一种共价偶联物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及化妆品用活性成分领域，具体涉及一种共价偶联物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、视黄醇（retinol）及其衍生物视黄酸（retinoic acid）等维a类成分（retinoid）是皮肤抗衰老领域的“金标准”活性成分，其通过激活视黄酸受体（rar/rxr）调节胶原蛋白合成、促进表皮细胞更新、抑制基质金属蛋白酶（mmp）表达等机制发挥抗衰老作用，被广泛用于各类护肤产品。然而，retinoid类成分在使用时常引起皮肤刺痛、灼热感、红斑、脱皮等不适反应，这部分与retinoid激活trpv1受体有关。trpv1是一种非选择性阳离子通道，在皮肤感觉神经末梢和角质形成细胞中高表达，其激活可引起灼痛感、神经源性炎症和血管扩张等刺激反应。因此，如何在保持retinoid抗衰老功效的同时降低其刺激性，是皮肤科学领域长期存在的技术难题。

2、trans-4-tert-butylcyclohexanol（tbch）是一种已知的trpv1受体拮抗剂，其trans异构体在细胞模型中对trpv1的拮抗活性ic50约为34 μm，通过竞争性结合trpv1受体可降低皮肤刺激感。已有专利申请（wo2024115621）披露了将tbch与retinoid物理混合使用的方案，并给出了两者的质量比范围，证实二者组合可降低刺激性；但物理混合存在缺陷：第一，两种活性成分的皮肤渗透动力学不同，难以实现时序协调释放；第二，物理混合不能保证tbch在retinoid起效前充分释放并占据trpv1受体；第三，未能将ghk铜肽与retinoid的协同修复作用整合在同一分子平台上。此外，已有专利文献（cn118126119b）公开了视黄酸与多肽（包括ghk）直接偶联的视黄酰肽类偶联物，其目的在于降低视黄酸刺激性与提高透皮吸收，但该类方案未涉及trpv1拮抗剂模块，也未涉及多官能连接器与时序释放设计。

3、铜肽ghk（甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸）是一种天然三肽，对铜离子具有高亲和力，其与cu2+形成的络合物ghk-cu具有促进胶原蛋白合成、抗氧化、促进伤口愈合和抗炎等多重护肤功效。ghk-cu的主要配位位点为n端氨基、gly-his肽键氮和his咪唑氮，c端羧基参与轴向配位，因此保留ghk的n端与c端有利于维持其铜配位能力。然而，将ghk与retinoid和trpv1拮抗剂三者通过共价键连接为单一分子实体，并利用不同酯键的水解速率差异设计时序释放的技术方案，目前尚未见报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种共价偶联物，通过共价键将retinoid、trpv1拮抗剂和ghk肽三种功能模块连接为单一分子实体，以解决现有技术中物理混合存在的渗透动力学不匹配、无法实现时序释放、未能整合ghk等缺陷，同时提供其制备方法、化妆品组合物和应用。偶联物通过共价键将三种功能模块连接为单一分子实体，利用不同酯键的水解速率差异设计时序释放，以期实现“先安抚、后抗衰”的协同护肤效果。

2、一种共价偶联物，其结构如下：a-l1-b-l2-c，其中：a为类视黄醇基团，选自视黄酸、视黄醇及其酯衍生物中的至少一种；b为连接中心，选自苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乙醇酸、乳酸、3-羟基丙酸残基中的至少一种；c为甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸结构域，具有通式h2n-gly-his-lys(ε-r)-cooh，其中r为b-l2-连接基团或h；l1为第一可裂解连接键，选自酯键、碳酸酯键中的至少一种；l2为第二可裂解连接键，选自酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键中的至少一种；d为辣椒素受体调节基团，选自反-4-叔丁基环己醇及其衍生物中的至少一种，通过可裂解酯键与b或甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸结构域连接；且a、b、c、d通过共价键连接，形成单一分子实体。

3、一种共价偶联物，为如下ra-01、ra-02、rol-01、rol-02结构中的一种：

4、（1）ra-01

5、h2n-gly-his-lys[ε-nhco-ch2-oco-reta]-coo-tbch

6、甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸通过赖氨酸ε-氨基与视黄酰乙醇酸酯形成酰胺键，甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸的c端羧基与4-叔丁基环己基丙烯酸酯形成酯键；

7、（2）ra-02

8、h2n-gly-his-lys[ε-nhco-ch2-ch(oco-reta)-coo-tbch]-cooh

9、甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸通过赖氨酸ε-氨基与苹果酸形成酰胺键，苹果酸的α-羟基与视黄酸形成酯键，苹果酸的另一羧基与4-叔丁基环己基丙烯酸酯形成酯键；

10、（3）rol-01

11、h2n-gly-his-lys[ε-nhco-ch2ch2-coo-tbch]-coo-retinyl

12、甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸通过赖氨酸ε-氨基与琥珀酸形成酰胺键，琥珀酸的另一羧基与4-叔丁基环己基丙烯酸酯形成酯键，甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸的c端羧基与视黄醇形成酯键；

13、（4）rol-02

14、h2n-gly-his-lys[ε-nhco-citrate(coo-retinyl)(coo-tbch)]-cooh

15、甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸通过赖氨酸ε-氨基与柠檬酸形成酰胺键，柠檬酸的两个羧基分别与视黄醇和4-叔丁基环己基丙烯酸酯形成酯键。

16、一种制备共价偶联物的方法，包括以下步骤：

17、(a)提供具有保护基的甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸肽前体，其中甘氨酸的n端氨基、组氨酸的侧链和赖氨酸的ε-氨基中至少一个被正交保护基保护；

18、(b)在偶联试剂存在下，将所述甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸肽前体与连接中心b的活化衍生物进行酰胺化反应，使b通过l2连接至赖氨酸的ε-氨基；

19、(c)在酯化试剂存在下，将步骤(b)产物与辣椒素受体调节基团d进行酯化反应，使d通过酯键连接至b或甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸肽结构域；

20、(d)在酯化试剂存在下，将步骤(c)产物与类视黄醇基团a进行酯化反应，使a通过l1连接至b；(e)脱除保护基，得到所述偶联物。

21、其中，步骤(a)中甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸肽前体通过固相肽合成法制备，使用n-芴甲氧羰基策略保护α-氨基，侧链保护基选自叔丁氧羰基、叔丁基、‌三苯甲基或2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基。

22、步骤(b)-(d)中使用的偶联试剂选自二环己基碳二亚胺/ 4-二甲氨基吡啶、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺/1-羟基苯并三唑、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯/n,n-二异丙基乙胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/n,n-二异丙基乙胺或n,n'-二异丙基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑，酯化试剂选自二环己基碳二亚胺/4-二甲氨基吡啶或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺/4-二甲氨基吡啶。

23、上述共价偶联物，可应用于化妆品组合物。

24、化妆品组合物，包括共价偶联物和载体。

25、其中，共价偶联物的含量为组合物总重量的0.001-5wt%；优选0.01-2wt%。载体可包含但不限于水、多元醇、油脂、表面活性剂、增稠剂、防腐剂、香精、ph调节剂等常规化妆品辅料。组合物的剂型选自霜、乳液、精华、水剂、凝胶、面膜、喷雾或油剂。

26、本发明还提供上述偶联物或化妆品组合物在制备用于皮肤抗衰老、降低维a类成分引起的皮肤刺激性和/或改善皮肤敏感状态的化妆品中的应用。偶联物在皮肤中具有时序释放特性，其中d基团通过酯键水解在0-2小时内优先释放，a基团通过酯键水解在2-24小时内释放，实现“先安抚、后抗衰”的协同护肤效果。

27、本发明具有如下有益效果：

28、第一，本技术通过将tbch与retinoid以不同空间位阻与电子环境的酯键连接到同一分子骨架，利用酯键水解速率差异设计时序释放；

29、第二，本技术通过仅在lys侧链引入连接臂而保留ghk的n端氨基和c端羧基（如ra-02、rol-02），有利于维持ghk的铜离子配位能力和生物活性，使其促进胶原蛋白合成与伤口愈合的功能得以保留；

30、第三，由于tbch优先释放并拮抗trpv1受体，能够降低retinoid引起的皮肤刺痛、灼热感和红斑等不适反应；

31、第四，本技术以单一分子实体形式携带固定比例的三种活性成分，避免了物理混合的多组分渗透动力学差异，有利于保证每一分子的递送一致性；

32、第五，偶联物的疏水性增强，预计有利于在皮肤角质层形成储库、延长作用时间。