特泊替尼在制备抗猪流行性腹泻病毒药物中的应用的制作方法

本发明涉及抗病毒药物，具体涉及特泊替尼在制备抗猪流行性腹泻病毒（pedv）药物中的应用。

背景技术：

1、猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，pedv）属于冠状病毒科α冠状病毒属，其基因组为一条单股正链rna。该病毒可侵袭各日龄猪只，对新生仔猪危害最为严重，感染后典型临床症状表现为急性水样腹泻、呕吐、机体严重脱水，初生仔猪发病率与死亡率可高达80%～100%；成年猪、育肥猪感染后虽死亡率较低，但会出现采食下降、生长停滞、饲料利用率降低等问题，严重影响生猪养殖产业的正常运转，是造成规模化猪场重大经济损失的核心病原之一。

2、目前针对pedv的防控体系存在显著短板，尚未形成完善、高效的防治方案。其一，疫苗防护效果有限：当前市面主流灭活疫苗、弱毒活疫苗受病毒毒株变异、母源抗体干扰、免疫程序不合理等因素影响，免疫保护率不稳定，无法实现全面防控；其二，临床缺乏特异性治疗药物：养殖现场仅能采用补液、纠正电解质紊乱、联合抗菌药物预防继发细菌感染等对症支持手段，无直接靶向抑制pedv复制的特效药物；其三，已报道的各类抗pedv小分子化合物普遍存在半数有效浓度偏高、细胞毒性强、选择性指数低等缺陷，难以应用于产业化开发与临床使用。因此，开发具有明确抗prdv活性、细胞毒性低，且适于产业化转化的药物，对生猪疫病防控及畜牧产业发展具有十分迫切的现实意义。

3、特泊替尼（tepotinib）是一种已上市的口服小分子靶向药物，其作为高选择性间充质-上皮转化因子（c-met）受体酪氨酸激酶抑制剂，通过与c-met激酶atp结合位点的竞争性结合，阻断下游pi3k/akt、mapk等信号通路的异常激活，从而抑制肿瘤细胞增殖、迁移及血管生成。该药物用于治疗携带met基因14号外显子跳跃突变的晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，nsclc）。

4、目前，特泊替尼的已知应用多局限于肿瘤学领域，已公开的专利和科学文献多涉及其作为c-met抑制剂的制备方法、晶型、肿瘤治疗适应症及相关联合用药方案。但目前尚未见特泊替尼或其相关化合物用于抗冠状状病毒、抗pedv等的报道，也未见其在制备抗pedv药物中的相关应用的报道。

技术实现思路

1、针对现有pedv的防治缺乏特异性抗病毒治疗药物的问题，本发明的目的在于提供一种特泊替尼在制备抗猪流行性腹泻病毒（pedv）药物中的应用。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、特泊替尼在制备抗猪流行性腹泻病毒药物中的应用。

4、其中，特泊替尼（tepotinib）为小分子化合物，其cas号为：1100598-32-0；分子式为：c29h28n6o2；分子量为：492.57。

5、该特泊替尼的结构式为：。

6、进一步地，所述药物为预防和/或治疗由猪流行性腹泻病毒感染引起的猪流行性腹泻的药物。应当理解的是，该药物包括作为饲料添加剂使用的情形。

7、进一步地，所述抗猪流行性腹泻病毒包括以下情形中的一种或多种：

8、抑制猪流行性腹泻病毒的复制；

9、抑制猪流行性腹泻病毒感染细胞；

10、抑制猪流行性腹泻病毒的核酸表达；

11、抑制猪流行性腹泻病毒的蛋白表达。

12、进一步地，所述药物通过靶向猪流行性腹泻病毒3c样蛋白酶（pedv-3clpro）、猪流行性腹泻病毒n蛋白（pedv-n蛋白）和猪流行性腹泻病毒m蛋白（pedv m蛋白）中的一种或多种蛋白来抑制猪流行性腹泻病毒的复制、增殖。即该药物可以通过靶向pedv-3clpro、pedv-n蛋白、pedv m蛋白中的至少一种来抑制pedv的复制、增殖。

13、进一步地，所述特泊替尼能嵌入猪流行性腹泻病毒3c样蛋白酶的活性口袋区域，所述特泊替尼与所述猪流行性腹泻病毒3c样蛋白酶活性口袋区域的部分氨基酸残基相互作用，相互作用的氨基酸残基包括glu165、his41、his162、phe139、pro188、asn141、cys144、ile140中的一个或多个。

14、进一步地，所述猪流行性腹泻病毒包括gⅰa株、gib株、giia株、giib株和giic株。

15、进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、稳定剂、助溶剂、防腐剂、缓冲剂、等渗调节剂中的一种或多种。

16、进一步地，所述药物的剂型包括注射剂、口服剂；

17、和/或，所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、混悬剂、乳剂、预混剂中的一种或多种。

18、进一步地，所述药物用于体外抗猪流行性腹泻病毒时，所述特泊替尼的有效浓度为1.7-20 μm。更优的，该药物用于体外抗猪流行性腹泻病毒时，特泊替尼的有效浓度为3-10 μm；更进一步的，特泊替尼的有效浓度为5 μm。

19、进一步地，所述药物用于猪体内抗猪流行性腹泻病毒时，所述特泊替尼的有效剂量为1-20 mg/kg体重。更优的，该药物用于猪体内抗猪流行性腹泻病毒时，特泊替尼的有效剂量为5-10 mg/kg体重。具体地浓度和剂量可根据猪只体重、感染阶段、给药方式、制剂形式和兽医临床需要进行进一步调整。

20、与现有技术相比，本发明的有益效果有：

21、1、本发明发现了tepotinib在抗pedv中的新用途，并通过试验首次证实了tepotinib具有抗pedv的活性。tepotinib可以用于治疗和预防由pedv感染导致的猪流行性腹泻；可以用于制备抗pedv的药物，包括制备体内抗pedv的药物和制备体外抗pedv的药物；以及用于制备治疗和预防由pedv感染导致的猪流行性腹泻的药物。由tepotinib制得的药物具有宽谱抗pedv病毒药物的特性，对pedv的不同亚群毒株均具有显著的抑制效果，具有良好的应用前景。

22、2、本发明通过虚拟的计算机模拟筛选，采用分子对接试验，提示了tepotinib能够进入pedv-3clpro蛋白的活性口袋区域并与之形成稳定的相互作用，表明tepotinib能够靶向pedv的3c样蛋白（pedv-3clpro蛋白），证实了小分子化合物tepotinib可作为pedv-3clpro蛋白抑制剂发挥抗pedv活性，为tepotinib抗pedv作用提供了靶点层面的理论支持。

23、3、本发明通过tepotinib的细胞毒性和体外抗pedv有效性评价试验，揭示了tepotinib具有明确的、可检测的抗pedv活性，能有效抵御pedv感染，显著抑制pedv病毒在宿主内的复制。tepotinib对vero细胞的cc50为30.21 μm，tepotinib对pedv抑制的ec50为1.72，其具有较好的安全窗口（选择指数si为17.56），表明tepotinib具有用于研制抗pedv病毒药物的潜力，可作为防治pedv的优质候选药物。此外，还揭示了tepotinib能有效抑制pedv病毒中pedv-n蛋白的表达。

24、4、本发明试验表明tepotinib对pedv的不同亚群毒株（gia株、gib株、giia株、giib株和giic株）均具有显著的抑制作用，表明tepotinib对pedv具有广谱抗病毒作用，其制得的药物具有更广的临床适用性，对病毒变异不敏感，治疗效果能更加稳定可靠。此外，也揭示了tepotinib能有效抑制pedv病毒中pedv m蛋白的表达。

25、5、本发明通过体外试验表明了tepotinib可有效抑制pedv活病毒的复制和减轻pedv病毒诱导的细胞损伤/细胞病变效应；通过猪体内试验证明tepotinib能在活猪体内有效抑制pedv的复制、增殖。进一步表明tepotinib对pedv具有明确的抗病毒作用，tepotinib具有开发作为兽用抗pedv药物的应用前景。

26、6、现有技术主要公开的是tepotinib在肿瘤领域的应用，未见其抗pedv相关用途的记载。本发明拓展了tepotinib的应用领域，为猪流行性腹泻的防控提供了全新的候选药物，也为抗α-冠状病毒类药物研发提供了新的靶点与研究思路，具有重要的产业价值与科学研究意义。