一种复合多肽外用敷料及其在促进皮肤创面愈合中的应用

本发明涉及生物医药，特别涉及一种复合多肽外用敷料及其在促进皮肤创面愈合中的应用。

背景技术：

1、皮肤创面愈合是一个涉及炎症反应、细胞增殖、基质合成与重塑等多个复杂环节的生理修复过程，广泛存在于外伤、烧伤、慢性溃疡、外科术后等临床场景中。创面愈合延迟或愈合不良不仅会增加患者痛苦、延长治疗周期，还可能引发感染、瘢痕增生甚至组织坏死等并发症，给医疗护理带来巨大挑战。因此，研发兼具抗菌抗炎、促进细胞增殖、加速胶原合成及提升活性成分渗透效率的外用敷料，成为生物医药领域的研究热点。

2、目前，临床常用的创面敷料主要分为传统敷料与新型生物敷料两大类。传统敷料如纱布、棉垫等，虽具备基础的吸收渗出液和物理保护功能，但存在保湿性能差、易与创面粘连、换药时易造成二次损伤、无法抑制感染等显著缺陷，已难以满足复杂创面的修复需求。

3、为克服传统敷料的不足，新型生物敷料不断涌现，其中多肽类敷料因生物相容性好、活性强、副作用小等优势备受关注。然而，现有多肽类敷料仍存在诸多亟待解决的问题：其一，功能单一，多数产品仅聚焦于某一修复环节，如单一抗菌肽仅能抑制微生物生长，单一生长因子类多肽仅能促进细胞增殖，缺乏对创面愈合全周期的协同调控能力，导致整体修复效果有限；其二，活性成分渗透性不佳，皮肤角质层的屏障作用使得多肽分子难以有效穿透并到达创面深层发挥作用，大幅降低了敷料的实际功效；其三，稳定性不足，多肽类成分易受温度、酶解等因素影响而失活，导致敷料储存期间活性下降，影响临床应用效果；其四，部分敷料的载体基质生物相容性欠佳，且未形成对活性多肽的有效负载与缓释体系，进一步削弱了修复作用。

4、在多肽原料应用方面，现有技术也存在明显局限。例如，促增殖成分多依赖化学合成或单一植物提取物，活性与安全性难以兼顾；抗菌肽来源较为局限，且抗菌谱较窄，难以应对创面复杂的微生物环境；胶原合成促进剂多为完整胶原蛋白，分子量较大，不易被吸收，且降解速度与创面修复节奏不匹配；促渗成分常采用化学试剂，生物相容性差，还可能对创面产生刺激性。此外，现有技术普遍忽视了不同多肽成分间的协同作用，以及辅料选择、制备工艺对敷料整体性能的影响，导致产品在临床应用中难以达到理想的创面愈合效果。

5、综上，针对当前外用敷料功能单一、活性成分渗透差、稳定性不足及协同作用缺失等问题，研发一种由多种功能多肽协同配伍，搭配优良载体基质，且具备高效抗菌抗炎、促增殖、促胶原合成及强渗透能力的复合多肽外用敷料，具有重要的临床价值与应用前景。

技术实现思路

1、鉴于此，本发明提出一种复合多肽外用敷料及其在促进皮肤创面愈合中的应用，解决上述问题。

2、本发明的技术方案是这样实现的：一种复合多肽外用敷料，包括以下重量份原料：促增殖肽20-40份、抗菌抗炎肽15-35份、胶原合成促进肽10-30份、促渗肽5-8份。

3、进一步的，包括以下重量份原料：促增殖肽30份、抗菌抗炎肽25份、胶原合成促进肽20份、促渗肽7份。

4、进一步的，所述促增殖肽为铁皮石斛茎尖再生肽，其提取方法具体包括：

5、(1)原料预处理：取新鲜铁皮石斛（dendrobiumofficinale）茎尖分生组织（长度≤5mm，经75%乙醇表面消毒30秒、0.1%升汞溶液消毒5分钟后无菌水冲洗3次），置于4℃黑暗环境中诱导培养24-72小时，激活分生组织再生相关基因表达，得预处理原料；

6、(2)联合酶解：将预处理原料剪碎后按料液比g/ml为1:(10-15)分散于去离子水中，加入纤维素酶（活力≥10万u/g）与果胶酶（活力≥5万u/g）的混合酶，质量比1:1-2，总添加量为原料干重的0.5%-1.0%，调节体系ph至4.5-5.5，在40-50℃下恒温酶解6-8小时（酶解过程中每隔2小时搅拌1次，转速100-150rpm）；

7、(3)灭酶与粗分离：酶解结束后升温至95℃保持10分钟灭酶，冷却后离心（4000rpm，10分钟）取上清液，经超滤（截留分子量1.2kda）去除未水解的大分子多糖及蛋白，收集分子量800-1200da的滤过液，纯化、干燥，得白色粉末状铁皮石斛茎尖再生肽，纯度≥90%，分子量分布800-1200da。

8、进一步的，所述抗菌抗炎肽来源于海洋软体动物足丝粘蛋白经酶解获得的含二硫键短肽，分子量≤1.2kda，其提取方法具体包括：

9、(1)原料预处理：取鲜活贻贝（mytilusedulis）足丝（附着于贝壳内侧的丝状结构），冲洗去除表面泥沙及微生物，剪碎后按料液比g/ml为1:(8-10)分散于ph7.0的tris-hcl缓冲液中，加入蛋白酶抑制剂（1mm苯甲基磺酰氟）4℃超声破碎（功率200w，频率40khz，时间10分钟）后离心（8000rpm，15分钟），收集沉淀，即为足丝粘蛋白粗品；

10、(2)定向酶解：将足丝粘蛋白粗品重新分散于去离子水，底物浓度3%-5%w/v，加入木瓜蛋白酶（活力≥8万u/g，优选来自番木瓜果实），添加量为底物质量的0.4%-0.6%，调节体系ph至6.0-6.5，在42-45℃下恒温酶解3-4小时；酶解结束后升温至80-100℃保持8-12分钟灭酶，冷却后离心（5000rpm，10分钟）取上清液，超滤、纯化，冻干得白色粉末。

11、进一步的，所述胶原合成促进肽来源于牛骨i型胶原蛋白，提取方法为：取牛骨i型胶原蛋白粉碎，加5-8倍去离子水，调ph至7.0-7.5，加胶原蛋白质量0.6-1.0%的蛋白酶酶解2-4小时，灭酶后经1000-2000da超滤膜纯化，干燥得甘氨酸-脯氨酸富集三肽。

12、进一步的，所述促渗肽为薄荷叶提取薄荷醇-肽缀合物，其制备方法具体包括：取薄荷叶粉碎过60-80目筛，加重量10-15倍去离子水，加薄荷叶质量0.3%-0.8%的复合酶，在40-45℃酶解1.5-2.5小时，复合酶为质量1:1-3的纤维素酶与蛋白酶，离心取上清得薄荷肽液；按薄荷肽液与薄荷醇质量比5-8:1混合，加混合液0.1%-0.3%wt的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺，在30-35℃反应1-3小时，经大孔树脂吸附、300-800da超滤膜过滤后冷冻干燥，得薄荷醇-肽缀合物。

13、进一步的，还包括0.2-0.6份的天然抗氧化剂和0.1-0.3份的金属离子螯合剂；所述天然抗氧化剂选自茶多酚、迷迭香酸或积雪草总苷，所述金属离子螯合剂为edta-2na或柠檬酸钠。

14、本发明还提供一种复合多肽外用敷料的制备方法，包括以下步骤：

15、s1、原料预处理与溶解：称取促增殖肽、抗菌抗炎肽、胶原合成促进肽、促渗肽，加入无菌去离子水，在25-30℃下低速搅拌10-15分钟至完全溶解，得各多肽单组分溶液；

16、s2、载体基质制备：将羧甲基壳聚糖与硫酸软骨素按质量比(2-4):1混合，溶于40-50℃去离子水，200-300rpm搅拌至完全溶解，形成载体母液；

17、s3、复合体系组装：将s1所得多肽单组分溶液及所述抗氧化剂及螯合剂依次加入s2载体母液，超声分散15-25分钟，调节ph至6.8-7.2，静置交联3-5小时；

18、s4、灭菌分装：将交联后体系经γ射线辐照灭菌，分装即得复合多肽外用敷料。

19、进一步的，所述步骤s1的多肽与水的料液比g:ml=1:10-15，低速搅拌转速100-150rpm；

20、所述步骤s3超声功率400-600w，静置交联温度为25-30℃，交联后体系固含量为15-25wt%，ph值为5.5-6.5；

21、所述步骤s4的γ射线辐照剂量为15-25kgy，辐照10-20分钟。

22、所述复合多肽外用敷料在制备促进皮肤创面愈合药物中的应用。

23、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

24、本发明通过复合多肽协同作用显著提升了皮肤创面修复效率及安全性，其中，促增殖肽刺激成纤维细胞增殖，抗菌抗炎肽抑制炎症因子释放，胶原合成促进肽加速基质重建，促渗肽提升活性成分透皮效率，形成抗炎、增殖、重建闭环；采用生物酶解与分子量截留技术提取活性肽，纯度≥90%，结合羧甲基壳聚糖-硫酸软骨素温敏凝胶载体，实现ph响应性黏附与药物缓释，敷料4℃储存30天后活性保留率仍高于91%，避免活性流失、渗透差缺陷；天然抗氧化剂与edta-2na双重保护体系抑制多肽氧化降解，工艺中超声分散与静置交联技术使敷料结构致密均匀，有效避免突释效应。