一种β-胡萝卜素与牛肝粉酶促制备抑瘤组合物的方法与流程

本发明涉及生物制剂，尤其涉及一种体外酶促转化制备抗肿瘤组合物的工艺。

背景技术：

1、恶性肿瘤持续威胁人类健康，肿瘤细胞典型生物学特征是不受机体调控、持续伸长、无限增殖。脱落酸(aba)属于类胡萝卜素衍生物，现有研究证实脱落酸能够抑制细胞伸长生长，具备一定抑制肿瘤细胞增殖的活性。

2、当前涉及脱落酸抗肿瘤的相关方案，普遍直接使用人工提纯制备的脱落酸原料药进行实验与制剂开发。该方式存在明显缺陷：第一，高纯度脱落酸分离提纯工艺复杂、生产成本高昂；第二，单纯外源添加脱落酸作用模式单一，抑瘤效果有限；第三，缺少低成本、原位生成脱落酸的复合制备体系。

3、β-胡萝卜素是广泛存在的天然类胡萝卜素。生理学研究表明，动物体内β-胡萝卜素常规代谢路径主要生成视黄醇、视黄醛等维生素a类物质；常规生理条件下难以裂解产生脱落酸。目前尚未见利用牛肝粉内源酶催化β-胡萝卜素定向转化生成脱落酸，并且用于制备抑瘤组合物的相关报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术直接使用纯化脱落酸成本高、抑瘤效果有限的缺陷，提供一种β-胡萝卜素与牛肝粉酶促制备抑瘤组合物的方法。本发明依靠牛肝粉内源复合酶体系，体外可控条件下催化β-胡萝卜素定向裂解、原位生成脱落酸；体系内残留类胡萝卜素、酶代谢衍生物与脱落酸协同作用，实现优于同等剂量纯脱落酸的抗肿瘤效果。

2、本发明提供一种β-胡萝卜素与牛肝粉酶促制备抑瘤组合物的方法，包含如下步骤：

3、s1、原料预处理：将牛肝粉过80～120目筛；取β-胡萝卜素粉末，与缓冲水溶液混合搅拌，配制β-胡萝卜素混悬液；

4、s2、酶促转化反应：向β-胡萝卜素混悬液中加入预处理后的牛肝粉，调节体系ph值至5.5～7.0；控制反应温度28～38℃，避光持续搅拌反应18～36h；

5、s3、反应终止：升温至55～65℃保温15～30min，灭活牛肝粉内活性酶，终止裂解反应；

6、s4、固液分离：离心去除固体残渣，收集上清液，得到富含脱落酸的抑瘤组合物。

7、进一步地，原料质量配比：β-胡萝卜素1份，牛肝粉3～8份。

8、进一步地，缓冲水溶液采用磷酸盐缓冲液。

9、本发明抑瘤机理阐述：脱落酸天然生理核心功能为抑制细胞伸长生长。肿瘤细胞恶性增殖的根本特征是细胞持续伸长、不受调控无限分裂。本发明制备体系生成的脱落酸作用于肿瘤细胞后，能够显著抑制肿瘤细胞伸长进程，阻滞肿瘤细胞周期持续运转，抑制肿瘤细胞增殖，并诱导肿瘤细胞发生凋亡，由此产生抑瘤作用。

10、同时，反应体系中未完全转化的β-胡萝卜素、各类酶解中间产物可与脱落酸产生协同效应。相较于同等剂量单一纯化脱落酸，本发明制得组合物对肿瘤细胞具备更强抑制效果，产生预料不到的协同抗肿瘤活性。

11、本发明具备以下有益效果：1、本发明采用体外酶促原位生成脱落酸，不需要提前高纯度提取脱落酸，简化生产流程，大幅降低原料制备成本；2、组合物为多组分复合体系，多种活性成分协同发挥作用，抑瘤活性优于单独脱落酸；3、制备条件温和，全程低温酶促反应，活性物质不易被破坏，工艺易于放大生产；4、原料β-胡萝卜素、牛肝粉来源广泛、获取方便。

1.一种β-胡萝卜素与牛肝粉酶促制备抑瘤组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、原料预处理：将牛肝粉过80～120目筛；取β-胡萝卜素粉末，与缓冲水溶液混合搅拌，配制β-胡萝卜素混悬液；s2、酶促转化反应：向β-胡萝卜素混悬液中加入预处理后的牛肝粉，调节体系ph值至5.5～7.0；控制反应温度28～38℃，避光持续搅拌反应18～36h；s3、反应终止：升温至55～65℃保温15～30min，灭活牛肝粉内活性酶，终止裂解反应；s4、固液分离：离心去除固体残渣，收集上清液，得到富含脱落酸的抑瘤组合物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，原料质量配比：β-胡萝卜素1份，牛肝粉3～8份。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲水溶液为磷酸盐缓冲液。