一种两面针和毛叶两面针的鉴别方法与流程

本发明涉及中药材鉴定，尤其涉及一种两面针和毛叶两面针的鉴别方法。

背景技术：

1、两面针为芸香科植物两面针zanthoxylumnitidum (roxb.)dc.的干燥根，现收载于《中国药典》2015年版一部。该药材具有活血化瘀、行气止痛、祛风通络、解毒消肿的作用，是常用的中药品种之一。其化学成分包括生物碱类、木脂素类、黄酮苷类、甾醇类等，现代药理研究表明其具有解痉、抗炎、镇痛、抗菌以及抗肿瘤等多种生物活性，应用价值十分显著。然而，随着市场对两面针药材需求量的持续增长，其野生资源因生态环境破坏和过度采挖而日益减少。同时，由于产地和生长环境的差异，市售两面针药材的来源较为混杂，真伪鉴别难度较大。

2、毛叶两面针（zanthoxylumnitidumvar．tomentosum）属于两面针的变种，是两面针的混伪品之一，现已被《广西壮族自治区瑶药材质量标准》（2014年版）收载。该变种叶背面密被柔毛，在外观上与两面针的原变种（即等同于两面针使用的毛两面针）极其相似，且两者的名称仅有一字之差，因此在流通和使用中常易发生混淆。目前，对这一基原相近、形态相似的混伪品毛叶两面针尚缺乏系统的实验研究，但在资源紧缺的背景下，其已逐渐进入流通领域替代正品使用。而品种混淆直接导致质量失控，不仅给两面针药材的质量控制带来极大困难，也对临床用药的安全性和有效性构成潜在威胁。

3、因此，建立一种能够准确区分两面针和毛叶两面针的鉴别方法，已成为保障两面针药材质量安全与临床疗效的迫切需求。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种两面针和毛叶两面针的鉴别方法，以解决现有技术中两面针与毛叶两面针难以准确区分，导致药材质量难以有效控制的问题。

2、为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供了一种两面针和毛叶两面针的鉴别方法，包括如下步骤：

4、1）供试品溶液的制备：利用体积分数为70%的甲醇溶液对两面针待测样品粉末进行提取，得到供试品溶液；

5、2）毛叶两面针特征成分的制备：将毛叶两面针药材粉末与体积分数为70%的甲醇溶液混合，顺次进行加热回流和第一次过滤，得到过滤液，对过滤液顺次进行蒸干、浓缩溶解和第二次过滤，然后注入高效液相色谱仪，洗脱，其中，所述洗脱的色谱条件为：

6、色谱柱：资生堂capcell pak，4.6×250 mm，5 μm；

7、流速：1.0 ml/min；

8、检测波长：220 nm；

9、进样量：20 μl；

10、流动相：流动相a为乙腈，流动相b为磷酸-三乙胺的混合水溶液，其中，磷酸、三乙胺和水的质量体积比为0.2 g：0.25 g：100 ml；

11、所述洗脱为梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：

12、0~20 min，流动相a为10%→21%，流动相b为90%→79%；

13、20~35 min，流动相a为21%→25%，流动相b为79%→75%；

14、35~50 min，流动相a为25%，流动相b为75%；

15、同时收集20~24 min的流出液，然后将流出液用氮气吹干后得到毛叶两面针特征成分；

16、3）对照品溶液的制备：将步骤2）得到的毛叶两面针特征成分与有机溶剂混合，得到对照品溶液；

17、4）展开及检测：吸取供试品溶液和对照品溶液各2 μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，先以体积比为2：13：1的石油醚-三氯甲烷-甲醇为展开剂，进行第一次展开、取出、晾干，其中，石油醚为沸点范围在60~90℃的馏分，再以体积比为5：25：13的正丁醇-甲醇-氨试液为展开剂，进行第二次展开、取出、晾干，随后置于碘蒸气中熏蒸，取出后挥尽硅胶g薄层板上吸附的碘，最后置于波长为365 nm的紫外光灯下检视；

18、5）结果判定：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，所述两面针待测样品为毛叶两面针；当供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的斑点，所述两面针待测样品为非毛叶两面针。

19、优选的，步骤1）中所述两面针待测样品粉末的粒径为342~368 μm。

20、优选的，步骤2）中所述毛叶两面针药材粉末与甲醇溶液的质量体积比为2 g：45~55 ml；所述毛叶两面针药材粉末的粒径为342~368 μm。

21、优选的，步骤2）中所述加热回流的温度为80~85℃，时间为27~33 min。

22、优选的，步骤2）中所述浓缩溶解的溶液为体积分数为70%的甲醇溶液；所述蒸干的样品与浓缩溶解的溶液的质量体积比为0.2 g：1 ml；所述第二次过滤的滤膜孔径为0.22 μm。

23、优选的，步骤3）中所述毛叶两面针特征成分与有机溶剂的质量体积比为0.8~1.2mg：1 ml；所述有机溶剂包括乙醇和/或甲醇。

24、优选的，步骤4）中所述第一次展开和第二次展开的温度独立的为4~30℃，湿度独立的为30~70%；所述第一次展开的展距为8~10 cm；所述第二次展开的展距为8~10 cm；所述熏蒸的时间为40~60 s。

25、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明有益效果如下：

26、本发明通过先以石油醚（60~90℃）-三氯甲烷-甲醇为展开剂、再以正丁醇-甲醇-氨试液为展开剂进行两次展开，使两面针和毛叶两面针的化学成分在薄层板上呈现不同的斑点颜色，进而能够有效区分两面针和毛叶两面针，解决了因二者基原相近、外形相似而难以鉴别的问题，为两面针药材的真伪鉴别和质量控制提供了可靠的技术手段，对保障临床用药的安全性和有效性具有重要意义。此外，本发明所述方法操作简便，仅需常规薄层色谱设备和试剂，无需复杂的前处理或贵重仪器，成本低廉，易于推广应用。

1.一种两面针和毛叶两面针的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种两面针和毛叶两面针的鉴别方法，其特征在于，步骤1）中所述两面针待测样品粉末的粒径为342~368 μm。

3.根据权利要求2所述的一种两面针和毛叶两面针的鉴别方法，其特征在于，步骤2）中所述毛叶两面针药材粉末与甲醇溶液的质量体积比为2 g：45~55 ml；

4.根据权利要求1~3任一项所述的一种两面针和毛叶两面针的鉴别方法，其特征在于，步骤2）中所述浓缩溶解的溶液为体积分数为70%的甲醇溶液；所述蒸干的样品与浓缩溶解的溶液的质量体积比为0.2 g：1 ml；

5.根据权利要求4所述的一种两面针和毛叶两面针的鉴别方法，其特征在于，步骤3）中所述毛叶两面针特征成分与有机溶剂的质量体积比为0.8~1.2 mg：1 ml；

6.根据权利要求5所述的一种两面针和毛叶两面针的鉴别方法，其特征在于，步骤4）中所述第一次展开和第二次展开的温度独立的为4~30℃，湿度独立的为30~70%；