复方氨基酸注射液(18AA-SF)中未知杂质的分离纯化、鉴定及检测方法与流程

本发明涉及药物分析，具体涉及一种复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的分离纯化、鉴定及检测方法。

背景技术：

1、复方氨基酸注射液(18aa-sf)是一种重要的临床营养支持药物，可用于蛋白质摄入不足、吸收障碍等氨基酸不能满足机体代谢需要的患者，亦可用于改善手术后病人的营养状况，其质量稳定性和安全性直接关系到患者的治疗效果和健康。

2、在复方氨基酸注射液(18aa-sf)的生产及稳定性研究过程中，发现其活性成分胱氨酸存在逐渐降解的现象。据文献报告，胱氨酸的已知降解产物有半胱氨酸、牛磺酸、磺基丙氨酸，但在稳定性研究中发现有未知杂质在所有复方氨基酸注射液(18aa-sf)产品及类似复方氨基酸注射液中均未见研究，也未建立相应的杂质鉴定、检测及控制方法。这使得在复方氨基酸注射液(18aa-sf)产品的实际生产和储存过程中，胱氨酸降解产生的未知杂质可能不断积累，进而影响药品的质量和安全性。

3、有鉴于此，当前迫切需要一种有效的方法来对该未知杂质进行定性鉴定与定量检测。

技术实现思路

1、鉴于背景技术中存在的技术问题，本申请提供了一种复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的分离纯化、鉴定及检测方法，能够对复方氨基酸注射液(18aa-sf)中胱氨酸产生的未知杂质进行有效的定性鉴定与定量检测。

2、第一方面，本申请实施例提供了一种复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的分离纯化方法，包括如下步骤：

3、将胱氨酸原料药与盐酸溶液混合，得到饱和溶液；

4、对所述饱和溶液进行加热处理，其后，取上清液，作为未知杂质混合溶液；

5、将所述未知杂质混合溶液稀释后，采用制备液相色谱进行分离纯化，在梯度洗脱时，收集7~9min的馏分，冷冻干燥后得到纯化的未知杂质；

6、其中，所述梯度洗脱时，流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a包括三氟乙酸的水溶液，所述流动相b包括乙腈；在0~10min时，所述流动相a与所述流动相b的体积比为90∶10~99∶1。

7、在一些实施例中，所述制备液相色谱的条件包括：

8、采用c18色谱柱；

9、检测波长为214 nm~254 nm；

10、洗脱流速为30~50 ml/min；

11、所述三氟乙酸的水溶液中三氟乙酸的体积浓度为0.05%~0.2%。

12、在一些实施例中，所述盐酸溶液的浓度为0.05~0.15mol/l；和/或，

13、所述加热处理包括：将所述饱和溶液于100~110℃的环境下放置18~36 h。

14、第二方面，本申请实施例提供了一种复方氨基酸注射液18aa-sf中未知杂质的鉴定方法，包括如下步骤：

15、对第一方面提供的分离纯化方法得到的纯化的未知杂质进行质谱分析，确定所述未知杂质的分子量；

16、对所述纯化的未知杂质进行核磁分析，得到氢谱数据和碳谱数据；

17、根据所述未知杂质的分子量以及所述氢谱数据和碳谱数据，确定所述未知杂质的结构式。

18、在一些实施例中，所述质谱分析的检测条件包括：

19、采用质谱仪，以电喷雾正离子模式进行检测；

20、喷雾电压为3~5 kv；

21、毛细管温度为300~350℃；

22、鞘气流量为30~40 arb；

23、辅助气流量为5~15 arb；

24、辅助气温度为300~400℃；

25、s-lens rf水平为30~40。

26、在一些实施例中，所述核磁分析的检测步骤包括：

27、将所述纯化的未知杂质溶于溶剂，采用核磁共振仪，以四甲基硅烷为内标进行测定；

28、其中，所述溶剂包括重水和三氟乙酸。

29、第三方面，本申请实施例提供了一种复方氨基酸注射液18aa-sf中未知杂质的检测方法，包括如下步骤：

30、取待测的复方氨基酸注射液18aa-sf，加入盐酸溶液进行溶解、稀释与定容，得到供试品溶液；

31、取胱氨酸对照品，加入盐酸溶液进行溶解与稀释，得到对照品溶液；

32、取胱氨酸对照品，加入盐酸溶液进行溶解后，进行加热处理，冷却后用所述盐酸溶液稀释并定容，得到系统适用性溶液；

33、将所述系统适用性溶液注入液相色谱仪，当符合系统适用性要求时，再将所述供试品溶液和所述对照品溶液分别注入液相色谱仪进行检测。

34、在一些实施例中，所述系统适应性要求包括：

35、与胱氨酸相比，杂质峰的相对保留时间为1.75~1.95；

36、所述杂质峰与相邻峰的分离度不小于1.2。

37、在一些实施例中，所述液相色谱仪的测试条件包括：

38、采用c18色谱柱；

39、柱温为35~38℃；

40、检测波长为205~220 nm；

41、流动相a为庚烷磺酸钠缓冲溶液，流动相b为乙腈，进样时所述流动相a与所述流动相b的体积比为90∶10~50∶50；

42、洗脱流速为0.9~1.1 ml/min。

43、在一些实施例中，各步骤中所述盐酸溶液的浓度分别独立地选自0.05~0.15mol/l；和/或，

44、所述加热处理包括：在100~110℃的环境下放置1~3 h；和/或，

45、所述供试品溶液中未知杂质的浓度采用校正因子法进行计算，以所述胱氨酸对照品作为对照，校正因子为0.20~0.30。

46、本申请的有益效果包括：

47、本申请提供的复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的分离纯化方法能够有效提取出胱氨酸在高温下产生的未知杂质，并对其进行分离纯化；在此基础上，通过对纯化的未知杂质进行鉴定，利用质谱分析结果以及核磁分析得到的氢谱数据和碳谱数据，即可确定未知杂质的具体结构式。针对该未知杂质，本申请提供的检测方法采用经加热处理的胱氨酸对照品作为系统适用性溶液，通过相对保留时间定位该未知杂质，既保证了该检测方法系统适用性的可靠性，又确保了杂质定位的准确性，并且，该方法利用来源广泛且价格便宜的胱氨酸对照来检测未知杂质，避免了定制未知杂质对照品的高昂费用，具有显著的经济效益。基于本申请提供的复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的分离纯化、鉴定及检测方法，能够准确识别并定量检测出复方氨基酸注射液(18aa-sf)中胱氨酸降解产生的胱氨酸三硫化物杂质，为复方氨基酸注射液(18aa-sf)的商业化生产提供了可靠的质量控制保证，有助于提高药品的质量和安全性，具有广泛的实用价值。

48、上述说明仅是本申请技术方案的概述，为了能够更清楚了解本申请的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本申请的上述和其它目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举本申请的具体实施方式。

1.一种复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的分离纯化方法，其特征在于，所述制备液相色谱的条件包括：

3.根据权利要求1所述的复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的分离纯化方法，其特征在于，所述盐酸溶液的浓度为0.05~0.15mol/l；和/或，

4.一种复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的鉴定方法，其特征在于，所述质谱分析的检测条件包括：

6.根据权利要求4所述的复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的鉴定方法，其特征在于，所述核磁分析的检测步骤包括：

7.一种复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

8.根据权利要求7所述的复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的检测方法，其特征在于，所述系统适应性要求包括：

9.根据权利要求7所述的复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的检测方法，其特征在于，所述液相色谱仪的测试条件包括：

10.根据权利要求7所述的复方氨基酸注射液(18aa-sf)中未知杂质的检测方法，其特征在于，各步骤中所述盐酸溶液的浓度分别独立地选自0.05~0.15mol/l；和/或，