基于适配体的嗜黏蛋白阿克曼氏菌Amuc_1100蛋白电化学检测方法与流程

本发明属于生物检测，具体涉及基于适配体的嗜黏蛋白阿克曼氏菌amuc_1100蛋白电化学检测方法。

背景技术：

1、amuc_1100是嗜黏蛋白阿克曼氏菌（akkermansia muciniphila，简称akk菌）外膜上表达最丰富的功能蛋白之一，通过toll样受体2（tlr2）信号通路发挥代谢调节和免疫调节功能。相关研究（如otman n.等人，plos one，2017）已证实，amuc_1100蛋白是评价akk菌产品功能活性最核心的指标之一。

2、目前，amuc_1100蛋白的检测主要依赖两种方法：一是基于单克隆抗体的酶联免疫吸附测定法（elisa），该方法操作繁琐、耗时较长（通常需2-3小时），且抗体批次间的差异会直接影响检测结果的稳定性；二是液相色谱-串联质谱法（lc-ms/ms），该方法设备昂贵、运行维护成本高，对操作人员和检测环境要求极为严格，无法满足生产现场即时快检的需求。

3、近年来，电化学适配体传感器技术在生物检测领域发展迅速。该技术利用核酸适配体作为识别元件，结合电化学检测方法，具备特异性强、灵敏度高、无需标记、检测速度快、设备便携等显著优势。然而，目前现有技术中尚无将amuc_1100蛋白特异性适配体与电化学方法结合，用于现场快速检测该蛋白的报道。

4、针对上述现有技术的不足，本发明提供一种基于适配体的akk菌amuc_1100蛋白电化学检测方法，通过电化学适配体传感器实现amuc_1100蛋白的快速、准确、定量检测，以满足生产现场质控和终端产品快速筛查的实际需求。

技术实现思路

1、① 要解决的问题： 现有amuc_1100蛋白检测方法操作复杂、成本高，不适合现场快速检测。

2、② 技术方案： 使用selex技术筛选获得的amuc_1100蛋白特异性核酸适配体，通过电化学方法进行检测。

3、③ 有益效果： 完全绕过抗体路线，成本低、稳定性高、检测速度快（约20分钟），适合现场快速检测。

1.一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌（akkermansia muciniphila）amuc_1100蛋白的检测方法，其特征在于，使用能够特异性结合amuc_1100蛋白的核酸适配体，通过电化学方法进行检测。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述核酸适配体经selex技术筛选获得。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述电化学方法为差分脉冲伏安法（dpv）或电化学阻抗谱法（eis）。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述方法的检测限为0.05 ng/ml，线性范围为0.1-100 ng/ml。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述核酸适配体的5‘端或3’端标记有电化学活性基团或巯基基团，并通过金硫键自组装固定于金电极表面。

6. 根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述差分脉冲伏安法（dpv）的检测溶液为含有5 mm k3fe(cn)6/k4fe(cn)6（1:1）和0.1 m kcl的pbs溶液，扫描范围为-0.2v至+0.6v，脉冲幅度为50 mv。

7. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，当计算出的amuc_1100蛋白含量≥3ng/ml时，判定样品为合格品；当计算出的amuc_1100蛋白含量<3 ng/ml时，判定样品为不合格品。