一种脂肪胰小鼠模型的构建方法及其应用

本发明属于动物模型构建领域，具体涉及一种脂肪胰小鼠模型的构建方法及其应用。

背景技术：

1、脂肪胰是指胰腺组织内脂肪异常沉积或脂肪细胞异常浸润的病理状态。近年来，随着肥胖、2型糖尿病及代谢综合征发病率升高，脂肪胰与胰岛功能障碍、胰腺炎、胰腺纤维化及胰腺肿瘤等疾病之间的关系逐渐受到关注。建立稳定、可重复的脂肪胰动物模型，是研究脂肪胰发生机制、评价干预措施及筛选治疗靶点的重要基础。

2、现有技术中，脂肪胰相关动物模型主要包括以下几类：第一类为饮食诱导模型，通常选用c57bl/6等小鼠品系，给予高脂饮食、高脂高糖饮食或其他代谢应激饮食干预一定时间后，观察小鼠是否出现肥胖、胰岛素抵抗、血脂异常及胰腺脂肪沉积等表现。该类方法操作相对简单，能够在一定程度上模拟代谢异常背景下胰腺脂肪沉积过程，是目前较常见的实验方法。第二类为遗传性肥胖或糖尿病动物模型，如ob/ob小鼠、db/db小鼠等，该类模型可较快出现肥胖、高血糖或胰岛素抵抗状态，并伴随不同程度的胰腺脂质积聚，适用于观察代谢紊乱状态下胰腺结构和功能改变。第三类为胰腺损伤或胰管梗阻相关模型，如胰管结扎、胰腺炎反复诱导等，可导致腺泡细胞损伤、胰腺萎缩及脂肪替代，常用于研究胰腺损伤后组织重塑过程。另有部分研究借助代谢相关脂肪性肝病或脂肪性肝炎动物模型，附带观察胰腺脂肪浸润情况。

3、上述现有技术具有一定优点。例如，饮食诱导模型更接近肥胖及代谢综合征背景，实验操作简便，成本较低；遗传性肥胖模型成模时间相对较短，代谢表型明显；胰腺损伤或胰管梗阻模型可较好反映胰腺实质损伤后脂肪替代过程。这些模型为脂肪胰相关研究提供了一定基础。

4、但是，现有技术仍存在明显不足。首先，现有模型多以肥胖、糖尿病、脂肪肝或胰腺损伤为主要研究目的，脂肪胰通常只是附带观察指标，缺乏针对脂肪胰本身建立的专门化模型。其次，不同研究采用的小鼠品系、性别、年龄、饮食组成、诱导周期及评价方法差异较大，导致模型重复性和可比性不足。第三，现有研究对胰腺脂肪浸润程度、脂肪分布位置、病理评分、胰岛功能、外分泌功能、炎症反应及纤维化改变等缺乏统一评价标准，难以客观判定模型是否成功建立。第四，部分遗传性肥胖或胰腺损伤模型虽然可出现胰腺脂肪沉积，但其病因机制与人类常见代谢相关脂肪胰并不完全一致，可能影响后续机制研究和药物干预评价的适用性。

5、因此，现有技术仍缺乏一种建模条件明确、表型稳定、重复性好，并能够结合病理学、代谢学、胰腺内外分泌功能及分子机制指标进行综合评价的脂肪胰小鼠模型构建方法。建立此类标准化模型及评价体系，对于脂肪胰发生机制研究、干预措施筛选以及相关药物和技术开发具有重要应用价值。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种建模条件明确、表型稳定、重复性好，并能够结合病理学、代谢学、胰腺内外分泌功能及分子机制指标进行综合评价的脂肪胰小鼠模型构建方法。

2、第一方面，本发明提供一种脂肪胰小鼠模型的构建方法，使用高脂饮食、链脲佐菌素（stz）、雨蛙素联合诱导小鼠使其出现胰腺脂肪浸润。

3、优选地，包括以下步骤：

4、s1：适应性培养小鼠；

5、s2：给予小鼠高脂饲料喂养一定时间；

6、s3：对小鼠进行链脲佐菌素阶段性注射；

7、s4：给予小鼠继续高脂饲料喂养诱导，并进行体重筛选；

8、s5：筛选合格的小鼠给予雨蛙素腹腔注射诱导，完成脂肪胰小鼠模型的构建。

9、优选地，所述小鼠为雄性c57bl/6小鼠。

10、优选地，所述s2中，具体步骤为：给予高脂饲料喂养6周，所述高脂饲料的脂质能量百分数为50%~70%。

11、优选地，所述s3中，链脲佐菌素连续注射三天，每日一次，每次剂量为60~80mg/kg小鼠体重。

12、优选地，链脲佐菌素溶解于0.1 mol/l、ph4.2~ 4.5的柠檬酸钠缓冲液中，现配现用。

13、优选地，所述s3中，链脲佐菌素阶段性注射中的第一次注射前小鼠禁食20~24小时，所述链脲佐菌素阶段性期间使用高脂饲料、红糖水饮水；所述链脲佐菌素阶段性注射中的第三次注射后停止红糖水饮水。

14、优选地，在链脲佐菌素诱导过程中设置诱导前禁食、现配现用、短期红糖水饮用、红糖水在第三次stz注射完成后停用等操作条件，可在保证建模效果的同时降低急性低血糖及应激反应风险，提高动物存活率和后续实验成功率。

15、优选地，所述s4中，高脂饲料喂养0~4周；所述筛选为剔除体重超过38g的小鼠。

16、优选地，所述s5中，雨蛙素腹腔注射持续4周，每周选取三天为注射日，每个注射日注射3次，每次间隔1小时，每次剂量为80~120μg/kg小鼠体重，注射期间维持高脂饲料喂养。

17、优选地，所述s5中，还包括在完成雨蛙素诱导后，继续给予小鼠高脂饲料喂养0~16周，获得脂肪浸润程度进一步加重的脂肪胰小鼠模型。

18、第二方面，本发明提供上述脂肪胰小鼠模型的构建方法的应用，包括脂肪胰发生机制研究、胰腺脂肪浸润相关分子靶点筛选、抗炎、抗纤维化或改善糖脂代谢药物研究、脂肪胰形成过程中脂肪生成、炎症反应、氧化应激、脂毒性损伤及纤维化相关信号通路研究中的至少一种。

19、优选地，本发明可以结合苏木精-伊红染色、油红o染色、马松三色染色、免疫组织化学或免疫荧光、代谢指标及胰腺内外分泌功能检测，对脂肪胰模型进行综合判定。

20、本发明与现有技术相比具有以下有益效果：

21、本发明提供的脂肪胰小鼠模型的构建方法以脂肪胰为直接建模目的，针对性更强，通过高脂饮食、stz阶段性干预及雨蛙素重复刺激相结合，更有针对性地诱导胰腺脂肪浸润及相关病理改变。

22、本发明提供的脂肪胰小鼠模型的构建方法得到的小鼠模型更符合脂肪胰发生过程中的复合病理特征，其并非单一因素诱导模型，而是在高脂饮食形成代谢异常背景的基础上，结合stz造成糖脂代谢紊乱及胰腺内分泌损伤，再通过雨蛙素重复刺激诱导胰腺损伤和组织重塑。该组合方式能够同时模拟脂肪胰形成过程中代谢异常、胰腺损伤、炎症反应及脂肪浸润等多重病理环节。

23、本发明提供的脂肪胰小鼠模型的构建方法得到的小鼠模型表型稳定，提高脂肪胰小鼠模型构建的稳定性和重复性。

1.一种脂肪胰小鼠模型的构建方法，其特征在于，使用高脂饮食、链脲佐菌素、雨蛙素联合诱导小鼠使其出现胰腺脂肪浸润。

2.根据权利要求1所述的脂肪胰小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的脂肪胰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述小鼠为雄性c57bl/6小鼠。

4.根据权利要求2所述的脂肪胰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述s2中，具体步骤为：给予高脂饲料喂养6周，所述高脂饲料的脂质能量百分数为50%~70%。

5.根据权利要求2所述的脂肪胰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述s3中，链脲佐菌素连续注射三天，每日一次，每次剂量为60~80mg/kg小鼠体重。

6.根据权利要求2所述的脂肪胰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述s3中，链脲佐菌素阶段性注射中的第一次注射前小鼠禁食20~24小时，所述链脲佐菌素阶段性期间使用高脂饲料、红糖水饮水；所述链脲佐菌素阶段性注射中的第三次注射后停止红糖水饮水。

7.根据权利要求2所述的脂肪胰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述s4中，高脂饲料喂养0~4周；所述筛选为剔除体重超过38g的小鼠。

8.根据权利要求2所述的脂肪胰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述s5中，雨蛙素腹腔注射持续4周，每周选取三天为注射日，每个注射日注射3次，每次间隔1小时，每次剂量为80~120μg/kg小鼠体重，注射期间维持高脂饲料喂养。

9.根据权利要求2所述的脂肪胰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述s5中，还包括在完成雨蛙素诱导后，继续给予小鼠高脂饲料喂养0~16周，获得脂肪浸润程度进一步加重的脂肪胰小鼠模型。

10.一种如权利要求1~9任一项所述的脂肪胰小鼠模型的构建方法的应用，其特征在于，包括脂肪胰发生机制研究、胰腺脂肪浸润相关分子靶点筛选、抗炎、抗纤维化或改善糖脂代谢药物研究、脂肪胰形成过程中脂肪生成、炎症反应、氧化应激、脂毒性损伤及纤维化相关信号通路研究中的至少一种。