一种基于H型DNA纳米结构荧光适配体传感器的制备方法

技术特征：
1.一种基于h型dna纳米结构荧光适配体传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）h型dna纳米结构的形成：取一定量的互补链cdna1和cdna2以及置换链zh置于恒温振荡器中孵育一定时间，之后向上述混合液中加入一定量的黄曲霉毒素b1适配体链（afb1-apt）以及不同浓度的黄曲霉毒素b1（afb1）孵育一定时间，最终得到h型dna纳米结构；（2）荧光适配体传感器的构建：向上述步骤（1）体系中加入一定浓度淬灭材料，在恒温振荡器中孵育一定时间，当afb1不存在时，afb1-apt将zh置换下来从而被淬灭材料吸附致使其荧光被淬灭，当加入afb1时，afb1优先与afb1-apt结合，此时参与形成h型dna纳米结构的zh由于双链结构游离在溶液中维持荧光信号，至此荧光适配体传感器制备完成；最后用缓冲液定容并经涡旋仪充分混合；设置固定激发波长、测量范围和测量电压，用荧光分光光度计记录发射波长的荧光强度；通过加入afb1前后响应信号的变化实现对afb1的定量分析。2.根据权利要求书1所述一种基于h型dna纳米结构荧光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述zh的序列为5
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aatgtgtgttggttctctctgtc-3’，其中3’端标记的荧光基团为alexa fluor 594、fam、rox、cy3、cy5的一种。3.根据权利要求书1所述一种基于h型dna纳米结构荧光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，恒温振荡器处理的条件均为：温度25~50℃，时间≤3h。4.根据权利要求书1所述一种基于h型dna纳米结构荧光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述cdna1的序列为5
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gagacacagagagactgagaagcgcatcacaacacgtcca-3’。5.根据权利要求书1所述一种基于h型dna纳米结构荧光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述cdna2的序列为5
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gagacacagagagatgatgcgcttctcggcaacacgtcca-3’。6.根据权利要求书1所述一种基于h型dna纳米结构荧光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的淬灭材料为氧化石墨烯、三维氮掺杂碳纳米片、氮掺杂碳纳米棒、空心碳球中的一种。7.根据权利要求书1所述一种基于h型dna纳米结构荧光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的淬灭材料浓度为0.1~0.5 mg/ml。8.根据权利要求书1所述一种基于h型dna纳米结构荧光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述缓冲溶液为tris-hcl、pbs、hepes中的一种或两种，体积范围在10～200 μl，ph范围在6.0～8.0。

技术总结
本发明属于生物传感检测技术领域，公开了一种基于H型DNA纳米结构荧光适配体传感器的制备方法及其应用，取一定量的cDNA1、cDNA2以及置换链ZH混合孵育，之后加入黄曲霉毒素B1适配体链(AFB1-Apt)孵育后得到H型DNA纳米结构，向上述混合体系中加入空心碳球混合孵育；当AFB1不存在时，AFB1-Apt与ZH发生链置换游离在体系中，此时ZH被淬灭材料吸附致使其荧光被淬灭；当AFB1存在时，AFB1优先与AFB1-Apt结合，此时参与形成H型结构的ZH由于双链结构游离在体系中维持荧光信号，至此荧光适配体传感器制备完成；根据响应信号变化对AFB1进行定量分析。并按照上述步骤检测实际加标样品，计算得到回收率。所制备的荧光适配体传感器表现出高灵敏度、良好的选择性及优秀的实际应用能力。良好的选择性及优秀的实际应用能力。


技术研发人员：卫敏 乔梦想 索志光 金华丽 何保山
受保护的技术使用者：河南工业大学
技术研发日：2023.06.17
技术公布日：2023/9/14