双特异性抗体及其应用的制作方法

技术特征：
no：9所示的cdr1、cdr2、cdr3序列；任选地，所述bcma抗体重链可变区包括：seq id no:14所示的氨基酸序列；任选地，所述第一肽链进一步包括第二重链恒定区，其中，所述bcma抗体重链可变区的c端与所述第二重链恒定区的n端相连；任选地，所述第二重链恒定区包括：ch1区、第二铰链区和第二fc肽段；任选地，所述ch1区的c端与所述第二铰链区的n端相连，所述第二铰链区的c端与所述第二fc肽段的n端相连；任选地，所述第二fc肽段包括：第二ch2和第二ch3区，其中，所述第二ch2区的c端与所述第二ch3区的n端相连；任选地，所述ch1区为人源、灵长目源或鼠源野生型igg1的ch1区；任选地，所述第二铰链区为人源、灵长目源或鼠源野生型igg1的铰链区片段；任选地，所述第二ch2区为人源、灵长目源或鼠源野生型igg1的ch2区片段；任选地，所述第二ch3区为人源、灵长目源或鼠源野生型igg1的ch3区片段；任选地，所述第二ch3区相比于人源野生型igg1的ch3区片段，具有t366s、l368a、y407v、y349c突变中的至少之一；任选地，所述第二重链恒定区包括seq id no:19所示的氨基酸序列。6.根据权利要求1所述的重组抗体，其特征在于，所述第二肽链包括：bcma抗体轻链可变区；任选地，所述bcma抗体轻链可变区包括：seq id no:10-12任一项所示的重链cdr；任选地，所述bcma抗体轻链可变区包括分别如seq id no：10、seq id no：11、seq id no：12所示的cdr1、cdr2、cdr3序列；任选地，所述bcma抗体轻链可变区包括：seq id no:15所示的氨基酸序列；任选地，所述第二肽链进一步包括轻链恒定区，其中，所述bcma抗体轻链可变区的c端与所述轻链恒定区的n端相连；任选地，所述轻链恒定区为人源、灵长目源或鼠源野生型轻链恒定区；任选地，所述抗体轻链恒定区为人源的kappa轻链恒定区；任选地，所述轻链恒定区为人源野生型igg1的轻链恒定区；任选地，所述轻链恒定区包括seq id no:32所示的氨基酸序列。7.根据权利要求1-6任一项所述的重组抗体，其特征在于，所述第一抗原结合区和第二抗原结合区通过knob-into-hole结构进行连接；任选地，所述knob-into-hole结构是由所述第一ch3区的t366w和/或s354c突变和所述第二ch3区的t366s、l368a、y407v、y349c至少之一的突变形成的；任选地，所述第一肽链与所述第二肽链通过键间二硫键连接；任选地，所述重组抗体包括seq id no:20-22所示的氨基酸序列。8.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸编码权利要求1～7任一项所述的重组抗体。9.根据权利要求8所述的核酸，其特征在于，所述核酸分子具有seq id no：23-25所示的核苷酸序列。10.一种表达载体，其特征在于，携带权利要求8或9所述的核酸分子。11.一种制备权利要求1-7任一项所述的重组抗体的方法，其特征在于，包括：
将权利要求10所述的表达载体引入到细胞中；将所述细胞在适于蛋白表达和分泌的条件下进行培养，以便获得所述重组抗体；任选地，所述细胞为真核细胞。12.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞携带权利要求8或9所述的核酸分子，或权利要求10所述的表达载体，或能够表达权利要求1-7任一项所述的重组抗体。13.一种组合物，其特征在于，包括：权利要求1～7任一项所述的重组抗体、权利要求8或9所述的核酸分子、权利要求10所述的表达载体或权利要求12所述的重组细胞。14.权利要求1-7任一项所述的重组抗体、权利要求8或9所述的核酸分子、权利要求10所述的表达载体、权利要求12所述的重组细胞或权利要求13所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或者预防髓系细胞白血病和bcma阳性癌症。15.根据权利要求14所述的用途，其特征在于，所述bcma阳性癌症包括下列中的至少之一：包括b细胞非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤和b细胞慢性淋巴细胞白血病。16.一种药物，其特征在于，包括：权利要求1-7任一项所述的重组抗体、权利要求8或9所述的核酸分子、权利要求10所述的表达载体、权利要求12所述的重组细胞或权利要求13所述的组合物。17.根据权利要求16所述的药物，其特征在于，所述药物进一步包括药学上可接受的辅料；任选地，所述药物用于治疗或预防髓系细胞白血病和bcma阳性癌症；任选地，所述bcma阳性癌症包括下列中的至少之一：b细胞非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤和b细胞慢性淋巴细胞白血病。18.权利要求1-7任一项所述的重组抗体、权利要求8或9所述的核酸分子、权利要求10所述的表达载体或权利要求12所述的重组细胞在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测4-1bb和/或bcma。19.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1-7任一项所述的重组抗体、权利要求8或9所述的核酸分子、权利要求10所述的表达载体或权利要求12所述的重组细胞。20.根据权利要求19所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测4-1bb和/或bcma。

技术总结
本发明提出了一种双特异性抗体及其应用，该抗体包括：第一抗原结合区，所述第一抗原结合区具有4-1BB分子结合活性；和第二抗原结合区，所述第二抗原结合区具有BCMA分子结合活性。本发明所制备的双特异性抗体能同时靶向4-1BB和BCMA，从而介导T细胞对肿瘤细胞的杀伤，具有较强的肿瘤抑制能力。具有较强的肿瘤抑制能力。


技术研发人员：曹国帅 成赢 李洋洋 武玉伟
受保护的技术使用者：合肥天港免疫药物有限公司
技术研发日：2022.07.19
技术公布日：2022/11/22