一种二肽防治抑郁症的用途

1.本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种二肽防治抑郁症的用途。


背景技术：

2.苦参子为豆科植物苦参(sophora flavescens ait.)的种子，其含有两个含量较高的非生物碱类成分，γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸和番石榴酸。
3.抑郁症又称抑郁障碍(major depressive disorder，mdd)，是最常见的精神障碍之一，其临床特征为显著而持久的心境低落。常病程迁延、反复发作，每次发作大多数可以缓解，部分可有残留症状或转为慢性，可造成严重的社会功能损害。抑郁症发病机制目前尚未阐明，大量研究表明，炎症因子会侵袭中枢神经系统，导致神经系统功能紊乱，神经炎症与抑郁症的发展密切相关。脂多糖(lipopolysaccharide，lps)可引起海马体神经炎症状态，脑内促炎细胞因子增加，并诱导抑郁样行为，lps腹腔注射诱导的抑郁样小鼠模型是目前被广泛认可，并能有效探讨抗抑郁作用的动物模型。
4.现有技术中未见苦参子提取物中的单体成分γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸抗抑郁作用的报道。


技术实现要素：

5.基于此，本发明提供了一种二肽或其盐或其它衍生物在制备用于防治抑郁症和/或抑郁样行为的药品、食品和/或保健品中的用途，其中所述二肽为γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸。
6.根据本发明的另一个方面，提供了一种包含二肽或其盐或其它衍生物的药物组合物在制备用于防治抑郁症和/或抑郁样行为的药品、食品和/或保健品中的用途，其中该二肽为γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸。
7.根据本发明的另一个方面，提供了一种包含二肽或其盐或其它衍生物的药物制剂在制备用于防治抑郁症和/或抑郁样行为的药品、食品和/或保健品中的用途，其中该二肽为γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸。
8.进一步地，该抑郁症和/或抑郁样行为为脂多糖诱导的抑郁症和/或抑郁样行为。
9.进一步地，该抑郁症和/或抑郁样行为为脂多糖腹腔注射诱导的抑郁症和/或抑郁样行为。
10.进一步地，该抑郁症和/或抑郁样行为为哺乳动物体内p-gsk-3β、cyclind1蛋白表达水平显著上升，β-catenin、wnt1蛋白水平表达显著下降的抑郁症和/或抑郁样行为。
11.进一步地，该抑郁症和/或抑郁样行为为哺乳动物大脑海马内细胞凋亡水平显著上升的抑郁症和/或抑郁样行为。
12.进一步地，该抑郁症和/或抑郁样行为包括选自以下的一种或多种状况(症状或情况)：旷场实验的旷场中间区运动距离及运动速度降低、高架十字迷宫实验的开臂停留时间减少以及强迫游泳实验的不动时间增加。
13.进一步地，该二肽通过与cyclind1蛋白结合而发挥作用。
14.进一步地，该二肽通过与p-gsk-3β蛋白结合而发挥作用。
15.进一步地，该二肽通过从植物中提取分离得到，或者通过转肽酶法合成得到，或者来源于商购。
16.本发明的有益效果：
17.γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸对脂多糖注射建立小鼠抑郁样动物模型的抑郁样行为具有改善作用，并且通过与靶标蛋白p-gsk-3β和cyclind1相结合而发挥抗抑郁作用。
附图说明
18.为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图，而并不超出本发明要求保护的范围。
19.图1为γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸与cyclind1蛋白相互作用的宏观图及微观图。其中a为宏观图，b为微观图。
20.图2为γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸与p-gsk-3β蛋白相互作用的宏观图及微观图。其中a为宏观图，b为微观图。
21.图3为γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸对旷场实验小鼠运动轨迹的影响。
具体实施方式
22.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
23.除非另外说明，本文所用的所有技术和科学术语和缩略语具有本发明领域或该术语应用领域中普通技术人员通常所理解的含义。虽然本发明实施过程中可使用类似于或等价于本文公开的那些的任何方法、条件、物质或材料，但本文描述了优选的方法、条件、物质或材料。
24.本发明有预期地涵盖所有的选择余地、变体和同等物，这些可能如权利要求所定义的那样包含在现有发明领域。所属领域的技术人员将识别许多类似或等同于在此所描述的方法和物质，这些可以应用于本发明的实践中去。本发明绝非限于方法和物质的描述。
25.在一定程度上，具体实施方式和/或权利要求中使用术语“包含”、“包括(including，includes)”和“具有(having，has，with)”或其变体，这些术语意在包括与术语“包含(comprising)”类似的方式。
26.正如背景技术部分所描述的，现有技术中未见苦参子提取物中的单体成分γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸抗抑郁作用的报道。为了解决上述问题，本发明提供了一种二肽或其盐或其它衍生物在制备用于防治抑郁症和/或抑郁样行为的药品、食品和/或保健品中的用途，其中所述二肽为γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸。
27.根据本发明的另一个方面，提供了一种包含二肽或其盐或其它衍生物的药物组合
物在制备用于防治抑郁症和/或抑郁样行为的药品、食品和/或保健品中的用途，其中该二肽为γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸。
28.根据本发明的另一个方面，提供了一种包含二肽或其盐或其它衍生物的药物制剂在制备用于防治抑郁症和/或抑郁样行为的药品、食品和/或保健品中的用途，其中该二肽为γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸。
29.在一种优选的实施方式中，该抑郁症和/或抑郁样行为为脂多糖诱导的抑郁症和/或抑郁样行为。
30.在一种优选的实施方式中，该抑郁症和/或抑郁样行为为脂多糖腹腔注射诱导的抑郁症和/或抑郁样行为。
31.在一种优选的实施方式中，该抑郁症和/或抑郁样行为为哺乳动物体内p-gsk-3β、cyclind1蛋白表达水平显著上升，β-catenin、wnt1蛋白水平表达显著下降的抑郁症和/或抑郁样行为。
32.在本发明中，小鼠腹腔注射lps后，模型组小鼠p-gsk-3β、cyclind1蛋白表达水平显著上升，β-catenin、wnt1蛋白水平表达显著下降，表明lps注射导致wnt/β-catenin信号通路异常，二肽(γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸)能显著降低抑郁模型组cyclind1、p-gsk-3β蛋白含量，同时提高β-catenin、wnt1蛋白表达水平(通过western blot实验方法)，小鼠抑郁样行为明显改善，结合蛋白表达水平趋于正常，提示苦参子提取物抗抑郁作用是通过激活wnt/β-catenin信号通路抑制神经炎症所实现。
33.在一种优选的实施方式中，该抑郁症和/或抑郁样行为为哺乳动物大脑海马内细胞凋亡水平显著上升的抑郁症和/或抑郁样行为。
34.在本发明中，小鼠腹腔注射lps后，与对照组比较，模型组小鼠的tunel阳性细胞明显增加。与模型组比较，二肽(γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸)组小鼠的tunel阳性细胞明显减少(通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dutp缺口末端标记法(tunel)检测凋亡细胞)。
35.在一种优选的实施方式中，该抑郁症和/或抑郁样行为包括选自以下的一种或多种状况(症状或情况)：旷场实验的旷场中间区运动距离及运动速度降低、高架十字迷宫实验的开臂停留时间减少以及强迫游泳实验的不动时间增加。并且在实际情况下，不限于上述所列举的状况(症状或情况)。
36.在一种优选的实施方式中，该二肽通过与cyclind1蛋白结合而发挥作用。
37.在一种优选的实施方式中，该二肽通过与p-gsk-3β蛋白结合而发挥作用。
38.在一种优选的实施方式中，该二肽通过从植物中提取分离得到，或者通过转肽酶法合成得到，或者来源于商购。例如参考发明专利申请号2021114897173中所涉及的方法。
39.实施例
40.1材料与方法
41.1.1动物
42.spf级雄性c57bl/6小鼠48只，体重18-20g，购于维通利华有限公司，饲养于spf级动物房，室温20℃～24℃，相对湿度为50～60％，光照节律12l/12d(7：00～19：00)，提供充足饲料和水，保持安静，定期清洁和消毒。购进后适应性饲养一周，自由摄食饮水。
43.1.2药品与试剂
44.γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸为实验室自制，纯度》98％；盐酸氟西汀分散片(百忧解)购
于礼来苏州有限公司；lps购自sigma公司(货号l2880)。
45.1.3动物分组
46.48只雄性小鼠分为6组，分别为对照组、模型组、氟西汀组(2.5mg/kg)以及γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸低剂量组(1.88mg/kg)、γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸中剂量组(3.76mg/kg)和γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸高剂量组(7.52mg/kg。
47.1.4造模和给药
48.对小鼠进行7天的γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸灌胃预处理，氟西汀组灌胃7天2.5mg/kg盐酸氟西汀，对照组和模型组灌胃7天相应剂量的生理盐水。第7天，模型组、氟西汀组和γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸各剂量组进行lps腹腔注射(1.5mg/kg)后给药。
49.1.5行为学检测
50.1.5.1旷场实验
51.给药后24h进行行为学测试。旷场实验设备尺寸为60cm
×
60cm，将旷场中心30
×
30cm的区域定义为中心区，其他区域为周围区。试验开始时将小鼠置于旷场周围区，用摄像头记录其在旷场中5min自由活动的轨迹，并记录其在旷场中心区的运动时间和距离。
52.1.5.2高架十字迷宫实验
53.试验开始前将小鼠笼置于高架十字迷宫房间中适应30min，试验开始时将小鼠面向开臂置于迷宫中心位置，用摄像头记录其在迷宫中5min自由活动的轨迹，记录其分别在闭臂和开臂中的停留时间。
54.1.5.3强迫游泳试验
55.强迫游泳装置是一圆柱形塑料桶，直径为20cm，高度为50cm。桶中水深30cm左右，水温保持在24℃左右。每只小鼠游泳时间均为6min，未进行预先筛选，后4min记录小鼠不动时间，以小鼠漂浮在水面无挣扎为不动标准。
56.1.6分子对接
57.从pubchem数据()下载γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸的结构式，利用chem3d软件最小化配体分子能量，并输出为mol2格式，再从pdb数据库(http://www.rcsb.org/)下载受体蛋白的pdb格式结构文件(pdb id：2ow3)，利用pymol软件对蛋白质进行去前处理，利用autodocktools1.5.6软件将γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸的mol2格式及受体蛋白的pdb文件格式转换为pdbqt格式并寻找活性口袋，设置搜索构象范围，最后运行vina脚本进行分子结合能计算以及分子对接结果展示，当vina结合能≤-5.0kcal/mol，且rmsd值《2.00说明两者形成稳定对接，当vina结合能≤-7.0kcal/mol时，表明配体分子与受体蛋白结合非常强烈，最后利用pymol软件对分子对接产生的配体-受体复合物进行3d展示。
58.1.7统计学分析
59.采用spss16.0统计软件进行数据分析。实验数据均以均数
±
标准误差表示，组间均数比较采用t检验(t-test)，以p《0.05为差异有统计学意义。
60.2结果
61.2.1γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸与靶蛋白分子对接分析
62.选取靶点cyclin d1和p-gsk-3β与γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸进行分子对接，以揭示γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸与信号通路中靶标蛋白的亲和力。
63.如图1所示，利用vina脚本将γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸与cyclin d1蛋白进行对接，
所产生的结合能为-5.1kcal/mol，表明配体分子γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸可以稳定与cyclin d1结合，后续利用pymol对配体-受体蛋白复合物进行相互作用的分析比较发现，γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸与受体蛋白cyclin d1的asn151形成氢键，距离为与arg87形成两个氢键，距离分别为与leu91存在疏水作用力，且与arg87形成盐桥，表明γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸主要通过氢键稳定结合在受体蛋白的口袋中。
64.如图2所示，利用vina脚本将γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸与p-gsk-3β蛋白进行对接，所产生的结合能为-6.2kcal/mol，表明配体分子γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸可以稳定与p-gsk-3β结合，后续利用pymol对配体-受体蛋白复合物进行相互作用的分析比较发现，γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸与受体蛋白p-gsk-3β的glu97、phe201、phe67形成氢键；与val70、ala83、lys85存在疏水作用力，且与lys还形成盐桥，表明γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸主要通过氢键与疏水作用稳定结合在受体蛋白的口袋中。
65.2.2γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸对抑郁样行为的影响
66.2.2.1γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸对小鼠旷场实验的影响
67.如图3所示，与对照组比较，模型组在旷场中间区的运动轨迹明显减少；与模型组比较，氟西汀组小鼠、γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸中剂量组和高剂量组小鼠在旷场中间区的运动轨迹均明显增加。
68.与对照组比较，模型组小鼠的旷场中间区运动距离和运动速度非常显著下降(p《0.01)。与模型组比较，氟西汀组小鼠的旷场中间区运动距离和运动速度显著上升(p《0.05)；γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸中剂量组和高剂量组小鼠的旷场中间区运动距离显著上升(p《0.05)，旷场中间区运动速度亦显著上升(p《0.05和p《0.01)。结果见表1。
69.表1γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸对小鼠旷场实验的旷场中间区运动距离及运动速度的影响(n＝8)
[0070][0071][0072]
注：与对照组比较
1)
p《0.05，
2)
p《0.01；与模型组比较
3)
p《0.05，
4)
p《0.01。
[0073]
2.2.2γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸对小鼠高架十字迷宫实验的影响
[0074]
与对照组比较，模型组小鼠高架十字迷宫开臂停留时间非常显著下降(p《0.01)。与模型组比较，氟西汀组小鼠的高架十字迷宫开臂停留时间显著上升(p《0.05)；γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸中剂量组和高剂量组的高架十字迷宫开臂停留时间亦显著上升(p《0.05和p《0.01)。结果见表2。
[0075]
表2γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸对小鼠高架十字迷宫开臂停留时间的影响(酪氨酸对小鼠高架十字迷宫开臂停留时间的影响(n＝8)
[0076][0077]
注：与对照组比较
1)
p《0.05，
2)
p《0.01；与模型组比较
3)
p《0.05，
4)
p《0.01
[0078]
2.2.3γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响与对照组比较，模型组小鼠的强迫游泳不动时间非常显著上升(p《0.01)。与模型组比较，氟西汀组小鼠的强迫游泳不动时间显著下降(p《0.05)；γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸中剂量组和高剂量组小鼠的强迫游泳不动时间亦显著下降(p《0.05和p《0.01)。结果见表3。
[0079]
表3γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响(n＝8)
[0080][0081][0082]
注：与对照组比较
1)
p《0.05，
2)
p《0.01；与模型组比较
3)
p《0.05，
4)
p《0.01
[0083]
3讨论
[0084]
抑郁症是一种常见的精神疾病，具有情绪低落，快感缺失以及在严重情况下具有自杀倾向等特征。本实验小鼠腹腔注射lps诱导抑郁动物模型，测定其抑郁相关行为变化。旷场实验显示，与正常组比较，模型组小鼠旷场中间区运动距离和运动速度明显降低，高架十字迷宫的开臂停留时间明显减少，强迫游泳实验的小鼠不动时间明显增加。上述结果表明，lps腹腔注射小鼠表现出明显的抑郁样行为，表明成功制备了小鼠的抑郁模型。氟西汀对lps注射小鼠进行灌胃给药后，小鼠各项行为学指标得到改善。
[0085]
本发明确认了苦参子提取物中主要活性成分γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸的抗抑郁作用。首先利用分子对接技术将p-gsk-3β和cyclind1 2个关键靶点与γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸进行分子对接，发现p-gsk-3β和cyclind1与γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸的结合能力较好。
cyclind1蛋白与γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸主要通过氢键稳定结合，而p-gsk-3β蛋白与γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸主要通过氢键与疏水作用稳定结合。分子对接结果表明γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸与靶标蛋白具有很好的结合作用，该成分具有极高的抗抑郁潜力。γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸给药后，模型小鼠行为学上的异常得到改善。与模型组比较，γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸能提高小鼠旷场实验的旷场中间区运动距离及运动速度，增加高架十字迷宫实验的开臂停留时间，减少强迫游泳实验的不动时间。这些结果表明γ-l-谷氨酰-l-酪氨酸具有较好的抗抑郁作用。
[0086]
以上对本发明实施例进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明仅用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。同时，本领域技术人员依据本发明的思想，基于本发明的具体实施方式及应用范围上做出的改变或变形之处，都属于本发明保护的范围。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。