用于治疗或预防多器官功能障碍综合征的组合物和方法与流程

用于治疗或预防多器官功能障碍综合征的组合物和方法
1.相关申请
2.本技术要求于2020年4月3日提交的美国临时申请63/004,769的优先权。上述申请的全部内容被援引纳入本文。
技术领域
3.技术领域是医学治疗，特别是用于治疗多器官功能障碍综合征(mods)的方法和组合物。


背景技术：

4.多器官功能障碍综合征(mods)是需要密集医疗干预的身体多个器官的衰竭。mods是当前icu实践中发病率和死亡率的主因。mods的起因有许多，例如严重创伤、烧伤、子痫、败血症、胰腺炎、吸入综合征、体外循环(如心脏搭桥)、多次输血、缺血再灌注损伤、自身免疫性疾病、热诱发疾病或中毒/毒性。mods与广泛的炎症密切相关。但抗炎剂未能显示出治疗mods的功效。mods的明确单一起因尚未被发现。
5.mods的治疗旨在应对起因并针对每个重要器官的衰竭提供密集支持。肺由呼吸机支持并增加向肺输氧。肾脏得到透析的支持。心脏得到增加心输出量的药物或设备的支持。在可能存在的实验方案之外，目前没有对肝衰竭的例行支持。
6.扭转血管系统衰竭的一些尝试集中在治疗低血压(血压过低)和/或降低高浓度一氧化氮(no)，它们常见于感染性休克患者。一氧化氮的过量产生会导致血管舒张和血压下降。然而，仅升高血压不会自动促成其它器官系统的改善。事实上，服用作为用于治疗危及生命的低血压(血压过低)的血管收缩剂的重酒石酸去甲肾上腺素已知实际上会加重器官损伤。同样，用一氧化氮合酶抑制剂546c88治疗感染性休克患者的尝试也未成功且实际上导致增大的死亡率和多器官衰竭。
7.在患有mods的患者中，血液对收缩血管和升高血压的血管升压药物的反应显著降低。此外，心脏收缩力降低。其它血管活性药物例如增加心脏收缩力的多巴酚丁胺或通过其它机制起作用的其它药物也无法逆转mods的不良反应。当患者死亡时，他们失去其对血管升压药物的反应，他们的血压下降到无法生存的水平。
8.鉴于上述情况，人们需要一种改善mods患者的器官功能的治疗方法。本技术的发明人出乎意料地发现磷脂纳米颗粒(pn)组合物的施用能预防或减轻多器官功能障碍综合征。


技术实现要素：

9.本技术的一个方面是一种用于针对有需要的受试者减轻或预防多器官功能障碍综合征(mods)的方法。该方法包括向需要治疗的受试者施用有效量的磷脂纳米颗粒(pn)组合物的步骤，该组合物包含：0～35％(w/v)量的亲脂性或疏水性组分；0.1％～60％(w/v)量的两亲乳化剂；极性液体载体；以及一种或多种电解质，其中，pn组合物包含平均直径为1～
500纳米的脂质体和/或胶束。在一些实施方式中，pn组合物包含总量为10～50％(w/v)的亲脂性或疏水性组分和两亲乳化剂。
10.本技术的另一方面是一种用于治疗受试者多器官功能障碍综合征(mods)的方法，包括：向需要治疗的受试者施用有效量的磷脂纳米颗粒(pn)组合物，其包含：含量为0～35％(w/v)的亲脂性或疏水性组分；含量为0.6％～60％(w/v)的两亲乳化剂；极性液体载体；以及一种或多种电解质，其中，pn组合物包含平均直径为1～500纳米的脂质体和/或胶束。在一些实施方式中，pn组合物包含总量为10～50％(w/v)的亲脂性或疏水性组分和两亲乳化剂。
11.在某些实施方式中，亲脂性或疏水性组分选自由大豆油、奇亚豆油、藻油和硅油构成的组。
12.在某些实施方式中，两亲乳化剂选自由磷脂和α-磷脂酰胆碱构成的组。在特定实施方式中，两亲乳化剂选自由蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和两亲肽构成的组。
13.在某些实施方式中，极性液体载体选自由水、水基溶液和非水极性液体构成的组。
14.在某些实施方式中，非水极性液体选自由二甲亚砜、聚乙二醇和极性硅液体构成的组。
15.在某些实施方式中，电解质选自由氯化钠、碳酸氢钠、柠檬酸钠、乳酸钠、硫酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乙酸钠、甘油磷酸钠、碳酸钠、氨基酸钠盐、丙酸钠、羟基丁酸钠、葡萄糖酸钠、氯化钾、乙酸钾、葡萄糖酸钾、碳酸氢钾、甘油磷酸钾、硫酸钾、乳酸钾、碘化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、柠檬酸钾、氨基酸钾盐、丙酸钾、羟基丁酸钾、氯化钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙、甘油磷酸钙、泛酸钙、乙酸钙、氯化镁、硫酸镁、甘油磷酸镁、乙酸镁、乳酸镁、氨基酸镁盐、氯化铵、硫酸锌、氯化锌、葡萄糖酸锌、乳酸锌、乙酸锌、硫酸铁、氯化铁、葡萄糖酸铁、硫酸铜和硫酸锰中的一种或多种来构成的组。
16.在某些实施方式中，pn组合物具有在2～3meq/l k (2～3mm)之间的亚生理范围内的钾离子浓度。
17.在某些实施方式中，pn组合物具有在亚生理范围内的镁离子浓度。
18.在某些实施方式中，pn组合物包含胶束和脂质体，其中，pn组合物中的胶束具有通过电子显微镜测量的在30～450纳米范围内的平均直径，并且其中，pn组合物中的脂质体具有通过电子显微镜测量的在1～25纳米范围内的平均直径。在某些实施方式中，pn组合物包含胶束和脂质体，其中，pn组合物中的胶束具有通过电子显微镜测量的在15～800纳米范围内的直径，并且其中，pn组合物中的脂质体具有通过电子显微镜测量的在1～300纳米范围内的直径。
19.在某些实施方式中，pn组合物通过静脉内、动脉内、骨内或心内来施用。
20.在某些实施方式中，pn组合物是氧含量为1～50毫升o2/100毫升pn组合物的含氧pn组合物。
21.在某些实施方式中，pn组合物具有在约1:200至约1:1之间的乳化剂:亲脂性或疏水性组分之比(w/w)。在某些实施方式中，pn组合物具有在约1:200至约1:1.7之间的乳化剂:亲脂性或疏水性组分之比(w/w)。
22.在某些实施方式中，pn组合物还包含结晶剂。
23.在某些实施方式中，pn组合物还包含肿胀剂。
24.在某些实施方式中，pn组合物还包含抗炎剂或免疫调节剂。
25.在某些实施方式中，pn组合物还包含亲脂性气体。
26.在某些实施方式中，受试者患有由流感病毒或冠状病毒感染引起的败血症诱导mods。在某些实施方式中，受试者患有由选自由以下内容组成的组的一种或多种而引起的败血症诱导mods：严重创伤、烧伤、子痫、败血症、胰腺炎、吸入综合征、体外循环、心脏搭桥、多次输血、缺血-再灌注损伤、自身免疫性疾病、热致病和中毒/毒性。
27.本技术的另一方面是一种用于治疗受试者多器官功能障碍综合征(mods)的方法，包括：向需要治疗的受试者施用有效量的磷脂纳米颗粒(pn)组合物，所述组合物包含：5％～35％(w/v)的大豆油；0.5％～15％(w/v)的卵磷脂；作为电解质的氯化钠和乳酸钠，其中，总电解质组分在50mm至200mm之间；含量在0.001mm至10mm之间的组氨酸；以及水，其中，卵磷脂形成：(1)在水溶液中具有亲脂性或疏水性核心的载脂胶束，所得胶束具有通过电子显微镜确定的在30～500纳米范围内的平均直径，并且其中，所述载脂胶束在室温下稳定至少4周；以及(2)通过电子显微镜确定的平均直径在1～500纳米范围内的脂质体。在某些实施方式中，pn组合物还包含氧。
附图说明
28.图1示出通过质谱测量的、水对一氧化氮的吸收(图a)和pn组合物对一氧化氮的吸收(图b)。
具体实施方式
29.详细参考本技术的某些方面和实施例来表明在所附结构和附图中的例子。本技术的各方面将结合实施例来描述，包括方法、材料和例子，这样的描述是非限制性的，并且本技术的范围旨在涵盖所有的等同、替代和修改，无论是众所周知的或被并入此处的。除非另有限定，否则本文所用的所有科技术语具有与本技术所属领域的普通技术人员通常所理解的一样的含义。本领域技术人员将认识到许多与这里描述的技术和材料相似或等效的技术和材料，它们可被用在本技术的各方面和实施例的实践中。本技术的所述方面和实施例不限于所述的方法和材料。
30.如在本说明书和所附权利要求中所用，单数形式“一”、“一个”和“这个”包括复数所指物，除非内容另有明确规定。
31.范围可以在本文中被表达为从“大约”一个特定值和/或至“大约”另一个特定值。当表达这样的范围时，另一实施例包括从一个特定值和/或到另一个特定值。相似地，当值被表达为近似值时，通过使用前缀词“约”，它将被理解为特定值形成另一个实施例。将进一步理解的是，每个范围的端点相对于另一个端点和独立于另一个端点都是重要的。还应当理解，在这里公开了许多值，并且除了值本身外，每个值也在此被公开为特定值的“近似值”。例如如果值“10”被公开，那么“大约10”也被公开。还应理解，当公开一个值时，“小于或等于该值”、“大于或等于该值”以及在这些值之间的可能范围也被公开，如本领域技术人员适当理解的那样。例如如果公开了值“10”，则还公开了“小于或等于10”以及“大于或等于10”。
32.术语“急性危重疾病”是指包括患者立即需要重症监护治疗的任何情况。该情况可
能由对身体的任何严重和广泛的伤害性打击造成，包括但不限于身体创伤、烧伤创伤、感染(以下称为败血症、严重败血症、感染性休克)、全身性炎症反应综合征(sirs)、急性心肌梗塞或其它血栓栓塞事件。
33.术语“重症监护治疗”还有在此的“器官支持治疗”可包括但不限于通气治疗(如机械通气)、血液透析、血管升压治疗、液体治疗、输血治疗(包括输注红细胞浓缩物、新鲜冷冻血浆、血小板浓缩物、全血或凝血因子浓缩物)、全身抗生素和/或抗病毒和/或抗真菌和/或抗原生动物疗法、肠外营养、粒细胞输注、t细胞输注、干细胞输注、抗凝和/或抗血栓治疗，包括低分子量肝素、皮质类固醇的给药、严格血糖控制等。
34.本文所用的术语“创伤”是指任何由外在动因对活体组织造成突然身体伤害如事故、损伤或冲击而引发的休克或身体伤口，外在动因如爆炸创伤、钝性创伤、穿透性创伤、由化学伤害(泄漏、战争或中毒)、辐射或烧伤造成的创伤。
35.术语“休克”按照传统临床含义来使用，即，休克是一种医疗紧急情况，此时身体的器官和组织没有接受足够的血液流动。这剥夺了器官和组织的氧气(血中携带)并允许废物的积累。休克由五类主要问题引起：心源性(意味着与心脏功能相关的问题)；低血容量性/出血性(意味着由于血管内空间的液体流失或血管扩张导致血管内空间的总体积低，因此循环系统中的液体体积在绝对或相对意义上低)；神经源性(由中枢神经系统严重损伤引起)、脓毒症性(由大量感染引起，通常由细菌引起)或过敏性/过敏(由免疫细胞全身组胺释放和过度血管舒张引起)。
36.如本文所用，术语“治疗”和“处治”是指对患有多器官功能障碍综合征(mods)或有发展为mods风险的患者的管理和护理。该术语旨在包括针对该病症的各类治疗，例如出于以下目的施用本技术的磷脂纳米颗粒组合物，目的是：改善、减轻或缓解症状或并发症；延缓病情、疾病或障碍的进展；治愈或消除病症、疾病或紊乱；和/或预防病症、疾病或紊乱或降低其风险，包括预防疾病的复发，其中，“预防”应理解为是指对患者的管理和护理以阻碍病症、疾病或紊乱的发展，并且包括施用pn组合物以预防症状或并发症的发生。待治疗个体是人。根据本技术的待治疗个体可以有不同的年龄和/或性别。
37.术语“器官衰竭”是指需要医疗干预以获得身体稳态和/或补偿该衰竭器官功能丧失的重病患者的器官功能改变。器官包括但不限于心脏和血管(心力衰竭、血管衰竭、低血压、器官衰竭)、肺(呼吸衰竭)、肝(肝衰竭)、肾(肾衰竭)、脑(脑病)。
38.术语“多器官功能障碍综合征”(缩写为mods)是指需要干预以实现体内平衡和/或补偿衰竭器官功能丧失的重症患者的多个器官功能的病理改变。主要原因引发不受控制的炎症反应。在手术和非手术患者中，败血症是最常见的原因。败血症可能导致脓毒症休克。在没有感染的情况下，类似脓毒症的疾病被称为全身炎症反应综合征(sirs)。sirs和脓毒症最终都可能发展为mods。但在三分之一的患者中找不到主因。mods已被确立为下述连续体的最后阶段：从sirs到脓毒症到严重脓毒症到mods。应注意的是mods与再灌注损伤不同。在再灌注中有一段无血流或低血流的时期。当血流恢复时，再灌注损伤是由活性氧引起的。活性氧清除剂可以防止再灌注损伤。但这样的清除剂不能防止mods。即使血流没有被中断，mods也可能发生。本技术提供消除败血症和其它mods诱导成因的方法。例如本技术的方法可被用于治疗由流感病毒或冠状病毒(如sars、mers和covid 19病毒(包括变体))感染以及由细菌、寄生虫和真菌感染引起的败血症所诱导的mods。
39.术语“败血症”按常规临床意义使用，是指全身炎症状态(称为全身炎症反应综合征(sirs))加之存在已知或疑似感染。“严重败血症”被定义为败血症引起的器官功能障碍或组织灌注不足(表现为例如低血压、乳酸升高、尿量减少或精神状态改变)。“败血性休克”是指在严重的败血症基础上经过静脉输注给药后仍出现持续低血压。败血症可导致严重败血症、感染性休克、多器官功能障碍综合征/多器官衰竭(mods)和死亡。
40.术语“全身炎症反应综合征”或“sirs”按常规临床意义来使用，是指在无确认的感染过程情况下对损伤作出反应的全身性炎症。sirs在符合以下2项或更多项时即可被确诊：1)体温低于36℃(96.8
°
f)或高于38℃(100.4
°
f)；2)心率大于90次/分；3)呼吸急促(呼吸频率高)，每分钟呼吸超过20次，或二氧化碳的动脉分压低于4.3kpa(32毫米汞柱)；4)白细胞计数低于4000个细胞/mm3(4x109个细胞/l)或大于12000个细胞/mm3(12x109个细胞/l)或存在大于10％的未成熟中性粒细胞(带状)。当在sirs基础上怀疑或证实感染(通过培养、染色或聚合酶链反应(pcr))时，根据定义，这是败血症。
41.术语“全身性炎症”是指由于身体(脉管系统、免疫系统、组织)对感染、非感染性抗原、创伤、烧伤、器官/组织破坏/退化/损伤、缺血、出血、中毒和/或恶性肿瘤的非特异性保守反应而引起的重病患者的器官功能改变。
42.术语“胶束”和“载脂胶束(lm)”在本文中关于分散在液体中的分子聚集体可以互换使用，该分子聚集体包括具有与周围溶剂接触的亲水性“头部”区域的聚集体，隔离胶束中心中的疏水单尾区域，其形成适合容纳和传递疏水剂的疏水核心。
43.本文所用的术语“脂质体”是指由脂质组成的囊泡结构，脂质具有包含长疏水烃链的尾基团和亲水头基团。脂质被布置形成脂质双层，其具有适合容纳和递送水性试剂的内部水性核心环境和适合容纳疏水性试剂、尤其是气体如氧气的脂质壁。
44.治疗方法
45.本技术的一个方面涉及一种用于治疗或预防患者多器官功能障碍综合征(mods)的方法，包括向受试者施用有效量的pn组合物，该pn组合物包含本技术的磷脂纳米颗粒(pn)组合物。本技术的发明人已出乎意料地发现，施用本技术的pn组合物能预防或减轻多器官功能障碍综合征(mods)。
46.本技术的pn组合物可被用于治疗或预防由受组织损伤影响的诸多种不同疾病状况引起的mods，包括但不限于败血症、严重创伤、烧伤、胰腺炎、吸入综合征、体外循环(如心脏搭桥术)、多次输血、缺血再灌注损伤、自身免疫性疾病、热病、子痫、中毒/毒性。在一些实施方式中，本技术的pn组合物被用于治疗或预防由流感病毒或冠状病毒(如sars、mers和covid19病毒)感染引起的败血症诱导mods。
47.在一个实施方式中，该方法包括以有效提供一氧化氮可逆摄取和释放以治疗或预防mods的量施用本技术的pn组合物。本技术寻求通过提供促进no的更有效再分布的pn组合物来应对与一氧化氮(no)过量产生相关的负面后果。一氧化氮的过量产生会导致血管舒张和血压降低。在患有mods或有发展为mods风险的患者中，血液对收缩血管并升高血压的血管升压药如重酒石酸去甲肾上腺素、血管加压素或肾上腺素的反应性明显降低。
48.一氧化氮合酶(nos)是催化精氨酸转化为no的酶。过去，已测试一种nos抑制剂(546c88)以试图减轻由no过量产生引起的问题。然而，试验因死亡率提高而提前终止(lopez等人，crit.care med.2004，第32卷，第1期，第21～30页)。抑制nos的主要问题是no
是维持血管通畅所必需的。因此，消除no会升高血压，但也会降低组织灌注并导致器官衰竭。抑制nos的另一问题是它在促进线粒体电子传递和atp产生方面发挥作用。但抑制nos显然会降低线粒体耗氧率和减少atp产生，这会导致氧化应激和线粒体不可逆损伤。
49.虽然不希望受理论束缚，但据信本技术的pn组合物包含可变的一氧化氮储存体，其可以随着一氧化氮局部浓度变化而吸收或释放一氧化氮，以产生no的更有效管理，部分基于no和本技术的磷脂纳米颗粒(pn)组合物都是疏水的事实来预测。
50.在这种情况下，no相对于血液含水环境优先定位于pn的疏水区域。图1示出通过质谱测量的no在水和本技术的pn组合物中的吸收和释放。实验程序在例8中有所描述。
51.与不释放一氧化氮的一氧化氮抑制剂或一氧化氮清除剂不同，pn快速释放它所吸收的一氧化氮。这使得pn能够充当一氧化氮的再分配剂，在此，它在一氧化氮过量产生的区域中降低其生物利用度，并在一氧化氮浓度不足的区域释放它以增大一氧化氮浓度，将一氧化氮的平衡从不利于生存改变为利于生存。pn及其类似物可被认为是一类新的治疗剂，被称为一氧化氮再分配剂，而不是抑制剂和清除剂。
52.因此，据信将pn注入血流允许吸收其中过量产生的一氧化氮，其在局部浓度不足区域可被容易释放。换言之，pn组合物用于降低一氧化氮的生物利用度但不影响其生物合成或旁分泌自分泌作用。减少过量产生的一氧化氮也可减少作为高反应性自由基的过氧亚硝酸盐的产生，其是一氧化氮与超氧化物反应的产物。在一些实施方式中，将pn组合物输注给mods患者以达到60～65毫米汞柱的平均血压或临床情况所需的其它合适血压的目标。
53.在一些实施方式中，接受本技术的pn组合物的患者已经或正在用血管升压药(也称为血管活性药物)治疗。血管升压药和血管活性药物的例子包括但不限于左旋芬酸、血管加压素和肾上腺素、血管紧张素ii、去氧肾上腺素、多巴胺和多巴酚丁胺。
54.本技术的pn组合物可以静脉内、动脉内、骨内或心内施用给需要这种治疗的受试者。在某些实施方式中，pn组合物以50～5000毫升、50～4000毫升、50～3000毫升、50～2000毫升、50～1000毫升、50～500毫升、100～5000毫升、100～4000毫升、100～3000毫升、100～2000毫升、100～1000毫升、100～500毫升、200～5000毫升、200～4000毫升、200～3000毫升、200～2000毫升、200～1000毫升、200～500毫升、500～5000毫升、500～4000毫升、500～3000毫升、500～2000毫升、500～1000毫升、1000～5000毫升、1000～4000毫升、1000～3000毫升和1000～2000毫升的量施用。在一些实施方式中，pn组合物以等于受试者正常血容量的约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％的量在30秒到24小时的时间内施用。
55.在某些实施方式中，pn组合物以0.1～5000毫升/分钟、0.1～2000毫升/分钟、0.1～1000毫升/分钟、0.1～500毫升/分钟、0.1～200毫升/分钟、0.1～100毫升/分钟、0.1～50毫升/分钟、0.1～20毫升/分钟、0.1～10毫升/分钟、0.1～5毫升/分钟、0.1～2毫升/分钟、0.1～1毫升/分钟、1～5000毫升/分钟、1～2000毫升/分钟、1～1000毫升/分钟、1～500毫升/分钟、1～200毫升/分钟、1～100毫升/分钟、1～50毫升/分钟、1～20毫升/分钟、1～10毫升/分钟、1～5毫升/分钟、1～2毫升/分钟、2～5000毫升/分钟、2～2000毫升/分钟、2～1000毫升/分钟、2～500毫升/分钟、2～200毫升/分钟、2～100毫升/分钟、2～50毫升/分钟、2～20毫升/分钟、2～10毫升/分钟、2～5毫升/分钟、5～5000毫升/分钟、5～2000毫升/分钟、5～1000毫升/分钟、5～500毫升/分钟、5～200毫升/分钟、5～100毫升/分钟、5～50毫升/分
钟、5～20毫升/分钟、5～10毫升/分钟、10～5000毫升/分钟、10～4000毫升/分钟、10～3000毫升/分钟、10～2000毫升/分钟、10～1000毫升/分钟、10～500毫升/分钟、10～200毫升/分钟、10～100毫升/分钟、10～50毫升/分钟、20～5000毫升/分钟、20～4000毫升/分钟、20～3000毫升/分钟、20～2000毫升/分钟、20～1000毫升/分钟、20～500毫升/分钟、20～200毫升/分钟、20～100毫升/分钟、20～50毫升/分钟、50～5000毫升/分钟、50～4000毫升/分钟、50～3000毫升/分钟、50～2000毫升/分钟、50～1000毫升/分钟、50～500毫升/分钟、50～200毫升/分钟、50～100毫升/分钟、100～5000毫升/分钟、100～4000毫升/分钟、100～3000毫升/分钟、100～2000毫升/分钟、100～1000毫升/分钟、100～500毫升/分钟、100～200毫升/分钟、200～5000毫升/分钟、200～4000毫升/分钟、200～3000毫升/分钟、200～2000毫升/分钟、200～1000毫升/分钟、200～500毫升/分钟、500～5000毫升/分钟、500～4000毫升/分钟、500～3000毫升/分钟、500～2000毫升/分钟、500～1000毫升/分钟、1000～5000毫升/分钟、1000～4000毫升/分钟、1000～3000毫升/分钟、1000～2000毫升/分钟、2000～5000毫升/分钟、2000～4000毫升/分钟、2000～3000毫升/分钟、3000～5000毫升/分钟、3000～4000毫升/分钟或4000～5000毫升/分钟的速率施用。
56.在其它实施方式中，以约500～700毫升/分钟、400～800毫升/分钟或300～900毫升/分钟的速率施用pn组合物。
57.在一些实施方式中，pn组合物在没有氧合情况下施用。在其它实施方式中，pn组合物是含氧pn组合物。在一些实施方式中，pn组合物是氧含量为2～50、2～40、2～30、2～20、2～10、2～5、5～50、5～40、5～30、5～20、5～10、10～50、10～40、10～30、10～20、15～50、15～40、15～30、15～20、20～50、20～40、20～30、25～50、25～40、25～30、30～50、30～40或40～50毫升o2/100毫升pn组合物的含氧pn组合物。
58.其它血流动力学参数例如脑、肾、心脏、肌肉、脾脏或其它组织的灌注、心输出量、收缩压、舒张压、平均动脉血压、每搏输出量指数、线粒体氧化磷酸化辅以近红外光谱或其它手段、血乳酸或膜极化也被可用于确定增加受试者血压所需的pn组合物的“有效量”。
59.当本技术的pn组合物对受试者施用并通过受试者循环时，各种药剂例如心脏停搏剂或强心剂可被直接施用到受试者循环系统中、直接施用到受试者心肌中、或被添加到本技术的pn组合物中。添加这些组分是为了达到所需生理效果如维持正常的心脏收缩活动、停止心脏纤颤或完全抑制心肌层或心肌的收缩活动。
60.心麻痹剂是造成心肌收缩停止的材料，并包括麻醉剂如利多卡因、普鲁卡因和新卡因以及浓度足以实现心肌收缩抑制的单价阳离子如钾离子。足以达到这种效果的钾离子浓度通常超过15mm。
61.磷脂纳米颗粒(pn)组合物
62.在一个实施方式中，用于治疗或预防mods的pn组合物包括亲脂性或疏水性组分、一种或多种两亲乳化剂、极性液体载体和一种或多种电解质。两亲乳化剂形成具有被极性液体载体包围的亲脂核心的亲脂或疏水物质承载胶束(lm)，和/或含有脂质双层和亲水内部(或核心)的脂质体。
63.在一些实施方式中，本技术的pn组合物包含lm和脂质体，其通过电子显微镜确定的直径为1～500纳米、1～400纳米、1～300纳米或1～200纳米。
64.在一些实施方式中，本技术的pn组合物包含：(1)通过电子显微镜确定的直径为30
～500纳米、30～400纳米、30～300纳米、30～200纳米、30～150纳米、30～120纳米、30～100纳米、30～80纳米、30～500纳米、30～400纳米、30～300纳米、30～200纳米、30～150纳米、30～120纳米、30～100纳米、30～80纳米、40～500纳米、40～400纳米、40～300纳米、40～200纳米、40～150纳米、40～120纳米、40～100纳米、40～80纳米、50～500纳米、50～400纳米、50～300纳米、50～200纳米、50～150纳米、50～120纳米、50～100纳米、50～80纳米、100～500纳米、100～400纳米、10～300纳米、100～200纳米、100～150纳米或100～120纳米的lm，和(2)通过电子显微镜确定的直径为1～30纳米、1～25纳米、1～20纳米、1～15纳米、1～10纳米、3～30纳米、3～25纳米、3～20纳米、3～15纳米、3～10纳米、5～30纳米、5～25纳米、5～20纳米、5～15纳米、5～10纳米、1～30纳米、7～25纳米、7～20纳米、7～15纳米、7～10纳米、10～30纳米、10～25纳米、10～20纳米或10～15纳米的脂质体。
65.在一些实施方式中，本技术的pn组合物包含由电子显微镜确定的平均粒径为1～100纳米、1～80纳米、1～50纳米、1～40纳米、1～30纳米、1～25纳米、1～20纳米、1～15纳米、1～10纳米、1～5纳米、5～100纳米、5～80纳米、5～50纳米、5～40纳米、5～30纳米、5～25纳米、5～20纳米、5～15纳米、5～10纳米、10～100纳米、10～80纳米、10～50纳米、10～40纳米、10～30纳米、10～25纳米、10～20纳米、15～100纳米、15～80纳米、15～50纳米、15～40纳米、15～30纳米、15～25纳米、15～20纳米、20～100纳米、20～80纳米、20～50纳米、20～40纳米、20～30纳米、20～25纳米、25～100纳米、25～80纳米、25～50纳米、25～40纳米、25～30纳米、30～100纳米、30～80纳米、30～50纳米、30～40纳米、40～100纳米、40～80纳米、40～50纳米、50～100纳米、50～80纳米或80～100纳米的纳米粒子(包含胶束和脂质体两者)。在一些实施方式中，本技术的pn组合物包含由电子显微镜确定的平均粒径为16～18纳米、15～19纳米或14～20纳米的纳米粒子。
66.在一些实施方式中，本技术的pn组合物包含如通过使用例如malvern zetasizer型或nano zs的动态光散射确定的平均直径为10～300纳米、10～200纳米、10～150纳米、10～120纳米、10～100纳米、10～90纳米、10～70纳米、10～50纳米、10～30纳米、30～300纳米、30～200纳米、30～150纳米、30～120纳米、30～100纳米、30～90纳米、30～70纳米、30～50纳米、50～300纳米、50～200纳米、50～150纳米、50～120纳米、50～100纳米、50～90纳米、50～70纳米、70～300纳米、70～200纳米、70～150纳米、70～120纳米、70～100纳米、70～90纳米、80～300纳米、80～200纳米、80～150纳米、80～120纳米、80～100纳米、80～90纳米、90～300纳米、90～200纳米、90～150纳米、90～120纳米、90～100纳米、100～300纳米、100～200纳米、100～150纳米、100～120纳米、120～300纳米、120～200纳米、120～150纳米、150～300纳米、150～200纳米或200～300纳米的纳米粒子(包含胶束和脂质体两者)。在一些实施方式中，本技术的pn组合物包含平均粒径为92～96纳米、90～98纳米或85～105纳米的纳米粒子。
67.将亲油或疏水组分分散在极性液体载体中以形成包含单层胶束和双层脂质体的纳米乳液，该单层胶束具有极性外表面和填充有亲油性或疏水性组分和/或其它疏水分子的内部疏水空间，该双层脂质体具有极性外表面和内部亲水空间。因为疏水性气体例如氧气和一氧化氮(no)相对于水或其它水性环境优先溶解在胶束的脂质核心中，故本技术的pn组合物提供能运载氧气和其它疏水性气体至身体组织的能力。
68.疏水性气体在亲脂性或疏水性核心中的溶解度促进组织对这些气体的吸收和运
输。内源性产生的气体，即一氧化碳、一氧化氮和硫化氢，也可被携载在乳液中以用于调节血管张力和细胞凋亡过程。
69.在一些实施方式中，pn组合物是增强有氧代谢的含氧pn组合物。在一些实施方式中，pn组合物是氧含量为1～50、1～40、1～30、1～20、1～10、1～5、1～2、2～50、2～40、2～30、2～20、2～10、2～5、5～50、5～40、5～30、5～20、5～10、10～50、10～40、10～30、10～20、15～50、15～40、15～30、15～20、20～50、20～40、20～30、25～50、25～40、25～30、30～50、30～40或40～50毫升o2/100毫升pn组合物的含氧pn组合物。
70.在一些实施方式中，pn组合物包含1～50、1～40、1～30、1～20、1～10、1～5、1～2、2～50、2～40、2～30、2～20、2～10、2～5、5～50、5～40、5～30、5～20、5～10、10～50、10～40、10～30、10～20、15～50、15～40、15～30、15～20、20～50、20～40、20～30、25～50、25～40、25～30、30～50、30～40或40～50毫升一氧化氮/100毫升pn组合物的no。
71.氙气和氩气是疏水性气体，其可在癫痫等病理状态下提供大脑保护。在一些实施方式中，pn组合物包含xe或ar或两者，其含量为1～50、1～40、1～30、1～20、1～10、1～5、1～2、2～50、2～40、2～30、2～20、2～10、2～5、5～50、5～40、5～30、5～20、5～10、10～50、10～40、10～30、10～20、15～50、15～40、15～30、15～20、20～50、20～40、20～30、25～50、25～40、25～30、30～50、30～40或40～50毫升气体/100毫升pn组合物。
72.在一些实施方式中，本技术的pn组合物进一步包含细胞凋亡抑制剂(例如z-vad-fmy，一种细胞凋亡抑制肽)、线粒体完整性保护剂(例如环孢菌素a，一种线粒体内孔开放抑制剂)、信号转导调节剂如甘油二酯或环状gmp或抗氧化剂如辅酶q10。
73.当使用具有平均直径小于30纳米的脂质体的pn时，脂质体可以穿过内皮细胞层并进入间质空间。这种脂质体可被用在血管空间的渗透性未增强的情况，或用于促进亲脂性或疏水性介质的细胞吸收或促进可有利地调节细胞内机制的分子或细胞组成的进入。
74.在某些情况下，本技术的pn组合物能够施加渗透力并吸收组织损伤介质例如前列腺素、一氧化氮、白三烯和血栓素以及其它亲脂性或疏水性介质例如血小板活化因子。因此在某些情况下，本技术的pn能够吸收mods患者产生的有毒分子。例如，肠道和胸导管淋巴结中产生的淋巴因子可能导致急性肺损伤和红细胞变形。其它有毒分子包括但不限于白三烯、前列腺素、一氧化氮、内毒素和肿瘤坏死因子(tnf)。pn组合物中的pn允许有效吸收亲脂性或疏水性化学介质。在其它情况下，pn可载有针对有毒化学介质的拮抗剂例如针对内毒素的抗体。
75.在具有例如由毛细血管渗漏引起的增强血管壁渗透性的mods患者中，上述磷脂纳米颗粒(pn)的小尺寸有助于它进入间质空间，否则其会受到较大结构的限制。毛细血管渗漏是由内皮细胞死亡和中性粒细胞作用引起的。它由细胞因子如il-1和tnf以及一氧化氮介导。中性粒细胞附着于受损内皮细胞并释放活性氧和细胞壁破坏酶如髓过氧化物酶。pn可以通过毛细血管渗漏进入间质并在间质空间内提供例如抗炎作用。
76.优选地，pn组合物被配制成包含在室温(例如25℃)或5℃下稳定至少3天、7天、2周、4周、12周、20周、180天、30周、40周、一年或更长时间的lm和/或脂质体。稳定性可以通过测量胶束直径变化来确定。不稳定的乳液将具有聚结并形成更大直径胶束的胶束。在某些优选实施方式中，pn组合物在室温下稳定至少4周。
77.在一些实施方式中，pn组合物由5％～40％(w/v)的量的大豆油和0.1％～18％(w/
v)的量的卵磷脂形成。在一些实施方式中，pn组合物还包含最终浓度为50～200mm的氯化钠。在一些实施方式中，pn组合物还包含1～5％的量的甘油。在一个实施方式中，pn组合物包含10％(w/v)的大豆油、0.6％(w/v)的蛋卵磷脂、1.13％(w/v)的甘油和77mm的氯化钠。在另一个实施方式中，pn组合物包含20％(w/v)的大豆油、1.2％(w/v)的蛋卵磷脂和2.25％(w/v)的蛋卵磷脂。在另一个实施方式中，pn组合物包含20％(w/v)的大豆油、1.2％(w/v)的蛋卵磷脂和2.25％(w/v)的蛋卵磷脂和77mm的氯化钠。
78.在一些实施方式中，该组合物由含量为10％～40％(w/v)、优选为15％～35％的大豆油和含量为6％～18％(w/v)、优选为10％～15％的卵磷脂、作为电解质的且总电解质组分在50～200mm之间的氯化钠和乳酸钠、含量在0.1～10mm之间的组氨酸以及水形成，使得卵磷脂形成(1)在水溶液中具有亲脂性或疏水性核心的载脂胶束，所得胶束的通过动态光散射确定的平均直径为70～150纳米、优选为90～120纳米并且在室温下稳定至少4周；以及(2)通过电子显微镜确定的直径在1～25纳米范围内的脂质体。
79.在另一个实施方式中，pn组合物包含10～40％(w/v)的大豆油和6～18％(w/v)的蛋卵磷脂或大豆卵磷脂。在一些实施方式中，pn组合物还包含0.6％(w/v)氯化钠、0.385％(w/v)乳酸钠(l)和0.155％(w/v)组氨酸。在一些实施方式中，pn组合物包含20～30％(w/v)大豆油、12％(w/v)蛋卵磷脂或大豆卵磷脂、0.6％(w/v)氯化钠、0.385％(w/v)乳酸钠(l)和0.155％(w/v)组氨酸。
80.在另一个实施方式中，pn组合物包含20％(w/v)的大豆油、12％(w/v)的蛋卵磷脂或大豆卵磷脂、0.6％(w/v)的氯化钠、0.385％(w/v)的乳酸钠(l)和0.155％(w/v)的组氨酸，其中，pn组合物在形成通过动态光散射测量的平均直径为80～120纳米的纳米粒子(包括脂质体和胶束)的条件下制备。在一些实施方式中，纳米粒子包含通过电子显微镜测量的直径在1～25纳米或7～20纳米范围内的脂质体和通过电子显微镜测量的直径在30～130纳米或40～100纳米范围内的胶束。
81.在另一个实施方式中，pn组合物包含30％(w/v)的大豆油、12％(w/v)的蛋卵磷脂或大豆卵磷脂、0.6％(w/v)的氯化钠、0.385％(w/v)的乳酸na(l)和0.155％(w/v)的组氨酸，其中，pn组合物在形成通过动态光散射测量的平均直径为80～120纳米的纳米粒子(包括脂质体和胶束)的条件下制备。在一些实施方式中，纳米粒子包含通过电子显微镜测量的直径在1～25纳米或7～20纳米范围内的脂质体和通过电子显微镜测量的直径在30～130纳米或40～100纳米范围内的胶束。
82.可以使用其它油例如来自奇亚籽、南瓜籽或其它来源的油。在某些实施方式中，上述pn组合物还可以包含约2～40％(w/v)、约2～20％(w/v)、约4～10％(w/v)或约5％(w/v)的白蛋白或白蛋白聚合物或与氨基酸或肽缀合的白蛋白聚合物，它们在形成胶束后被添加到pn组合物。在其它实施方式中，疏水或亲水组分携载于红细胞内。
83.在某些实施方式中，lm占pn组合物的10～40％(w/w)，而脂质体占pn组合物的5～30％(w/w)。在一些实施方式中，使用大豆油制造lm并且使用奇亚籽油制造脂质体，奇亚籽油具有比大豆油更大的抗炎作用。
84.在某些实施方式中，本技术的pn组合物以0.2～20mm、0.5～10mm、0.5～5mm或0.5～2mm的最终浓度包含选自由大豆油、奇亚籽油和藻油构成的组的亲脂性或疏水性组分、选自由磷脂和α-磷脂酰胆碱构成的组的乳化剂和氨基酸或n-乙酰氨基酸。
85.在某些实施方式中，pn组合物的最终氨基酸浓度为0.001～10mm、0.01～10mm、0.1～10mm、0.2～10mm、0.5～10mm、1～10mm、2.5～10mm、5～10mm或7.5～10mm。在某些实施方式中，pn组合物具有0.001、0.01、0.1、0.2、0.5、1、2.5、5、7.5或10mm的最终氨基酸浓度。乳化剂:亲油性或疏水性组分之比(w/w)可以在约1:400至约1:1之间，优选在约1:200至约1:50之间。在一个实施方式中，乳化剂:亲脂性或疏水性组分之比(w/w)为约1:100。在另一个实施方式中，乳化剂:亲脂性或疏水性组分之比(w/w)为约1.2:100。
86.在一些实施方式中，pn组合物基本上由脂质体组成并且不包括亲脂性或疏水性成分如大豆油。
87.在一些实施方式中，pn组合物包含在lm和/或脂质体中的一种或多种活性药物成分或试剂(例如核酸、蛋白质、小分子药物等)。活性药物成分或试剂可被掺入lm或脂质体的亲脂性或疏水性核心中或被掺入脂质体的亲水性核心中。
88.在一个实施方式中，pn组合物以0.1飞摩尔(fm)至10mm的最终浓度包含大豆油、卵磷脂和氨基酸、β-内啡肽或以飞摩尔或更高量级的浓度起效的其它调节剂。
89.本技术的pn组合物不含血红蛋白、血红蛋白衍生物、全氟化碳和全氟化碳衍生物。如本文所用，如果组合物不含任何血红蛋白、血红蛋白衍生物、全氟化碳和全氟化碳衍生物，或者如果组合物所含的血红蛋白、血红蛋白衍生物、全氟化碳和全氟化碳衍生物的量低于0.1％w/v，则组合物“不含血红蛋白、血红蛋白衍生物、全氟化碳和全氟化碳衍生物”。
90.本技术的pn组合物通常不含ca

、k

、mg

和al

。在某些实施方式中，ca

和k

刚好在使用前(例如在使用前24小时内)被添加到pn组合物。在其它实施方式中，ca

与pn组合物预混。因为al

对骨骼、脑、造血、血红素合成、球蛋白合成、铁吸收和代谢以及胎儿发育有毒，故所有的油和其它组分必须具有尽可能最少量的al

。在某些实施方式中，pn组合物含有浓度小于25毫克/升、20毫克/升、10毫克/升或5毫克/升的al

。在其它实施方式中，pn组合物不含al

，即，不能通过常规方法检测到。
91.在某些实施方式中，本技术的pn组合物中的胶束是自由移动的胶束，其未封装在任何类型颗粒中。此外，胶束壁由单层或双层两亲乳化剂分子构成，使得胶束可以容易地与同pn组合物接触的组织的细胞膜融合。此外，本技术的pn组合物中的胶束不含血红蛋白、血红蛋白衍生物、全氟化碳和全氟化碳衍生物。
92.亲脂性或疏水性成分
93.如本文所用，术语“亲脂性组分”是指天然存在或非天然存在的脂溶性材料。亲脂性组分的例子包括但不限于脂肪酰基、甘油脂、磷脂、鞘脂、甾醇脂、异戊烯醇脂、糖脂、聚酮化合物、非天然脂质、阳离子脂质、两亲性烷基氨基酸衍生物、二烷基二甲基铵、聚甘油烷基醚、聚氧乙烯烷基醚、三正辛胺、硼酸、三(3,5-二甲基-4-庚基)酯、甘油三酯、甘油二酯和其它酰基甘油如四甘油、五甘油、六甘油、七甘油、八甘油、九甘油和十甘油、疏水肽、疏水多糖、硅氧烷、脂肽、环肽及其混合物。在某些实施方式中，亲脂性或疏水性组分包含大豆油、奇亚籽油或藻油。
94.在一个实施方式中，亲脂性组分是大豆油。亲脂性组分也可能来自具有高浓度抗炎欧米茄3脂肪酸的奇亚籽。大豆油是血栓形成剂和促凝剂，因此在需要凝血时是符合期望的。在出血不再是问题后，富含欧米茄3脂肪酸的油将受到青睐，因为它们具有抗血栓形成的特性。富含欧米茄3脂肪酸的油包括但不限于奇亚油、藻油、南瓜油、亚麻籽油或鱼油。
95.在某些实施方式中，亲脂性或疏水性组分包含顺式或反式构型的具有一个或多个烯基官能团的不饱和脂肪酸。顺式构型是指相邻的氢原子或其它基团位于双键的同一侧。在反式构型中，这些部分位于双键的不同侧。双键的刚性冻结其构象，并且在顺式异构体的情况下导致链弯曲并限制脂肪酸构象自由度。一般，链具有越多的双键，其所具有的弹性越小。当一条链有多个顺式键时，它在其优势构象中变得相当弯曲。例如具有一个双键的油酸中具有“扭结”，而具有两个双键的亚油酸具有更明显的弯曲。具有三个双键的α-亚油酸倾向于钩形。其效果是，在受限环境中，例如当脂肪酸是脂质双层中的磷脂的一部分或脂滴中的甘油三酯时，顺式键限制脂肪酸密堆能力，因此可能会影响膜或脂肪的熔化温度。在一些实施方式中，亲脂性或疏水性组分包含高达1％、2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％(w/v)的具有一个或多个烯基官能团的顺式构型的不饱和脂肪酸。
96.顺式不饱和脂肪酸的例子包括但不限于4-癸烯酸(obtusilic acid)、十二碳-5-烯酸(linderic acid)、粗租酸(tsuzuic acid)、棕榈油酸(palmito-oleic acid)、油酸(oleic acid)、反油酸(elaidic acid)、异油酸(vaccenic acid)、岩芹酸(petroselinic acid)、烯酸(gadoleic acid)、二十碳烯酸(eicosenoic acid)、芥酸(erucic acid)、二十二烯酸(cetoleic acid)、神经酸(nervonic acid)、二十六烯酸(ximenic acid)和三十碳烯酸(lumepueic acid)；n-3型不饱和脂肪酸如α-亚麻酸、硬脂酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸；n-6型不饱和脂肪酸如亚油酸、亚麻酸、γ-亚麻酸、双高-γ-亚麻酸(bis-homo-γ-linolenic acid)和花生四烯酸；共轭脂肪酸如共轭亚油酸和α-桐酸；在5位带有双键的脂肪酸例如松油酸、环脂酸、杜松酸和哥伦比亚酸；多价不饱和脂肪酸，除了上面列出的那些之外，例如十六碳三烯酸、十八碳四烯酸、二十二碳五烯酸和二十四碳六烯酸；支链脂肪酸如异丁酸、异戊酸、异酸、反异酸；羟基脂肪酸如α-羟基酸、β-羟基酸、霉菌酸和多羟基酸；环氧脂肪酸；酮脂肪酸；环状脂肪酸。在某些实施方式中，亲脂性或疏水性组分还包含两亲分子。
97.亲脂性或疏水性组分可以占pn组合物的约1～80％、1～70％、1～60％、1～50％、1～40％、1～30％、1～20％、5～80％、5～70％、5～60％、5～50％、5～40％、5～30％、5～20％、10～80％、10～70％、10～60％、10～50％、10～40％、10～30％、10～20％、15～80％、15～70％、15～60％、15～50％、15～40％、15～30％、15～20％、20～80％、20～70％、20～60％、20～50％、20～40％、20～30％、30～80％、30～70％、30～60％、30～50％、30～40％、40～80％、40～70％、40～60％、40～50％、40～80％、40～70％、40～60％、40～30％、50～80％、50～70％、50～60％、60～80％、60～70％或70～80％(w/v)。在某些实施方式中，亲脂性或疏水性组分占pn组合物的约10％、约15％、约20％、约25％、约30％和约35％(w/v)。在一些实施方式中，亲脂性或疏水性组分占pn组合物的0～35％、5～35％、10～35％、15～35％、20～35％、25～35％、30～35％、0～30％、5～30％、10～30％、15～30％、20～30％、25～30％、0～25％、5～25％、10～25％、15～25％、20～25％、0～15％、5～15％或10～15％(w/v)，或包含选自由10％、15％、20％、25％、30％、35％构成的组的整数值的任何百分比范围。在其它实施方式中，亲脂性或疏水性组分的上限和/或下限由本文所述的任何所列出的浓度来限定。
98.两亲乳化剂
99.两亲乳化剂可以是任何两亲物或两亲性分子，其将具有在胶束的亲油或疏水核心中的疏水尾以及与极性载体接触的亲水端。乳化剂例子是卵磷脂、纯磷脂或两亲肽。
100.如本文所用，术语“两亲物”是指具有亲水性和亲油性或疏水性两者的化合物。两亲物的例子包括但不限于天然存在的两亲物例如磷脂、胆固醇、糖脂、脂肪酸、胆汁酸和皂苷；和合成的两亲物例如肽。
101.磷脂的例子包括天然或合成的磷脂例如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、异磷脂酰胆碱、鞘磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化磷脂。
102.糖脂的例子包括甘油糖脂和神经鞘糖脂。甘油糖酯的例子包括双半乳糖甘油二酯(例如双半乳糖月桂酸二甘油酯、双半乳糖二肉豆蔻酰甘油酯、双半乳糖二棕榈酰甘油酯、双半乳糖二硬脂酰甘油酯)和半乳糖甘油二酯(例如半乳糖月桂酸二甘油酯、半乳糖二肉豆蔻酰甘油酯、半乳糖二棕榈酰甘油酯、半乳糖二硬脂酰甘油酯)。神经鞘糖脂的例子包括半乳糖基脑苷脂、乳糖基脑苷脂和神经节苷脂。
103.甾醇的示例包括胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯、3β-[n
‑‑
(n',n'-二甲基氨基乙烷)氨基甲酰基]胆固醇、麦角甾醇和羊毛甾醇。
[0104]
在一个实施方式中，乳化剂包括蛋磷脂或蛋黄卵磷脂。在另一个实施方式中，乳化剂是大豆卵磷脂或α-磷脂酰胆碱。
[0105]
在其它实施方式中，乳化剂可占pn组合物的0.1～60％、0.1～50％、0.1～40％、0.1～30％、0.1～20％、0.1～15％、0.1～10％、0.1～5％、0.1～2％、0.3～60％、0.3～50％、0.3～40％、0.3～30％、0.3～20％、0.3～15％、0.3～10％、0.3～5％、0.3～2％、0.6～60％、0.6～50％、0.6～40％、0.6～30％、0.6～20％、0.6～15％、0.6～10％、0.6～5％、0.6～2％、2～60％、2～50％、2～40％、2～30％、2～20％、2～15％、2～10％、2～5％、6～60％、6～50％、6～40％、6～30％、6～20％、6～15％、6～10％、10～60％、10～50％、10～40％、10～30％、10～20％、10～15％、15～60％、15～50％、15～40％、15～30％、15～20％、20～60％、20～50％、20～40％、20～30％、30～60％、30～50％、30～40％、40～60％、40～50％或50～60％(w/v)。在某些实施方式中，乳化剂可以以pn组合物的约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约18％、约20％(w/v)的水平或在所列整数中任何两个之间的任何其它范围内存在。在其它实施方式中，乳化剂以pn组合物的约7～9％、9～11％、11～13％、13～15％、15～17％、17～19％、10～14％、9～15％或8～16％(w/v)或在所列整数中任意两个之间的任何其它范围内存在。在其它实施方式中，乳化剂的上限和/或下限由本文所述的任何所列浓度来限定。
[0106]
在某些优选的实施方式中，乳化剂是在上述量或范围之一内的卵磷脂例如蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂。
[0107]
极性液体载体
[0108]
极性液体载体可以是能够与脂质形成乳液的任何药学可接受的极性液体。术语“药学可接受”是指具有足够纯度和质量以用于配制本技术的组合物或药物的分子实体和组合物，其在被适当施用至动物或人时不产生不良反应、过敏反应或其它意外反应。由于人类使用(临床和非处方药)和兽医使用都同样被涵盖在本技术范围内，故药学可接受的制剂将包括用于人类或兽医使用的组合物或药物。在一个实施方式中，极性液体载体是水或水
基溶液。在另一个实施方式中，极性液体载体是非水极性液体例如二甲亚砜、聚乙二醇和极性硅胶液体。
[0109]
水基溶液通常包含与全血等渗或接近等渗的生理相容的电解质载体。载体可以是例如生理盐水、盐水-葡萄糖混合物、林格溶液、乳酸林格溶液、洛克-林格溶液、克雷布斯-林格溶液、哈特曼平衡盐水、肝素化柠檬酸钠-柠檬酸-葡萄糖溶液和聚合物血浆替代品例如聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇和环氧乙烷-丙二醇缩合物。pn组合物还可以包含其它成分例如药学可接受的载体、稀释剂、填充剂和盐，其选择取决于所用剂型、所治疗的病症、根据本领域技术人员的决定和这种添加剂的性质来达到的特定目的。
[0110]
电解质
[0111]
在一个实施方式中，本技术的pn组合物包括一种或多种电解质。本技术所使用的电解质通常包括用于药用目的的各种电解质。电解质的例子包括钠盐(例如氯化钠、碳酸氢钠、柠檬酸钠、乳酸钠、硫酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乙酸钠、甘油磷酸钠、碳酸钠、氨基酸钠盐、钠丙酸、羟基丁酸钠和葡萄糖酸钠)、钾盐(例如氯化钾、乙酸钾、葡萄糖酸钾、碳酸氢钾、甘油磷酸钾、硫酸钾、乳酸钾、碘化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、柠檬酸钾、氨基酸钾盐、丙酸钾和羟基丁酸钾)、钙盐(例如氯化钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙、甘油磷酸钙、泛酸钙和乙酸钙)、镁盐(例如氯化镁、硫酸镁、甘油磷酸镁、醋酸镁、乳酸镁和氨基酸镁盐)、铵盐(例如氯化铵)、锌盐(例如硫酸锌、氯化锌、葡萄糖酸锌、乳酸锌和乙酸锌)、铁盐(例如硫酸铁、氯化铁和葡萄糖酸铁)、铜盐(例如硫酸铜)和锰盐(例如硫酸锰)。其中，尤其特别优选的是氯化钠、氯化钾、氯化镁、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、乳酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠、乙酸钾、甘油磷酸钾、葡萄糖酸钙、氯化钙、硫酸镁和硫酸锌。
[0112]
钙、钠、镁或钾离子的浓度通常在血浆内这种离子的正常生理浓度范围内。通常，这些离子的期望浓度是从溶解的钙、钠和镁的氯化物盐中获得的。钠离子也可以来自也在溶液中的溶解的有机钠盐。
[0113]
在一个实施例中，电解质包括氯化钠、乳酸钠或两者。
[0114]
在一个具体实施方式中，pn组合物包含百分比浓度为约0.2～1％、0.3～0.9％、0.4～0.8％、0.5～0.7％或约0.6％(w/v)的氯化钠。
[0115]
在另一个实施方式中，药物浓度包含浓度为50～150mm、70～130mm、80～120mm、90～110mm、95～100mm或约97.4mm的氯化钠。
[0116]
在另一个实施方式中，pn组合物包含百分比浓度为约0.1～0.7％、0.2～0.6％、0.3～0.5％、0.35～0.45％、0.38～0.39％或约0.385％(w/v)的l-乳酸钠、d-乳酸钠或其混合物。
[0117]
在另一个实施方式中，pn组合物包含浓度为10～60mm、20～50mm、30～40mm或约34mm的l-乳酸钠、d-乳酸钠或其混合物。
[0118]
在一个实施方式中，钠离子浓度在约70～180mm、90～170mm、70～160mm、100～160mm、110～150mm、120～140mm、125～135mm、131～133mm的范围内或约为131.4mm。
[0119]
在一个实施方式中，钙离子浓度在约0.5～4.0mm、0.5～1.0mm、0.5～2mm、0.5～3mm、1～2mm、1～3mm、1～4mm、2～2.5mm、2～3mm、2～4mm、2.5～3mm或3～4mm的范围内。
[0120]
在一个实施方式中，镁离子的浓度在0至10mm的范围内。在另一个实施方式中，镁离子的浓度在约0.3～0.45mm、0.3～0.35mm、0.3～0.4mm、0.35～0.4mm、0.35～0.4mm、0.35
～0.4mm或0.4～0.45mm的范围内。最好不要在本发明的pn组合物中包含过量的镁离子，因为高镁离子浓度会对心脏收缩活动强度产生负面影响。在本发明的一个优选实施方式中，溶液含有亚生理量的镁离子。
[0121]
在一个实施方式中，钾离子的浓度在0～5meq/l k (0～5mm)之间的亚生理范围内，优选在2～3meq/l k (2～3mm)范围内。因此，pn组合物允许稀释输注的库存血中的钾离子浓度。结果，可以更容易地控制高浓度的钾离子和由此引起的潜在心律失常和心脏功能不足。含有亚生理量钾的pn组合物也可用于受试者血液置换和低温维持。
[0122]
在一个实施方式中，氯离子的浓度在50～200mm、50～150mm、70～180mm、70～130mm、80～170mm、80～120mm、90～160mm、90～110mm、95～150mm、95～100mm的范围内或约为97.4mm。在另一个实施方式中，氯离子的浓度在110mm至125mm的范围内。
[0123]
其它离子源包括钠盐(例如碳酸氢钠、柠檬酸钠、乳酸钠、硫酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乙酸钠、甘油磷酸钠、碳酸钠、氨基酸钠盐、钠丙酸、3-羟基丁酸钠和葡萄糖酸钠)、钾盐(例如乙酸钾、葡萄糖酸钾、碳酸氢钾、甘油磷酸钾、硫酸钾、乳酸钾、碘化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、柠檬酸钾、氨基酸钾盐、丙酸钾和3-羟基丁酸钾)、钙盐(例如葡萄糖酸钙、乳酸钙、甘油磷酸钙、泛酸钙和乙酸钙)、镁盐(例如硫酸镁、甘油磷酸镁、镁醋酸镁、乳酸镁和氨基酸镁盐)、铵盐、锌盐(例如硫酸锌、氯化锌、葡萄糖酸锌、乳酸锌和乙酸锌)、铁盐(例如硫酸铁、氯化铁和葡萄糖酸铁)、铜盐(例如硫酸铜)和锰盐(例如硫酸锰)。其中，尤其特别优选的是氯化钠、氯化钾、氯化镁、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、乳酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠、乙酸钾、甘油磷酸钾、葡萄糖酸钙、氯化钙、硫酸镁、氯化胆碱和硫酸锌。
[0124]
pn组合物的载气能力
[0125]
pn组合物中的例如呈胶束和/或红细胞影的形式的亲脂性或疏水性组分为pn组合物提供了携带比纯水溶液更大量亲脂性气体的能力。具体而言，亲脂性气体溶解到pn组合物的亲脂性部分中，以与亲脂性或疏水性组分和可能存在于pn组合物的亲脂性或疏水性部分中的任何其它疏水性液体材料形成均匀溶液。
[0126]
在一个实施方式中，亲脂性气体是氧气。氧气在脂质中的溶解度是在水中的4.41倍(battion等人，j.amer.oil chem.soc.1968,45:830-833)。因此，具有较高脂质含量的pn组合物将能够携带比具有较低脂质含量的pn组合物更多的氧气。在一个实施方式中，pn组合物具有约1～80％(w/v)的脂质含量。在其它实施方式中，pn组合物具有约10～80％(w/v)、20～60％(w/v)、约20～50％(w/v)、约20～40％(w/v)或约20～25％(w/v)的脂质含量。在又一个实施方式中，pn组合物具有约21.8％的脂质含量。在某些实施方式中，pn组合物通过在存在常规空气下混合亲脂性或疏水性组分和极性液体组分来制备。在其它实施方式中，通过使常规空气或纯氧气以气泡形式穿过pn组合物达所需时间段来进一步充氧该pn组合物。由于气泡因可能有空气栓塞而在循环中是不希望有的，故必须添加气泡阱以去除气泡，只留下已溶解在胶束核心、极性载体中或附着于蛋白质或其它添加剂的气体。也可以通过使胶束与富含气体的气氛平衡并结合pn组合物在混合室中的缓和运动而将气体加载到胶束上以免产生气泡。装载也可以在高于1个大气压的压力下进行，然后是释放压力以释放多余气体。
[0127]
在另一个实施方式中，亲脂性气体是氙气(xe)或氩气(ar)。在另一个实施方式中，亲脂性气体是一氧化氮(no)。在另一个实施方式中，亲脂性气体是硫化氢(h2s)。在又一个
实施方式中，亲脂性气体是一氧化碳(co)。
[0128]
在一个实施方式中，pn组合物包含载有气体混合物(例如氧气、硫化氢、一氧化碳和/或一氧化氮的混合物)的胶束。在另一个实施方式中，pn组合物含有多种载有不同气体的胶束之混合物。例如胶束混合物可含有50％载有no胶束和50％载有氧气的胶束。
[0129]
刚性非平面分子
[0130]
pn组合物还可包含具有刚性非平面结构的分子。这种分子将在胶束结构的疏水核心中产生用于气体分子的更大不规则性和更多空间，由此改变胶束载气能力。这种分子的例子包括但不限于( )纳洛酮、( )吗啡和( )纳曲酮。
[0131]
在一个实施方式中，具有刚性非平面结构的分子是( )纳洛酮，与阿片受体拮抗剂(-)纳洛酮不同，它不与阿片受体结合并且不会像(-)纳洛酮那样增加疼痛。在另一个实施方式中，( )纳洛酮以10-5
至10-4
m的浓度使用。在另一个实施方式中，( )纳洛酮以10-4
m或更高浓度使用。
[0132]
复苏后，可能会在患有会导致mods的病症的患者组织中引发炎症过程，包括内皮细胞(ec)损伤和毛细血管渗漏(cl)。在败血症和其它疾病中，疾病可能引发全身炎症并且以类似顺序导致ec损伤和cl。因此，在一个实施方式中，( )纳洛酮在产生抗炎作用的10-5
至10-4
m浓度范围内使用(simpkins co、ives n、tate e、johnson m.纳洛酮抑制人嗜中性粒细胞释放超氧化物(life sci.1985.10.14；37(15):1381-6)。
[0133]
具有非平面结构的分子还包括具有支链结构的有机分子。这种分子的例子包括但不限于三正辛胺、三正己胺、硼酸、三(3,5,-二甲基-4-庚基)酯、金属络合和非金属络合的氘卟啉二甲酯及其衍生物、六苯基硅氧烷和有机硅聚合物。
[0134]
血浆组分
[0135]
pn组合物可以进一步包括血浆组分。在一个实施方式中，血浆是动物血浆。在另一个实施方式中，血浆是人血浆。尽管不希望受限于任何特定科学理论，但据信血液替代物的施用可能将凝血因子的浓度稀释到不希望的水平。因此使用等离子体作为载氧组分的稀释剂来避免这个问题。可以通过本领域已知的任何手段来收集血浆，假定基本去除红细胞、白细胞和血小板。它优选使用自动等离子电泳设备来获得。血浆电泳设备是可商购的并包括例如通过超滤或通过离心从血液中分离血浆的设备。诸如由auto c,a200(baxter国际有限公司，迪尔菲尔德，il)制造的基于超滤的血浆电泳设备是合适的，因为它有效去除红细胞、白细胞和血小板，而又留下凝血因子。
[0136]
血浆可用抗凝剂收集，其中许多抗凝剂是本领域众所周知的。优选的抗凝剂是钙螯合抗凝剂，例如柠檬酸盐。在一个实施方式中，柠檬酸钠以最终浓度0.2～0.5％、优选0.3～0.4％、最优选0.38％用作抗凝剂。血浆可以是新鲜的、冷冻的、混集的和/或灭菌的。虽然来自外源的血浆可能是优选的，但在配制和施用pn组合物之前自受试者收集的自体血浆也在本技术中被使用。
[0137]
除了来自天然来源的血浆外，还可以使用合成血浆。如本文所用，术语“合成血浆”是指包含至少一种血浆蛋白的任何水溶液。也可以使用类似于血浆蛋白的蛋白质。
[0138]
肿胀剂
[0139]
在一个实施方式中，除了脂质胶束外，pn组合物还含有肿胀剂。肿胀剂由如下分子组成，其尺寸足以防止其穿过毛细血管床的开窗进入身体组织的间隙空间而从循环中流
失。肿胀剂的例子包括但不限于葡聚糖(例如低分子量葡聚糖)、葡聚糖衍生物(例如羧甲基葡聚糖、羧基葡聚糖、阳离子葡聚糖和硫酸葡聚糖)、羟乙基淀粉、羟丙基淀粉、支链淀粉、未取代或取代淀粉、明胶(例如改性明胶)、白蛋白(例如人血浆、人血清白蛋白、加热的人血浆蛋白和重组人血清白蛋白)、peg、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、阿拉伯胶、葡萄糖、葡萄糖(例如葡萄糖一水合物)、寡糖类(例如寡糖)、多糖降解产物、氨基酸和蛋白质降解产物。尤其特别优选的是低分子葡聚糖、羟乙基淀粉、改性明胶、重组白蛋白。
[0140]
由于其抗氧化作用，白蛋白也可被用于最大限度地减少活性氧与胶束组分的相互作用并且还可以稳定胶束结构。在一个实施方式中，肿胀剂是约2％、5％、7％或10％(w/v)的白蛋白。在另一个实施方式中，肿胀剂是分子量范围为30000至50000道尔顿(d)的多糖例如葡聚糖。在又一个实施方式中，肿胀剂是分子量范围为50000至70000d的多糖如葡聚糖。高分子量葡聚糖溶液由于其从毛细血管的较低渗漏率而更有效地防止组织肿胀。
[0141]
在一个实施方式中，多糖的浓度足以实现(当与下列物质一起使用时：钠、钙和镁的氯化物盐、来自上述有机钠盐和己糖的有机离子)胶体渗透压接近正常人血清，约28毫米汞柱。
[0142]
在另一个实施方式中，肿胀剂是甘油或甘露醇，其含量为pn组合物的约2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、10％、15％、20％、25％或30％(w/v)。在其它实施方式中，pn组合物含有2～5％w/v量的甘油或甘露醇。
[0143]
晶体剂
[0144]
pn组合物还可以包含晶体剂。晶体剂可以是任何晶体，其以pn组合物的形式优选能够实现大于800mosm/l的渗透压，即，它使pn组合物“高渗”。pn组合物中的合适的晶体及其浓度的例子包括但不限于在6％w/v的葡聚糖中的3％w/v的氯化钠、7％的氯化钠、7.5％的氯化钠和7.5％的氯化钠。在一个实施方式中，pn组合物具有在800～2400mosm/l之间的渗透压。
[0145]
抗炎和免疫调节剂
[0146]
在一个实施方式中，本技术的pn组合物还包括抗炎剂或免疫调节剂。显示抑制活性氧的抗炎剂的例子包括但不限于组氨酸、白蛋白、( )纳洛酮、前列腺素d2、苯烷基胺类分子。其它抗炎化合物和免疫调节药物包括：干扰素；干扰素衍生物，其包括倍泰龙(betaseron)、β-干扰素；包括伊洛前列素、西卡前列素的前列腺烷衍生物；糖皮质激素，包括皮质醇、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松；包含环孢菌素a、甲氧沙林、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤的免疫抑制剂；脂氧合酶抑制剂，包括齐留酮、mk-886、wy-50295、sc-45662、sc-41661a、bi-l-357；白三烯拮抗剂；包含acth及其类似物的肽衍生物；可溶性tnf受体；抗tnf抗体；白细胞介素或其它细胞因子的可溶性受体；针对白细胞介素或其它细胞因子、t细胞蛋白的受体的抗体；以及单独或联合施用的卡泊三醇及其类似物。
[0147]
碳水化合物和氨基酸
[0148]
pn组合物可以包含碳水化合物或碳水化合物的混合物。合适的碳水化合物包括但不限于简单的己糖(例如葡萄糖、果糖和半乳糖)、甘露糖醇、山梨糖醇或本领域已知的其它糖。在一个实施方式中，pn组合物包括生理水平的己糖。“生理水平的己糖”包括在2～50mm之间的己糖浓度。在一个实施方式中，pn组合物含有5mm葡萄糖。有时，需要提高己糖浓度，用以为细胞提供营养。因此如果需要，己糖范围可被扩大到约50mm以至少提供营养所需热
量。
[0149]
其它合适的碳水化合物包括药用目的用各种糖类。糖类例子包括木糖醇、糊精、甘油、蔗糖、海藻糖、甘油、麦芽糖、乳糖和赤藓糖醇。
[0150]
pn组合物可含有一种或多种氨基酸和/或一种或多种寡肽。合适的氨基酸包括但不限于丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸和2-氨基戊烯酸。在一个实施方式中，氨基酸选自如下构成的组：氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸和半胱氨酸。在另一实施方式中，pn组合物包含一种或多种已知防止细胞凋亡的氨基酸。这种氨基酸的例子包括谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸和2-氨基戊烯酸。
[0151]
氨基酸可以在0.1fm～200mm、0.1fm～100pm、100pm～10nm、10nm～10μm、0.01～200mm、0.2～50mm或0.5～2mm的浓度范围内使用。在一个实施方式中，氨基酸以1mm的浓度使用。
[0152]
缓冲剂
[0153]
本技术的pn组合物还可包含生物缓冲剂以将流体的ph维持在ph7～8的生理范围内。生物缓冲剂的例子包括但不限于n-2-羟乙基哌嗪-n'-2-羟基丙磺酸(hepes)、3-(n-吗啉代)丙磺酸(mops)、2-([2-hydroxy-1,1-双(羟甲基)乙基]氨基)甘氨酸乙磺酸(tes)、3-[n-三(羟甲基)甲基氨基]-2-羟乙基]-1-哌嗪丙磺酸(epps)、三[羟甲基]-氨基乙烷(tham)和三[羟甲基]甲基氨基甲烷(tris)。
[0154]
在一个实施方式中，缓冲剂是组氨酸、咪唑、保留咪唑环的两性位点的取代组氨酸或咪唑化合物、含有组氨酸或甘氨酸的寡肽(例如甘氨酰甘氨酸)或其混合物。组氨酸还能够减少活性氧并抑制细胞收缩(参见例如simpkins等人，j trauma.2007,63:565-572)。组氨酸或咪唑可以以约1mm、5mm、10mm、20mm、30mm、40mm、50mm的浓度或在约0.1mm至约200mm、1mm至约100mm、5mm至约50mm、5mm至约20mm的浓度范围内或在本文列出的任何组氨酸浓度之间的任何其它范围内使用。
[0155]
在另一实施方式中，本技术的pn组合物使用正常的生物组分来维持体内生物ph。简而言之，一些生物化合物例如乳酸能够在体内代谢并与其它生物组分一起作用以在动物中维持生物学合适的ph值。即使在低温和基本无血的条件下，生物组分也能有效地维持生物学合适的ph值。正常生物成分的例子包括但不限于羧酸、其盐和酯。羧酸具有rcoox的结构通式，其中，r是烷基、烯基或芳基，支链或直链，含有1至30个碳，该碳可被取代，x是氢或钠或其它生物相容的离子取代基，其可以附接在氧的位置，或者是含有1～4个碳原子的短直链或支链烷基，例如
‑‑
ch3、
‑‑
ch2ch3。羧酸和羧酸盐的例子包括但不限于乳酸盐和乳酸钠、柠檬酸盐和柠檬酸钠、葡糖酸盐和葡糖酸钠、丙酮酸盐和丙酮酸钠、琥珀酸盐和琥珀酸钠以及乙酸盐和乙酸钠。
[0156]
促凝剂
[0157]
积极的大容量复苏在不控制出血的情况下可能因破坏早期形成的软血栓和稀释凝血因子而加剧出血。在某些实施方式中，pn组合物还可以包含一种或多种凝血增强剂。凝血因子的例子包括但不限于因子vii、凝血酶、血小板和氨甲环酸。这些因子可能来自天然或非天然来源。在某些实施方式中，因子7以70～150iu/kg的浓度被添加到pn组合物，凝血酶原复合物以15～40iu/kg的浓度被添加到pn组合物，并且纤维蛋白原以浓度50～90毫克/
公斤被添加到pn组合物中。也可以添加天然衍生的或合成的血小板或血小板替代物。
[0158]
抗氧化剂
[0159]
在某些实施方式中，pn组合物还可包含一种或多种抗氧化剂。抗氧化剂的例子包括但不限于亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠(例如焦亚硫酸钠)、雕白粉(ch2ohso2na)、抗坏血酸、抗坏血酸钠、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠、半胱氨酸、半胱氨酸盐酸盐、高半胱氨酸、谷胱甘肽、硫代甘油、α-硫代甘油、依地酸钠、柠檬酸、柠檬酸异丙酯、二氯异氰脲酸钾、硫代乙醇酸钠、焦亚硫酸钠1,3-丁二醇、乙二胺四乙酸二钠钙、乙二胺四乙酸二钠、氨基酸亚硫酸盐(例如l-赖氨酸亚硫酸盐)、丁基羟基苯甲醚(bha)、丁基羟基甲苯(bht)、没食子酸丙酯、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素e及其衍生物(例如dl-α-生育酚、醋酸生育酚、天然维生素e、d-δ-生育酚、混合生育酚和trolox)、愈创木脂、去甲二氢愈创木酸(ndga)、l-抗坏血酸硬脂酸酯、大豆卵磷脂、棕榈酸抗坏血酸、苯并三唑和季戊四醇-四[3-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸酯]2-巯基苯并咪唑。尤其优选的是亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、抗坏血酸、同型半胱氨酸、dl-α-生育酚、醋酸生育酚、谷胱甘肽、trolox。
[0160]
其它组分
[0161]
除了以上讨论的组分外，pn组合物还可以包含其它添加剂，包括但不限于抗生素，例如青霉素、氯唑西林、双氯西林、头孢菌素、红霉素、阿莫西林-克拉维酸、氨苄青霉素、四环素、甲氧苄啶-磺胺甲恶唑、氯霉素、环丙沙星、氨基糖苷类(如妥布霉素和庆大霉素)、链霉素、磺胺类药物、卡那霉素、新霉素、单环内酰胺；抗病毒剂，例如盐酸金刚烷胺、金刚乙胺、阿昔洛韦、泛昔洛韦、膦甲酸、更昔洛韦钠、碘尿苷、利巴韦林、索立夫定、曲氟尿苷、伐昔洛韦、缬更昔洛韦、喷昔洛韦、阿糖胞苷、去羟肌苷、司他夫定、扎西他滨、齐多夫定、干扰素α和依度舒定；抗真菌剂如盐酸特比萘芬、制霉菌素、两性霉素b、灰黄霉素、酮康唑、硝酸咪康唑、氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑、克霉唑、苯甲酸、水杨酸、伏立康唑、卡泊芬净和硫化硒；维生素、氨基酸、血管扩张剂(如醇和多元醇)、表面活性剂、针对有害细胞因子(如肿瘤坏死因子(tnf)或白细胞介素)的抗体以及血管效力介质和免疫调节剂(如前列腺素、白三烯、阿片黑皮质素原片段和血小板活化因子)。
[0162]
在某些实施方式中，pn组合物还可包含有益阴离子如乳酸或谷氨酸。已发现含高渗乳酸的组合物可有效减轻急性血流动力学窘迫患者的脑水肿。在一个实施方式中，pn组合物含有250～2400mm乳酸或乳酸盐。在另一个实施方式中，pn组合物含有250～2400mm乳酸或乳酸盐和2～10mm钾。
[0163]
在一些其它实施方式中，pn组合物可以包含取代阳离子。例如pn组合物可以含有胆碱以取代钠离子。
[0164]
在一些其它实施例中，pn组合物还包含钾通道阻滞剂，其能够通过阻止钾外流来抑制程序性细胞死亡。
[0165]
在一些实施方式中，pn组合物还包含抗癌药物和/或细胞内信号分子例如camp和二酰基甘油。在其它实施方式中，pn组合物还完全或部分包含一种或多种细胞器或细胞器组成例如内质网、核糖体和线粒体。
[0166]
在其它实施方式中，pn组合物可与红细胞、修饰红细胞或血液的其它细胞组成进行组合。
[0167]
在其它实施方式中，pn组合物还包含阿片黑皮质素原片段例如β-内啡肽和促黑素
细胞激素、脑啡肽或阿片类药物，以改变免疫反应并提供镇痛作用。β-内啡肽也可以以0.01～100纳米、优选0.1～10纳米、更优选约1纳米的最终浓度来使用，以调节脓毒症状态下的中性粒细胞功能(参见例如simpkins等人，j natl med协会，1988,80:199-203)。
[0168]
在其它实施方式中，pn组合物还包含一种或多种用于治疗精神疾病或预防精神疾病的神经营养剂。
[0169]
pn组合物的制备
[0170]
pn组合物可以通过混合亲脂性或疏水性组分、乳化剂、水性载体和任何其它组分而形成乳液来制备。常用的混合方法包括但不限于搅拌、摇动、均质化、振动、微流化和超声处理。
[0171]
示例性均质器是apv2000均质器(spx集团)。对于小于100纳米的纳米乳液，可以在约15000～20000psi的设定压力下形成乳液，或者对于约300纳米的较大胶束乳液，可以在约22000～28000psi的设定压力下形成乳液。可能需要多轮(循环)均质化来产生所需尺寸的胶束。均质化循环数量可以根据配方而变并且可能需要例如6个循环、8个循环、10个循环、12个循环、15个循环。
[0172]
合适的粒子分析仪和/或zeta电位分析仪可被用于评估和监测胶束组合物的尺寸和稳定性。示例性分析仪包括malvern zetasizer nano zs，它可以提供尺寸和zeta电位测量。
[0173]
在一个实施方式中，pn组合物通过将由上述组分预先形成的脂质乳液与水性载体混合而成。此外，pn组合物可被携带在影红细胞中。具体而言，应以允许亲脂性气体溶解到乳液的亲油性部分或疏水性部分中但不形成可能增大气体栓塞风险的微泡的方式制备乳剂。
[0174]
在一些实施方式中，白蛋白或白蛋白聚合物或与氨基酸或肽缀合的白蛋白聚合物以2～40％(w/v)、约2～20％(w/v)、约4～10％(w/v)或约5％(w/v)的量被添加到pn组合物中。在形成胶束之后，将白蛋白或白蛋白聚合物或与氨基酸或肽缀合的白蛋白聚合物添加到pn组合物中。在一个实施方式中，将亲脂性或疏水性组分、乳化剂、水性载体和任何其它非白蛋白组分混合而形成乳液。然后将白蛋白、白蛋白聚合物或与氨基酸或肽缀合的白蛋白聚合物以所需浓度溶解于乳液中。
[0175]
在一些实施方式中，部分a或部分a和部分b的混合物在使用前加载有氧气、一氧化氮、一氧化碳、氙气、氩气、硫化氢、其它疏水性气体或这些气体的混合物。这些气体可被用于在初次推注后给有氧代谢输送氧气，提供初始一氧化碳推注以防止mods，在血管疾病或涉及血管收缩或阻塞的状态下打开血管，提供氙气或氩气以防止创伤性脑损伤或癫痫发作，或提供硫化氢以促进长期组织保存。载有一氧化氮的胶束也可用作抗高血压药物。a部分、b部分或a部分和b部分的混合物都可以通过高压釜灭菌被灭菌。
[0176]
在一些实施方式中，增强凝血的大豆油由抗炎并减少凝血的奇亚籽油来代替。在一个实施方式中，在发生出血的输注的初始阶段中使用具有大豆油的pn组合物。当出血不再是问题时，含有奇亚籽油的pn组合物被用于输注的后期阶段。
[0177]
在一些其它实施方式中，a部分中的甘油被甘露醇替代。在其它实施方式中，卵磷脂被α-磷脂酰胆碱替代以消除蛋白质污染和过敏反应的潜在来源(由于卵磷脂被卵蛋白质污染)。在其它实施方式中，配方2的b部分中的氨基酸被n-乙酰氨基酸替代。在一个实施例
中，pn组合物是非含氧pn组合物。如本文所用，术语“非含氧pn组合物”是指在大气中制备且未通过任何氧化装置或方法载有氧气的制剂。
[0178]
在一些实施方式中，pn组合物包含15～35％(w/v)的亲脂性或疏水性组分；含量为6～18％(w/v)的两亲乳化剂；极性液体载体；以及一种或多种电解质，其中，该两亲乳化剂形成具有亲脂性或疏水性核心的载脂胶束(lm)，所述核心包含极性液体载体中的亲油性或疏水性组分，并且其中，所述lm具有在20～140纳米范围内的直径。在一些其它实施方式中，pn组合物所包含的lm的直径在30～140纳米、30～130纳米、30～120纳米、30～100纳米、30～90纳米、30～80纳米、30～70纳米、40～140纳米、40～130纳米、40～120纳米、40～100纳米、40～90纳米、40～80纳米、50～140纳米、50～130纳米、50～120纳米、50～100纳米、50～90纳米、50～80纳米、50～70纳米、60～140纳米、60～130纳米、60～120纳米、60～100纳米、60～90纳米、60～80纳米、80～140纳米、80～130纳米、80～120纳米、80～110纳米、80～100纳米、100～140纳米、100～130纳米、100～120纳米、100～110纳米、120～140纳米、120～130纳米或130～140纳米的范围内，如通过电子显微镜法测量的那样。
[0179]
在一些其它实施方式中，pn组合物所包含的脂质体的直径在1～30纳米、1～25纳米、1～20纳米、1～15纳米、1～10纳米、3～30纳米、3～25纳米、3～20纳米、3～15纳米、3～10纳米、5～30纳米、5～25纳米、5～20纳米、5～15纳米、5～10纳米、7～30纳米、7～25纳米、7～20纳米、7～15纳米、7～10纳米、10～30纳米、10～25纳米、10～20纳米、10～15纳米、15～30纳米、15～25纳米、15～20纳米、20～30纳米、20～25纳米或25～30纳米的范围内，如通过电子显微镜测量的那样。
[0180]
在一些其它实施方式中，pn组合物所包含的纳米颗粒(包括胶束和脂质体)的平均直径在约70～160纳米、70～150纳米、70～140纳米、70～130纳米、70～120纳米、70～100纳米、70～90纳米、80～160纳米、80～150纳米、80～140纳米、80～130纳米、80～120纳米、80～100纳米、80～90纳米、90～160纳米、90～150纳米、90～140纳米、90～130纳米、90～120纳米、90～100纳米、90～98纳米、92～96纳米或95～100纳米的范围内，如通过动态光散射测量的那样。
[0181]
在一些实施方式中，该pn组合物包含由通过电子显微镜测定的直径在30～500纳米范围内的lm和直径在1～30纳米范围内的脂质体构成的混合物。
[0182]
在一些实施方式中，该pn组合物包含由lm和脂质体构成的混合物，其中，所有颗粒的平均直径如通过电子显微镜确定的在5～25纳米、5～20纳米、5～15纳米、5～10纳米、10～25纳米、10～20纳米、10～15纳米、15～25纳米、15～20纳米或20～25纳米的范围内。
[0183]
在一些实施方式中，该pn组合物包含约12％的卵磷脂并包含通过电子显微镜确定的直径为约30～500纳米的lm和直径为约1～25纳米的脂质体。在一些实施方式中，该pn组合物包含约12％的卵磷脂并包含通过电子显微镜确定的直径为约40～100纳米的lm和直径为约7～20纳米的脂质体。
[0184]
在一些实施方式中，该pn组合物包含约5～35％的大豆油和0.5～20％的卵磷脂，并且包含通过电子显微镜所确定的直径为约15～800纳米的lm和直径为约1～300纳米的脂质体。
[0185]
在一些实施方式中，该pn组合物包含约5～25％的大豆油和0.5～1.5％的卵磷脂，并且包含通过电子显微镜所确定的直径为约30～400纳米的lm和直径为约1～150纳米的脂
质体。
[0186]
在一些实施方式中，该pn组合物包含约5～25％的大豆油和0.5～1.5％的卵磷脂，并包含通过电子显微镜所确定的直径为约30～400纳米的lm和直径为约1～150纳米的脂质体。
[0187]
在一些实施方式中，该pn组合物包含约12％的卵磷脂，并包含通过电子显微镜确定的直径为约40～100纳米的lm和直径为约7～20纳米的脂质体。
[0188]
在一些实施方式中，上述的pn组合物还按照1～10％、1～8％、1～5％、1～3％、1～2％、5～10％、2～8％、2～5％、2～3％、3～10％、3～8％、3～5％、5～10％、5～8％或8～10％(w/v)的量含有甘油。
[0189]
在一些实施方式中，上述的pn组合物还包含按最终浓度50～200mm、50～150mm或50～100mm的氯化钠。
[0190]
在一些实施方式中，该pn组合物是在大气空气下制备的，而不富含氧气、一氧化碳、一氧化氮或氙。
[0191]
在一些实施方式中，该pn组合物可以在临床应用之前被加载亲脂性气体。这种气体的例子包括但不限于氧气、氙气、氩气、一氧化氮、一氧化碳、硫化氢。该气体的存在量足以调节血管功能和细胞栓塞。如本文所用，“加载有亲脂性气体的pn组合物”是指在pn组合物中的这种亲脂性气体含量已通过处理而提高的pn组合物。pn组合物可通过使亲脂性气体鼓泡穿过pn组合物达期望时间或通过在存在加压亲脂性气体的情况下搅拌pn组合物而被加载亲脂性气体。
[0192]
在一个实施方式中，pn组合物通过使纯氧或氧含量在21～100％(v/v)、优选40～100％(v/v)、更优选60～100％(v/v)、最优选80～100％(v/v)范围内的气体鼓泡经过混合物达30秒以上、优选1～15分钟、更优选1～5分钟而被充氧。氧气也可以在压力下被加入，然后是将压力降低到一个大气压。在一个实施方式中，pn组合物在即将应用前才被充氧。pn组合物可以使用便携式氧气罐或便携式氧气浓缩器、例如由马萨诸塞州安多弗的philips healthcare生产的evergo便携式脉冲剂量氧气浓缩器来充氧。
[0193]
另一种方法可以允许乳液与充满待添加气体的气氛平衡。在大多数情况下，需要气泡捕集器来去除可能成为气栓的气泡。可以通过实验来确定特定组成的pn组合物的平衡时间。
[0194]
在一些实施方式中，该pn组合物包含含氧脂质乳液。如本文所用，术语“含氧脂质乳剂”或“含氧pn组合物”是指特定类型的充气脂质乳液或充气流体，其已被迫吸收氧，使得其所含氧的总浓度大于在大气平衡条件下存在于相同液体中的氧浓度。
[0195]
例子
[0196]
提出以下例子是为了给本领域普通技术人员提供关于如何实施本技术方法的完整公开和描述，而并非想要限制本发明的范围。已努力确保关于所用数字的准确性(例如数量、温度等)，但应考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则份数是重量份数，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，压力是大气压或接近大气压。
[0197]
例1：磷脂纳米颗粒(pn)组合物的制备
[0198]
a部分的制备
[0199]
大豆油10％～20％＝10～20克
[0200]
蛋黄磷脂0.6％～12％＝0.6～12克
[0201]
加水至100毫升最终体积
[0202]
加入氢氧化钠直至ph＝8.0
[0203]
超声产生磷脂纳米颗粒
[0204]
b部分的制备
[0205]
氯化钠0.6克
[0206]
乳酸钠(l)0.385克
[0207]
组氨酸0.155克
[0208]
a部分可单独使用，或在使用后24小时内与b部分混合，或预混合。也可以将其中一部分或两个部分都冻干，并且可以在使用时加水。在一些实施方式中，将甘油以1.13％(w/v)或2.25(w/v)的最终浓度添加到最终产品中。
[0209]
例2：用pn组合物治疗患者a的mods
[0210]
患者a患有mods，该患者是心脏移植失败的39岁女性。即使在使用心室辅助装置后，患者也出现心脏骤停。多个器官都衰竭。需要借助呼吸机100％供氧以达到可行的氧合水平，肺功能衰竭是显而易见的。发生心脏骤停和需要将肾上腺素直接注入心脏以恢复自发收缩，从而证明心脏衰竭。为了解决心脏骤停的问题，她被开胸。由于肾功能衰竭，患者没有排尿。尽管服用大剂量重酒石酸去甲肾上腺素并接受液体推注，她的平均动脉血压(map)仅为43毫米汞柱。她的肺功能严重受损，如仅为132的p/f比所表明的那样。p/f越低，血压越低，生存能力越低。
[0211]
在30分钟内向患者施用500毫升本技术的pn组合物。没有进行其它干预。这促使肺功能改善，如map从43毫米汞柱增大到69毫米汞柱所表明的那样。p/f比从132增大到235。
[0212]
例3：用pn组合物治疗患者b的mods
[0213]
患者b是69岁女性，其脚部感染并出现感染性休克，导致mods。肺部需要呼吸机支持。肾功能由透析支持。患者在心脏骤停后出现心衰。尽管接受了白蛋白和生理盐水的推注并且服用了极其大量的血管升压药、即100微克/分钟的重酒石酸去甲肾上腺素、0.1单位/分钟的血管加压素和30微克/分钟的肾上腺素，但她的map仅为39毫米汞柱。尽管上了呼吸机，但她的p/f比仅为131。
[0214]
在30分钟内向患者施用500毫升本技术的pn组合物。在没有任何额外干预的情况下，她的map从39增加到59毫米汞柱，她的p/f比从131增加到240。
[0215]
例4：用pn组合物治疗患者c的mods
[0216]
患者c是65岁女性，由于心包腔内积血，她因心脏压塞而送到急诊室。这严重限制心脏扩张，使其无法向身体其它部位输送足够血流量。心脏压塞导致两次心脏骤停，需要用针头从心包腔引流血液。这些事件导致mods。在液体推注和面罩吸氧未能分别改善她的血压和氧合后，她被上了呼吸机和施用血管升压药。肺衰竭表现为低p/f比。肾衰竭反映在肌酐升高。天冬氨酸氨基转移酶(ast)与丙氨酸氨基转移酶(alt)的比率增大表明肝脏受损。乳酸升高表明器官灌注不良。她服用血管升压药，分别是32微克/分钟的重酒石酸去甲肾上腺素和0.04单位/分钟的血管加压素。
[0217]
在120分钟内向患者施用765毫升本技术的pn组合物。在接受pn组合物后，她的map从68毫米汞柱升高到86毫米汞柱。她的p/f比从63增大到116。重酒石酸去甲肾上腺素的剂
量从32微克/分钟减小到10微克/分钟。表1示出输注pn后24小时她的血液检验参数的改善。肌酐下降表明肾功能有所改善。ast是天冬氨酸转氨酶，alt是丙氨酸氨基转移酶。两者都是肝组织中的酶。ast/alt比值越高，肝损伤程度越严重。正常的ast/alt比值小于1.0。pn组合物后的该比值的减小是肝功能改善指标。乳酸是体内组织整体灌注的指标。乳酸越高，预后越差。输注pn组合物后降低的乳酸是整体组织灌注改善的指标。甘油三酯水平是血液中脂质含量的指标。在输注pn组合物后，甘油三酯水平从109起增加，且在输注后第二天为736mg/dl。甘油三酯水平是血液中pn水平随时间变化的指标。未观察到这种升高的甘油三酯的不利影响。升高之后24小时，甘油三酯水平降至244mg/dl。
[0218]
表1 pn输注后的肺功能(p/f比)、肾功能(肌酐)、肝脏损害(ast/alt)、器官灌注(乳酸)和甘油三酯。
[0219][0220]
在这些结果期间内，除了输注pn组合物外，无任何干预。测量结果表明，在输注pn组合物后，在心血管、肺、肾和肝系统方面有所改善。此外，在流过组织的整体血流量方面有所改善。
[0221]
例5：用pn组合物治疗患者d的mods
[0222]
患者d是65岁的男性，被检测确诊为covid-19。他的map下降，输液后未见好转。血管升压药对于将他的血压升高到可存活水平是必要的。当在输液后他的map未提高时，他符合感染性休克的标准。即使他以11微克/分钟的速度施用血管升压药，即重酒石酸去甲肾上腺素，他的血压仍为68毫米汞柱。他的肺部状况严重恶化，需要上呼吸机。尽管有最大的呼吸机支持，他的肺部状况继续下降，使得他的pf比仅为56。他在2.4小时内被静脉施用200毫升pn组合物。这使得map从68毫米汞柱升高到78毫米汞柱。他的p/f比从56增大到199。
[0223]
7天后，虽仍上呼吸机并接受5微克/分钟的重酒石酸去甲肾上腺素和0.04单位/分钟的加压素，但患者的p/f比降至62。患者在2.5小时内被施用200毫升pn组合物。这导致血压从67毫米汞柱升高到70毫米汞柱，p/f比从62增大到191。
[0224]
6天后，患者仍上呼吸机并施用5微克/分钟的重酒石酸去甲肾上腺素和0.04单位/分钟的血管升压药。p/f比降至81。在10分钟内，患者施用400毫升的pn组合物。这使得p/f比从81增大到145。血压升高，故患者可完全停用血管升压药。停用血管升压药后，map为107毫米汞柱。
[0225]
例6：用pn组合物治疗患者e的mods
[0226]
患者e是62岁男性，其根据临床标准被诊断为患有covid-19。他在用于诊断covid-19的测试检出之前已有表现。他处于感染性休克。他还患有多灶性肺炎，其血培养对革兰氏阳性球菌呈阳性。因为其低血压，他被施用大剂量血管升压药，所述血管升压药是重酒石酸去甲肾上腺素、血管加压素和去氧肾上腺素。尽管采取了这些措施，他还是进入心脏停搏期。遵循高级心脏生命支持方案。但他无反应。向他施用1000毫升pn组合物。此后，他的血压升至67毫米汞柱且能停用血管升压药。他的氧气需求从100％吸氧降到55％吸氧。
[0227]
例7：用pn组合物治疗患者f的mods
[0228]
患者f#5是58岁女性，被诊断为covid-19和感染性休克。她患有严重肺炎。她上了呼吸机。尽管施用大剂量血管升压药，她还是进入心脏停搏。她对高级心脏生命支持方案无反应。在施用1000毫升pn组合物之前，她的血压为零。输注后，她的血压升至平均值，即69毫米汞柱。在pn组合物之前，尽管给予100％吸氧，但她的氧饱和度为55％。在输注pn组合物后，她的需氧量降到55％。
[0229]
例8：pn组合物和水中的一氧化氮含量
[0230]
将500微升pn(含有20％大豆油、1.2％蛋卵磷脂、2.25％甘油，依据动态光散射的平均粒径为400纳米)被置于15毫升瓶中，一氧化氮按照100ppm混在氦气中以气泡形式被通入pn两分钟。相同的方法被用于在去离子水中添加一氧化氮。连续采样四极质谱仪被用于量化样品流体所运载的一氧化氮。吹扫容器中的水被保持在37℃并根据需要含有消泡溶液。为了测量pn和水中运载的一氧化氮，将100微升样品流体注入该设备的吹扫容器中。样品气体迅速从流体中被释放并以推注形式从吹扫容器被输送到质谱仪。使用peakfit(systat software有限公司，伊利诺伊州芝加哥(美国))对因样本气体与检测器接触而产生的信号进行积分并与用去离子水获得的饱和值相比较。每组进行10次测量。吸收的一氧化氮体积被确定为曲线下面积。对于pn和水，平均值和标准误差分别为3.19
×
10-3
±
0.19
×
10-3
和2.12
×
10-3
±
0.17
×
10-3
摩尔/升，表明no在20％pn中的溶解度是在水中的1.5倍。从pn和水中释放一氧化氮都很快速，分别约2秒。
[0231]
所获数据被显示在下表2中。
[0232]
表2 h2o和pn组合物中的一氧化氮含量
[0233][0234][0235]
*双尾未配对student’s t检验表明明显差异，p＝0.0008
[0236]
如图1所示，与水相比(图a)，pn吸收了更多的一氧化氮(图b)。在图1所示的代表性实验中，曲线下的面积与吸收的一氧化氮量相关，并且一氧化氮释放速率与自水中释放的速率一样都很快。这种快速释放允许pn能使一氧化氮分布从无法存活状态转变为存活状态。
[0237]
在此所用的术语和描述仅以说明方式来阐述而不意味着限制。本领域技术人员将会认识到，在如以下权利要求及其等同所限定的本发明精神和范围内可以实现许多变化，其中，所有的术语都应以其可能的最广泛含义来理解，除非另有说明。