一种提高荧光免疫层析试纸条检测精密度的方法与流程

1.本发明涉及一种提高荧光免疫层析试纸条检测精密度的方法。


背景技术：

2.免疫层析法是国内外常用的一种快速诊断技术，其具有操作简单快捷使用方便，不受时间地点限制，适合于床旁检测等优点。
3.目前市面上常见的荧光免疫层析试纸条，包括有样品垫，样品垫上包被有待测抗原标记的单克隆抗体i、nc膜(硝酸纤维素膜)，nc膜上包被有质控线、测试线。当样本加入加样孔时，样本中的抗原流经样品垫时，与样品垫上的待测抗原标记的单克隆抗体i和nc膜检测线上的待测抗原标记的单克隆抗体ii形成双抗夹心，此反应时间较短且不充分，导致精密度较差。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种提高荧光免疫层析试纸条检测精密度的方法，可提高标记待测抗原单克隆抗体i与待测抗原的结合物的释放性，从而改善试剂的灵敏度，精密度。
5.本发明采用的技术方案是这样的：一种提高荧光免疫层析试纸条检测精密度的方法，将标记待测抗原单克隆抗体i制成冻干小球，样本与标记待测抗原单克隆抗体i冻干小球预先混匀后，加至荧光免疫层析试纸条加样孔内进行检测。
6.优选地，标记待测抗原单克隆抗体i冻干小球置于定量取样吸管或样本针内，定量取样吸管或样本针吸取的样本与标记待测抗原单克隆抗体i在定量取样吸管或样本针内预先混匀后，加至荧光免疫层析试纸条加样孔内进行检测。优选地，所述荧光免疫层析试剂条包括壳体和位于壳体内部的试纸条，所述试剂条包括顺次依次相互搭接的样品垫、nc膜以及吸水纸，所述nc膜的检测线上包被有待测抗原单克隆抗体ii，所述nc膜的质控线上包被有羊抗鼠igg抗体或兔抗鼠igg抗体，所述加样孔位于壳体上并与样品垫的位置相对应。
7.优选地，所述的标记待测抗原单克隆抗体i为标记心肌肌钙蛋白i单克隆抗体i，标记n-端脑利钠肽前体单克隆抗体i，标记降钙素原单克隆抗体i或标记糖化血红蛋白单克隆抗体i，待测抗原单克隆抗体ii为心肌肌钙蛋白i单克隆抗体ii，n-端脑利钠肽前体单克隆抗体ii，降钙素原单克隆抗体ii或糖化血红蛋白蛋白单克隆抗体ii。
8.优选地，所述冻干小球制备工艺：按质量比0.01～3:15将标记抗体加入冻干保护剂中混匀，取混合物3～30ul滴入液氮中，液滴滴入液氮后会形成小球，收集液氮中小球，将小球放入冷冻干燥机进行干燥处理，干燥结束后制得冻干小球。
9.本发明的有益效果如下：本发明将传统的标记抗体包被于样品垫中的方式改为将标记待测抗原单克隆抗体i进行冻干小球的方式，在样本与标记待测抗原单克隆抗体i混匀时在液体介质中，可提高抗原、抗体反应的充分性，混匀后样本加入加样孔时，可提高标记抗体与抗原的结合物的释放性，从而改善试剂的灵敏度，精密度。
附图说明
10.为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
11.图1为定量取样吸管结构示意图，1为冻干小球。
具体实施方式
12.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明具体实施例及相应的附图对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。以下结合附图，详细说明本发明各实施例提供的技术方案。
13.一种荧光免疫层析检测试剂盒，包括定量取样吸管和荧光免疫层析试剂条，所述定量取样吸管可以如图1所示，也可以是其他形式。
14.实施例1一种提高ctni荧光免疫层析试纸条检测精密度的方法
15.1)按质量比1:15将标记ctni单克隆抗体i加入冻干保护剂(3wt％甘露醇、5wt％蔗糖及1wt％甘氨酸，91wt％水)中混匀，取混合物30ul滴入液氮中，液滴滴入液氮后会形成小球，收集液氮中小球，将小球放入冷冻干燥机进行干燥处理，干燥结束后制得标记ctni单克隆抗体i冻干小球；
16.2)定量取样吸管吸取100ul的样本在定量取样吸管或样本针内与标记ctni单克隆抗体i冻干小球预先混匀后，滴加至荧光免疫层析试纸条加样孔内进行检测。
17.本实施例中所述定量取样吸管可以如图1所示，也可以是其他任何形式，只要能进行定量吸液即可，本实施例中，取上述步骤1)制备的标记ctni单克隆抗体i冻干小球1置于定量取样吸管内，数量为1粒；另外，本实施例中所述定量取样吸管液可替换为荧光免疫定量分析仪样本针(本实施例中未给出)，冻干小球置于定量样本针内，在测量时，样本针自动吸取的样本在样本针内与冻干小球预先混匀后，加至荧光免疫层析试纸条加样孔内进行检测。
18.本实施中所述荧光免疫层析试剂条，包括壳体和位于壳体内部的试纸条，所述试剂条包括顺次依次相互搭接的样品垫、nc膜以及吸水纸，所述nc膜的检测线上以0.7ul/cm包被4.0mg/ml ctni单克隆抗体ii，所述nc膜的质控线上以0.8ul/cm包被2mg/ml羊抗鼠igg抗体，所述加样孔位于壳体上并与样品垫的位置相对应。
19.对比例1
20.采用常规的荧光免疫层析试剂条，常规的荧光免疫层析试剂条与实施例1所述荧光免疫层析试剂条相同，不同的是，还包括胶乳垫，所述胶乳垫搭接与样本垫与nc膜之间，所述的胶乳垫上以1.5ul/cm包被4.0mg/ml eu标记ctni单克隆抗体i，定量取样吸管吸取的样本100ul加至荧光免疫层析试纸条加样孔内进行检测。
21.选用6个浓度水平ctni样本(35ng/ml、11ng/ml、5.5ng/ml、1.4ng/ml、0.3ng/ml、0.05ng/ml)进行重复性试验，取14份同一批次的荧光免疫层析试剂条，用配套荧光免疫定量分析分别检测，分别计算测量值的总平均值(x)和批内标准差(s批内)，按批内标准差/总
平均值得出批内变异系数(cv)。实施例1和对比例1具体检测结果见表1：
22.表1
[0023][0024][0025]
实验结果显示，采用实施例1冻干工艺可以很好的改善试剂的精密度，cv可控制在8％以内，较常规工艺有很大的提高。
[0026]
依据“高敏感方法检测心肌肌钙蛋白临床应用中国专家共识”中提出的hs-ctn应该能够在50％以上的表面健康人群中检测到ctn，参考范围上限第99百分位值的检测不精密度(以cv表示)应≤10％。对500例表面健康人群进行检测，99百分位值为0.038ng/ml，50百分位值为0.01ng/ml。对99百分位值附近水平进行精密度实验，实验结果见表2：
[0027]
表2
[0028]
[0029][0030]
实验结果显示大于0.03ng/ml时，cv可控制在10％以内，结合对99％位点值的检测及不精密度检测，参考范围上限为0.04ng/ml，灵敏度为0.01ng/ml
[0031]
实施例2一种提高血红蛋白荧光免疫层析试纸条检测精密度的方法
[0032]
1)按0.1:15比例将标记血红蛋白单克隆抗体i加入冻干保护剂(3wt％甘露醇、5wt％蔗糖及1wt％甘氨酸，91wt％水)中混匀，取混合物3ul滴入液氮中，液滴滴入液氮后会形成小球，点样完成后，收集液氮中小球，将小球放入冷冻干燥机进行干燥处理，干燥结束后制得标记血红蛋白单克隆抗体i冻干小球；
[0033]
2)定量取样吸管吸取10ul的样本在定量取样吸管或样本针内与标记血红蛋白单克隆抗体i冻干小球预先混匀后，滴加至荧光免疫层析试纸条加样孔内进行检测。
[0034]
本实施例中所述定量取样吸管可以如图1所示，也可以是其他任何形式，只要能进行定量吸液即可，本实施例中取上述步骤1)制备的标记血红蛋白单克隆抗体i冻干小球置于定量取样吸管内，数量为1粒；另外，本实施例中所述定量取样吸管液可替换为荧光免疫定量分析仪样本针(本实施例中未给出)，冻干小球置于定量样本针内，测量时，样本针自动吸取的样本在样本针内与冻干小球预先混匀后，加至荧光免疫层析试纸条加样孔内进行检测。
[0035]
本实施中所述荧光免疫层析试剂条，包括壳体和位于壳体内部的试纸条，所述试剂条包括顺次依次相互搭接的样品垫、nc膜以及吸水纸，所述nc膜的检测线上以1.2ul/cm包被2.0mg/ml糖化血红蛋白单克隆抗体ii，所述nc膜的质控线上以1.2ul/cm包被有2.0mg/ml羊抗鼠igg抗体，所述加样孔位于壳体上并与样品垫的位置相对应。
[0036]
对比例2
[0037]
采用常规的荧光免疫层析试剂条和检测方法，与实施例2所述荧光免疫层析试剂条不同的是，还包括胶乳垫，所述胶乳垫搭接与样本垫与nc膜之间，所述的胶乳垫上以1.2ul/cm包被5.0mg/ml标记血红蛋白单克隆抗体i，定量取样吸管吸取10ul的样本在稀释液中混匀后，取100ul混匀液滴加至荧光免疫层析试纸条加样孔内进行检测。
[0038]
选用5个浓度水平hba1c样本(13.5％、10.0％、8.2％、6.8％、5.3％)进行重复性试验，取14份同一批次的荧光免疫层析试剂条，用配套荧光免疫定量分析分别检测，分别计算测量值的总平均值(
x
)和批内标准差(s批内)，按批内标准差/总平均值得出批内变异系数(cv)。实施例2和对比例2具体检测结果见表3：
[0039]
表3
[0040][0041]
实验结果显示，采用实施例2冻干工艺可以很好的改善试剂的精密度，cv可控制在3.6％以内，较常规工艺有很大的提高。
[0042]
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。