一种基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法

技术特征：
1.一种基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：（1）冷冻结晶提取分离色素：将橄榄油与提取溶剂充分混合均匀，并置于低温条件下冷冻，使甘油三脂固化结晶，经过滤除去固化甘油三脂，得滤液；将滤液蒸发至干，残余物溶于乙酸乙酯，得含类胡萝卜素和叶绿素的样品；（2）高效液相色谱检测：采用高效液相色谱对提取得到色素样品进行分离检测，其条件如下：色谱柱：ods-bp柱；柱温：25℃；流速：1.0 ml/min；流动相组成：流动相a：体积比为1:1的甲醇和乙酸乙酯，流动相b：体积比为8:1:1的甲醇、水和1 m乙酸铵；洗脱方式：梯度洗脱；检测波长：450 nm、670nm；流速：1.0 ml/min；进样体积：20 μl。2.根据权利要求1所述的基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的橄榄油为初榨橄榄油。3.根据权利要求1所述的基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的冷冻温度为-18℃~-80℃。4.根据权利要求1所述的基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的冷冻时间为4h~24 h。5.根据权利要求1所述的基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的橄榄油与提取溶剂的料液比为1：10~1：80。6.根据权利要求1所述的基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的提取溶剂为甲醇、乙醇和乙酸乙酯中的一种、两种或者三种的混合液。7.根据权利要求1所述的基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的检测波长在450 nm处检测类胡萝卜素、在670 nm处检测叶绿素。8.根据权利要求1所述的基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法，其特征在于，步骤（2）中分离检测的类胡萝卜素包括叶黄素、cis-叶黄素、cis-β-胡萝卜素、β-胡萝卜素，叶绿素包括脱镁叶绿素a、脱镁叶绿素b、焦脱镁叶绿素a。9.根据权利要求1或8所述的基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法，其特征在于，步骤（2）中通过高效液相色谱检测色素的色谱峰面积对色素进行定量，高效液相色谱对色素样品进行分离检测得到色素的色谱峰面积，根据色素的浓度与色谱峰面积之间的线性关系定量得到色素的浓度；其中，叶黄素在浓度为5.0~400 μg/ml范围内，色素的浓度与色谱峰面积之间的线性关系为y=23753x 7.5787，线性相关系数r2=0.9995， x为叶黄素的浓度，单位μg/ml，y为色谱峰面积；β-胡萝卜素在浓度为5.0~400 μg/ml范围内，色素的浓度与色谱峰面积之间的线性关系为y=24294x 26.826，线性相关系数r2=0.9999， x为β-胡萝卜素的浓度，单位μg/ml，y为色谱峰面积；脱镁叶绿素a在浓度为0.7~70 μg/ml范围内，色素的浓度与色谱峰面积之间的线性关系为y=69652x 7.8345，线性相关系数r2=0.9999，其x为脱镁叶绿素a的浓度，单位μg/ml，y为色谱峰面积。

技术总结
本发明提供了一种基于冷冻结晶-高效液相色谱法分离检测橄榄油中色素的方法，将橄榄油与提取溶剂充分混合均匀，并置于低温条件下冷冻，使甘油三脂固化结晶，经过滤除去固化甘油三脂，得滤液；将滤液蒸发至干，残余物溶于乙酸乙酯，得含类胡萝卜素和叶绿素的样品，再采用高效液相色谱方法实现色素分离和定量检测。本发明方法操作简单方便，无需皂化可从橄榄油中同时分离得到色素，且对色素的提取效率分别是传统固相萃取法和液液萃取法的1.0-1.9倍和1.0-2.5倍，优于传统方法。优于传统方法。


技术研发人员：黄新异 卢聪慧 邸多隆 裴栋 刘建飞
受保护的技术使用者：中国科学院兰州化学物理研究所
技术研发日：2022.10.18
技术公布日：2022/12/6