一种具有治疗儿童感冒功效的中药组合物及其应用的制作方法

1.本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种具有治疗儿童感冒功效的中药组合物及其应用。


背景技术：

2.流行性感冒（以下简称流感）是人类面临的主要公共健康问题之一，由流感病毒引起，1889年以来有详细记载的流感大流行共有6次，近10年来我国先后出现甲型h1n1、乙型流感、人感染禽流感h7n9等流感爆发疫情，流感病毒极易发生重组和变异，传播迅速，每年可引起季节性流行，部分因出现肺炎等并发症可发展至重症流感，少数重症病例病情进展快，可因急性呼吸窘迫综合征(ards)和/或多脏器衰竭而死亡。儿童是流感的易感和高危人群，在学校、托幼机构儿童聚集的场所可发生暴发流行。
3.我国0～15岁儿童已达2.47亿人，占全国人口总数的17.80%，呼吸系统疾病位居儿童疾病谱首位，对100多个城市3576名0～14岁儿童调研分析显示，患病率前三位依次为感冒（74.7%）、发烧（59.8%）、咳嗽（56.0%），儿童感冒位居儿科呼吸系统疾病首位，每年可发生6～8次，10%～15%的患儿每年感冒高达12次，成为最常见呼吸系统疾病。感冒相关病原体包括鼻病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒、肠道病毒等，病毒以咳嗽和喷嚏为媒介，以呼吸道飞沫气溶胶传播，首先黏附于腺样体淋巴上皮区域的m细胞，并借鼻腔粘膜纤毛运动达到后鼻部，出现呼吸道黏膜水肿充血导致渗液。该病常发生在季节交替之际尤其是冬春季，起病较急，以发热、鼻塞、咽痛、咳嗽、喷嚏、流涕等症状为主。据估计，每年有10%～15%的儿童因流感感染而需就诊，在流感流行季节，可有超过40%的学龄前儿童及30%的学龄儿童罹患流感。由于受到来自母体的被动免疫保护，6个月以下小儿较少感染本病，6个月至3岁年龄组是流感高危人群，且易得重型流感，并发症的发生率较高。5至20岁儿童和青少年则是流感高发年龄，在大流行期该年龄段流感感染率可达50%左右，比成人高1.5-3倍。一般感染者在临床症状出现前24～48h即可排出病毒，排毒量在感染后0.5～1.0d显著增加，在发病后24h内达到高峰。儿童流感临床表现为突然起病，发热，体温可高达39-40℃，伴有畏寒、寒战、头痛、全身肌肉酸痛、乏力、失于减退，常有咳嗽、咽痛，流涕或鼻塞，少数出现恶心、呕吐、腹泻等，小儿消化道症状多于成人，婴幼儿流感临床表现不典型，新生儿流感少见，但如流感易合并肺炎。在儿童流感病毒引起的急性喉炎、急性中耳炎、气管炎、支气管炎、毛细支气管炎、肺炎较成人常见。大多数无并发症的流感患儿症状在3-7天缓解，但咳嗽和体力恢复常需要持续1-2周。成人和较大年龄儿童一般持续排毒5d(3～8d)，患者感染不同毒株的排毒时间也会有差异。低龄儿童发病时的排毒量与成人相同，但排毒时间更长，与成人相比，婴幼儿病例中，长期排毒很常见(1～3周)。所以实际上儿童是流感最重要的传染源，也成为儿童病情反复或急性加重的原因，及时治疗儿童流感，对保障儿童健康、降低额外医疗费用具有重要意义。
4.西药无针对普通感冒的特异性抗病毒药物，儿童感冒常用药物包括抗病毒药物如神经氨酸酶抑制剂（奥司他韦（oseltamivir）、扎那米韦（zanamivir）），m2离子通道阻滞剂
（金刚烷胺（amantadine）和金刚乙胺（rimantadine）），但临床应用存在诸多不良反应及病毒耐药性问题困扰临床应用。目前我国儿童药物市场占比及市场需求不断攀升，2019年我国公立医疗机构终端中成药儿科用药销售额89.05亿元，同比增长11.61%，但儿童药物专用剂型规格少、品种匮乏，市场急需一种安全、有效的儿童感冒用药。
5.病毒性呼吸道感染(viral respiratory infection)，是多种病毒引起的急性呼吸道感染，分病毒性上呼吸道感染和病毒性下呼吸道感染，前者表现为急性鼻炎、咽炎和喉炎，后者表现为急性气管炎、支气管炎和肺炎。本类疾病发病率高，人群普遍易染，小儿、老人、营养不良及患有慢性病者更易患病。值得注意的是2019冠状病毒疾病新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019，covid-19)传播后，病毒性呼吸道感染在世界范围内流行。
6.由于免疫力不成熟，儿童可能比成人更容易感染传染性病毒，其中婴幼儿尤其容易感染呼吸道感染。在儿童中，呼吸道感染的死亡率和发病率仍然高于其他任何疾病。目前，病毒性呼吸道感染是儿科临床的多发病，居于儿科门诊、住院病例数量的首位，严重威胁小儿健康。仅流感一项，全世界每年就有大约87万名5岁以下儿童住院。
7.此外，病毒性下呼吸道感染疾病近年来的发病率有增高的趋势，如据病原学的研究表明，病毒性肺炎约占社区获得性肺炎的18％，在同期医院内获得性感染中约占5％，愈来愈受到人们的关注。因而如何能够快捷有效的治愈呼吸道病毒感染性疾病显得尤为重要。


技术实现要素：

8.小儿生理特点表现为脏腑娇嫩、形气未充，小儿脏腑“成而未全”“全而未壮”的生理特点决定其“易虚易实”“易寒易热”的病理特点。小儿“气脉未调，脏腑脆薄，腠理开疏”，幼稚不知自保，寒热不能自言，全赖家人顾护，“神气虽丸，性情未定，衣裳不择于浓薄；或恣情而脱着，娇纵不常，生冷尽意，或过餐寒热之物”均可引起小儿腠理开阖失司，卫外防御不固，易受外邪侵袭而致感冒。小儿感冒以风邪侵袭为先，感邪初始部位在卫表肌腠，热为阳邪，其性燔灼上炎，风热致病可见患儿发热重、恶寒轻，有汗或少汗，热邪上扰清窍则见头痛，风热上壅咽喉伤津耗液，则见咽喉红肿疼痛、口干，临证可见头痛、身痛等头面感触表现。
9.肺主气、司呼吸，主宣发肃降，外合皮毛，职司卫外，口鼻、皮毛是外邪侵入的通道，肺络之防御卫护、温煦充养功能正常则六淫外邪难以侵袭人体为害。小儿肌肤嫩弱，藩篱疏薄，邪气易从肌表而入，使娇肺易伤。外感风热之邪肺部首当其冲感而发病，且小儿
ꢀ“
肺常不足”，故小儿感冒病位在“肺”。
10.小儿体质特点为“纯阳之体”，小儿生机蓬勃，发育迅速，血气充实，熏蒸于内外而易于化热，外感六淫致病易化火表现为内热征象，也可因“心肺有热，当风解脱，是以风邪伤于皮毛，入于脏腑”。小儿外邪侵袭而致风热壅肺之病机，源于风热之邪与小儿纯阳之体相兼而蕴热，肺卫俱病。
11.皮部阳络为肺之所合，卫气依靠肺之气络宣发作用外实肌表发挥卫外防御功能，若风热袭表，阳络郁闭，肺气郁滞，卫外不固，风热外邪从口鼻或皮毛趁虚而入，肺气壅遏不宣，气道开阖舒缩运动异常则气道壅滞，浊气欲出而不出，为祛邪外达肺气上逆冲击声门逆
而致咳嗽。鼻属清空之窍，与外界直接相通，最易受外邪侵袭，风阳升散，上攻头面，风热之邪壅滞清窍，鼻失通利而致鼻塞；窍失清灵，正邪相争，驱邪外出，则喷嚏频作；外邪随气入乘于鼻，津涕不能自收则流涕。此外肺与大肠相表里，肺热循经脉下迫大肠易致大便干结，及时通腑又可助肺热从魄门而出，通腑而泄热清肺。
12.综上，小儿感冒是因风热之邪从皮毛口鼻而入，加之小儿神识未开，寒暖不能自调，感邪致病，病变部位在肺，风热之邪侵袭卫表失司，加之小儿纯阳之体易于化热，影响肺络气机，气络郁滞，肺气失宣，邪热壅肺，气道壅滞，肺卫俱病。
13.小儿感冒以风热外袭，卫表失司，邪热壅肺，气道壅滞为病因病机特点，发明人提出“清感解表，宣肺泄热”治法，以辛凉解表清透外邪，宣肺泄热清解内火，使邪气去，火热消，肺复宣发，气道通畅，则肺卫之症自除。
14.遵循小儿“脏气清灵，随拨随应”用药轻巧灵动，小儿的生理病理特点既有脏腑娇嫩，形气未充，发病容易，传变迅速的一面，又有生机蓬勃，发育迅速，脏气清灵，易趋康复的一面，因此对于儿童用药需轻巧灵动，不可用重剂猛药。小儿感冒多由感受风热外邪侵袭肺卫所致，病程短、症状较轻浅，因此治疗时应药到即止，“调理最取其平，补泻无过其剂”。
15.本发明药物组合物基于连花清瘟在儿童感冒、流感治疗中的经验进行化裁，基于该病病位在肺卫，取“在上者，因而越之”之意，故用药宜质轻、味薄、性凉、宣透之品，发挥清解透达的功效，有助热邪从表而散，也暗合肺位至高，其体至清。选用银翘散中银花、连翘疏散风热、清热解毒，薄荷疏散风热、清利咽喉。取汉代张仲景《伤寒论》麻杏石甘汤解肺家之邪热的功效，其中麻杏石甘汤原方为麻黄4两，石膏半斤，两者比例为1：2，本发明药物组合物中选用蜜麻黄重在宣肺止咳，发汗解表为辅，故麻黄与石膏比例为1:3，防止解表太过，遵循刘完素治疗小儿感冒“宜防微杜渐，行巡尉之法，用养性之药，以全其真”的治疗原则。
16.该病以风热外袭，卫表失司，邪热壅肺，气道壅滞为病因病机特点，治疗当兼顾表里肺卫、协调肺气之宣畅。结合该病患儿在外治表证未解，在内治郁热熏蒸，外内交迫，给与辛凉解表清透外邪之剂，解表开达腠理，给外邪以出路，使在里之郁热得以透达，同时内清里热，热则凉之，选用擅长散肺经热邪而透热达表的银花、连翘疏散透达，选用石膏凉而能散，透表解肌退热，薄荷疏散风热、清利咽喉，板蓝根清热解毒、利咽消肿。同时小儿感冒传变迅速，因此应积极干预，辛凉使风热之邪透达向外而解，内蕴之热清化自内而解，一透一凉，使外邪与内热两解之。同时基于肺与大肠相表里，在疏表之中寓以泻下，旨在通腑清肺、通腑泄肺，腑气畅通，有利于肺热下泄随大便而去，配以红景天清肺化瘀、调节免疫，藿香芳香化湿。
17.本发明药物组合物源自连花清瘟，连花清瘟由连翘、金银花、炙麻黄、炒苦杏仁、石膏、板蓝根、绵马贯众、鱼腥草、广藿香、大黄、红景天、薄荷脑、甘草13味药物组成，本发明药物组合物组方以连花清瘟为基础，组方包括连翘、山银花、薄荷、蜜麻黄、石膏、炒苦杏仁、板蓝根、广藿香、红景天、大黄、甘草11味，去掉了绵马贯众、鱼腥草，以山银花替代金银花，将薄荷替代薄荷脑。
18.贯众始载于《神农本草经》，列为下品，味苦、性微寒、有小毒，归肝、胃经，具有清热解毒、凉血止血功效。贯众在呼吸系统疾病方面主要药效和临床研究集中在抗流感病毒、抑菌方面，小儿多肝肾功能不全或脾胃虚弱，且儿童临床服用易出现呕吐，综合考虑上述因素故将处方中去掉绵马贯众。
19.鱼腥草是治疗痰热壅肺，肺痈吐脓血要药，对于儿童感冒病变部位为肺卫，尚未达到痰热壅肺、咳嗽浓稠痰病变阶段，且鱼腥草有鱼腥味不易矫味，造成患儿服药依从性差。综合考虑小儿稚阴稚阳之体，脾胃娇弱，去掉绵马贯众、鱼腥草，使清热解毒力缓，防止伤脾碍胃。
20.山银花与金银花在2020版《中国药典》中收录，两味药材性味与归经（甘、寒；归肺、心、胃经），功能与主治（清热解毒，疏散风热。用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热），用法用量（6-15g）完全一样，但山银花为灰毡毛忍冬，经过试验证明，研究发现灰毡毛忍冬对流感病毒引起的普通感冒均有一定的疗效。从灰毡毛忍冬中提取分离出的黄酮类化合物对不同类型的细菌均有不同程度的抑制作用，对金黄葡萄球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、绿脓杆菌等均有抑菌作用，并且对引起呼吸道感染的常见致病菌和条件致病菌也有很强的抗菌作用，综合考量抗菌作用，我们用山银花替代了金银花，以期起到更好的抑菌作用。
21.薄荷脑有可引起消化系统不良反应，主要表现为胃部冷感不适，考虑儿童胃肠功能不全，故将薄荷脑调整为薄荷药材，提取薄荷油入药。
22.本方中，君药为连翘，山银花，其中连翘性微寒，味苦，归肺、心经。清热解毒，疏散风热。外疏肌表，内清郁热，该药一方面取其升浮宣散之力，透热达表，配以宣肺之麻黄宣散肺中风热邪气，取“火郁发之”之义；另一方面针对外感邪气入里蕴热，以石膏、板蓝根助其清热解毒之功，辛凉清解故为君药。山银花：性甘味寒，归肺、心、胃经。疏散风热，清热解毒，用于风热感冒、温病发热。本品甘寒善散肺经热邪，而透热达表，与连翘相伍，有助于清解肺中郁热，连、花相须为用，二者气味芳香，连翘清里热解毒之力强，山银花偏散表热，且甘寒不伤脾胃，既可轻宣透表，疏散风热，又在透散卫气表邪的同时，兼顾外感风热邪气蕴而化热的特点。
23.臣药为薄荷，蜜麻黄，石膏。
24.佐药为炒苦杏仁，味苦辛，性温，归肺、大肠经。功专苦泄润降，润肺止咳，为治咳喘要药。杏仁与麻黄相配，能散能降，降气润燥，复其肃降之功，一宣一降，咳定嗽平，二者相配宣散结合，散邪止咳，改善小儿感冒中出现的咳嗽气逆。
25.板蓝根：味苦，性寒，归心胃经。功效清热解毒，凉血利咽，常用于感受外邪，发热咽痛。，对小儿感冒易蕴而化热导致咽喉肿痛起到清热解毒，凉血利咽的功效。
26.广藿香：味辛，性微温，归脾胃肺经。功用芳香化湿，醒脾开胃，以助胃气。其性辛散发表而不峻烈，微温化湿而不燥热，善于散湿浊，醒脾开胃，和中止呕，小儿肠胃本弱，感受外邪，纳谷不香，易夹湿夹滞，因此配以广藿香芳香化湿，开胃健脾，发挥“醒脾健胃，则邪气自无容而愈”的功效。
27.红景天：味甘、苦，性平，归肺、脾、心经。具有清肺化瘀，调节免疫的功效，本方使用红景天一方面因儿童为稚阴稚阳之体，五脏六腑发育未完全，抵抗力弱，故使用红景天提高机体免疫力，另一方面配合石膏清肺化瘀。
28.大黄：味苦，性寒，归脾、胃、大肠、肝、心包经。通腑清肺，通腑泻肺。基于肺与大肠相表里，用大黄通腑清肺，腑气下通而肺热自清，考虑小儿不耐下法，故方中用药量小，以中病即止。
29.使药：
甘草：味甘性平，归心、肺、脾胃经。功效补脾益气，润肺止咳，调和诸药。该药味甘平之品，合土之德，入脾胃与广藿香配伍益气健脾和中，与苦杏仁相配润肺止咳，调和诸药，故而方中为使药。
30.综上所述，本发明药物组合物根据小儿感冒的病机特点，结合小儿脏腑娇嫩的生理特点而形成的组方。该组方荟萃经典名方，将外解卫表之邪与清解内热相结合，同时不忘固护正气，健脾开胃，体现了肺卫内外兼治，表里俱解，扶正祛邪的治疗原则。组方源于经典、践于临床，结合小儿病生理特点进行化裁并经实验研究加以印证，络病理论—病因病机—治则治法—遣方用药，理、法、方、药一以贯之，契合度高，处方合理。去掉了绵马贯众、鱼腥草，以山银花替代金银花，将薄荷替代薄荷脑。在减少药味的情况下，更适合儿童服用，且疗效与连花清瘟相当，为目前最缺少的专业儿童用药提供了更好的选择。
31.针对现有病毒性呼吸道感染，尤其是儿童感冒存在的上述技术问题，本发明提供一种具有治疗儿童感冒功效的中药组合物及其应用。
32.为达到上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：一种具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，所述中药组合物由以下重量份的原料组成：连翘250-400份、山银花250-400份、麻黄50-150份、苦杏仁50-150份、石膏250-400份、板蓝根250-400份、广藿香50-150份、大黄30-90份、红景天10-50份、薄荷120-280份和甘草50-150份。
33.进一步地，所述的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，由以下重量份的原料组成：连翘250份、山银花400份、麻黄50份、苦杏仁150份、石膏250份、板蓝根400份、广藿香50份、大黄90份、红景天10份、薄荷280份和甘草50份。
34.进一步地，所述的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，由以下重量份的原料组成：连翘400份、山银花250份、麻黄150份、苦杏仁50份、石膏400份、板蓝根250份、广藿香150份、大黄30份、红景天50份、薄荷120份和甘草150份。
35.进一步地，所述的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，由以下重量份的原料组成：连翘328份、山银花328份、麻黄98份、苦杏仁98份、石膏328份、板蓝根328份、广藿香98份、大黄66份、红景天33份、薄荷197份和甘草98份。
36.进一步地，所述的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，由以下重量份的原料组成：连翘280份、山银花360份、麻黄60份、苦杏仁120份、石膏280份、板蓝根360份、广藿香60份、大黄60份、红景天20份、薄荷250份和甘草60份。
37.进一步地，在所述的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物中，所述麻黄为蜜麻黄，所述苦杏仁为炒苦杏仁。
38.相对于现有技术，本发明提供的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，是在现有技术基础上，经过发明人大量创新性劳动得到的适用于儿童感冒的中药组合物，具体为发明人结合儿童特殊生理阶段和生理、病理特征，对连花清瘟的组方及其用量进行调整、工艺改进并矫味，并通过药效多指标评估，发明了本发明中药组合物，11味药物中，君臣佐使相辅相成，即特定药味组成、特定用量配比组成的用于治疗儿童感冒的中药组合物。与连花清瘟比较，本发明中药组合物在药味减少的情况下，治疗儿童感冒的效果与连花清瘟相当，并且提升了该产品的口感，更适用于儿童用药。经临床试验证实，由本发明提供的中药组合物制备得到的药物治疗儿童流感的临床疗效结果总有效远远高于西药对照组奥司他韦，相对
于西药对照组均具有较好的退热疗效，安全可靠，且无不良反应和副作用。
39.小儿感冒属于络病新病入络范畴，本发明基于络病理论空间概念和肺络病变证治规律，结合小儿脏腑薄、藩篱疏，腠理易开，较成人更易感受外邪而致病，提出“风热侵袭、卫表失司，邪热壅肺，气道壅滞”为该病主要病因病机，确立“清感解表，宣肺泄热”治法，遵循小儿“脏气清灵，随拨随应”的生理特性，用药轻巧灵动，中病即止；同时兼顾卫肺外内同调，积极干预，防止传变。本发明提供的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，全方将外解表邪与内清肺热相协，清透与扶正相兼，充分考虑小儿病生理特点，祛邪而不伤正，符合肺络证治“积极干预”的治疗策略，组方源于经典、践于临床，体现了络病理论指导下病因病机—治则治法—遣方用药，理、法、方、药一体化的研究思路。
40.本发明还提供了上述具有治疗儿童感冒功效的中药组合物在制备治疗儿童感冒药物中的应用，所述感冒为流行性感冒或普通感冒。
41.经药理和临床试验证实，本发明提供的药物治疗儿童流感的临床疗效结果总有效远远高于西药对照组奥司他韦，相对于西药对照组均具有较好的退热疗效，且未出现任何恶心、腹泻、呕吐、腹痛、腹胀、口干，以及皮疹、瘙痒、头晕等胃肠道不良反应，以及其他副作用；比之连花清瘟，去掉和替换了极为药材，但作用相当，证明本发明中药组合物作为儿童用药是非常安全的。
42.进一步地，上述治疗儿童感冒药物为解热药物。
43.进一步地，上述治疗儿童感冒药物为抗炎、镇痛药物。
44.进一步地，上述治疗儿童感冒药物为治疗咳嗽、咳痰、鼻塞、咽喉肿痛药物。
45.本发明还提供了上述具有治疗儿童感冒功效的中药组合物在制备抗呼吸道感染病毒药物中的应用。
46.本发明提供的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物对多株甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒以及冠状病毒具有体外的抗病毒作用，且作用于病毒复制的早期阶段，同时，该中药组合物具有明显体内抗甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒的药效作用。病毒性呼吸道感染常见的病原有鼻病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒等，因此，本发明提供的中药组合物能够应用于制备抗呼吸道感染病毒药物中。
47.进一步地，上述抗呼吸道感染病毒药物为治疗病毒性上呼吸道感染和/或病毒性下呼吸道感染药物。
48.进一步地，上述抗呼吸道感染病毒药物为治疗急性鼻炎、急性咽炎、扁桃体炎、喉炎药物。
49.进一步地，上述抗呼吸道感染病毒药物为治疗急性气管-支气管炎或肺炎药物。
50.进一步地，上述具有治疗儿童感冒功效的中药组合物的活性成分由以下步骤制成：（1）按处方量称取广藿香、薄荷采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加水煎煮，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，浓缩，滤过，得浸膏，备用；步骤（1）所得挥发油与步骤（2）所得浸膏共同构成所述中药组合物的活性成分。
51.进一步地，上述中药组合物的活性成分由以下步骤制成：
（1）按处方量称取广藿香、薄荷加10倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，提取8小时，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加10倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，减压浓缩至相对密度1.15
±
0.05（60℃）的浸膏，滤过，备用；步骤（1）所得挥发油与步骤（2）所得浸膏共同构成所述中药组合物的活性成分。
52.本发明提供的中药组合物的活性成分的制备方法，工艺简单，操作方便，安全环保，能够最大程度的保留中药中的活性成分，保证药物的功效。
53.进一步地，上述中药组合物的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、散剂或口服液。
54.为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：peg6000，peg4000，虫蜡等。
55.进一步地，本发明提供了上述颗粒剂的制备方法，颗粒剂由以下步骤制成：（1）按处方量称取广藿香、薄荷采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加水煎煮，滤液与步骤（1）所得挥发油提取液合并，浓缩，滤过，干燥，得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加适量辅料制粒，按照常规方法制成颗粒剂。
56.进一步地，上述颗粒剂由以下步骤制成：（1）按处方量称取广藿香、薄荷加10倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，提取8小时，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加10倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，减压浓缩至相对密度1.15
±
0.05（60℃）的浸膏，滤过，喷雾干燥得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加适量辅料，采用干法制粒，按照常规方法制成颗粒剂。
57.进一步地，本发明提供了上述片剂的制备方法，片剂由以下步骤制成：（1）按处方量称取广藿香、薄荷采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；
（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加水煎煮，滤液与步骤（1）所得挥发油提取液合并，浓缩，滤过，干燥，得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加适量辅料，按照常规方法制片剂。
58.进一步地，本发明提供了上述胶囊剂的制备方法，胶囊剂由以下步骤制成：（1）按处方量称取广藿香、薄荷采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加水煎煮，滤液与步骤（1）所得挥发油提取液合并，浓缩，滤过，干燥，得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加适量辅料，按照常规方法制成胶囊剂。
附图说明
59.图1为本发明试验例5中lhqg对不同细胞的抑制率（mtt法）；图2为本发明试验例5中lhqg对流感病毒np蛋白表达的影响结果；图3为本发明试验例7抗甲型流感病毒体内药效学研究中lhqg对肺组织病理学影响结果（染毒后24h）；图4为本发明试验例7抗甲型流感病毒体内药效学研究中lhqg对肺组织病理学影响结果（末次给药后2h）；图5为本发明试验例7抗甲型流感病毒体内药效学研究中lhqg对肺组织中cd4

、cd8

细胞荧光强度值的影响结果（染毒后24h）；图6为本发明试验例7抗甲型流感病毒体内药效学研究中lhqg对肺组织中cd4

、cd8

细胞荧光强度值的影响结果（末次给药后2h）；图7为本发明试验例7抗呼吸道合胞病毒体内药效学研究中lhqg对肺组织病理学影响结果（染毒后24h）；图8为本发明试验例7抗呼吸道合胞病毒体内药效学研究中lhqg对肺组织病理学影响结果（末次给药后2h）；图9为本发明试验例7抗呼吸道合胞病毒体内药效学研究中lhqg对肺组织中cd4

、cd8

细胞荧光强度值的影响结果（染毒后24h）；图10为本发明试验例7抗呼吸道合胞病毒体内药效学研究中lhqg对肺组织中cd4

、cd8

细胞荧光强度值的影响结果（末次给药后2h）。
具体实施方式
60.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
61.为了更好的说明本发明实施例提供的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，下面
通过实施例做进一步的举例说明。
62.实施例1一种具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，由以下重量份的原料组成，即处方为：连翘328g、山银花328g、蜜麻黄98g、炒苦杏仁98g、石膏328g、板蓝根328 g、广藿香98g、大黄66g、红景天33g、薄荷197g和甘草98g。
63.将上述中药组合物制备成颗粒剂，制备方法具体包括如下步骤：（1）按处方量称取广藿香、薄荷加10倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，提取8小时，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加10倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，减压浓缩至相对密度1.15
±
0.05（60℃）的浸膏，滤过，喷雾干燥得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加三氯蔗糖、麦芽糊精混匀，干法制粒，得颗粒，备用。
64.实施例2一种具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，由以下重量份的原料组成，即处方为：连翘350g、山银花350g、蜜麻黄100g、炒苦杏仁100g、石膏350g、板蓝根350g、广藿香100g、大黄70g、红景天35g、薄荷210g和甘草100g。
65.将上述中药组合物制备成胶囊剂，制备方法具体包括如下步骤：（1）按处方量称取广藿香、薄荷加12倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，提取6小时，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加12倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，减压浓缩至相对密度1.15
±
0.05（60℃）的浸膏，滤过，喷雾干燥得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加糊精混匀，制粒，装胶囊，备用。
66.实施例3一种具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，由以下重量份的原料组成，即处方为：连翘250g、山银花400g、麻黄50g、苦杏仁150g、石膏250g、板蓝根400g、广藿香50g、大黄90g、红景天10g、薄荷280g和甘草50g。
67.将上述中药组合物制备成片剂，制备方法具体包括如下步骤：（1）按处方量称取广藿香、薄荷加8倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，提取12小时，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加8倍量水煎煮二次，每次1.5小时，滤过，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，减压浓缩至相对密度1.15
±
0.05（60℃）的浸膏，滤过，减压干燥得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加淀粉混匀，制粒，干燥，
得颗粒，压片，备用。
68.实施例4一种具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，由以下重量份的原料组成，即处方为：连翘350g、山银花350g、蜜麻黄100g、炒苦杏仁100g、石膏350g、板蓝根350g、广藿香100g、大黄70g、红景天35g、薄荷210g和甘草100g。
69.将上述中药组合物制备成丸剂，制备方法具体包括如下步骤：（1）按处方量称取广藿香、薄荷加10倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，提取8小时，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加10倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，减压浓缩至相对密度1.15
±
0.05（60℃）的浸膏，滤过，喷雾干燥得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，按照常规方法制成丸剂。
70.实施例5一种具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，由以下重量份的原料组成，即处方为：连翘280g、山银花360g、麻黄60g、苦杏仁120g、石膏280g、板蓝根360g、广藿香60g、大黄60g、红景天20g、薄荷250g和甘草60g。
71.将上述中药组合物制备成片剂，制备方法具体包括如下步骤：（1）按处方量称取广藿香、薄荷加8倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，提取12小时，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加8倍量水煎煮二次，每次1.5小时，滤过，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，减压浓缩至相对密度1.15
±
0.05（60℃）的浸膏，滤过，减压干燥得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加淀粉混匀，制粒，干燥，得颗粒，压片，备用。
72.实施例6一种具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，由以下重量份的原料组成，即处方为：连翘400g、山银花250g、麻黄150g、苦杏仁50g、石膏400g、板蓝根250g、广藿香150g、大黄30g、红景天50g、薄荷120g和甘草150g。
73.将上述中药组合物制备成颗粒剂，制备方法具体包括如下步骤：（1）按处方量称取广藿香、薄荷加10倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，提取8小时，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加10倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，减压浓缩至相对密度1.15
±
0.05（60℃）的浸膏，滤过，喷雾干燥得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加三氯蔗糖、麦芽糊精混匀，干法制粒，得颗粒，备用。
74.对比例1在实施例1的基础上，用野菊花替换山银花，其他药物及其用量配比不变，即处方为：连翘328g、野菊花328g、蜜麻黄98g、炒苦杏仁98g、石膏328g、板蓝根328 g、广藿香98g、大黄66g、红景天33g、薄荷197g和甘草98g。
75.将上述中药组合物制备成颗粒剂，制备方法具体包括如下步骤：（1）按处方量称取广藿香、薄荷加10倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，提取8小时，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加10倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，减压浓缩至相对密度1.15
±
0.05（60℃）的浸膏，滤过，喷雾干燥得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加三氯蔗糖、麦芽糊精混匀，干法制粒，得颗粒，备用。
76.对比例2在实施例1的基础上，用紫花地丁替换连翘，其他药物及其用量配比不变，即处方为：紫花地丁328g、山银花328g、蜜麻黄98g、炒苦杏仁98g、石膏328g、板蓝根328 g、广藿香98g、大黄66g、红景天33g、薄荷197g和甘草98g。
77.将上述中药组合物制备成颗粒剂，制备方法具体包括如下步骤：（1）按处方量称取广藿香、薄荷加10倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，提取8小时，收集挥发油，备用；蒸馏后的水溶液滤过得挥发油提取液，备用；（2）按处方量称取除步骤（1）中药味外的其他药味，加10倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，滤液与步骤（1）挥发油提取液合并，减压浓缩至相对密度1.15
±
0.05（60℃）的浸膏，滤过，喷雾干燥得干膏粉，备用；（3）将步骤（1）所得挥发油选用倍他环糊精进行包合，得挥发油包合物；（4）将步骤（2）所得干膏粉、步骤（3）所得挥发油包合物，加三氯蔗糖、麦芽糊精混匀，干法制粒，得颗粒，备用。
78.为了更好的说明本发明实施例提供的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物的特性，下面将实施例1及对比例1、2制备的颗粒剂进行防治效果测试。
79.试验例1为了阐述本发明中药组合物的安全性，用实施例1制备的颗粒剂（以下简称本发明中药组合物或lhqg）进行毒性试验研究。
80.本发明中药组合物重复灌胃给予幼年sd大鼠6周和恢复期4周的毒性试验。
81.本试验的目的是评价本发明中药组合物重复灌胃给予幼年sd大鼠6周后可能出现的毒性反应（包括发育毒性）、靶器官以及停药后4周毒性反应的恢复情况，为供试品的临床研究提供动物试验资料。
82.试验选用幼年sd大鼠（出生后21日龄，pnd21）200只，雌雄各半，按性别区段随机分成8组，1~4组为毒理学研究组，每组30只（雌雄各半），分别为溶媒对照组（灭菌注射用水）、低剂量组（6g生药/kg/天）、中剂量组（12g生药/kg/天）和高剂量组（24g生药/kg/天）；5~8组用于行为学功能和动情周期的检查，分别为溶媒对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，
每组各20只（雌雄各半），给药剂量同毒理学研究组。灌胃给药，动物于出生后第21天（pnd21）开始给药，每天给药一次，连续给药6周，至sd大鼠63日龄（成年），共给药42次。试验期间，对动物进行临床观察、体重、摄食量、身体发育、行为学发育、血细胞计数、凝血功能、血液生化、尿液、眼科检查以及雄鼠精子计数和活力、精子形态学和雌鼠动情周期等指标的检查。末次给药后次日，对部分动物实施安乐死，剩余动物进行4周恢复期观察后实施安乐死。动物安乐死后进行大体解剖观察，主要脏器称重，计算脏体比和脏脑比，并对40多种组织脏器进行组织病理学检查。
83.试验期间，各剂量组动物的体重、食量、眼科检查、尿液分析、血细胞计数、凝血指标、血液生化指标均未见与供试品相关的异常改变；生长发育指标包括单位时间生长速度、身体发育指标（阴道张开、睾丸下降和包皮分离的达标日龄，身长、尾长和胫骨长度）、行为发育指标（自发活动试验中动物的总路程和活动次数、y 迷宫试验中动物的自发交替率）以及生殖相关指标（雄鼠精子计数和活力、精子形态学、雌鼠动情周期不规律率）均未见明显与供试品相关的异常改变。
84.在本试验条件下，本发明中药组合物以6、12、24g生药/kg/天剂量重复灌胃给予幼年sd大鼠，每天给药一次，连续给药6周，恢复4周。6、12和24 g生药/kg/天剂量下均未见与供试品相关的生长发育毒性和系统毒性反应，说明本发明中药组合物给予幼年sd大鼠是安全的。
85.试验例2为阐明本发明中药组合物治疗感冒的活性，采用实施例1制备的颗粒剂（以下简称本发明中药组合物）以及对比例1、2制备的颗粒剂进行下列药效试验。
86.1 实验目的本试验采用小鼠氨水喷雾引咳模型（镇咳）、小鼠气管段酚红排泌模型（祛痰）、大鼠腹腔注射脂多糖（lps）致热模型（解热）、小鼠二甲苯致耳肿胀模型（抗炎），评价本发明中药组合物（lhqg）的药效。
87.2 试验方法2.1镇咳试验km小鼠雌雄各半，按体重随机分为6组，即模型组、右美沙芬组、连花清瘟组、本发明中药组合物（lhqg）组、对比例1（lhqg-a）组、对比例2（lhqg-b）组，拟临床剂量为0.4g生药/kg体重，小鼠剂量定为4.0g生药/kg，为拟临床剂量的10倍，此为临床等效剂量。连续给药3d，1次/d，末次给药约0.5h后引咳，记录3min内的咳嗽潜伏期及咳嗽次数。
88.2.2祛痰试验km小鼠雌雄各半，按体重随机分为6组，即模型组、氨溴索组、连花清瘟组、本发明中药组合物（lhqg）组、对比例1（lhqg-a）组、对比例2（lhqg-b）组。拟临床剂量为0.4g生药/kg体重，小鼠剂量定为4.0g生药/kg，为拟临床剂量的10倍，此为临床等效剂量。连续给药3d，1次/d，末次给药约0.5h后，小鼠腹腔注射2.5%酚红溶液，0.5
ꢁ
h后颈椎脱臼处死动物，剪取相同一段气管，放进装有2ml生理盐水的试管中，同时加入1mol/l naoh溶液0.1
ꢁ
ml，波长546
ꢁ
nm处，测吸光度值，计算酚红浓度。
89.2.3解热试验雄性sd大鼠按基础体温随机分为6组，即模型组、布洛芬组、连花清瘟组、本发明中
药组合物（lhqg）组、对比例1（lhqg-a）组、对比例2（lhqg-b）组。拟临床剂量为0.4g生药/kg体重，小鼠剂量定为3.2g生药/kg，为拟临床剂量的8倍，此为临床等效剂量。试验前先测量1次基础体温记为t0，对基础体温筛选并分组，分组完成后给药，给药30min后，大鼠腹腔注射20μg/kg lps，造模后每隔1h测量一次肛温记为t
x
，连续5h，计算体温差
△
t，
△
t =t
x-t0。
[0090] 2.4抗炎实验km小鼠雌雄各半，按体重随机分为6组，即模型组、阿司匹林组、连花清瘟组、本发明中药组合物（lhqg）组、对比例1（lhqg-a）组、对比例2（lhqg-b）组。拟临床剂量为0.4g生药/kg体重，小鼠剂量定为4.0g生药/kg，为拟临床剂量的10倍，此为临床等效剂量。连续给药3d，1次/d，末次给药后约0.5h，小鼠右耳中部涂布二甲苯，正反两面各15μl，左耳不做任何处理，40min后颈椎脱臼处死动物，打孔器在两耳相对称部位打下耳片，精密分析天平称重，记录重量，计算肿胀度和肿胀抑制率。肿胀度=右耳耳片重量-左耳耳片重量。肿胀抑制率=（模型组平均肿胀度-给药组平均肿胀度）/模型组平均肿胀度
×
100%。
[0091]
3统计方法试验数据用均数
±
标准差（）表示，检验水准为0.05和0.01，采用spss软件进行统计分析，均数比较用单因素方差分析，首先进行方差齐性检验，若方差齐，采用最小显著差法（lsd），若方差不齐，则采用dunnett’s t3检验。
[0092]
4结果4.1镇咳试验与模型组比较，连花清瘟组、本发明中药组合物（lhqg）组小鼠咳嗽潜伏期明显延长（p《0.05），咳嗽次数明显减少（p《0.05），对比例1（lhqg-a）组、对比例2（lhqg-b）组小鼠咳嗽潜伏期及次数未见明显差异（p》0.05）；右美沙芬组较模型组小鼠咳嗽潜伏期明显延长（p《0.05），咳嗽次数明显减少（p《0.05）。
[0093]
4.2祛痰试验与模型组比较，连花清瘟组、lhqg组小鼠酚红浓度明显增加（p《0.05），lhqg-a组、lhqg-b组小鼠酚红浓度未见明显差异（p》0.05）；氨溴索组较模型组小鼠酚红浓度明显增加（p《0.05）。
[0094]
4.3解热试验与模型组比较，连花清瘟组、lhqg组大鼠造模后3h、4h体温差明显降低（p《0.05），lhqg-a组、lhqg-b组大鼠造模后体温差未见明显差异（p》0.05）；布洛芬组较模型组大鼠造模后2h、3h、4h体温差明显降低（p《0.01或p《0.05）。
[0095]
4.4抗炎实验与模型组比较，连花清瘟组、lhqg组小鼠耳肿胀度明显减小（p《0.05），肿胀抑制率分别为30.29%、30.85%。lhqg-a组、lhqg-b组小鼠耳肿胀度未见明显差异（p》0.05）；阿司匹林组小鼠耳肿胀度明显减小（p《0.01），肿胀抑制率为37.70%。
[0096]
5结论本试验条件下，lhqg明显抑制氨水引起的小鼠咳嗽，明显增加小鼠气管段酚红排泌量，明显抑制lps引起的大鼠发热，明显降低二甲苯引起的小鼠耳肿胀度，药效与连花清瘟相当。lhqg-a、lhqg-b方则未见明显药效。说明本发明提供的中药组合物能够有效治疗感冒，能够应用于制备治疗儿童感冒药物中，具体的，药物可以为解热、抗炎、止咳祛痰药物。
[0097]
试验例3为阐明本发明中药组合物的镇痛作用，采用实施例1制备的颗粒剂（以下简称本发明中药组合物（lhqg））的进行下列药效试验。
[0098]
1.试验目的本试验采用0.7%醋酸腹腔注射致小鼠出现扭体反应，观察本发明中药组合物对疼痛的影响。
[0099]
2.试验方法1）剂量与分组60只km小鼠按体重随机分为5组，包括模型组；吲哚美辛组；lhqg高、中、低剂组，给药剂量分别为2.00、1.00、0.50g/kg，小鼠吲哚美辛给药剂量定为5.00mg/kg。
[0100]
2）给药方法灌胃给药，与临床拟用药途径一致。用一次性注射器给药，给药体积为10ml/kg，模型组动物给予相应体积溶剂，连续给药5d。
[0101]
3）观测的指标、时间和内容新接收实验动物，编号，适应性饲养5d，分组如前所述。所有动物末次给药前禁食15h以上，末次给药后1h，将0.7%的醋酸10ml/kg注入小鼠腹腔内，刺激脏层和壁层腹膜，引起深部较大面积较长时间的疼痛反应，致使小鼠出现腹部内凹、躯干与后肢伸张，臀部高起等扭体行为反应，记录发生扭体反应的潜伏期及15min内扭体次数为疼痛定量指标。
[0102]
4）统计方法试验数据采用spss18.0统计软件进行分析处理，检验水准为0.05和0.01。结果用均数
±
标准差()表示，首先进行正态性检验，符合正态分布的数据，均数比较用单因素方差分析（one-way anova），若方差齐，两两比较采用最小显著差法（lsd），若方差不齐则
采用dunnett’s t3检验进行两两比较；如不符合正态分布，则用非参数检验。
[0103]
3.结果由表5可见，与模型组比较，吲哚美辛组小鼠扭体次数明显减少（p《0.05），lhqg中剂组小鼠扭体潜伏期明显延长（p《0.05），扭体次数明显减少（p《0.05）。吲哚美辛组、lhqg高剂组小鼠扭体潜伏期较模型组有所延长，但未见明显差异（p》0.05），lhqg高、低剂组小鼠扭体次数较模型组有所减少，但未见明显差异（p》0.05）。
[0104]
4.结论本试验条件下，lhqg可明显抑制醋酸刺激小鼠腹膜引起的疼痛反应。说明本发明中药组合物具有镇痛作用，能够应用于制备镇痛药物。
[0105]
试验例4为了进一步地阐述本发明中药组合物的临床有效性，用实施例1制备的颗粒剂（以下简称本发明中药组合物）进行临床研究。
[0106]
1一般资料选取河北以岭医院呼吸科门诊或儿科接诊的符合儿童流行性感冒诊断患者，筛选符合纳入标准的患者101例，随机分配给本发明药物组、西药对照组，连用5天。
[0107]
2研究对象的选择2.1西医诊断标准参考卫生部制定的《流行性感冒诊断与治疗指南（2011年版）》一、需要考虑流感的临床情况：（一）在流感流行时期，出现下列情况之一，需要考虑是否为流感：1.发热伴咳嗽和/或咽痛等急性呼吸道症状。2.发热伴原有慢性肺部疾病急性加重。3.婴幼儿和儿童发热，未伴其他症状和体征。4.老年人（年龄≥65岁）新发生呼吸道症状，或出现原有呼吸道症状加重，伴或未伴发热。5.重病患者出现发热或低体温。（二）在任何时期，出现发热伴咳嗽和/或咽痛等急性呼吸道症状，并且可以追踪到与流感相关的流行病学史—如患者发病前7天内曾到有流感暴发的单位或社区；与流感可疑病例共同生活或有密切接触；从有流感流行的国家或地区旅行归来等。
[0108]
二、需要安排病原学检查的病例：若有条件，对出现以上情况的病例，可安排病原学检查以求明确诊断。对于明确诊断与否会对临床处理产生影响的病例，宜积极安排病原学检查。这些病例一般包括：需决定是否应及时启动抗病毒治疗的高危病例；是否确诊对安排其他诊断检查有影响的病例；需决策是否应用抗生素治疗的病例；等待诊断结果来安排相应感染控制措施的病例；进行流行病学采样调查的病例等。
[0109]
三、确诊标准：具有临床表现，以下1种或1种以上的病原学检测结果呈阳性者，可以确诊为流感：（一）流感病毒核酸检测阳性（可采用real-time rt-pcr和rt-pcr方法）。（二）流感病毒快速抗原检测阳性（可采用免疫荧光法和胶体金法），需结合流行病学史作综合判断。（三）流感病毒分离培养阳性。（四）急性期和恢复期双份血清的流感病毒特异性igg抗体水平呈4倍或4倍以上升高。
[0110]
2.2中医证候诊断标准中药复方制剂诊疗应符合“方证相应”的基本原则，选择公认的证候诊断标准。《中药新药治疗流行性感冒临床试验指导原则》指出流感较为常见的中医证候主要为风热犯卫证、风寒束表证、表寒里热证、湿热壅滞证等，本发明药物主要适用于热毒袭肺证（流行性感冒诊疗方案（2018年版）），症见：发热或高热，恶寒、肌肉酸痛、鼻塞流涕、咳嗽、头痛，咽干咽痛，舌偏红，苔黄或黄腻，脉滑数等。
[0111]
2.3纳入标准1、符合流行性感冒诊断标准，具有流感临床表现，至少有一个因流感病毒感染导致的呼吸道症状（咳嗽、流涕/鼻塞、咽喉红肿等）。且流感症状开始时间在入组研究前的48小时内。2、年龄3-14岁，男女不限。3、在流感季节内，体温≥ 37.3℃或基线前48小时内有体温≥ 37.3℃的发热史。4、发病后未服用任何抗病毒/抗流感药物。5、鼻或咽拭子流感病毒快速抗原检测阳性。6、研究开始前法定监护人自愿签署书面的知情同意书（同时≥10周岁患儿需要本人自愿签署知情同意书)。
[0112]
2.4排除标准1、重症流行性感冒以及具有并发症的流感患者。2、发热体温≥39.5℃。2、有以下状况的受试者：非流感病毒引起的下呼吸道感染，需每日治疗的哮喘，任何其他慢性呼吸道疾病，呼吸系统细菌感染如化脓性扁桃体炎，急性气管支气管炎，鼻窦炎，耳炎等其他影响临床试验评估的呼吸道疾病。3、受试者1个月之内接种过流感疫苗；正在接受系统激素类或其他免疫抑制剂治疗，或服用中药或其他抗病毒药物。4、有严重的肝、肾、心、肺、血管、神经、内分泌、免疫功能疾病、癌症者。5、近1个月内参与过其他临床试验。6、过敏或对试验药物成分有已知的过敏史。7、研究者认为可能限制或妨碍研究参与或影响研究结果的任何其他相关的疾病或状况。
[0113]
2.5受试者退出标准2.5.1由研究者决定：1. 研究者认为并发症或生理异常使受试者不再符合参与此次临床试验。2. 受试者服用了少于80%或大于120%的试验药物。3. 受试者出现严重不良事件及/或实验室检验异常，研究者认为以及/或者出于安全原因，要求受试者退出此次试验研究，4. 受试者服用了试验方案禁止的药物。
[0114]
2.5.2由受试者做的决定：受试者无论有无原因都可以随时退出研究，并且如果受试者停止服用药物或拒绝接受检查，被视为中止试验研究。所有退出试验或中止试验的受试者的研究病历，都应被完整的记录，并且最后一次观察到的数据也应被用于进行疗效和安全性分析。
[0115]
3治疗方法（1）分组：分为本发明药物组、西药对照组（口服奥司他韦颗粒），符合入排标准的患者随机分配到以上两组。
[0116]
本发明药物组：实施例1制备的颗粒剂，服用5天。
[0117]
西药对照组：为口服奥司他韦颗粒，25mg/袋，服用5天，温水冲服。对儿童使用剂量推荐按照下列体重-剂量表（表6）服用。
[0118]
表6 体重-剂量表（2）合并用药规定：在试验期间，原则上方案禁止使用任何其他治疗流感及其相关症状的药物，包括但不限于抗病毒药物，解热镇痛药及任何中药抗病毒药物。研究者认为可能影响试验的任何其它药物也不允许使用。此外，试验过程中根据以下实际情况，（1）受试者体温≥38.5℃，或身体疼痛（头痛、咽痛、肌肉酸痛）难以忍受时，可给予布洛芬或扑热息痛治疗。（2）受试者咳嗽严重时，给予止咳祛痰药。（3）若受试者有细菌感染指征，给予抗菌药物治疗，需记录所有用药。
[0119]
4观察项目及指标4.1 人口学资料包括年龄、性别、身高、体重、既往史、现病史、过敏史。
[0120]
4.2安全性观察一般体检项目，血常规（白细胞计数、中性粒细胞、淋巴细胞、红细胞计数、血红蛋白、血小板）、尿常规（尿蛋白、红细胞(高倍镜检)、白细胞(高倍镜检)）、肝肾功能（谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、γ-谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、尿素氮、肌酐）、心电图检查。
[0121]
4.3疗效性观察主要指标：退热有效率。
[0122]
次要指标：临床有效率。
[0123]
疗效记录：（1）记录病程：入组时所有受试者家长均由专人培训，由入组第一天起家长每日填写症状日记卡，记录与流感相关的症状评分、体温、不良反应、继发性疾病以及合并用药情况等。
[0124]
4.4疗效判定标准4.4.1 退热疗效判定标准痊愈：患儿服药后24h 内体温恢复正常，并且无反复；显效：患儿服药后24h 内体温降低≥1.0 ℃，但体温未完全恢复正常；有效：患儿服药24h后体温降低幅度为0.5～＜1.0℃，且体温未完全恢复正常；无效：患儿服药24h 后体温降低＜0.5℃。总有效率＝（痊愈例数 显效例数）/总例数
×
100％。
[0125]
4.4.2 临床疗效判定标准参照《中药新药临床研究指导原则》，结合流感症状评分判定疗效。痊愈：治疗后临床症状、体征消失或基本消失，流感症状评分减少≥ 95％；显效：治疗后流感症状评分减少＜95％且≥70％；有效：治疗后流感症状评分减少＜ 70％且≥
30％；无效：治疗后流感症状评分减少＜30％。总有效率＝（痊愈例数 显效例数）/总例数
×
100％。症状评分表如表7所示。
[0126]
表7 症状评分表5统计试验结束后，由专业统计人员进行统计学处理。对不符合纳入标准，未按规定用药及严重资料不全者，作为不符合要求的病例排除，不作统计处理。统计方法采用t检验方法。最后根据统计结果，就该协定方治疗儿童流感的疗效做出客观评价，并写出总结报告。
[0127]
6结果6.1 退热疗效结果本发明药物治疗儿童流感的退热总有效率达到了96.1%，远远高于西药对照组的74.0%；且本发明药物退热疗效仅仅2例患者无效，而西药对照组无效例数达到了13例；同时本发明药物的退热效果的痊愈和显效患者的例数达到了38例，西药对照组仅仅为23例，由以上试验结果可知，本发明药物相对于西药对照组均具有较好的退热疗效，具体结果见下表8所示。
[0128]
表8 退热试验结果
6.2临床疗效结果本发明药物治疗儿童流感的临床疗效结果总有效率达到了98%，远远高于西药对照组的84%；且本发明药物治疗儿童流感的临床疗效仅仅1例患者无效，而西药对照组的无效例数达到了8例；同时本发明药物的退热效果的痊愈和显效患者的例数达到了43例，西药对照组仅仅为22例，由以上试验结果可知，本发明药物相对于西药对照组均具有很好的疗效，具体结果见下表9所示。
[0129] 表9 临床试验结果6.3安全性评价结果在试验期间共发生不良事件2例，其中西药对照组发生2例，与试验药物有关，未对受试者造成健康损害。本发明中药组合物组患者未出现恶心、腹泻、呕吐、腹痛、腹胀、口干，以及皮疹、瘙痒、头晕等不良反应，也未发生其他任何的不良事件，此外，未见与本发明药物有关的实验室异常且有临床意义的重要医学不良事件，说明本发明中药组合物的安全性好。
[0130]
试验例5为阐明本发明中药组合物的体外抗病毒活性，采用实施例1制备的颗粒剂（以下简称本发明中药组合物（lhqg））进行下列试验。
[0131]
1.实验目的通过筛选本发明中药组合物对不同呼吸道感染病毒的药效，明确其抗病毒的广谱性，以及本发明中药组合物体外抑制甲型流感病毒复制的药效机制。
[0132]
2.实验材料
①
毒株与细胞来源：
②ꢀ
药物来源1）供试品药物来源及溶解方法称取实施例1制备的颗粒剂1225mg加入20ml dmso溶解，采用超声加热助溶（20000hz，50℃水浴超声1h）；超声完后2000rpm，室温离心15min，弃沉淀取上清分装500μl/管，冻-20℃备用，药物存储浓度为61.25mg/ml。
[0133]
2）阳性药物来源3.实验方法
①
病毒半数组织感染量（tcid 50）的测定将宿主细胞接种到96孔板，待细胞长成单层后，弃去培养液，以pbs洗涤细胞表面2次。加入不同浓度的病毒稀释液，在co2培养箱中孵育48~72小时。每天观察细胞生长状况，当细胞出现萎缩，变圆，脱落等病变现象时（cpe），记录产生cpe的情况。
[0134]
②
lhqg体外毒性测定（mtt法）细胞接种在96孔板，同时设置空白组（不含细胞，仅有培养基）、正常细胞对照组（含药物溶解介质）。孵育48小时，继续培养4小时，终止培养，每孔加入100ul dmso，置摇床上低速振荡10分钟。在全波长扫描仪上测量在490nm 波长各孔的od值。计算出药物的tc50。
[0135]
③ꢀ
体外抗流感病毒谱活性筛选以细胞病变抑制法对待测药物进行抗病毒活性检测。用含1ug/ml tpck（胰蛋白酶）的培养基把待测药物倍比稀释成八个浓度，阳性药物（利巴韦林）倍比稀释配成八个浓度。将mdck细胞接种到96孔板，待细胞长成单层后，弃去培养液，以pbs洗涤细胞表面2次。设置正常细胞对照组、病毒对照组、药物对照组，培养箱中孵育2小时后弃去病毒液，加入含待测药物以及阳性药物的培养基，置培养箱中孵育48小时，每天观察并记录细胞病变。细胞出现病变程度按以下表12中的6级标准记录。
[0136]
④ꢀ
体外抗其他病毒活性筛选以细胞病变抑制法对待测药物进行抗病毒活性检测。用培养基把待测药物倍比稀释成八个浓度，阳性药物（利巴韦林和阿比朵尔）均是倍比稀释配成八个浓度。将宿主细胞接种到96孔板，待细胞长成单层后（约24h），弃去培养液，以pbs洗涤细胞表面2次。加入病毒稀释液100ul/孔，每个浓度4个复孔，同时设置正常细胞对照组、病毒对照组、药物对照组，培养箱中孵育，2小时后弃去病毒液，加入含待测药物以及阳性药物的培养基，置培养箱中孵育48～72小时，每天观察并记录细胞病变。细胞出现病变程度按6级标准记录（见表12）。
[0137]
⑤
体外抑制流感病毒（a/pr/8/34，h1n1）和脂多糖（lps）诱导宿主炎症因子表达将生长密度适度的a549细胞，接种到6孔细胞培养板，48h后弃去上清培养基，洗涤细胞两次，加入1ml甲型流感病毒培养液，置培养箱中吸附2小时后，弃去上清，再加入含待测药物培养基，24h后，吸弃上清，洗涤细胞两次，加入试剂裂解细胞，样品用于后续rna提取，设置病毒感染对照组，不同剂量待测药物干预组以及非感染药物对照组。
[0138]
将生长密度适度的巨噬细胞，接种到细胞培养板上，48h后弃去上清培养基，洗涤细胞，换无血清培养基饥饿24h；第3天加入脂多糖和不同药物剂量的培养基处理；24h后裂解细胞，样品用于后续rna提取，实验组别包括：模型组、药物干预组、药物对照组。
[0139]
rt-pcr检测本发明中药组合物对宿主细胞感染相关炎症因子mrna的表达水平的影响。
[0140]
⑥ꢀ
lhqg作用时相实验mdck细胞接种12孔板，生长至单层，去掉培养上清，pbs洗涤两次，然后在4℃环境下，加入甲型流感病毒a/pr/34株吸附2小时。除去还没吸附到宿主细胞的病毒。接着加入培养基，在培养箱中孵育。在感染后、感染后指定时间点加入药物。10h后，将12孔板反复冻融3次，收集各个时间点的样品进行子代病毒滴度测定（tcid
50
）。
[0141]
⑦ꢀ
间接免疫荧光实验（流感病毒np蛋白表达）mdck细胞接种到8-well glass，待细胞长至40%左右，弃去培养基，用pbs清洗细
胞。病毒孵育后用含dapi甘油封片染色液标记细胞核染色，荧光显微镜下观察结果。
[0142]
4.统计学方法报告中实验结果采用spss20.0软件进行统计分析，graphpad prism 5软件作图，所有数据采用均数标准差进行计算。两组样本比较用t检验，多个样本比较采用one-way anova分析，两两比较假定方差齐性使用lsd法，假定方差不齐使用tamhane，s t2或dunnett，s t3。不符合正态分布与方差齐性的多组计量资料，则采用kruskal-wallis秩和检验。p《0.05表示有统计学意义。
[0143]
5.结果
①
病毒的半数感染量（tcid
50
）结果：病毒接种对应宿主细胞48～72h后，显微镜下观察cpe，根据 reed-muench法计算其tcid
50
，如下表13所示。
②
lhqg体外毒性测定（mtt法）以mtt 法测试lhqg体外细胞（mdck、hep-2、huh-7、mrc-5、vero）毒性，根据 reed-muench法，计算 tc
50
，详见图1。
[0144]
③
lhqg体外抗病毒谱筛选（cpe法）以细胞病变抑制法测试lhqg体外抗病毒活性，根据reed-muench法，计算ic
50
，结果见表14、15所示。
[0145]
④
lhqg对流感病毒以及脂多糖诱导的细胞因子mrna表达水平的影响rt-pcr实验结果显示：与病毒感染模型组比较，lhqg可显著降低流感病毒诱导的宿主细胞炎症因子mip-1β、ifn-β、ip-10、il-6、ccl5、mcp-1、tnf-α、rig-i、mig、cxcl1的mrna水平的表达，详见下表16（注：*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001）。
[0146]
同时，lhqg可降低脂多糖刺激宿主细胞炎症因子il-6、tnf-α、ip-10、mcp-1、il-1β的表达且呈剂量依赖关系，详见下表17（注：*p《0.05，**p《0.01）。
[0147]
⑤
lhqg抗流感病毒作用时相在流感病毒单个复制周期中时间点（0h、2h、4h、6h、8h），加入lhqg干预后，收集各时间点干预后的样品与病毒感染对照组样品，结果显示：在0~4h时间点（病毒复制早期阶段）加入lhqg，病毒滴度显著降低（p《0.01或p《0.001）。说明lhqg具有抗病毒作用，且主要作用于病毒复制早期阶段，详见表18（注：**表示p《0.01，***表示p《0.001）。
[0148]
⑥
间接免疫荧光实验（流感病毒np蛋白表达试验）宿主细胞感染病毒（0h、2h、4h、6h、8h），加入lhqg干预，取细胞进行免疫荧光实验，在荧光显微镜下观察，结果显示：病毒感染后（0h）加入lhqg干预，能明显降低流感病毒的np蛋白的表达，详见图2。
[0149]
6.结论本发明中药组合物（lhqg）对多株甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒以及冠状病毒具有体外的抗病毒作用，即lhqg在体外具有广谱抗病毒作用，且作用于病毒复制的早期阶段。此外，本发明中药组合物还可显著降低流感病毒及lps诱导的宿主细胞炎症因子表达，具有明确的体外抗炎作用。
[0150]
试验例6为阐明本发明中药组合物体内抗病毒的活性，采用实施例1制备的颗粒剂（以下简称本发明中药组合物）以及对比例1、2制备的颗粒剂进行下列试验。
[0151]
1.实验目的本研究分别采用甲型流感病毒（h3n2）和呼吸道合胞病毒对balb/c小鼠进行滴鼻感染，建立甲型流感病毒和呼吸道合胞病毒动物模型，通过观察本发明中药组合物对感染小鼠临床症状（体重、肺指数、细胞因子）与病原学相关指标（病毒载量）的影响，评价本发明中药组合物（lhqg）的药效。
[0152]
2 实验方法2.1抗甲型流感病毒体内药效学研究spf级balb/c小鼠，雌雄各半，体重17.0～20.0g，按性别和体重随机分为7组，分别为正常对照组、模型对照组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟组、lhqg组、lhqg-a方组（对比例1）、lhqg-b方组（对比例2）。lhqg、lhqg-a、lhqg-b拟临床剂量为0.4g生药/kg体重，小鼠剂量定为4.0g生药/kg，为拟临床剂量的10倍，此为临床等效剂量。各给药组按10ml/kg经口灌胃给予相应浓度的药液，正常对照组和模型对照组给予等体积的纯水，1日/次，连续给药7天。于给药d4（给药前）采用乙醚轻微麻醉各组小鼠，并经鼻滴入h3n2甲型流感病毒原液（采用血凝抑制试验检测病毒血凝效价为6log2，滴鼻感染前4℃预冷），80μl/只，正常对照组经鼻滴入等体积的空白培养基。于末次给药后2h解剖取肺脏并称重，计算肺指数；采用elisa法检测肺匀浆中il-1β、tnf-α的含量；采用荧光定量pcr法测定肺内流感病毒载量。
[0153]
2.2抗合胞病毒体内药效学研究spf级balb/c小鼠，雌雄各半，体重17.0～20.0g，按性别和体重随机分为7组，分别为正常对照组、模型对照组、利巴韦林片组、连花清瘟组、lhqg组、lhqg-a方组、lhqg-b方组。lhqg、lhqg-a、lhqg-b拟临床剂量为0.4g生药/kg体重，小鼠剂量定为4.0g生药/kg，为拟临床剂量的10倍，此为临床等效剂量。各给药组按10ml/kg经口灌胃给予相应浓度的药液，正常对照组和模型对照组给予等体积的纯水，1日/次，连续给药7天。于给药d4（给药前）采用乙醚轻微麻醉，各组小鼠经鼻滴入rsv病毒液（病毒液浓度100tcid，滴鼻感染前4℃预冷），80μl/只，正常对照组经鼻滴入等体积的空白培养基。于末次给药后2h解剖取肺脏并称重，计算肺指数；采用elisa法检测肺匀浆中il-1β、tnf-α的含量；采用荧光定量pcr法测定肺内流感病毒载量。
[0154]
3统计方法试验数据用均数
±
标准差（）表示，检验水准为0.05和0.01，采用spss软件进行统计分析，均数比较用单因素方差分析，首先进行方差齐性检验，若方差齐，采用最小显著差法（lsd），若方差不齐，则采用dunnett’s t3检验。
[0155]
4结果
4.1抗甲型流感病毒体内药效学研究如表19、20和21所示，与正常对照组相比，模型对照组病毒感染后肺指数明显增大（p《0.01），肺组织匀浆中炎症因子含量（il-1β、tnf-α）、病毒载量明显升高（p《0.01）。与模型对照组比较，连花清瘟组及lhqg组肺指数、肺内炎症因子、病毒载量明显降低（p《0.01或p《0.05），lhqg-a方组、lhqg-b方组上述指标均未见明显差异（p》0.05），磷酸奥司他韦胶囊组肺指数、肺内炎症因子含量、病毒载量明显降低（p《0.01或p《0.05）。肺指数、肺内炎症因子含量、病毒载量明显降低（p《0.01或p《0.05）。肺指数、肺内炎症因子含量、病毒载量明显降低（p《0.01或p《0.05）。
[0156]
4.2抗呼吸道合胞病毒体内药效学研究如表22、23和24所示，与正常对照组相比，模型对照组病毒感染后肺指数明显增大
（p《0.01），肺组织匀浆中炎症因子含量（il-1β、tnf-α）、病毒载量明显升高（p《0.01）。与模型对照组比较，连花清瘟组及lhqg组肺指数、肺内炎症因子、病毒载量明显降低（p《0.01或p《0.05），lhqg-a方组、lhqg-b方组上述指标均未见明显差异（p》0.05），磷酸奥司他韦胶囊组肺指数、肺内炎症因子含量、病毒载量明显降低（p《0.01或p《0.05）。0.01或p《0.05）。0.01或p《0.05）。
[0157]
5结论本试验条件下，lhqg（本发明中药组合物）明显降低甲型流感病毒及呼吸道合胞病毒感染后肺指数、肺内炎症因子含量及病毒载量，药效与连花清瘟相当。lhqg-a方、lhqg-b方则未见明显抗病毒药效。
[0158]
试验例7为进一步地阐明本发明中药组合物体内抗病毒的活性，采用实施例1制备的颗粒剂（以下简称本发明中药组合物）进行下列试验。
[0159]
1.实验目的本研究分别采用甲型流感病毒（h3n2）和呼吸道合胞病毒对balb/c小鼠进行滴鼻感染，建立甲型流感病毒和呼吸道合胞病毒动物模型，通过观察本发明中药组合物对感染小鼠临床症状与病原学相关指标的影响，评价本发明中药组合物（lhqg）的药效。
[0160]
2 实验方法2.1抗甲型流感病毒体内药效学研究balb/c小鼠140只，spf级，雌雄各半，体重15.6～20.0g，按性别和体重随机分为7组，分别为正常对照组、模型对照组、磷酸奥司他韦胶囊组（20mg/kg）、连花清瘟胶囊组（0.5g/kg）及lhqg低、中、高剂量组，20只/组。每天采用0.5% 羧甲基纤维素钠（cmc-na）将lhqg配制成浓度为0.05、0.10、0.20g粉/ml药液（后续试验表格中剂量为生药量），磷酸奥司他韦胶囊采用纯水配制成浓度为2mg/ml药液，连花清瘟胶囊采用纯水配制成浓度为0.05g/ml药液，lhqg低、中、高剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组小鼠按10ml/kg经口灌胃给予相应浓度的药液，正常对照组和病毒模型组给予等体积的纯水，1日/次，连续给药7天。于给药d4（给药前）采用乙醚轻微麻醉各组小鼠，除正常对照组外，各组小鼠经鼻滴入h3n2甲型流感病毒液（滴鼻感染前4℃预冷），80μl/只，正常对照组经鼻滴入等体积的空白培养基。
[0161]
于给药d5（染毒后24h）、d7（末次给药后2h），分别从各组中随机选取动物，采用elisa试剂盒检测肺匀浆中il-1β、tnf-α、inf-γ、il-10的含量；采用血凝抑制试验检测肺悬液的血凝抑制滴度（以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数为血凝抑制滴度），以log2（最大稀释倍数），反映肺脏中病毒效价；he染色，光镜观察病理改变，并根据肺泡结构、肺泡间隔、肺间质、细支气管粘膜病理变化以及炎症细胞浸润状况对肺脏病理变化进行综合评价（按病变程度评分，评分标准如下：0分：正常；1分：极轻度（病变小于10％）；2分：轻度（病变10％～30％）；3分：中度（病变30％～50％）；4分：重度（病变大于50％））；对动物肺脏中cd4

、cd8

淋巴细胞进行免疫组化染色，采用image j 软件对荧光信号进行分析，其中cd4

细胞为红色荧光信号，cd8

细胞为绿色荧光信号，以荧光值反映cd4 、cd8 细胞的数量，并计算cd4

/cd8

比值。
[0162]
2.2抗合胞病毒体内药效学研究balb/c小鼠224只，spf级，雌雄各半，体重14.4～20.3g，按性别和体重随机分为7组，分别为正常对照组、模型对照组、利巴韦林片组（60mg/kg）、连花清瘟胶囊组（0.5g/kg）及lhqg低、中、高剂量组，32只/组。每天采用0.5%羧甲基纤维素钠（cmc-na）将lhqg配制成浓度为0.05、0.10、0.20g粉/ml药液（后续试验表格中剂量为生药量），利巴韦林片采用纯水配制成浓度为6.0mg/ml药液，连花清瘟胶囊采用纯水配制成浓度为0.05g/ml药液，以上各组小鼠按10ml/kg经口灌胃给予相应浓度的药液，正常对照组和病毒模型组给予等体积的纯水，1日/次，连续给药7天。于给药d4（给药前）采用乙醚轻微麻醉各组小鼠，除正常对照组外，各组小鼠经鼻滴入rsv病毒原液（滴鼻感染前4℃预冷），80μl/只，正常对照组经鼻滴入等体积的空白培养基。
[0163]
于给药d5（染毒后24h）、d7（末次给药后2h），分别从各组中随机选取动物，采用elisa试剂盒检测肺匀浆中il-1β、tnf-α、inf-γ、il-10的含量；采用流式细胞术检测全血中淋巴细胞cd4

、cd8

细胞，计算cd4

、cd8

细胞比值；采用流式细胞术测定肺匀浆液中淋巴细胞cd4

、cd8

细胞，巨噬细胞（m1、m2），计算cd4

/cd8

、m1/m2；采用流式细胞术检测脾脏中nk细胞；he染色，光镜观察病理改变，并根据肺泡结构、肺泡间隔、肺间质、细支气管粘膜病理变化以及炎症细胞浸润状况对肺脏病理变化进行综合评价（按病变程度评分，评分标准如下：0分：正常；1分：极轻度（病变小于10％）；2分：轻度（病变10％～30％）；3分：中度（病变30％～50％）；4分：重度（病变大于50％））；对动物肺脏中cd4

、cd8

淋巴细胞进行免疫组化染色，采用image j 软件对荧光信号进行分析，其中cd4

细胞为红色荧光信号，cd8

细胞为绿色荧光信号，以荧光值反映cd4

、cd8

细胞的数量，并计算cd4

/cd8

比值。
[0164]
3统计方法统计所用软件为spss。计量资料以均数
±
标准差（ )表示，用leven’s test方法检验正态性和方差齐性。如果没有统计学意义（p 》 0.05），用单因素方差分析（anova）进行统计分析。如果anova有统计学意义（p ≤ 0.05），用lsd test （参数法）进行比较分析。如果方差不齐（p ≤ 0.05），则用kruskal-wallis检验。如果kruskal-wallis检验有统计学意义（p ≤ 0.05），则用dunnett’s test （非参数方法）进行比较分析。统计结果以α=0.05为检验界限，其中p ≤ 0.05表示有统计学意义，p ≤ 0.01表示所检验的差别有非常显著性意义。
[0165]
4结果4.1抗甲型流感病毒体内药效学研究结果1）对肺组织中il-1β、tnf-α、il-10、inf-γ含量的影响如表25所示，染毒后24h，与正常对照组比较，模型对照组il-1β、tnf-α、il-10、inf-γ含量均明显上升（p ≤0.05或p ≤ 0.01）。与模型对照组比较，lhqg低、中、高剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组il-1β含量均明显下降（p ≤ 0.05或p ≤ 0.01）；lhqg中、高剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组tnf-α含量均明显下降（p ≤ 0.05或p ≤ 0.01），lhqg低剂量组tnf-α含量呈下降趋势，但无统计学差异；lhqg高剂量组inf-γ含量均明显下降（p ≤ 0.05或p ≤ 0.01），lhqg低、中、高剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组il-10，lhqg低、中剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组inf-γ含量均呈下降趋势，但无统计学差异。末次给药后2h，与正常对照组相比，模型对照组il-1β与tnf-α含量明显上升（p ≤ 0.05或p ≤ 0.01），il-10与inf-γ含量呈上升趋势，但无统计学差异。与模型对照组比较，lhqg高剂量组、连花清瘟胶囊组l-1β含量明显性下降（p ≤ 0.01），lhqg低、中剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组l-1β含量呈下降趋势，但无统计学差异；lhqg中、高剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组tnf-α含量均明显下降（p ≤ 0.05或p ≤ 0.01），lhqg低剂量组呈tnf-α含量呈降低趋势，但无统计学差异；lhqg低、中、高剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组il-10与inf-γ含量均呈下降趋势，但无统计学差异。
[0166]
2）对肺组织中h3n2甲型流感病毒血凝效价的影响如表26所示，正常对照组未进行流感病毒感染，肺脏中无病毒效价。与模型对照组比较，染毒后24h、末次给药后2h，lhqg低、中、高剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组肺脏中病毒血凝效价均明显降低（p ≤ 0.01）。
[0167]
3）对肺组织病理改变的影响如表27及图3、4所示，其中，图3为染毒后24h对肺组织病理学影响结果：a，正常对照组；b，模型对照组；c，磷酸奥司他韦胶囊组；d，连花清瘟胶囊组；e，lhqg低剂量组；f，lhqg中剂量组；g，lhqg高剂量组；黑色箭头表示肺泡（b、d中）；蓝色箭头表示肺间质（b、c、d中）；红色箭头表示细支气管（b、f中），图4为末次给药后2h对肺组织病理学影响结果：a，正常对照组；b，模型对照组；c，磷酸奥司他韦胶囊组；d，连花清瘟胶囊组；e，lhqg低剂量组；f，lhqg中剂量组；g，lhqg高剂量组；黑色箭头表示肺泡（b、e中）；蓝色箭头表示肺间质（b、d、e中）；红色箭头表示细支气管（b、c中）。
[0168]
染毒后24h，正常对照组支气管、肺泡结构清晰，细胞排列整齐；模型对照组可见肺泡壁明显肿胀、部分塌陷、断裂，毛细支气管壁增厚且部分粘膜细胞脱落，并伴有大量炎症细胞浸润。lhqg低、中、高剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组病变程度较模型对
照组明显减轻，且病理评分明显降低（p ≤0.05或p ≤0.01）。末次给药后2h，正常对照组支气管、肺泡结构清晰，细胞排列整齐；模型对照组可见肺泡壁部分塌陷、断裂，肺间质增厚，且伴有炎症细胞浸润。相较于模型对照组，lhqg低、中、高剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组病变程度较模型对照组明显减轻，且病理评分明显降低（p ≤0.05或p ≤0.01）。
[0169]
4）对肺组织中cd4

、cd8

淋巴细胞的影响如表28及图5、6所示，其中，图5为染毒后24h对肺组织中cd4

、cd8

细胞荧光强度值的影响结果：为cd4

、cd8

信号merge图，a，正常对照组；b，模型对照组；c，磷酸奥司他韦胶囊组；d，连花清瘟胶囊组；e，lhqg低剂量组；f，lhqg中剂量组；g，lhqg高剂量组，图6为末次给药后2h对肺组织中cd4

、cd8

细胞荧光强度值的影响结果：为cd4

、cd8

信号merge图，a，正常对照组；b，模型对照组；c，磷酸奥司他韦胶囊组；d，连花清瘟胶囊组；e，lhqg低剂量组；f，lhqg中剂量组；g，lhqg高剂量组。
[0170]
染毒后24h、末次给药后2h，与正常对照组比较，肺脏中cd4

/cd8

均明显减小（p ≤ 0.01），提示h3n2甲型流感病毒感染能引起小鼠肺脏中cd4

、cd8

比例失调。与模型对照比较，染毒后24h、末次给药后2h，lhqg低、中、高剂量组、磷酸奥司他韦胶囊组、连花清瘟胶囊组cd4

/cd8

均明显增大（p ≤ 0.01），说明经口灌胃给予lhqg能改善感染小鼠肺脏中cd4

、cd8

淋巴细胞比例失调。
[0171]
上述试验结果表明，lhqg能减小肺指数、降低肺脏中h3n2甲型流感病毒载量的同时，lhqg低、中、高剂量均能减少炎症因子在肺脏中的蓄积，并改善病毒所致的肺组织病理变化，且能明显升高肺组织中cd4

/cd8

比例，具有调节淋巴细胞的作用。综上，lhqg具有明显体内抗甲型流感病毒药效作用，该作用可能与其能调节局部肺组织免疫细胞，抑制肺组织炎症反应有关。
[0172]
4.2抗呼吸道合胞病毒体内药效学研究结果1）对肺组织中il-1β、tnf-α、il-10、inf-γ含量的影响如表29所示，染毒后24h，与正常对照组比较，模型对照组il-1β、tnf-α、il-10、inf-γ含量均明显上升（p ≤ 0.01）。与模型对照组比较，lhqg中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组il-1β含量均明显降低（p ≤ 0.01），lhqg低剂量组il-1β含量呈下降趋势，但无统计学差异；与模型对照组比较，lhqg低、中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组tnf-α、il-10、inf-γ含量均明显降低（p ≤ 0.05或p ≤ 0.01）。末次给药后2h，与正常对照组比较，模型对照组il-1β、tnf-α、il-10含量均明显上升（p ≤ 0.01），inf-γ含量呈上升趋势，但无统计学差异；与模型对照组比较，lhqg低、中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组tnf-α、il-10含量均明显降低（p ≤ 0.01）；lhqg低、中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组il-1β均明显降低（p ≤ 0.01），lhqg高剂量组il-1β呈下降趋势，但无统计学差异；与模型对照组比较，lhqg低、中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组inf-γ含量均呈下降趋势，但无统计学差异。
[0173]
2）对外周血与肺组织中cd4

/cd8

淋巴细胞比值的影响如表30所示，与正常对照组比较，染毒后24h、末次给药后2h，模型对照组外周血与肺组织中cd4

/cd8

比值均明显减小（p ≤ 0.05或p ≤ 0.01）。染毒后24h，与模型对照组比较，lhqg高剂量组外周血中cd4

/cd8

比值明显增大（p ≤ 0.05），lhqg低、中剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组外周血中cd4

/cd8

比值呈增大趋势，但无统计学差异；与模型对照
组比较，染毒后24h，lhqg中剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组肺组织中cd4

/cd8

比值明显增大（p ≤ 0.05），lhqg低、高剂量组肺组织中cd4

/cd8

比值呈增大趋势，但无统计学差异。末次给药后2h，与模型对照组比较，lhqg高剂量组外周血中cd4

/cd8

比值明显增大（p ≤ 0.05），lhqg低、中剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊外周血中cd4

/cd8

比值呈增大趋势，但无统计学差异；末次给药后2h，lhqg高剂量组肺组织中cd4

/cd8

比值明显增大（p ≤ 0.05），利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组肺组织中cd4

/cd8

比值呈增大趋势，但无统计学差异，lhqg低、中剂量组肺组织中cd4

/cd8

比值与模型对照组无明显差异。
[0174]
3）对肺巨噬细胞及脾nk细胞的影响如表31所示，与正常对照组比较，染毒后24h、末次给药后2h，模型对照组肺组织中巨噬细胞m1/m2比值均明显增大（p ≤ 0.01）、染毒后24h脾脏中nk细胞明显减少（p ≤ 0.05），末次给药后2h，脾脏中nk细胞呈减少趋势，但无统计学差异。与模型对照比较，染毒后24h，lhqg低、中、高剂量组、利巴韦林片组肺脏中m1/m2的比值明显减小（p ≤ 0.05），末次给药后2h，lhqg低、中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组肺脏中m1/m2的比值均明显减小（p ≤ 0.05或 p ≤ 0.01）；与模型对照组比较，染毒后24h、末次给药后2h，lhqg低、中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组脾脏中nk细胞均呈增多趋势，但无统计学差异。
[0175]
4）对肺组织病理改变的影响如表32及图7、8所示，其中，图7为染毒后24h对肺组织病理学影响结果：a，正常对照组；b，模型对照组；c，利巴韦林片组；d，连花清瘟胶囊组；e，lhqg低剂量组；f，lhqg中剂量组；g，lhqg高剂量组；黑色箭头表示肺泡；蓝色箭头表示肺间质；红色箭头表示细支气管，图8为末次给药后2h对肺组织病理学影响结果：a，正常对照组；b，模型对照组；c，利巴韦林片组；d，连花清瘟胶囊组；e，lhqg低剂量组；f，lhqg中剂量组；g，lhqg高剂量组；黑色箭头表示肺泡；蓝色箭头表示肺间质；红色箭头表示细支气管。
[0176]
染毒后24h，正常对照组支气管、肺泡结构清晰，细胞排列整齐；模型对照组可见肺泡壁明显塌陷、断裂，毛细支气管壁增厚且部分粘膜细胞脱落，并伴有大量炎症细胞浸润，且病理评分明显升高（p ≤ 0.01）。lhqg中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组病变程度较模型对照组明显减轻，且病理评分明显降低（p ≤ 0.05或p ≤ 0.01），lhqg低剂量肺组织病变虽减轻，但病理评分无统计学差异。末次给药后2h，正常对照组支气管、肺泡结构清晰，细胞排列整齐；模型对照组可见肺泡壁部分塌陷、断裂，肺间质增厚，支气管壁增厚，且伴有炎症细胞浸润，且病理评分明显升高（p ≤ 0.01）。相较于模型对照组，lhqg中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组病变程度较模型对照组明显减轻，且病理评分明显降低（p ≤ 0.05或p ≤ 0.01）；与模型对照组相比，lhqg低剂量肺组织病变虽减轻，但病理评分无统计学差异。
[0177]
5）对肺组织中cd4

、cd8

淋巴细胞的影响如表33及图9、10所示，其中，图9为染毒后24h对肺组织中cd4

、cd8

细胞荧光强度值的影响结果：为cd4

、cd8

信号merge图，a，正常对照组；b，模型对照组；c，利巴韦林片组；d，连花清瘟胶囊组；e，lhqg低剂量组；f，lhqg中剂量组；g，lhqg高剂量组，图10为末次给药后2h对肺组织中cd4

、cd8

细胞荧光强度值的影响结果：为cd4

、cd8

信号merge图，a，正常对照组；b，模型对照组；c，利巴韦林片组；d，连花清瘟胶囊组；e，lhqg低剂量组；f，lhqg中剂量组；g，lhqg高剂量组。
[0178]
染毒后24h、末次给药后2h，与正常对照组比较，肺脏中cd4

/cd8

均明显减小（p ≤ 0.01），提示小鼠感染呼吸道合胞病毒会造成肺脏中cd4

、cd8

比例失调。与模型对照比较，染毒后24h，lhqg中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组cd4

/cd8

均明显增大（p ≤ 0.05或p ≤ 0.01），lhqg低剂量组呈增大趋势，但无统计学差异；与模型对照组比较，末次给药2h，lhqg低、中、高剂量组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组cd4

/cd8

均明显增大（p ≤ 0.01），说明经口灌胃给予lhqg能抑制感染小鼠肺脏中cd4

、cd8

淋巴细胞比例失调。
[0179]
上述试验结果表明，lhqg能减小肺指数、抑制呼吸道合胞病毒在肺脏中的复制的同时，lhqg低、中、高剂量均能降低炎性因子在肺脏中蓄积，改善染毒模型小鼠肺部病理变化，且lhqg能提高外周血与肺组织中cd4

/cd8

比值、抑制巨噬细胞m1极化，说明lhqg具有调节免疫细胞、维持免疫平衡的作用。说明本发明中药组合物具有明显体内抗呼吸道合胞病毒的药效作用，该作用可能与其能调节全身及肺组织局部的免疫细胞平衡，抑制肺组织局部炎症反应有关。
[0180]
药效研究证实本发明提供的中药组合物lhqg具有祛邪扶正、整体调节，肺卫同治、积极干预的作用。
[0181]
祛邪扶正，整体调节：研究证实lhqg既能有效祛除病原体，又能调动免疫机能，体外抗病毒药效研究证实lhqg对多株甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒以及冠状病毒具有体外抗病毒作用，且作用于病毒复制的早期阶段。体内药效研究进一步地证实lhqg有明显体内抗甲型流感病毒、抗呼吸道合胞病毒药效作用，同时可提高外周血与肺组织中cd4

/cd8

比值、降低肺部巨噬细胞m1/m2比值，提升机体抵御外部病毒感染，调动抗病免疫机能，防止反复上呼吸道感染发生。lhqg既有效抗感冒病毒，又针对感冒相关临床症状，发挥解热镇痛、化痰止咳的综合治疗作用。
[0182]
肺卫同治，积极干预：lhqg可显著降低流感病毒及lps诱导的宿主细胞炎症因子表达，具有明确的体外抗炎作用。在体内实验中，有效降低呼吸道合胞病毒感染小鼠肺部炎症
因子水平（il-1β、tnf-α、il-10、inf-γ），保护肺泡壁结构、减轻炎症细胞浸润程度、降低肺间质厚度，改善肺部病理损伤。同时有效抑制感冒引发的肺部炎症反应，降低炎症因子水平，改善肺部病理损伤，治疗感冒本病，防治向肺炎发展。
[0183]
由以上数据可知，本发明实施例提供的具有治疗儿童感冒功效的中药组合物，11味药物，君臣佐使相辅相成，全方将外解表邪与内清肺热相协，清透与扶正相兼，安全可靠，无毒副作用，不仅能够有效治疗小儿感冒，具有解热、抗炎、镇痛、止咳祛痰等功效，还可以抗呼吸道感染病毒，能够用于预防和治疗病毒性呼吸道感染（病毒性上呼吸道感染和病毒性下呼吸道感染），效果显著。
[0184]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。