一种具有舒缓功效的护肤品组合及其制备的制作方法

1.本发明涉及化妆品领域，涉及一种可用于敏感性皮肤人群具有舒缓功效的护肤品组合。


背景技术：

2.敏感性皮肤(sensitive skin，ss)是一种好发于面部的皮肤高反应状态或对刺激的耐受性差，在生理或病理状态下均可发生，其症状主要表现为受到物理、化学、精神等因素刺激时皮肤易出现灼热、刺痛、瘙痒及紧绷感等主观症状，也可能伴有红斑、鳞屑、毛细血管扩张等客观体征。在国女性中发生率15.93～23％，男性8.62％，由于调查受区域和人数限制，实际发生率可能高于该报道。敏感性皮肤在全球范围内发生率较高，国外报道60～70％的女性和50～60％的男性具有不同程度的皮肤敏感。目前的研究认为ss的发生是一种涉及“皮肤屏障－神经血管－免疫炎症”的复杂过程，但国内外尚无对ss治疗的“金标准”。在2017年发布的《中国敏感性皮肤诊治专家共识》和2019年发布的《舒敏保湿类护肤品在敏感性皮肤中的应用指南》中均提到，敏感性皮肤人群选择日常护肤品因遵循以下原则：(1)化妆品成分应温和，低刺激性；(2)在满足正常清洁、保湿功能的基础上，应具备舒缓(有助于改善皮肤刺激等状态)和修护(有助于维护皮肤保持正常状态)的功效。
3.日常皮肤护理不当是ss的主要诱发因素，包括滥用化妆品、清洁过度、长期接触化妆品中的刺激性成分、医美治疗后的皮肤损伤。常用的化妆品配方成分中可能存在一些对皮肤形成外源性刺激的物质，这些刺激物一方面可能来自配方中的防腐剂(如苯氧乙醇、山梨酸钾)、表面活性剂(如十二烷基苯磺酸盐)、助溶剂(如聚乙二醇、丙二醇)、香精香料等；另一方面，在使用一些具有成熟供应体系的植物或动物来源的天然产物提取物作为化妆品原料时，也可能将其中所含的防腐剂、助溶剂引入到化妆品中，造成这些潜在刺激物的重复添加。虽然这类成分的使用限量在《化妆品安全技术规范》已有明确的规定，对于健康皮肤并无风险，但对于ss人群长期使用依然是外源性刺激风险物质。


技术实现要素：

4.本发明提供了一种适用于ss人群日常皮肤护理的产品组合及其制备，包含具有清洁功效的洁面乳，具有舒缓功效的保湿露，具有舒缓、保湿功效的修护霜。其配方基质中尽可能选择温和无刺激的原料，避免使用香精香料和刺激性较大的防腐剂、表面活性剂、助溶剂。对于天然产物来源的原料，选择成分可控且纯度较高的提取物自行预配使用，避免使用含刺激性防腐剂、助溶剂的成品原料，尽可能减少对皮肤造成负担，适合ss人群作为日常皮肤护理品，长期使用。
5.本发明所涉及的洁面乳，以适量椰油酰甘氨酸钠为表面活性剂；以适量甘油、羟丙基三甲基氯化铵透明质酸为保湿剂；以少量马齿苋提取物作为舒缓功效活性物；以微量辛酰羟肟酸作为防腐剂。该洁面乳对皮肤和眼均无刺激性，清洁后皮肤滋润，无紧绷感。
6.本发明所涉及的保湿露，以适量透明质酸钠、海藻糖、β-葡聚糖、乙酰壳糖胺作为
丙二醇和水稀释为一定的浓度。所用1,3-丙二醇为生物来源，有玉米通过生物发酵而来，其纯度可达99.8％，是一种具有防腐功效的纯天然保湿剂，对皮肤无刺激性或致敏性。
18.马齿苋浓缩液、1,3-丙二醇和水的重量比为：0.2～0.8:25～35:60～80，优选0.4:30:69.6。
19.所述的防腐剂为phl，由辛酰羟肟酸(caprylhydroxamic acid)、1,2-己二醇、1,3-丙二醇组成。
20.优选的，辛酰羟肟酸(caprylhydroxamic acid)、1,2-己二醇和1,3-丙二醇的重量比为：1～8:20～40:50～70，优选5:30:65。
21.所述的phl为将辛酰羟肟酸加入1,3-丙二醇和1,2己二醇中，加热至45-55℃，搅拌让其溶解完全，冷却至室温备用。
22.所述的edta二钠、椰油酰甘氨酸钠、甘油、聚季铵盐-10、甲基椰油酰基牛磺酸钠、月桂酰羟乙磺酸钠、柠檬酸、羟丙基三甲基氯化铵透明质酸、peg-7甘油椰油酸酯可购自合规化妆品原料供应商。
23.其中1,3-丙二醇为100％玉米来源，其中不含石油和动物性原料，纯度高(可达99.8％)，对皮肤无刺激性或致敏性，并具有助于化妆品的防腐和保湿功效。相比是石油来源的1,2-丙二醇、丁二醇，1,3-丙二醇是更佳温和的助溶剂的替代品。
24.所述的水为去离子水。
25.进一步的，提供：一种具有清洁和保湿功效的洁面乳，含有水59.7kg、椰油酰甘氨酸钠12kg、甘油18kg、聚季铵盐-100.1kg、edta二钠0.1kg、甲基椰油酰基牛磺酸钠2.4kg、月桂酰羟乙磺酸钠3kg、柠檬酸1.1kg、羟丙基三甲基氯化铵透明质酸0.1kg、phl1.2kg、马齿苋提取物预配液0.8kg、peg-7甘油椰油酸酯1.5kg。
26.所述的一种具有清洁和保湿功效的洁面乳，其制备方法包括以下步骤：
27.(1)将原料水、聚季铵盐-10、椰油酰甘氨酸钠、甘油、甲基椰油酰基牛磺酸钠、月桂酰羟乙磺酸钠加入乳化锅，搅拌加热，加入原料柠檬酸、edta二钠，搅拌溶解完全。
28.(2)降温：停止加热，持续搅拌降温。
29.(3)将原料羟丙基三甲基氯化铵透明质酸用适量水溶解完全后加入乳化锅，搅拌混合均匀。
30.(4)将原料phl、马齿苋提取物预配液、peg-7甘油椰油酸酯加入乳化锅，搅拌混合均匀。
31.其中步骤(1)条件为搅拌时间为40-60分钟，温度75-85℃，真空度-0.01～-0.03mpa，优选条件为搅拌时间50分钟，温度80℃，真空-0.02mpa。
32.步骤(2)条件为搅拌时间为40-60分钟，温度35-45℃，真空度-0.01～-0.03mpa，优选条件为搅拌时间55分钟，温度38℃，真空-0.02mpa。
33.步骤(3)条件为搅拌时间为10-15分钟，温度35-45℃，真空度-0.01～-0.03mpa，优选条件为搅拌时间10分钟，温度37℃，真空-0.02mpa。
34.步骤(4)条件为搅拌时间为10-15分钟，温度35-45℃，真空度-0.01～-0.03mpa，优选条件为搅拌时间15分钟，温度37℃，真空-0.02mpa。
35.具体的，还提供一种具有舒缓功效的保湿露，所述的保湿露包括水、甘油、丁二醇、透明质酸钠、甜菜碱、edta二钠、泛醇、甘草酸二钾、β-葡聚糖、乙酰壳糖胺、三七提取物预配
液、马齿苋提取物预配液、乳酸杆菌/豆浆发酵产物、四氢甲基嘧啶羧酸、白及提取物、防腐剂、聚丙烯酸酯交联聚合物-6。
36.一种具有舒缓功效的保湿露，含有以重量百分比计的水80～90％、甘油3～5％、丁二醇2～5％、透明质酸钠0.12～0.24％、甜菜碱1～3％、edta二钠0.05～0.2％、泛醇0.1～0.5％、甘草酸二钾0.05～0.1％、β-葡聚糖0.02～0.05％、乙酰壳糖胺0.5～2％、三七提取物预配液2～5％、马齿苋提取物预配液0.5～2％、乳酸杆菌/豆浆发酵产物0.5～2％、四氢甲基嘧啶羧酸0.1～0.5％、白及提取物0.2～2％、防腐剂1.0～1.4％、聚丙烯酸酯交联聚合物-60.3～0.7％。
37.其中，透明质酸钠、甜菜碱、β-葡聚糖、乙酰壳糖胺为保湿剂。
38.其中，三七提取物、马齿苋提取物、乳酸杆菌/豆浆发酵产物为舒缓功效活性物。
39.其中，四氢甲基嘧啶羧酸、白及提取物为修护功效活性物。
40.其中，防腐剂为phl。
41.所述的透明质酸钠为ha(分子量106da)和寡聚糖ha(分子量104da)以3:2比例混合。
42.所述的三七提取物预配液为将三七提取物经过微生物发酵，将有效物分离冻干，用一定量的1,3-丙二醇和peg-40氢化蓖麻油将其溶解为一定浓度的预配液。
43.所述三七提取物、1,3-丙二醇和peg-40氢化蓖麻油的重量比为：1～3:70～90:10～25，优选1.5:78.5:20。
44.其中，三七提取物为三七(panax notoginseng)提取物。
45.所述的乳酸杆菌/豆浆发酵产物预配液为将黑豆豆浆与乳酸杆菌至于发酵罐中发酵，发酵灭活破壁后提取活性成分，在提取的发酵液中加入天然1,3-丙二醇做为防腐剂。
46.所述的黑豆豆浆、乳酸杆菌和1,3-丙二醇的重量比为：60～80:0.02～0.2:20～35，优选69.9:0.1:30。
47.其中，乳酸杆菌/豆浆发酵产物为乳酸杆菌/大豆提取物发酵产物滤液(lactobacillus/soybean extract ferment filtrate)。
48.所述的白及提取物预配液为将新鲜白及经过现代工艺技术提取，制成一定浓度的提取液，加入天然1,3-丙二醇做为防腐剂。
49.白及提取物和1,3-丙二醇的重量比为：80～100:10～20，优选90:10。
50.其中，白及提取物为白及(bletilla striata)提取物。
51.所述的四氢甲基嘧啶羧酸为四氢甲基嘧啶羧酸(ectoin)。
52.所述的甘油、丁二醇、透明质酸钠、甜菜碱、edta二钠、泛醇、甘草酸二钾、β-葡聚糖、乙酰壳糖胺、聚丙烯酸酯交联聚合物-6。可购自合规化妆品原料供应商。
53.进一步的，提供具有舒缓功效的保湿露，含有水83.99kg、甘油3kg、丁二醇2kg、透明质酸钠0.18kg、甜菜碱2kg、β-葡聚糖0.03kg、乙酰壳糖胺1kg、三七提取物预配液3kg、马齿苋提取物预配液1kg、乳酸杆菌/豆浆发酵产物1.2kg、四氢甲基嘧啶羧酸0.3kg、白及提取物0.1kg、phl 1.2kg、聚丙烯酸酯交联聚合物-60.5kg、edta二钠0.05kg、泛醇0.1kg、甘草酸二钾0.05kg。
54.所述的一种具有舒缓功效的保湿露，其制备方法包括以下步骤：
55.(1)将原料水加入乳化锅，原料甘油、透明质酸钠、β-葡聚糖、聚丙烯酸酯交联聚合物-6加入混合均匀后加入乳化锅，搅拌溶解完全。
56.(2)将原料海藻糖、乙酰壳糖胺、三七提取物预配液、马齿苋提取物预配液、乳酸杆菌/豆浆发酵产物、四氢甲基嘧啶羧酸、白及提取物、phl加入乳化锅，搅拌溶解完全。
57.其中步骤(1)条件为搅拌时间为50-70分钟，温度室温，真空度-0.01～-0.03mpa，优选条件为搅拌时间为60分钟，温度室温，真空度-0.03mpa。
58.步骤(2)条件为搅拌时间为20-30分钟，温度室温，真空度-0.01～-0.03mpa，优选条件为搅拌时间为30分钟，温度室温，真空度-0.03mpa。
59.具体的，提供一种具有舒缓、保湿功效的修护霜，所述的修复霜包括水、甜菜碱、丁二醇、β-葡聚糖、甘草酸二钾、edta二钠、三七提取物预配液、透明质酸钠、鲸蜡硬脂基葡糖苷/山梨坦橄榄油酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、聚二甲基硅氧烷、乳木果油、霍霍巴油、角鲨烷、青刺果油、植物甾醇油酸酯、橄榄油神经酰胺、异壬酸异壬酯、生育酚、马齿苋提取物预配液、白及提取物、防腐剂、聚丙烯酸酯-13、聚异丁烯、聚山梨醇酯-20、山梨坦异硬脂酸酯。
60.一种具有舒缓、保湿功效的修护霜，含有以重量百分比计的水48～71％、甜菜碱1～3％、丁二醇2～5％、β-葡聚糖0.02～0.055％、甘草酸二钾0.05～0.1％、edta二钠0.05～0.2％、三七提取物预配液1～6％、透明质酸钠0.1～0.3％、鲸蜡硬脂基葡糖苷/山梨坦橄榄油酸酯2.5～5％、辛酸/癸酸甘油三酯2～5％、聚二甲基硅氧烷1～3％、乳木果油3～5％、霍霍巴油1～2％、角鲨烷1～4％、青刺果油0.5～2％、植物甾醇油酸酯0.5～2％、橄榄油神经酰胺0.5～2％、异壬酸异壬酯2～5％、生育酚0.2-0.5％、马齿苋提取物预配液1～3％、白及提取物0.2～2％、防腐剂1.0～1.4％、聚丙烯酸酯-130.3～1.0％、聚异丁烯0.1～0.4％、聚山梨醇酯-200.03～0.12％、山梨坦异硬脂酸酯0.02～0.1％。
61.其中，透明质酸钠、海藻糖、β-葡聚糖、乳木果油、霍霍巴油、角鲨烷为保湿剂。
62.其中，三七提取物、马齿苋提取物、青刺果油为舒缓功效活性物。
63.其中，白及提取物、神经酰胺为修护功效活性物。
64.其中，防腐剂为phl，由辛酰羟肟酸、1,2-己二醇、1,3-丙二醇组成。
65.所述的透明质酸钠为ha(分子量106da)和寡聚糖ha(分子量104da)以3:2比例混合。
66.所述的乳木果油为牛油果树(butyrospermum parkii)果脂。
67.所述的霍霍巴油为霍霍巴(simmondsia chinensis)籽油。
68.所述的青刺果油为扁核木(prinsepia utilis)油。
69.所述的神经酰胺为神经酰胺np(ceramide np)与油橄榄(olea europaea)果油按1:6.5比例混合。
70.所述的甜菜碱、丁二醇、β-葡聚糖、甘草酸二钾、edta二钠、鲸蜡硬脂基葡糖苷、山梨坦橄榄油酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、聚二甲基硅氧烷、乳木果油、霍霍巴油、角鲨烷、青刺果油、植物甾醇油酸酯、异壬酸异壬酯、生育酚、聚丙烯酸酯-13、聚异丁烯、聚山梨醇酯-20、水、山梨坦异硬脂酸酯可购自合规化妆品原料供应商。
71.进一步的，提供：一种具有舒缓、保湿功效的修护霜，含有水66.15kg、甜菜碱2kg、丁二醇4kg、β-葡聚糖0.03kg、甘草酸二钾0.05kg、edta二钠0.05kg、三七提取物预配液3kg、透明质酸钠0.12kg、鲸蜡硬脂基葡糖苷/山梨坦橄榄油酸酯3.5kg辛酸/癸酸甘油三酯3kg、聚二甲基硅氧烷1.5kg、乳木果油3.5kg、霍霍巴油1.2kg、角鲨烷2kg、青刺果油0.8kg、植物甾醇油酸酯0.5kg、橄榄油神经酰胺0.7kg、异壬酸异壬酯3kg、生育酚(维生素e)0.2kg、马齿苋提取物预配液2kg、白及提取物0.5kg、phl 1.2kg、聚丙烯酸酯-131kg、聚异丁烯0.2kg、聚
山梨醇酯-200.1kg、山梨坦异硬脂酸酯0.08kg。
72.所述的一种具有舒缓、保湿功效的修护霜，其制备方法包括以下步骤：
73.(1)将原料水加入水相锅，将原料丁二醇、β-葡聚糖、透明质酸钠混合均匀后加入水相锅，加入原料三七预配液、甜菜碱、甘草酸二钾、edta二钠，搅拌加热。
74.(2)将原料鲸蜡硬脂基葡糖苷、山梨坦橄榄油酸酯，辛酸/癸酸甘油三酯，聚二甲基硅氧烷，乳木果油，霍霍巴油，角鲨烷，青刺果油，植物甾醇油酸酯，橄榄油神经酰胺，异壬酸异壬酯，生育酚(维生素e)加入油相锅，加热溶解完全。
75.(3)将水相锅、油相锅原料分别抽入乳化锅，均质乳化，乳化后加入原料(聚丙烯酸酯-13、聚异丁烯、聚山梨醇酯-20、水、山梨坦异硬脂酸酯)，搅拌混合均匀。
76.(4)搅拌降温。
77.(5)将原料马齿苋提取物预配液，白及提取物，phl加入乳化锅，搅拌混合均匀。
78.其中步骤(1)条件为搅拌时间为30～60分钟，温度75～85℃，真空度0，优选条件为搅拌时间为50分钟，温度78℃，真空度0。
79.步骤(2)条件为搅拌时间为15～30分钟，温度75～85℃，真空度0，优选条件为搅拌时间为20分钟，温度82℃，真空度0。
80.步骤(3)条件为搅拌时间为10～20分钟，温度75～85℃，真空度-0.01～-0.03mpa，优选条件为搅拌时间为15分钟，温度78℃，真空度-0.03mpa。
81.步骤(4)条件为搅拌时间为30～60分钟，温度35～45℃，真空度-0.02～-0.05mpa，优选条件为搅拌时间为50分钟，温度40℃，真空度-0.03mpa。
82.步骤(5)条件为搅拌时间为10～20分钟，温度35～45℃，真空度-0.03～-0.07mpa，优选条件为搅拌时间为15分钟，温度38℃，真空度-0.05mpa。
83.最后，还提供一种具有舒缓功效的护肤品套装组合物，其包括所述的洁面乳、保湿露和修复霜。
附图说明
84.图1测试样品对lps诱导raw264.7细胞分泌炎症因子的抑制率对比
85.1#测试样：实施例2中制备的保湿露(3.2mg/ml)
86.2#测试样：实施例3中制备的修护霜(0.8mg/ml)
87.3#测试样：某国际品牌舒缓特护保湿霜(0.8mg/ml)
88.4#测试样：某国内品牌舒敏保湿特护霜(0.8mg/ml)
89.图2t8号受试者面部visia图像对比
90.图312名受试者28天面部visia数据对比
91.图412名受试者28天脸颊皮肤角质层含水量对比
92.图512名受试者28天脸颊皮肤经皮水分流失twel对比
93.图6不同浓度白及提取物对hacat角化细胞cck-8细胞活性对比
94.图7解剖镜下对比白及胶阻隔活性炭微粒侵袭皮肤纹理的效果
95.图8受试者使用测试样品后150分钟内皮肤水份/油份含量变化
96.图9白及提取物及修护霜对hacat细胞迁移活性影响
97.图10白及提取物及修护霜对hacat细胞迁移活性影响
98.*表示与空白样品组相比，经t-检验p《0.05
99.#表示与对照样品组相比，经t-检验p《0.05
具体实施方式
100.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
101.实施例1.洁面乳的制备
102.以下实施例中使用的试剂和仪器如下：
103.试剂：
104.edta二钠、椰油酰甘氨酸钠、甘油、聚季铵盐-10、甲基椰油酰基牛磺酸钠、月桂酰羟乙磺酸钠、柠檬酸、羟丙基三甲基氯化铵透明质酸、phl、马齿苋提取物预配液、peg-7甘油椰油酸酯购自云南柏妮兰资源开发有限公司。
105.仪器：
106.配料釜，购自江苏省高邮市仪器厂，型号xy-a
107.电子台秤，购自厦门佰伦斯科技，型号tcs-t01r-150
108.电子天平，购自mettler toledo，型号pl1002e/02
109.本实施例用于说明本发明所述洁面乳的其制备方法。
110.含有edta二钠0.1kg、椰油酰甘氨酸钠12kg、甘油18kg、聚季铵盐-100.1kg、甲基椰油酰基牛磺酸钠2.4kg、月桂酰羟乙磺酸钠3kg、柠檬酸1.1kg、羟丙基三甲基氯化铵透明质酸0.1kg、phl1.2kg、马齿苋提取物预配液0.8kg、peg-7甘油椰油酸酯1.5kg、水59.7kg。
111.制备方法：
112.(1)将原料水、聚季铵盐-10、椰油酰甘氨酸钠、甘油、甲基椰油酰基牛磺酸钠、月桂酰羟乙磺酸钠加入乳化锅，搅拌加热，加入原料柠檬酸、edta二钠，搅拌溶解完全。搅拌时间为50分钟，温度80℃，真空度-0.02。
113.(2)降温：停止加热，持续搅拌降温。搅拌时间55分钟，温度38℃，真空-0.02mpa。
114.(3)将原料羟丙基三甲基氯化铵透明质酸用适量水溶解完全后加入乳化锅，搅拌混合均匀。搅拌时间10分钟，温度37℃，真空-0.02mpa。
115.(4)将原料phl、马齿苋提取物预配液、peg-7甘油椰油酸酯加入乳化锅，搅拌混合均匀。搅拌时间15分钟，温度37℃，真空-0.02mpa。
116.实施例2.保湿露的制备
117.以下实施例中使用的试剂和仪器如下：
118.试剂：
119.甘油、丁二醇、透明质酸钠、甜菜碱、edta二钠、泛醇、甘草酸二钾、β-葡聚糖、乙酰壳糖胺、三七提取物预配液、马齿苋提取物预配液、乳酸杆菌/豆浆发酵产物、四氢甲基嘧啶羧酸、白及提取物、phl％、聚丙烯酸酯交联聚合物-6购自云南柏妮兰资源开发有限公司。
120.仪器：
121.配料釜，购自江苏省高邮市仪器厂，型号xy-a
122.电子台秤，购自厦门佰伦斯科技，型号tcs-t01r-150
123.电子天平，购自mettler toledo，型号pl1002e/02
124.本实施例用于说明本发明所述保湿露的其制备方法。
125.含有甘油3kg、丁二醇2kg、透明质酸钠0.18kg、甜菜碱2kg、edta二钠0.05kg、泛醇0.1kg、甘草酸二钾0.05kg、β-葡聚糖0.03kg、乙酰壳糖胺1kg、三七提取物预配液3kg、马齿苋提取物预配液1kg、乳酸杆菌/豆浆发酵产物1.2kg、四氢甲基嘧啶羧酸0.3kg、白及提取物0.1kg、phl 1.2kg、聚丙烯酸酯交联聚合物-60.5kg、水83.99kg。
126.制备方法：
127.(1)将原料水加入乳化锅，原料甘油、透明质酸钠、β-葡聚糖、聚丙烯酸酯交联聚合物-6加入混合均匀后加入乳化锅，搅拌溶解完全。搅拌时间为60分钟，温度室温，真空度-0.03mpa。
128.(2)将原料海藻糖、乙酰壳糖胺、三七提取物预配液、马齿苋提取物预配液、乳酸杆菌/豆浆发酵产物、四氢甲基嘧啶羧酸、白及提取物、phl加入乳化锅，搅拌溶解完全。搅拌时间为30分钟，温度室温，真空度-0.03mpa。
129.实施例3.修护霜的制备
130.以下实施例中使用的试剂和仪器如下：
131.试剂：
132.甜菜碱、丁二醇、β-葡聚糖、甘草酸二钾、edta二钠、三七提取物预配液、透明质酸钠、鲸蜡硬脂基葡糖苷/山梨坦橄榄油酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、聚二甲基硅氧烷、乳木果油、霍霍巴油、角鲨烷、青刺果油、植物甾醇油酸酯、橄榄油神经酰胺、异壬酸异壬酯、生育酚、马齿苋提取物预配液、白及提取物、phl、聚丙烯酸酯-13、聚异丁烯、聚山梨醇酯-20、水、山梨坦异硬脂酸酯购自云南柏妮兰资源开发有限公司。
133.仪器：
134.真空均质乳化机，购自江苏省高邮市新邮仪器厂，型号xy-a
135.电子台秤，购自厦门佰伦斯科技，型号tcs-t01r-150
136.电子天平，购自mettler toledo，型号pl1002e/02
137.本实施例用于说明本发明所述修护霜的其制备方法。
138.含有甜菜碱2kg、丁二醇4kg、β-葡聚糖0.03kg、甘草酸二钾0.05kg、edta二钠0.05kg、三七提取物预配液3kg、透明质酸钠0.12kg、鲸蜡硬脂基葡糖苷/山梨坦橄榄油酸酯3.5kg辛酸/癸酸甘油三酯3kg、聚二甲基硅氧烷1.5kg、乳木果油3.5kg、霍霍巴油1.2kg、角鲨烷2kg、青刺果油0.8kg、植物甾醇油酸酯0.5kg、橄榄油神经酰胺0.7kg、异壬酸异壬酯3kg、生育酚(维生素e)0.2kg、马齿苋提取物预配液2kg、白及提取物0.5kg、phl 1.2kg、聚丙烯酸酯-13、聚异丁烯、聚山梨醇酯-20、山梨坦异硬脂酸酯1kg、水66.15kg。
139.制备方法：
140.(1)将原料水加入水相锅，将原料丁二醇、β-葡聚糖、透明质酸钠混合均匀后加入水相锅，加入原料三七预配液、甜菜碱、甘草酸二钾、edta二钠，搅拌加热。搅拌时间为50分钟，温度78℃，真空度0。
141.(2)将原料鲸蜡硬脂基葡糖苷、山梨坦橄榄油酸酯，辛酸/癸酸甘油三酯，聚二甲基硅氧烷，乳木果油，霍霍巴油，角鲨烷，青刺果油，植物甾醇油酸酯，橄榄油神经酰胺，异壬酸
异壬酯，生育酚(维生素e)加入油相锅，加热溶解完全。搅拌时间为20分钟，温度82℃，真空度0。
142.(3)将水相锅、油相锅原料分别抽入乳化锅，均质乳化，乳化后加入原料(聚丙烯酸酯-13、聚异丁烯、聚山梨醇酯-20、水、山梨坦异硬脂酸酯)，搅拌混合均匀。搅拌时间为15分钟，温度78℃，真空度-0.03mpa。
143.(4)搅拌降温。搅拌时间为50分钟，温度40℃，真空度-0.03mpa。
144.(5)将原料马齿苋提取物预配液，白及提取物，phl加入乳化锅，搅拌混合均匀。搅拌时间为15分钟，温度38℃，真空度-0.05mpa。
145.实施例4.护肤品组合物的制备
146.将实施例1-3的洁面乳、保湿露和修复霜组合成套装。
147.试验例1.洁面乳、保湿露、修护霜的风险物质限度测定
148.该测试委托广州市康正检测服务有限公司检测，该测试按国家食品药品监督管理总局《化妆品安全技术规范》(2015年版)要求进行检测。
149.试样品：
150.采用实施例1的方法制备的洁面乳；
151.采用实施例2的方法制备的保湿露；
152.采用实施例3的方法制备的修护霜。
153.测试方法：有害物质检测方法及限值要求见表1，理化检测结果见表2
154.表1理化检验各项指标检测方法与限值
155.有害物质检测方法限值(mg/kg)汞电感耦合等离子体质谱法《1砷电感耦合等离子体质谱法《2镉电感耦合等离子体质谱法《5铅电感耦合等离子体质谱法《10二噁烷气相色谱-质谱法《30
156.表2测试样品理化检验结果
[0157][0158]
结论：经检测，样品各项理化检测结果均符合《化妆品安全技术规范》(2015年版)要求。
[0159]
试验例2.洁面乳、保湿露、修护霜的卫生物限度测定
[0160]
该测试委托广州市康正检测服务有限公司检测，该测试按国家食品药品监督管理总局《化妆品安全技术规范》(2015年版)要求进行检测。
[0161]
试样品：
[0162]
采用实施例1的方法制备的洁面乳；
[0163]
采用实施例2的方法制备的保湿露；
[0164]
采用实施例3的方法制备的修护霜。
[0165]
测试方法：微生物检测限值见表3，微生物检测结果见表4。
[0166]
表3微生物检验各项指标及要求
[0167]
[0168]
表4测试样品微生物检验结果
[0169][0170][0171]
结论：经检测，样品各项微生物检测结果均符合《化妆品安全技术规范》(2015年版)要求。
[0172]
试验例3.洁面乳、保湿露、修护霜单次皮肤刺激及多次皮肤激试验
[0173]
该测试委托广州市康正检测服务有限公司检测，该测试按国家食品药品监督管理总局《化妆品安全技术规范》(2015年版)要求进行检测。
[0174]
试样品：
[0175]
采用实施例1的方法制备的洁面乳；
[0176]
采用实施例2的方法制备的保湿露；
[0177]
采用实施例3的方法制备的修护霜。
[0178]
测试方法：
[0179]
试验目的：确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。
[0180]
基本原则：将受试物一次(或多次)涂敷于受试动物的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺激作用。急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价该作用的可逆性或不可逆性。
[0181]
评价结果：按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表5和表6判定皮肤刺激强度。
[0182]
每天每只动物平均积分＝(∑红斑和水中积分/受试动物)/14
[0183]
表5皮肤反应与积分对应表
[0184]
皮肤反应积分红斑和焦痂形成 无红斑0轻微红斑(勉强可见)1明显红斑2中度—重度红斑3严重红斑(紫红色)至轻微焦痂形成4
ꢀꢀ
水肿形成 无水肿0轻微水肿(勉强可见)1轻度水肿(皮肤隆起轮廓清楚)2中度水肿(皮肤隆起约1mm)3重度水肿(皮肤隆起超过1mm，范围扩大)4最高积分8
[0185]
表6积分均值与刺激强度对应表
[0186]
积分均值刺激强度0～＜0.5无刺激性0.5～＜2.0轻刺激性2.0～＜6.0中刺激性6.0～8.0强刺激性
[0187]
试验结果
[0188]
每天涂抹1次，连续涂抹洁面乳及观察14天。试验期间，动物给药侧和对照测皮肤均未见异常结果。见表7。
[0189]
表7洁面乳测试样品对家兔多次皮肤刺激及反应评分表
[0190][0191]
结论：按《化妆品安全技术规范》(2015年版)要求可判定为洁面乳对皮肤无刺激。
[0192]
每天涂抹1次，连续涂抹保湿露及观察14天。试验期间，动物给药侧和对照测皮肤均未见异常结果。见表8。
[0193]
表8保湿露测试样品对家兔多次皮肤刺激及反应评分表
[0194]
[0195][0196]
结论：按《化妆品安全技术规范》(2015年版)要求可判定为保湿露对皮肤无刺激。
[0197]
每天涂抹1次，连续涂抹保湿霜及观察14天。试验期间，动物给药侧和对照测皮肤均未见异常结果。见表9。
[0198]
表9修护霜测试样品对家兔多次皮肤刺激及反应评分表
[0199]
[0200][0201]
结论：按《化妆品安全技术规范》(2015年版)要求可判定为保湿霜对皮肤无刺激。
[0202]
试验例4.预配原料对lps诱导raw264.7细胞分泌tnf-α的抑制作用评价
[0203]
该项评价研究委托昆明医科大学科技成果孵化中心进行，该评价按照团体标准《化妆品舒缓功效测试-体外tnf-α炎症因子含量测定脂多糖诱导巨噬细胞raw264.7测试方法》(t/shrh033-2020)进行研究。
[0204]
研究目的：应用脂多糖(lps)诱导巨噬细胞系炎症细胞(raw264.7)分泌炎症因子tnf-α含量的抗炎功效模型，评价测试样品作为化妆品原料的舒缓功效。
[0205]
原理：lps诱导raw264.7，是研究炎症因子的经典细胞模型。lps与巨噬细胞表面抗原识别受体结合，可诱导巨噬细胞分泌tnf-α等多种炎症因子。tnf-α可激活caspase蛋白酶、jnk和转录因子nf-κb三条信号通路，实现其细胞毒性，抗病毒、免疫调节和细胞凋亡等生物学功能。本方法通过比较阴性对照与测试样品给药后raw264.7细胞分泌tnf-α含量的差异，评价测试样品抑制tnf-α分泌的作用。其中tnf-α含量测定采用酶联免疫方法(elisa)具体原理为：tnf-α与包被在酶标板上的tnf-α抗体特异性结合后，带有底物标记的抗tnf-α抗体结合，底物被催化后，生成有色产物，tnf-α含量与有色产物在450nm波长下测定光密度(od值)计算其tnf-α的含量。
[0206]
研究方法：
[0207]
1.细胞：小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系raw264.7，细胞株来源于中国科学院典型培养物保藏委员会昆明细胞库，选用型号为kcb 200603yj。
[0208]
2.培养条件：dmem培养基，胎牛血清，胰蛋白酶/edta溶液(0.25％胰酶溶液与0.02mol/l edta溶液1:1混合)，磷酸盐缓冲液(pbs)，细胞培养瓶。
[0209]
3.刺激物：细菌脂多糖(lps大肠杆菌来源)
[0210]
4.阳性对照：地塞米松(索莱宝d8040)
[0211]
5.材料、仪器：96孔板；tnf-αelisa检测试剂盒(elisa试剂盒)；cck-8细胞毒检测试剂盒(索莱宝ca1210)；酶标仪；超净工作台；二甲基亚砜(dmso)。
[0212]
6.研究样品：见表10
[0213]
表10评价样品分组信息
[0214]
[0215]
7.操作步骤：按照团体标准《化妆品舒缓功效测试-体外tnf-α炎症因子含量测定脂多糖诱导巨噬细胞raw264.7测试方法》(t/shrh033-2020)。
[0216]
8.tnf-α含量和抑制率计算
[0217]
(1)tnf-α含量
[0218]
将tnf-α的标准品配置成标准溶液，并按比例逐级稀释成一系列已知浓度的溶液，用上述elisa方法测出其在450nm的od值(od450)，经拟合制作标准曲线的回归方程式，将各个测试样品的od450值带人方程式，计算该测试样品中的tnf-α含量结果。各组平行测试3个复孔，计算平均值和标准差(sd)。应用spss统计软件对上述试验所测得各样品组的tnf-α含量与阴性对照组进行t-检验分析，以p＜0.05为差异有统计学意义。
[0219]
(2)tnf-α抑制率
[0220]
抑制率(％)＝(1-t/c)
×
100％，其中t为样品组tnf-α含量平均值，c为阴性对照组tnf-α含量平均值。
[0221]
研究结果：
[0222]
表11不同剂量测试样品对炎症细胞(raw264.7)的cck-8细胞活力对比
[0223][0224]
表11对比了常规型和预配型的马齿苋提取物、三七提取物，以及phl防腐剂对炎症细胞巨噬细胞系炎症细胞(raw264.7)的cck-8细胞活力评价。结果显示以生物来源的1,3-丙二醇为溶剂，并预配phl防腐体系的预配型马齿苋提取物、三七提取物，以及phl本身在0.4～3.2mg/ml浓度范围内细胞活力均能保持在大于90％，且细胞活力不随剂量增加而有明显波动。与之相对比，以常规丙二醇为溶剂的常规型马齿苋提取物和三七提取物在同等试验条件下的细胞活力均小于90％，且随剂量增加而细胞活力逐渐下降。证明常规丙二醇作为溶剂对raw264.7细胞存在一定刺激性，降低了其细胞活力。相比而言，以生物来源的1,3-丙二醇为溶剂，并预配phl防腐体系后，对raw264.7细胞无刺激性，不影响其细胞活力。
[0225]
表12对比对lps诱导raw264.7细胞分泌炎症因子tnf-α的抑制情况
[0226]
[0227]“**”表示经t-检验，测试组tnf-α含量与阴性对照组相比差异具有统计学意义(p《0.01)；
[0228]“#”表示经t-检验，采用生物来源的1,3-丙二醇为溶剂相比用常规丙二醇为溶剂配置的三七提取物对tnf-α的抑制率的差异具有统计学意义(p《0.01)。
[0229]
表12所示，在本试验例条件下，不论常规型或预配型马齿苋提取物或三七提取物，对由lps诱导raw264.7细胞分泌炎症因子tnf-α具有显著的抑制作用。其中，预配型三七提取物对tnf-α的抑制率显著高于用常规型三七提取物。
[0230]
结论：在本试验例条件下，马齿苋提取物和三七提取物均有显著的抑制炎症因子tnf-α释放作用。因为采用生物来源的1,3-丙二醇为溶剂，并预配phl防腐体系的预配型马齿苋提取物、三七提取物细胞毒性更低，可能减少对皮肤造成负担，适合ss人群作为日常皮肤护理品，长期使用。
[0231]
试验例5.保湿露、修护霜对lps诱导raw264.7细胞分泌三种炎症因子的抑制作用评价
[0232]
该项评价研究委托昆明医科大学科技成果孵化中心进行，该评价按照团体标准《舒敏类功效性护肤品安全/功效评价标准》(t/cnmia0013-2020)中“6.3ps诱导raw264.7细胞模型抗炎评价”部分进行研究。
[0233]
研究目的：应用脂多糖(lps)诱导巨噬细胞系炎症细胞(raw264.7)分泌炎症因子tnf-α、il-1β和il-6含量的抗炎功效模型，评价测试化妆品的舒缓功效。
[0234]
原理：lps诱导raw264.7，是研究炎症因子的经典细胞模型。lps与巨噬细胞表面抗原识别受体结合，可诱导巨噬细胞分泌tnf-α、il-1β和il-6等多种炎症因子。
[0235]
tnf-α可激活caspase蛋白酶、jnk和转录因子nf-κb三条信号通路，实现其细胞毒性，抗病毒、免疫调节和细胞凋亡等生物学功能。
[0236]
il-1β是炎症反应的重要介质，当机体处于炎症状态或发生免疫反应时可参与多种细胞活动，包括细胞增殖、分化和凋亡等。il-1β还可以通过激活内皮细胞、引起骨髓中性粒细胞动员(白细胞增多)以及激活各类白细胞等方式，引发急性期反应蛋白如c反应蛋白等增多，从而导致全身炎症。
[0237]
il-6在不同炎症中产生的模式不同。在传染性炎症的早期阶段，不同病原体通过相关分子模式(pamp)的toll样受体(tlr)，刺激单核细胞和巨噬细胞产生il-6。在非感染性炎症(如烧伤或创伤性损伤)，通过损伤相关分子模式(damp)的tlr，刺激损伤细胞产生il-6。这种急性il-6表达通过刺激各种细胞群体在宿主防御中起着核心作用。
[0238]
本方法通过比较阴性对照与测试样品给药后raw264.7细胞分泌tnf-α、il-1β和il-6含量的差异，评价测试样品抑制tnf-α、il-1β和il-6分泌的作用。含量测定采用酶联免疫方法(elisa)，具体原理为：炎症因子(tnf-α、il-1β或il-6)与包被在酶标板上的该炎症因子抗体特异性结合后，带有底物标记的抗该炎症因子抗体结合，底物被催化后，生成有色产物，炎症因子含量与有色产物在450nm波长下测定光密度(od值)计算其该炎症因子的含量。
[0239]
研究方法：
[0240]
1.细胞：小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系raw264.7，细胞株来源于中国科学院典型培养物保藏委员会昆明细胞库，选用型号为kcb 200603yj。
[0241]
2.培养条件：dmem培养基，胎牛血清，胰蛋白酶/edta溶液(0.25％胰酶溶液与0.02mol/l edta溶液1:1混合)，磷酸盐缓冲液(pbs)，细胞培养瓶。
[0242]
3.刺激物：细菌脂多糖(lps大肠杆菌来源)
[0243]
4.阳性对照：地塞米松(索莱宝d8040)
[0244]
5.材料、仪器：96孔板；tnf-αelisa检测试剂盒、il-1βelisa检测试剂盒、il-6elisa检测试剂盒(elisa试剂盒)；cck-8细胞毒检测试剂盒(索莱宝ca1210)；酶标仪；超净工作台；二甲基亚砜(dmso)。
[0245]
6.测试分组：见表13
[0246]
表13评价样品分组信息
[0247][0248]
7.操作步骤：按照团体标准。《舒敏类功效性护肤品安全/功效评价标准》(t/cnmia0013-2020)中“6.3ps诱导raw264.7细胞模型抗炎评价”部分。
[0249]
8.tnf-α、il-1β和il-6含量和抑制率计算
[0250]
(1)含量
[0251]
分别将tnf-α、il-1β和il-6的标准品配置成标准溶液，并按比例逐级稀释成一系列已知浓度的溶液，用上述elisa方法测出其在450nm的od值(od450)，经拟合制作标准曲线的回归方程式，将各个测试样品的od450值带人方程式，计算该测试样品中的tnf-α、il-1β和il-6含量结果。各组平行测试3个复孔，计算平均值和标准差(sd)。应用spss统计软件对上述试验所测得各样品组的tnf-α、il-1β和il-6含量与阴性对照组进行t-检验分析，以p＜0.05为差异有统计学意义。
[0252]
(2)tnf-α、il-1β和il-6抑制率
[0253]
抑制率(％)＝(1-t/c)
×
100％，其中t为各样品组tnf-α、il-1β或il-6含量平均值，c为阴性对照组tnf-α、il-1β或il-6含量平均值。
[0254]
研究结果：
[0255]
本研究采用lps诱导raw264.7细胞分泌三种炎症因子的细胞模型，将实施例2制备的保湿露、实施例3制备的修护霜与宣称舒缓功效的国内外知名化妆品的抗炎活性进行对比。表14所示，除3#测试样对il-1β无抑制作用之外，1#～4#测试样对lps诱导raw264.7细胞分泌tnf-α、il-1β和il-6都具有抑制作用。图1对比了各个测试对三种炎症因子的抑制率，3.2mg/ml的测试样1#(实施例2中制备的保湿露)对tnf-α、il-1β和il-6的抑制率分别为47.22％、53.80％和54.35％，测试产品具有舒缓抗炎功效。0.8mg/ml的测试样2#(实施例3中制备的修护霜)对tnf-α、il-1β和il-6都具有抑制作用，抑制率分别为71.45％、72.27％和91.23％。
[0256]
表14测试样品对lps诱导raw264.7细胞分泌炎症因子的抑制作用对比
[0257][0258]
结论：在本试验的条下，测试样1#(实施例2中制备的保湿露，3.2mg/ml)和测试样2#(实施例3中制备的修护霜，0.8mg/ml)对由lps诱导raw264.7细胞分泌tnf-α、il-1β和il-6都具有抑制作用，说明该测试产品具有舒缓抗炎功效，符合舒敏类功效性护肤品的功效评价要求。
[0259]
参见图1。
[0260]
试验例6.联合使用洁面乳、保湿露、修护霜后14天前后受试者皮肤状态评估
[0261]
乳酸刺痛实验
[0262]
为了验证使用本发明产品的有效性，选取2022年4月期间，选取5名年龄25-55岁亚洲成年受试志愿者，通过皮受试者使用本发明产品前后进行乳酸刺痛试验。选择受试者鼻唇沟部位进行试验，将10％乳酸溶液50μl滴在直径为0.8cm的单层滤纸上，置于受试者鼻唇沟部位,分别在2.5和5分钟时询问受试者刺痛感并观察皮肤反应，具体评分指标如下：
[0263]
表15乳酸刺痛评判标准
[0264][0265]
评价结果具体如下：
[0266]
表16乳酸刺痛评判实验结果
[0267]
受试者编号2.5分钟5分钟乳酸刺痛分数10002213322442135224
[0268]
从使用者的自我评估的结果可以看出，选取的80％受试者皆为敏感性皮肤。
[0269]
visia实验
[0270]
为了验证使用本发明产品的有效性，选取2022年4月期间，选取5名年龄25-55岁亚洲成年受试志愿者，使用本发明所述的洁面乳清洁面部皮肤，随后在面部涂抹本发明所述的保湿露进行护理，之后再在面部涂抹本发明所述的修护霜进行滋润营养，每天早晚各一
次，持续14天。在使用后，使用智能皮肤分析仪对面部皮肤的斑点、皱纹、纹理、毛孔、紫外线色斑、棕色斑、红色区和紫质等指标与受试者同龄、同性别、同皮肤类型的其他人相比较进行皮肤特征评分。
[0271]
结果如表17。
[0272]
表17 visia面部评估结果
[0273]
项目受试者1受试者2受试者3受试者4受试者5斑点90％75％66％34％66％皱纹29％50％89％70％34％纹理98％96％98％97％97％毛孔54％20％10％89％37％紫外线色斑97％81％69％78％90％棕色斑96％37％63％49％40％红色区75％40％72％62％21％紫质63％98％91％99％95％
[0274]
备注：百分位数分值描述与受试者同龄、同性别、同皮肤类型的其他人相比较进行皮肤特征评分(分值越高越好)。
[0275]
从使用者面部皮肤的斑点、皱纹、纹理、毛孔、紫外线色斑、棕色斑、红色区和紫质等指标的变化结果可以看出，该本发明产品对皮肤斑点、纹理、紫外线色斑、棕色斑、紫质等指标有明显改善。
[0276]
试验例7.联合使用本发明产品组合人体皮肤安全性评估
[0277]
一、目的
[0278]
通过人体试用本产品组合28天，期间受试者自我评估和皮肤科医生观察，评价本产品组合对人体皮肤的安全性。
[0279]
二、测试方法
[0280]
1.测试样品
[0281]
采用实施例1的方法制备的洁面乳；实施例2的方法制备的保湿露；实施例3的方法制备的修护霜。
[0282]
2.受试者
[0283]
选择成年受试者12人(男性6人，女性6人)，符合以下入选标准：
[0284]
·
年龄18～35岁健康成年人；
[0285]
·
无严重系统疾病、无免疫性疾病，无皮肤疾病，非过敏性性皮肤；
[0286]
·
受试部位没有接受过皮肤治疗、美容及其他可能影响测试结果的治疗；
[0287]
·
近一个月及在本测试期间，受试者未使用激素类药物或免疫抑制药物；
[0288]
·
近一个月及在本测试期间，受试部位为参加过其他临床测试；
[0289]
·
同意在测试期间不使用除测试产品之外的护肤品；
[0290]
·
女性受试者未处于妊娠或哺乳期间。
[0291]
3.使用方法
[0292]
受试者按下述步骤使用按本发明制备的洁面乳、保湿露和修护霜进行个人皮肤护理，每天早晚各一次，连续使用28天。在此期间，受试者不再使用其他皮肤清洁和护理产品。
第一步使用洁面乳和清水清洁面部，第二步将适量保湿露均匀涂抹于面部，可轻柔按摩至吸收；第三步将适量修护霜均匀涂抹于面部，可轻柔按摩至吸收。
[0293]
4.安全性评估
[0294]
受试者根据使用本产品组合28天内的主观感受，填写使用日志，记录期间皮肤不良反应。
[0295]
同时，请皮肤科医生分别在第7、14、28天观察评估受试者皮肤，评价释放引起皮肤干燥、脱屑、发红、丘疹等不良反应及其潜在的可能性。在受试者回访时，仔细询问、检查并记录受试者在使用本产品组合期间所发生的任何不良事件，包括不良事件的发现、发生时间、处理措施及转归，并对不良事件与所用产品组合的关系做出判断。
[0296]
皮肤不良反应分级按照《化妆品安全技术规范2015》中固定的人体试用试验皮肤反应分级标准判断，如下表：
[0297]
表18人体试用试验皮肤反应分析及标准
[0298][0299]
不良事件严重程度按以下三级标准判断：
[0300]
轻度：受试者可以忍受，不需要特别处理，不影响受试者的正常生活；
[0301]
中度：受试者难以忍受，需要停用或做特殊处理，影响受试者的正常生活；
[0302]
重度：妨碍受试者正常生活，需要立即停用或做紧急处理。
[0303]
不良事件与测试样品关系的判断标准：
[0304]
肯定有关：使用测试样品及反应发生时间顺序合理，停止使用测试样品反应停止，或迅速减轻或好转，再次使用测试样品反应再现，同时有文献资料佐证，并已排除其他混杂因素影响；
[0305]
很可能有关：使用测试样品及反应发生时间顺序合理，停止使用测试样品反应停止，或迅速减轻或好转，基本可以排出其他因素影响；
[0306]
可能有关：使用测试样品及反应发生时间关系密切，但引起不良反应的样品不止一种，或有其他因素不能除外；
[0307]
可能无关：使用测试样品及不良反应发生，时间的关系不密切，反应发现与已知的化妆品不良反应不吻合；
[0308]
待评价：资料不全，等待补充资料后再评价，或因果关系难以定论，缺乏文献资料佐证；
[0309]
无法评价：缺项太多，因果关系难以定论，资料无法补充。
[0310]
三、测试结果
[0311]
表19受试者使用本产品组合28天内不良反应评价情况
[0312][0313]
四、结论
[0314]
连续28天使用本产品组合做皮肤清洁和护理，12名受试者均未感到不适，也未观察到皮肤不良反应。
[0315]
试验例8.联合使用本发明产品组合受试者皮肤对乳酸刺激的耐受评估
[0316]
一、目的
[0317]
评估12名受试者使用本发明产品组合14天前后，皮肤对乳酸刺激耐受性的差异。
[0318]
二、测试方法
[0319]
1.测试样品
[0320]
采用实施例1的方法制备的洁面乳；实施例2的方法制备的保湿露；实施例3的方法制备的修护霜。
[0321]
2.受试者
[0322]
选择成年受试者12人(男性6人，女性6人)，符合以下入选标准：
[0323]
·
年龄18～35岁健康成年人；
[0324]
·
无严重系统疾病、无免疫性疾病，无皮肤疾病，非过敏性性皮肤；
[0325]
·
受试部位没有接受过皮肤治疗、美容及其他可能影响测试结果的治疗；
[0326]
·
近一个月及在本测试期间，受试者未使用激素类药物或免疫抑制药物；
[0327]
·
近一个月及在本测试期间，受试部位为参加过其他临床测试；
[0328]
·
同意在测试期间不使用除测试产品之外的护肤品；
[0329]
·
女性受试者未处于妊娠或哺乳期间。
[0330]
3.使用方法
[0331]
将受试者分为两组，每组6人(男性3人，女性3人)。一组为治疗组，受试者按下述步骤使用按本发明制备的洁面乳、保湿露和修护霜进行个人皮肤护理，每天早晚各一次，连续使用14天。在此期间，受试者不再使用其他皮肤清洁和护理产品。第一步使用洁面乳和清水清洁面部，第二步将适量保湿露均匀涂抹于面部，可轻柔按摩至吸收；第三步将适量修护霜
均匀涂抹于面部，可轻柔按摩至吸收。
[0332]
4.乳酸刺痛实验
[0333]
对治疗组和对照组受试者在14天前后分别做乳酸刺痛测试，通过自身对照评价对比，受试者对乳酸刺激反应的变化情况。测试时，受试者需要先用清水清洁面部，将载有10％乳酸溶液50μl滴在直径为0.8cm的单层滤纸贴于受试者一侧鼻唇沟部位，分别在3和5分钟时询问受试者刺痛感并观察皮肤反应，并记录受试者皮肤的主观感受评分。无刺痛感记0份，轻度刺痛感记1分，中度刺痛感记2分，重度刺痛感记3分；刺痛感累计≥3分者为乳酸刺痛者。
[0334]
三、测试结果
[0335]
表20治疗组与对照组受试者28天前后乳酸刺痛评分对比
[0336][0337]
在治疗组的6例受试者中，有5人(占比83.3％)对乳酸刺痛反应评分降低。对照组的6例受试者对乳酸刺痛反应均未显著降低，反而有3人评分增加。
[0338]
表21治疗组与对照组28天乳酸刺痛改善对比[n,(％)]
[0339][0340]
因测试样本数量有限，且屈光度变化值不符合正态分布，所以对两组受试者的乳酸刺痛评分变化值进行独立样本的秩和检验(mann-whitney u test)，结果p《0.05，说明使用按本发明制备的护肤品组合的治疗组与使用自有护肤品(不含三七提取物、马齿苋提取物、白及提取物活性成分)的对照组14天乳酸刺痛评分变化的差异具有统计学意义。
[0341]
四、结论
[0342]
连续28天使用本产品组合做皮肤清洁和护理，能有效改善受试者皮肤对乳酸刺痛的反应。
[0343]
试验例9.联合使用本发明产品组合受试者面部皮肤评价
[0344]
一、目的
[0345]
通过测定受试者进行面部皮肤角质层含水量、皮肤经表皮水分流失tewl值，以及采集面部皮肤visia成像，评估受试者使用本发明产品组合初始和28天面部皮肤生理状态的改善情况。
[0346]
二、测试方法
[0347]
1.测试样品
[0348]
采用实施例1的方法制备的洁面乳；实施例2的方法制备的保湿露；实施例3的方法制备的修护霜。
[0349]
2.受试者
[0350]
选择成年受试者人(男性6人，女性6人)，符合以下入选标准：
[0351]
·
年龄18～35岁健康成年人；
[0352]
●
无严重系统疾病、无免疫性疾病，无皮肤疾病，非过敏性性皮肤；
[0353]
·
受试部位没有接受过皮肤治疗、美容及其他可能影响测试结果的治疗；
[0354]
·
近一个月及在本测试期间，受试者未使用激素类药物或免疫抑制药物；
[0355]
·
近一个月及在本测试期间，受试部位为参加过其他临床测试；
[0356]
●
同意在测试期间不使用除测试产品之外的护肤品；
[0357]
●
女性受试者未处于妊娠或哺乳期间
[0358]
●
一侧面夹区域皮肤角质层含水量《60c.u.；
[0359]
·
一侧面夹区域皮肤失水率》12g/m2·h[0360]
3.使用方法
[0361]
受试者按下述步骤使用按本发明制备的洁面乳、保湿露和修护霜进行个人皮肤护理，每天早晚各一次，连续使用28天。在此期间，受试者不再使用其他皮肤清洁和护理产品。第一步使用洁面乳和清水清洁面部，第二步将适量保湿露均匀涂抹于面部，可轻柔按摩至吸收；第三步将适量修护霜均匀涂抹于面部，可轻柔按摩至吸收。
[0362]
4.面部图像分析(visia)
[0363]
在使用本产品组合第0天和第28天，受试者在用清水面部以后，我试着在温度21
±
1℃，相对湿度50
±
10％的环境中静息30分钟，请皮肤科医生用visia皮肤图像分析仪采集拍摄面部图像，分析对比面部纹理、红色区分值。
[0364]
5.面部皮肤角质层含水量
[0365]
受试者在完成上一步的面部visia图像采集之后，使用皮肤水分测试仪(courage khazaka，corneometer cm825)对受试者左侧脸颊进行角质层含水量测试。
[0366]
6.面部皮肤经皮水分流失(tewl)
[0367]
受试者在完成上一步的面部皮肤角质层含水量测试之后，使用皮肤水分流失测试探头(courage khazaka，tewameter tm300)对受试者右侧脸颊进行角质层含水量测试。
[0368]
7.统计分析
[0369]
所得数据采用spss进行处理分析。对各个受试者使用本产品组合28天前后收集的各项数据进行shapiro-wilk正态分布检验和方差齐性检验，有统计学意义后再进行配对样本t-检验，检验水准取a＝0.05，p《0.05表明差异具有显著性。
[0370]
三、测试结果
[0371]
1.visia皮肤成像
[0372]
参见图2，图3
[0373]
表22 12名受试者28天面部visia数据记录
[0374][0375][0376]
经皮肤科医生评估，受试者使用本产品组合28天前后面部皮肤visia成像中纹理和和红丝区域均明显改善。
[0377]
2.面部皮肤角质层含水量
[0378]
表23 12名受试者28天脸颊皮肤角质层含水量数据记录
[0379][0380]
参见图4。
[0381]
数据分析显示，使用本产品组合28天前后对比，受试者脸颊皮肤角质层含水量从34.7％
±
12.0％提高至47.5％
±
11.4％，变化率37.0％。经配对样本t-检验，该差异具有统计学意义(p＜0.05)。
[0382]
3.面部皮肤经皮水分流失(tewl)
[0383]
表24 12名受试者28天脸颊皮肤经皮水分流失tewl数据记录
[0384][0385][0386]
参见图5。
[0387]
数据分析显示，使用本产品组合28天前后对比，受试者脸颊皮肤经皮水分流失twel从19.4
±
5.0提高至16.1
±
5.6，变化率-16.6％。经配对样本t-检验，该差异具有统计学意义(p＜0.05)。
[0388]
四、结论
[0389]
持续使用本产品组合28天对受试者面部皮肤多项生理指标均有改善，能有效舒缓皮肤敏感，增加角质层含水量，改善皮肤屏障功能，对皮肤具备一定的舒缓、保湿和修护功效。
[0390]
试验例10白及提取物的细胞毒性评价
[0391]
一、目的
[0392]
采用cck-8方法评价不同浓度的白及提取物对hacat角化细胞的细胞毒性。
[0393]
二、测试方法
[0394]
1.细胞：hacat角化细胞，来源于北纳创联生物科技有限公司。
[0395]
2.培养条件：dmem培养基，胎牛血清，胰蛋白酶/edta溶液(0.25％胰酶溶液与0.02mol/l edta溶液1:1混合)，磷酸盐缓冲液(pbs)，细胞培养瓶。
[0396]
3.cck-8测定：接种细胞到96孔板中，每孔200μl细胞悬液(每孔8万个细胞)。在培养箱中培养24h，向培养板中加入不同浓度待测物质，孵育24h，吸取上清液丢弃，每孔加入100μl培养基和10μlcck-8溶液混合物，孵育2h，用酶标仪测450nm处吸光度值。
[0397]
三、测试结果
[0398]
参见图6。
[0399]
四、结论
[0400]
根据cck-8结果，认为白及提取物对hacat角化细胞，在≤5％浓度范围内细胞活力均》90％，未表现出明显的细胞毒性。
[0401]
试验例11白及提取物的成膜性评价
[0402]
一、目的
[0403]
评价白及提取物在皮肤表面上的成膜性。
[0404]
二、测试方法
[0405]
选用已剃除表面毛发的新鲜、纹理均匀的猪皮，分切成尺寸为4
×
3cm2的片状，并分为三组。三组猪皮分别用120μl的测试样品处理(a组：100％白及胶；b组：20％白及胶；c组：去离子水)。在室温条件下(22～26℃，相对湿度40～60％)下放置1.5小时后，在解剖镜下观察并拍照。随后，用活性炭粉(粒径约75μm)处理猪皮表面，经水冲洗(不使用任何清洗剂)前后再次在解剖镜下观察拍照对比。
[0406]
三、测试结果
[0407]
参见图7。
[0408]
四、结论
[0409]
从解剖镜下图片看看出，白及胶涂抹吸收后在形成一层保护膜，可有效阻隔活性炭粉微粒向皮肤纹理的侵袭，100％白及胶组的阻隔效果优于20％白及胶组。
[0410]
试验例12白及提取物在保湿露中的保湿功效评价
[0411]
一、目的
[0412]
评价白及提取物在按本发明制备的保湿露和修护霜中的保湿功效。
[0413]
二、测试方法
[0414]
1.分组
[0415][0416]
2.操作
[0417]
选择3名健康受试者使用按本发明制备的洁面乳清洁面部，使用皮肤水分测试仪(corneometer cm825)记录受试者面部皮肤角质层的水份和油份含量初始值。让受试者在左侧面部皮肤涂抹适量按本发明制备的保湿露a(或保湿露b)，并轻柔按摩至吸收；同时，用同样的用量和涂抹方法在右侧面部皮肤涂抹对照样品。同样的方法，使用皮肤水分测试仪在第0、3、5、10、30、60、90、120和150分钟，测试受试者左右两侧脸颊皮肤的水份和油份含量，观察变化情况。
[0418]
三、测试结果
[0419]
参见图8。
[0420]
实验测定发现，受试者在使用含有白及提取物2％的保湿露a和和含白及提取物1％的保湿露b后，皮肤角质层水份含量升高，油份含量相对降低，其中保湿露a的效果可持续150分钟，保湿露b的效果可持续约90分钟。与此相比，使不含白及提取的对照样品的受试者皮肤在45分钟皮肤即恢复初始皮肤角质层水份/油份含量趋于初始值。
[0421]
四、结论
[0422]
测试样品中的白及提取物能有效延长所制备的保湿露对皮肤保湿作用的持续时间。
[0423]
试验例13白及提取物在修护霜中的修护功效评价
[0424]
一、目的
[0425]
通过划痕实验评价白及提取物和按本发明制备的修护霜对hacat的细胞迁移的影响。
[0426]
二、测试方法
[0427]
1.细胞：hacat角化细胞，来自北纳创联生物科技有限公司。
[0428]
2.分组：
[0429][0430]
3.操作
[0431]
将对数期生长的hacat细胞消化重悬后，接种在6孔板中，将6孔板放于37℃，5％co2培养箱内，培养至孔内铺满细胞。在每个试验孔沿同一方向，使用无菌枪头垂直培养孔自上而下划一条线，在划线过程中掌握好力度与角度，尽量使线为一条直线，宽窄一致，划线一次完成，避免反复划线。吸弃培养基，用pbs缓冲液吹洗2遍，清洗掉划线过程中刮下的
细胞碎片，细胞团块。吸弃pbs后，设置四个组别，每组设置三个复孔，分别加白及提取物、修护霜、对照样品和空白样品的新鲜无血清dmem培养基，使细胞在梯度浓度的药物刺激下，观察细胞迁移能力变化。用倒置显微镜记录为0小时和24小时同一视野下的划痕变情况。计算出划痕修复率，计算公式：划痕修复率＝(0h划痕宽度-24h划痕宽度)/0h划痕宽度。
[0432]
三、测试结果
[0433]
图9，图10所示，1％白及提取物、修护霜(含1％白及提取物)、不含白及提取物对照样品均能明显促进hacat细胞在划痕测试中的迁移，1％白及提取物、修护霜(含1％白及提取物)的划痕修复率均显著高于不含白及提取物的对照样品(经t-检验p《0.05)。
[0434]
四、结论
[0435]
1％白及提取物及修护霜(含白及提取物1％)具能有效促进hacat细胞在划痕测试中的迁移，具有促进皮肤损伤修护的功效。
[0436]
综上，以上所述的套装组合物、洁面乳、保湿露或修护霜，均可以用于对敏感性皮肤的护理，所述的护理包括清洁、保湿、舒缓和修护。