一种水罗兰快速繁殖的方法

1.本发明涉及农业种植技术领域，具体涉及一种水罗兰快速繁殖的方法。


背景技术：

2.水罗兰具有羽状叶，俗称龙须草、扁担草，因为叶子较大，又被称为大叶菊龙须草，是水生草本植物。属爵床科，其羽状叶短柄，对生，长12公分；主要分布在印度、马来西亚、缅甸、泰国。
3.水罗兰不管是水上草或水中草，在不同的季节，都会有不同变化。水上草的叶片可以是卵形对生叶或浅裂叶，植株被绒毛，叶腋能长出唇形的淡紫色花，叶色青绿。20世纪80年代随观赏性水草扩散而引入中国，在各地水族馆均有栽培，生长于溪流、河沟、池塘等水域，水陆两生。
4.水罗兰是一种具有高经济价值的水族观赏植物，深受广大消费者喜爱。近年来，水罗兰具有个体大小合适、表型特征明显、容易进行遗传转化和基因组小等优势，逐渐成为研究植物表型可塑性的一种模式植物。目前，水罗兰繁殖主要依赖组织培养和扦插等技术。然而，植物组织培养需要严格的无菌环境，不仅需要进行愈伤组织诱导、丛生芽诱导、继代培养等复杂的培养过程，周期较长(约2-3个月)；而且生成的植株仍需要进行多次炼苗才能够用于生产应用；而利用水罗兰进行扦插繁殖时，主要采用的是成熟植株的茎段，产量较低，出苗品质也不均匀。


技术实现要素：

5.本发明提供的一种水罗兰快速繁殖的方法，旨在解决上述背景技术中存在的问题。
6.为了实现上述技术目的，本发明主要采用如下技术方案：
7.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
8.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；
9.s2将外植体置于培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，盖上保鲜膜，进行培养，所述超纯水中含有或不含有生长素类似物naa；
10.s3统计水罗兰不定根和不定芽的数目，计算诱导率。
11.在一些实施例中，所述培养基质选自河沙、珍珠岩或泥炭土中的一种或几种。
12.具体的，所述培养基质的厚度为0.8-1.2cm，所述河沙直径为0.5-1mm，所述珍珠岩直径为3-5mm。
13.在一些优选的实施例中，所述培养基质为河沙。
14.在一些实施例中，所述生长素类似物naa的浓度为0-100μm。
15.在一些优选的实施例中，所述生长素类似物naa的浓度为0.1-0.5μm。
16.在一些实施例中，所述超纯水的加入量超过所述培养基质表面高度0.3-0.6cm。
17.在一些实施例中，所述培养温度为18-30℃，培养湿度为45-75％rh，光照强度为
50-70μmol m-2
s-1
。
18.在一些优选的实施例中，所述培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
。
19.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
20.本发明针对水罗兰组织培养周期长、成本高和出苗率低的问题，首次开发并优化了一套利用水罗兰叶片进行快速繁殖水族观赏植物水罗兰的方法，所用的培养基质成分简单(河沙或珍珠岩)，其中的生长素类似物(naa)价格低廉，操作简便，能够实现水罗兰的快速繁殖；
21.以叶片为外植体，利用不同培养基质，搭配不同浓度的生长素类似物来诱导水罗兰快速繁殖的方法，具有简便、快捷和高效稳定等优点，大大提高了水罗兰的育苗生产能力，缩短了成苗时间，降低了生产成本，具有广阔的应用前景；
22.本发明在不经过组织培养的条件下即可迅速获得大量长势均一的幼苗，培养周期短、成本低，有助于提高水罗兰的快速生产及应用。
附图说明
23.图1为本发明实施例提供的不同处理条件和时间下水罗兰的生根率；图中a、b、c分别代表以河沙、珍珠岩、泥炭土作为培养基质；
24.图2为本发明实施例提供的不同处理条件和时间下水罗兰的生芽率；图中a、b、c分别代表以河沙、珍珠岩、泥炭土作为培养基质；
25.图3为本发明实施例提供的河沙 0.5μm naa处理下水罗兰的长势图(15天)。
具体实施方式
26.以下参考说明书附图介绍本发明的多个优选实施例，使其技术内容更加清楚和便于理解。具体实施方式中使用的材料，如无特殊说明，均可直接购买获得。本发明可以通过许多不同形式的实施例来得以体现，本发明的保护范围并非仅限于文中提到的实施例。
27.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
28.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；一般可以直接剪下水罗兰的成熟叶片并将其洗净即可作为外植体；
29.s2将外植体置于培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，盖上保鲜膜，进行培养，所述超纯水中含有或不含有生长素类似物naa；
30.s3统计水罗兰不定根和不定芽的数目，计算诱导率。
31.在一些实施例中，所述培养基质选自河沙、珍珠岩或泥炭土中的一种或几种。
32.具体的，所述培养基质的厚度为0.8-1.2cm，所述河沙直径为0.5-1mm，所述珍珠岩直径为3-5mm。
33.可选的，培养基质的厚度为1cm。
34.在一些优选的实施例中，所述培养基质为河沙。
35.在一些实施例中，所述生长素类似物naa的浓度为0-100μm。
36.在一些优选的实施例中，所述生长素类似物naa的浓度为0.1-0.5μm。
37.在一些实施例中，所述超纯水的加入量超过所述培养基质表面高度0.3-0.6cm；
38.可选的，超纯水的加入量以刚好没过培养基质表面为宜。
39.在一些实施例中，所述培养温度为18-30℃，培养湿度为45-75％rh，光照强度为50-70μmol m-2
s-1
。
40.在一些优选的实施例中，所述培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
。
41.下面结合具体实施例来说明本发明的繁殖方法。
42.实施例1
43.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
44.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的河沙作为培养基质；其中，河沙的直径约0.5-1mm；
45.s2将外植体置于河沙培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；然后盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中不含有生长素类似物naa；
46.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中a1所示。
47.实施例2
48.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
49.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的河沙作为培养基质；其中，河沙的直径约0.5-1mm；
50.s2将外植体置于河沙培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有0.1μm生长素类似物naa；
51.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中a2所示。
52.实施例3
53.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
54.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的河沙作为培养基质；其中，河沙的直径约0.5-1mm；
55.s2将外植体置于河沙培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有0.5μm生长素类似物naa；
56.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中a3所示。
57.实施例4
58.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
59.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中
置入1cm厚的河沙作为培养基质；其中，河沙的直径约0.5-1mm；
60.s2将外植体置于河沙培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有1μm生长素类似物naa；
61.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中a4所示。
62.实施例5
63.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
64.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的河沙作为培养基质；其中，河沙的直径约0.5-1mm；
65.s2将外植体置于河沙培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有10μm生长素类似物naa；
66.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中a5所示。
67.实施例6
68.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
69.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的河沙作为培养基质；其中，河沙的直径约0.5-1mm；
70.s2将外植体置于河沙培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有100μm生长素类似物naa；
71.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中a6所示。
72.实施例7
73.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
74.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的珍珠岩作为培养基质；其中，珍珠岩的直径约3-5mm；
75.s2将外植体置于珍珠岩培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中不含有生长素类似物naa；
76.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中b1所示。
77.实施例8
78.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
79.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的珍珠岩作为培养基质；其中，珍珠岩的直径约3-5mm；
80.s2将外植体置于珍珠岩培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有0.1μm生长素类似物naa；
81.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中b2所示。
82.实施例9
83.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
84.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的珍珠岩作为培养基质；其中，珍珠岩的直径约3-5mm；
85.s2将外植体置于珍珠岩培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有0.5μm生长素类似物naa；
86.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中b3所示。
87.实施例10
88.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
89.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的珍珠岩作为培养基质；其中，珍珠岩的直径约3-5mm；
90.s2将外植体置于珍珠岩培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有1μm生长素类似物naa；
91.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中b4所示。
92.实施例11
93.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
94.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的珍珠岩作为培养基质；其中，珍珠岩的直径约3-5mm；
95.s2将外植体置于珍珠岩培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有10μm生长素类似物naa；
96.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中b5所示。
97.实施例12
98.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
99.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的珍珠岩作为培养基质；其中，珍珠岩的直径约3-5mm；
100.s2将外植体置于珍珠岩培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有100μm生长素类似物naa；
101.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中b6所示。
102.实施例13
103.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
104.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的泥炭土作为培养基质；
105.s2将外植体置于泥炭土培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中不含有生长素类似物naa；
106.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中c1所示。
107.实施例14
108.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
109.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的泥炭土作为培养基质；
110.s2将外植体置于泥炭土培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有0.1μm生长素类似物naa；
111.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中c2所示。
112.实施例15
113.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
114.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的泥炭土作为培养基质；
115.s2将外植体置于泥炭土培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有0.5μm生长素类似物naa；
116.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中c3所示。
117.实施例16
118.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
119.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的泥炭土作为培养基质；
120.s2将外植体置于泥炭土培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有1μm生长素类似物naa；
121.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中c4所示。
122.实施例17
123.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
124.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的泥炭土作为培养基质；
125.s2将外植体置于泥炭土培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有10μm生长素类似物naa；
126.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中c5所示。
127.实施例18
128.一种水罗兰快速繁殖的方法，包括如下步骤：
129.s1选取表面干净、成熟的水罗兰叶片作为外植体；在内径为15
×
30cm的塑料盆中置入1cm厚的泥炭土作为培养基质；
130.s2将外植体置于泥炭土培养基质中，加入能覆盖所述培养基质表面的超纯水，超纯水的加入量可以超过培养基质表面高度0.3-0.6cm；以刚好没过培养基质表面为宜；盖上保鲜膜，进行培养，培养温度为23℃，培养湿度为60％rh，光照强度为60μmol m-2
s-1
，所述超纯水中含有100μm生长素类似物naa；
131.s3每3天统计一次不定根和不定芽的数目，计算其诱导率，结果如图1、图2中c6所示。
132.对采用本发明实施例1-18的方法繁殖的水罗兰的生根率及生牙率进行计算，其中，生根率采用如下公式计算：
133.x％＝生根数/培养数
(同一培养条件下)
×
100％
134.生芽率采用如下公式计算：
135.x％＝生芽数/培养数
(同一培养条件下)
×
100％
136.对计算后的结果进行统计，其中水罗兰的生根率如图1所示，水罗兰的生芽率如图2所示。图中a、b、c分别代表以河沙、珍珠岩、泥炭土作为培养基质。
137.结果表明，河沙作为基质比珍珠岩和泥炭土的诱导率高；生长素类似物naa浓度在0.1-0.5μm范围内能够显著提高水罗兰不定根和不定芽的诱导率，过高则会抑制其生长，降
低诱导率。
138.其中，采用河沙作为基质，生长素类似物naa浓度为0.5μm时，水罗兰15天的长势图如图3所示，表明本发明即使在不经过组织培养的条件下，仍能迅速获得大量长势均一的幼苗，培养周期短、成本低，有助于提高水罗兰的快速生产及应用。
139.以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。