一种乙肝病毒颗粒裂解液及其制备与应用

1.本发明涉及医学检测技术领域，特别是涉及一种乙肝病毒颗粒裂解液及其制备与应用。


背景技术：

2.现在临床上主要通过检测乙肝两对半和乙型肝炎病毒dna(hbv dna)进行慢性乙肝患者抗病毒疗效评价和治疗终点判断，但由于核苷类似物治疗、乙肝病毒基因整合、乙肝e抗原g1896a的表达终止突变，这些血清学标志物不能直接作为治疗终点的判断依据。
3.在现有文献报道中，包括了乙肝核心抗原(hbcag)，乙肝e抗原(hbeag)和p22cr的乙肝核心相关抗原(hbcrag)对慢性乙肝患者临床上治疗终点做出正确判断具有重要价值，然而hbcag是hbv核心颗粒的组成单元，成熟状态下被乙肝病毒s蛋白组成的外膜所所包裹。要直接检测到hbcag有一定的困难，必须实现将病毒外膜除去，并使核心颗粒裂解为单体，才能实现对hbcag的检测。目前在常温条件下，没有专门用于暴露和裂解核心颗粒的试剂，实验室水平的研究中一般采用70℃加热15至30分钟来破坏hbv的核心颗粒。但是这种处理方式并不适用于临床血清样本(加热后会发生凝固)。因此，一种合适的乙肝病毒颗粒裂解液就显得尤为的重要。


技术实现要素：

4.鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种乙肝病毒颗粒裂解液及其制备与应用，能够暴露乙肝病毒颗粒内的hbcag，且对检测抗体影响小。
5.为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种乙肝病毒颗粒裂解液，包括以下重量份数配比的组分：硫脲10～20份，尿素70～90份，十二烷基肌氨酸钠8～12份，吐温3～5份，chaps(3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propanesulfonate)4～8份，tcep(三(2-羧乙基)膦，tris(2-carboxyethyl)phosphine)1～3份，triton x-100 3～5份，甘油8～12份，tirs-hcl1～3份，去离子水0～100份。
[0006]
进一步，所述乙肝病毒颗粒裂解液包括以下重量份数配比的组分：硫脲10～20份，尿素70～90份，十二烷基肌氨酸钠8～12份，吐温3～5份，chaps 4～8份，tcep 1～3份，triton x-100 3～5份，甘油8～12份，tirs-hcl 1～3份，去离子水10～100份。
[0007]
进一步，所述乙肝病毒颗粒裂解液的ph至7.2～7.8。
[0008]
进一步，所述吐温选自tween20、tween40、tween 60、tween80中的至少一种。本发明第二方面提供根据第一方面所述的乙肝病毒颗粒裂解液的制备方法，包括如下步骤：
[0009]
(1)将硫脲，尿素，十二烷基肌氨酸钠(sls)，chaps，tcep依次加入去离子水中，搅拌均匀；
[0010]
(2)将步骤(1)所得溶液的ph调节至7.2～7.8；
[0011]
(3)将triton x-100，甘油，tirs-hcl加入步骤(2)所得溶液中，搅拌均匀；
[0012]
(4)将tween 60加入步骤(3)所得溶液中，搅拌均匀后即制得所述乙肝病毒颗粒裂解液。
[0013]
进一步，所述步骤(1)中，搅拌速度为300～400rpm，搅拌30～40min。
[0014]
进一步，所述步骤(2)中，搅拌速度为300～400rpm，搅拌30～40min。
[0015]
进一步，所述步骤(4)中，搅拌速度为100～120rpm，搅拌20～30min。
[0016]
本发明第三方面提供根据第一方面所述的乙肝病毒颗粒裂解液、根据第二方面所述的方法制备得到的乙肝病毒颗粒裂解液在乙肝病毒颗粒裂解上的应用。
[0017]
本发明第四方面提供一种乙肝病毒颗粒裂解方法，采用根据第一方面所述的乙肝病毒颗粒裂解液、根据第二方面所述的方法制备得到的乙肝病毒颗粒裂解液裂解乙肝病毒颗粒。
[0018]
如上所述，本发明的乙肝病毒颗粒裂解液及其制备与应用，具有以下有益效果：
[0019]
本发明提供的裂解液中的十二烷基肌氨酸钠(sls)和chaps能够有效地裂解乙肝病毒颗粒的外膜，硫脲、尿素和tcep能够有效地裂解核心颗粒，使hbcag呈现出单体状态并被最大量的检出，适用于裂解乙肝病毒颗粒内hbcag，且对检测抗体影响小。
具体实施方式
[0020]
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
[0021]
本发明提供了一种乙肝病毒颗粒裂解液，包括以下重量份数配比的组分：硫脲10～20份，尿素70～90份，十二烷基肌氨酸钠(sls)8～12份，吐温3～5份，chaps 4～8份，tcep 1～3份，triton x-100 3～5份，甘油8～12份，tirs-hcl 1～3份，去离子水0～100份。
[0022]
其中，所述吐温选自tween20、tween40、tween 60、tween80中的至少一种。
[0023]
本发明提供的乙肝病毒颗粒裂解液的制备方法包括如下步骤：
[0024]
(1)将去离子水置于磁力搅拌器，搅拌速度为300～400rpm，依次加入硫脲，尿素，十二烷基肌氨酸钠(sls)，chaps，tcep，搅拌30～40min；
[0025]
(2)将步骤(1)所得溶液的ph调节至7.2～7.8；
[0026]
(3)将triton x-100，甘油，tirs-hcl加入步骤(2)所得溶液中，搅拌均匀，搅拌速度为300～400rpm，搅拌30～40min；
[0027]
(4)将tween 60加入步骤(3)所得溶液中，搅拌速度为100～120rpm，搅拌20～30min，即制得所述乙肝病毒颗粒裂解液。
[0028]
本发明提供的裂解液用于裂解乙肝病毒颗粒，能暴露乙肝病毒颗粒内的hbcag，且对检测抗体影响小。
[0029]
下面具体的例举实施例以详细说明本发明。同样应理解，以下实施例只用于对本发明进行具体的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。下述示例具体的工艺参数等也仅是合适范围中的一个示例，即本领域技术人员可以通过本文的说明做合适的范围内选择，而并非要限定于下文示例的具体数值。
[0030]
实施例1
[0031]
本实施例中的乙肝病毒颗粒裂解液，由以下组分按重量份数配比组成：硫脲15份，尿素80份，十二烷基肌氨酸钠(sls)10份，tween 60 4份，chaps 6份，tcep 2份，triton x-100 4份，甘油10份，tirs-hcl 3份，去离子水66份。
[0032]
本实施例中的乙肝病毒颗粒裂解液的制备方法包含以下步骤：
[0033]
(1)、将去离子水置于磁力搅拌器，搅拌速度为300rpm，依次加入硫脲，尿素，十二烷基肌氨酸钠(sls)，chaps，tcep，搅拌30min。
[0034]
(2)、调节步骤(1)得到的溶液ph至7.2；
[0035]
(3)、在步骤(2)所得溶液中加入triton x-100，甘油，tirs-hcl，搅拌速度为300rpm，搅拌30min；
[0036]
(4)、将tween 60加入步骤(3)所得溶液内，搅拌速度为100rpm，搅拌20min，即可制得乙肝病毒颗粒裂解液。
[0037]
实施例2
[0038]
本实施例中的乙肝病毒颗粒裂解液，由以下组分按重量份数配比组成：硫脲10份，尿素70份，十二烷基肌氨酸钠(sls)8份，tween 60 3份，chaps 4份，tcep 1份，triton x-1003份，甘油8份，tirs-hcl 1份，去离子水92份。
[0039]
本实施例中的乙肝病毒颗粒裂解液的制备方法，包含以下步骤：
[0040]
(1)、将去离子水置于磁力搅拌器，搅拌速度为350rpm，依次加入硫脲，尿素，十二烷基肌氨酸钠(sls)，chaps，tcep，搅拌35min。
[0041]
(2)、调节步骤(1)得到的溶液ph至7.5；
[0042]
(3)、在步骤(2)所得溶液中加入triton x-100，甘油，tirs-hcl，搅拌速度为350rpm，搅拌35min；
[0043]
(4)、将tween 60加入步骤(3)所得溶液内，搅拌速度为110rpm，搅拌25min，即可制得乙肝病毒颗粒裂解液。
[0044]
实施例3
[0045]
本实施例中的乙肝病毒颗粒裂解液，由以下组分按重量份数配比组成：硫脲20份，尿素90份，十二烷基肌氨酸钠(sls)12份，tween 60 5份，chaps 8份，tcep 3份，triton x-100 5份，甘油12份，tirs-hcl 3份，去离子水42份。
[0046]
本实施例中的乙肝病毒颗粒裂解液的制备方法，包含以下步骤：
[0047]
步骤(1)、将去离子水置于磁力搅拌器，搅拌速度为400rpm，依次加入硫脲，尿素，十二烷基肌氨酸钠(sls)，chaps，tcep，搅拌40min。
[0048]
(2)、调节步骤(1)得到的溶液ph至7.8；
[0049]
(3)、在步骤(2)所得溶液中加入triton x-100，甘油，tirs-hcl，搅拌速度为400rpm，搅拌40min；
[0050]
(4)、将tween 60加入步骤(3)所得溶液内，搅拌速度为120rpm，搅拌30min，即可制得乙肝病毒颗粒裂解液。
[0051]
实施例4
[0052]
用实施例1～3制备获得的乙肝病毒颗粒裂解液对慢性乙型肝炎患者血清进行处理，然后进行hbcrag检测，结果如下：
[0053]
表1
[0054][0055][0056]
注：hbcrag浓度≥5pg/ml为阳性结果，介于1～5pg/ml为疑似阳性，＜1pg/ml为阴性结果。
[0057]
由表1可知，实施例1对6株hbv dna阳性样本的检出3例，疑似1例，对2株hbv dna低于检测限的样本检出1例；实施例2对6株阳性样本的检出3例，疑似2例，对2株hbv dna低于检测限的样本检出1例；实施例3对6株阳性样本的检出4例，疑似1例，对2株hbv dna低于检测限的样本检出1例。综上结果可知，实施例1～3的乙肝病毒颗粒裂解液均能裂解乙肝病毒颗粒内hbcag，其中经实施例3的乙肝病毒颗粒裂解液处理后的样本检测结果最准确。
[0058]
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。