电离探针、电喷雾方法及应用

1.本发明涉及质谱领域，具体地，涉及电离探针、电喷雾方法及应用。


背景技术：

2.液相色谱-质谱分析方法是当今应用最广的化学分析技术之一，其分析功能强大，但是通常需要先对样品进行预处理，单次分析耗时较长。为了减少样品前处理的时间，更快获得待测样品的质谱信息，原位电离技术被提出并得到迅速发展。原位电离技术具有无需或仅需少量样品前处理、分析速度快、通量高等特点，已被广泛应用于食品安全、公共安全、生命医学等多个领域。原位电离技术在生物样品分析中有着重要的应用，已经开发出许多针对生物固体样品的原位电离技术，如解吸附电喷雾电离、低温等离子体探针等。而针对生物体液样品的原位电离技术的发展受关注较少，仍需进一步的研究。
3.因此，目前的电离探针、电喷雾方法及应用仍有待改进。


技术实现要素：

4.本发明是基于发明人对于以下事实和问题的发现和认识作出的：
5.生物体液待测样品中通常含有盐和基质成分等杂质成分，会严重影响质谱仪对待测成分检测的灵敏度和定量的准确性，故需要在质谱分析前对生物体液待测样品进行前处理操作，以去除盐和基质成分的干扰，同时对待测成分进行富集。发明人发现，相关技术中对于生物体液样品的前处理过程耗时长、处理过程复杂、需要昂贵的特定专业设备，且由于前处理操作中会造成生物体液样品的浪费，使得生物体液样品的体积需求达到了毫升量级，极大地增大了待测样品的获取难度，对于珍贵的待测样本，如临床样本等会对于造成极大的损失和浪费，从而导致直接质谱分析过程的检测效率低，样品损耗率高等问题的发生，质谱仪的快速检测和样品需求量小等优势无法体现。
6.本发明旨在至少一定程度上缓解或解决上述提及问题中至少一个。
7.在本发明的一个方面，本发明提出了一种电离探针，包括：毛细管，所述毛细管包括台体部和柱状部，所述台体部具有第一开口和第二开口，所述第一开口的直径小于所述第二开口的直径，所述柱状部具有第三开口和第四开口，所述第二开口与所述第三开口相连，其中，所述台体部的内壁具有多孔材料，所述多孔材料为亲水性材料或疏水性材料。由此，该电离探针可以在对待测样品中的待测成分快速、高效采样的同时，去除待测样品中的盐和基质成分的干扰，进而可以直接将采集的待测成分进行电喷雾电离，实现原位质谱分析，适用于小型、便携质谱分析仪器的现场快速检测、高通量质谱分析以及单细胞检测等多种质谱分析检测应用。
8.根据本发明的实施例，所述毛细管的材料包括玻璃、金属、聚醚醚酮和氟化乙烯丙烯共聚物中的至少之一；所述多孔材料包括有机聚合物、金属有机框架以及共价有机框架中的至少之一。由此，可以适用于多种检测需求的质谱仪。
9.根据本发明的实施例，所述第一开口的直径为1-200μm，所述多孔材料的厚度为
0.1-100μm。由此，可以提高多孔材料的富集效果。
10.在本发明的另一个方面，本发明提出了一种采用前述的电离探针进行电喷雾的方法，包括：步骤s1：令所述电离探针的第一开口与待测溶液接触，并进行第一处理，所述第一处理包括依次吸取和释放所述待测溶液；步骤s2：令所述电离探针的所述第一开口与清洗溶液接触，并进行第二处理，所述第二处理包括依次吸取和释放所述清洗溶液；步骤s3：令所述电离探针的所述第一开口与洗脱溶液接触，并吸取所述洗脱溶液；步骤s4：对所述吸取所述洗脱溶液的所述电离探针施加电压以进行所述电喷雾，其中，所述清洗溶液与多孔材料的亲疏水性不同，所述洗脱溶液与所述多孔材料的亲疏水性相同。由此，可以实现高效、快速和准确的质谱分析。
11.根据本发明的实施例，所述步骤s1进一步包括：重复进行所述第一处理，所述重复进行所述第一处理的频率为1-10hz，所述重复进行所述第一处理的次数为1-200次。由此，可以实现待测组分在电离探针内的高度富集。
12.根据本发明的实施例，所述洗脱溶液的体积为10pl-10μl。由此，通过较少量的待测样品即可以实现高效准确的质谱分析。
13.根据本发明的实施例，所述吸取所述洗脱溶液的时间为0.1-10min。由此，可以有效地将电离探针内富集的待测成分转移至洗脱溶液中。
14.根据本发明的实施例，进一步包括：所述电喷雾包括接触式电喷雾和非接触感应式电喷雾。由此，可以满足多种模式的电喷雾的方法。
15.在本发明的又一个方面，本发明提出了一种采用前述的电喷雾方法进行高通量质谱分析的应用，包括：提供电离探针阵列、待测溶液阵列、清洗溶液阵列和洗脱溶液阵列；令所述电离探针阵列依次进行步骤s1、步骤s2以及步骤s3；对所述电离探针阵列的所述电离探针依次施加电压以进行电喷雾。由此，可以实现高通量质谱分析。
16.在本发明的又一个方面，本发明提出了一种采用前述的电喷雾方法进行单细胞检测的应用，所述待测溶液为细胞内容物。由此，可以实现极少体积的细胞内容物的质谱分析。
附图说明
17.本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
18.图1显示了根据本发明一个实施例的电离探针的结构示意图；
19.图2显示了根据本发明又一个实施例的电离探针的结构示意图；
20.图3显示了根据本发明一个实施例的电喷雾方法的流程示意图；
21.图4显示了根据本发明一个实施例的电离探针的结构图以及虚线框处的显微放大图；
22.图5显示了根据本发明一个实施例的电离探针内壁多孔材料的在不同放大倍数下的扫描电镜图；
23.图6显示了根据本发明一个实施例的待测溶液为血浆样品时的正离子模式质谱图；
24.图7显示了根据本发明一个实施例的待测溶液为血浆样品时的高质量端负离子模
式质谱图；
25.图8显示了根据本发明一个实施例的待测溶液为血浆样品时的低质量端负离子模式质谱图；
26.图9显示了分别采用本发明的电离探针方法和传统液液提取方法分析同一份血浆样品测得的脂质信号对比图；
27.图10显示了根据本发明一个实施例的应用于高通量质谱分析的流程示意图；
28.图11显示了根据本发明一个实施例的应用于单细胞样品分析的流程示意图。
29.附图标记说明：
30.1：电离探针；2：多孔材料；3：待测成分；4：杂质成分；5：待测溶液；6：清洗溶液；7：洗脱溶液；8：电极丝；9：质谱仪；10：电离探针固定平台；11：一维电动导轨；12：多孔板；13：单细胞样品；100：台体部；110：第一开口；120：第二开口；300：柱状部；330：第三开口；340：第四开口。
具体实施方式
31.下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
32.在本发明的一个方面，本发明提出了一种电离探针，参考图1，包括：毛细管，毛细管包括台体部100和柱状部300，台体部100具有第一开口110和第二开口120，第一开口110的直径小于第二开口120的直径，柱状部300具有第三开口330和第四开口340，第二开口120与第三开口330相连，其中，台体部100的内壁具有多孔材料2，多孔材料2为亲水性材料(即疏油性材料)或疏水性材料(即亲油性材料)。通过在毛细管的台体部(即毛细管的尖端)的内壁上修饰一层多孔材料，具有该毛细管的电离探针可以在实现快速便捷的采样操作的同时，还具备直接电喷雾电离的功能。使用上述电离探针进行质谱分析时，通过简单的吸取-释放操作即可实现对待测溶液中待测成分的富集，还可以同时去除待测溶液中的杂质成分，省去繁琐耗时、造成待测样品损失的前处理步骤，实现高效采样的质谱分析检测，进而可以直接将采集的待测成分进行电喷雾电离，实现原位质谱分析，适用于小型、便携质谱分析仪器的现场快速检测、高通量质谱分析以及单细胞检测等多种质谱分析检测应用。
33.可以理解的是，在水(液相)、材料(固相)与空气(气相)三相的交点处，沿水滴表面的切线与水和材料接触面所形成的夹角θ称为接触角，θ角位于0-180
°
之间，其中，当θ《90
°
时，则为亲水性材料；当θ》90
°
时，为疏水性材料。θ角越小，亲水性越好，反之，则疏水性越好。
34.为了便于理解，下面对于本技术中的电离探针具有上述有益效果的原理进行说明：
35.当采用本技术中的电离探针1进行质谱分析取样操作时，具体地，参考图3：
36.首先令电离探针1的台体部浸润到待测溶液5中并进行快速的吸取-释放，从而使得待测溶液5快速进出电离探针1的尖端内，进而反复冲击尖端内壁的多孔材料2，由于多孔材料与待测成分3具有相同或相接近的亲水性或疏水性，而待测溶液5中的杂质成分4则与多孔材料2的亲水性或疏水性完全相反，或具有较大的差距，故通过多次的吸取-释放即可
使多孔材料2充分萃取待测溶液5中的待测成分3，而不会将待测溶液5中的杂质成分4大量吸附在多孔材料2上。
37.随后将电离探针1的台体部浸润在清洗溶液6中进行快速的吸取-释放以进行清洗处理，由于杂质成分4与多孔材料的亲水性或疏水性完全相反，或具有较大的差距，通过该步骤可以将多孔材料2上黏附的少量杂质成分4进一步去除，例如，当待测溶液为血浆样品时，可以通过该步骤将多孔材料2上黏附的盐和基质成分4进一步去除。
38.继而将经过清洗处理的电离探针1的台体部浸入洗脱溶液，并吸取少量的洗脱溶液7至电离探针台体部内，由于洗脱溶液7的亲水性或疏水性相较于多孔材料2而言，与待测成分3更为接近，故待测成分3经过洗脱处理后将从多孔材料2上转移到洗脱溶液7中，最终获得含有待测成分3的洗脱溶液7。最后将经过洗脱处理的电离探针1及其内部的含有待测成分3的洗脱溶液7转移到质谱仪9的进样端，继而进行电喷雾质谱分析即可。
39.由上述可知，通过将多孔材料修饰在毛细管尖端的内壁上制成电离探针，并结合待测成分与杂质成分的亲疏水性差异这一特点，通过重复吸取释放待测溶液，即多次萃取处理实现待测成分在多孔材料上的富集，通过进一步的清洗处理清洗去除待测溶液中如基质和盐等杂质成分，并最终通过洗脱处理将在萃取处理中富集的待测成分全部转移至洗脱溶液中，进而可以直接进行电喷雾质谱分析，省去了繁琐的前处理去杂质和前处理富集待测成分步骤，实现了原位电喷雾电离和质谱分析。总言之，本技术中的电离探针使其在实现快速便捷的采样操作的同时，还具备直接电喷雾电离的功能。通过简单的吸取-释放操作即可实现对待测溶液中的待测成分快速、高效采样的同时去杂质成分干扰，并且可以对采集的待测成分进行直接电喷雾电离和质谱分析。
40.根据本发明的一些实施例，形成毛细管的材料不受特别限制，例如，形成毛细管的材料可以包括玻璃、金属、聚醚醚酮和氟化乙烯丙烯共聚物中的至少之一。根据本发明的另一些实施例，多孔材料的种类不受特别限制，例如，多孔材料可以包括有机聚合物、金属有机框架以及共价有机框架中的至少之一，进一步地，为了改善多孔材料的亲水性或疏水性，可以对多孔材料进行修饰，具体地，可以在前述的多孔材料上进一步修饰聚多巴胺、半胱氨酸等亲水性或疏水性基团。
41.根据本发明的一些实施例，第一开口的直径不受特别限制，只要第一开口的直径大于两倍的第一开口处的多孔材料厚度即可，即在第一开口的内壁设置有多孔材料后，第一开口剩余的孔隙足以待测溶液通过即可。具体地，第一开口的直径可以为1-200μm。根据本发明的另一些实施例，多孔材料的厚度不受特别限制，例如，多孔材料的厚度可以为0.1-100μm。
42.可以理解的是，对于毛细管而言，其在第一开口指向第二开口的方向上，台体部的截面直径是逐渐变大的，即台体部中任一平行于第一开口的截面的直径均大于第一开口所形成的截面的直径，故在台体部内壁中间位置处的多孔材料的厚度可以大于第一开口处的多孔材料的厚度，即台体部内壁上的多孔材料可以是不等厚的。具体地，第一开口处的多孔材料的厚度与第一开口的直径的比值范围可以为0～1/3。例如，第一开口的直径为60μm时，第一开口处的多孔材料的厚度可以为0μm、0.1μm、0.5μm、1μm、2μm、3μm、4μm、5μm、10μm、15μm和20μm。参考图5(自台体部的第二开口观察第一开口)，图5中的(a)为电离探针的整体示意图，从图中可见第一开口直径约为50μm，其中第一开口处的多孔材料的厚度为0μm。图5中的
(b)图、(c)图和(d)图为沿一平行于第一开口的截面将台体部截断后的截面示意图，可以观察到台体部内壁的中间位置处具有多孔材料，多孔材料的厚度范围为50-100μm。
43.根据本发明的一些实施例，多孔材料在毛细管台体部内壁上的位置不受特别限制，只要台体部的内壁上设置有多孔材料即可。例如，参考图1，多孔材料2可以仅覆盖毛细管台体部100内壁上靠近第一开口110处的部分区域；参考图2，多孔材料2还可以覆盖毛细管台体部100内壁上的全部区域；多孔材料2还可以仅覆盖毛细管台体部100内壁上远离第一开口110和远离第二靠口120的中间区域；多孔材料2还可以在覆盖毛细管台体部100内壁上的全部区域的基础上，进一步覆盖柱状部的部分或全部区域。
44.在本发明的另一个方面，本发明提出了一种采用前述的电离探针进行电喷雾的方法，具体地，包括以下步骤：
45.步骤s1：令电离探针的第一开口与待测溶液接触，并进行第一处理，第一处理包括依次吸取和释放待测溶液
46.根据本发明的一些实施例，在该步骤中将电离探针的尖端在待测溶液中快速吸取-释放，使待测溶液快速进出电离探针的尖端内，冲击内壁的多孔材料，以令多孔材料与待测溶液充分接触，从而将待测溶液中的待测成分富集到多孔材料上。
47.根据本发明的一些实施例，为了进一步提高待测成分在多孔材料上的富集效果，步骤s1可以进一步包括：重复进行第一处理，即多次重复吸取-释放待测溶液。根据本发明的另一些实施例，重复进行第一处理频率和次数均不受特别限制，例如，重复进行第一处理的频率可以为1-10hz，重复进行第一处理的次数可以为1-200次。
48.步骤s2：令电离探针的第一开口与清洗溶液接触，并进行第二处理，第二处理包括依次吸取和释放清洗溶液
49.根据本发明的一些实施例，清洗溶液与多孔材料的亲疏水性不同，即当多孔材料为亲水性材料时，清洗溶液为非极性溶液；当多孔材料为疏水性材料时，清洗溶液为极性溶液。在该步骤将电离探针的尖端在清洗溶液中进行快速吸取-释放，以使得多孔材料上黏附的少量杂质成分进一步去除。
50.根据本发明的一些实施例，为了进一步提高杂质成分的去除效果，步骤s2可以进一步包括：重复进行第二处理，即多次重复吸取-释放清洗溶液。根据本发明的另一些实施例，重复进行第二处理频率和次数均不受特别限制，例如，重复进行第二处理的频率可以为1-5hz，重复进行第一处理的次数可以为1-10次。
51.步骤s3：令电离探针的第一开口与洗脱溶液接触，并吸取洗脱溶液
52.根据本发明的一些实施例，洗脱溶液与多孔材料的亲疏水性相同，且洗脱溶液的亲疏水性大于多孔材料的亲疏水性，待测成分在洗脱溶液中的结合力大于待测分子与多孔材料的结合力，即当洗脱溶液与多孔材料均为亲水性时，洗脱溶液的极性更强；当洗脱溶液与多孔材料均为疏水性时，洗脱溶液的非极性更强。在该步骤将电离探针的台体部浸入洗脱溶液，并吸取少量的洗脱溶液至电离探针台体部内保持一段时间，以将多孔材料上吸附的待测成分充分转移到洗脱溶液中。
53.根据本发明的一些实施例，洗脱溶液的体积不受特别限制，只要洗脱溶液的体积足以满足后续的电喷雾质谱分析的待测液用量即可，例如，洗脱溶液的体积可以为10pl-10μl。当洗脱溶液的体积为上述范围内时，通过较少体积用量的待测样品即可以多种模式下
的电喷雾质谱分析。
54.根据本发明的一些实施例，吸取洗脱溶液后等待多孔材料上吸附的待测成分转移到洗脱溶液中的时间不受特别限制，例如，吸取洗脱溶液后等待的时间可以为0.1-10min。在静置上述时间后，可以有效地将电离探针内多孔材料富集的待测成分充分转移至洗脱溶液中。
55.步骤s4：对吸取洗脱溶液的电离探针施加电压以进行电喷雾
56.根据本发明的一些实施例，在该步骤将台体部内含有待测成分的洗脱溶液的电离探针转移到质谱仪的进样端，以进行电喷雾电离。
57.根据本发明的一些实施例，电喷雾电离的方法不受特别限制，例如：电喷雾可以包括接触式电喷雾和非接触感应式电喷雾。具体地，当采用非接触感应式电喷雾进行电喷雾电离时，洗脱溶液的体积可以为10pl-1μl，当采用接触式电喷雾进行电喷雾电离时，洗脱溶液的体积可以为1μl-10μl。例如，当采用接触式电喷雾进行电喷雾电离时，可以从电离探针1的第四开口340处插入电极丝8，使电极丝接触含有待测成分的洗脱溶液，并在电极丝上施加电压，从而在电离探针的第一开口处形成电喷雾，最后使用质谱仪对电喷雾中的待测成分离子进行检测和分析。
58.在本发明的又一个方面，本发明提出了一种采用前述的电喷雾方法进行高通量质谱分析的应用，包括：提供电离探针阵列、待测溶液阵列、清洗溶液阵列和洗脱溶液阵列；令电离探针阵列依次进行步骤s1、步骤s2以及步骤s3；对电离探针阵列的电离探针依次施加电压以进行电喷雾，从而可以实现高通量质谱分析。
59.为了便于理解，下面对采用前述的电喷雾方法实现高通量的待测溶液分析应用进行简单说明，参考图10：
60.首先可以将电离探针阵列10(如含有电离探针数量为10-100根)固定在同一个操作平台上，其中，每根电离探针1内均插有电极丝8；再通过操控平台11，操控平台11可以驱动电离探针阵列完成垂直方向运动，使电离探针阵列同时对多个待测溶液5进行吸取-释放操作，随后将待测溶液阵列更换为多个清洗溶液6，完成清洗杂质成分4；最后再将清洗溶液阵列更换为多个洗脱溶液7，完成吸取洗脱溶液操作。静置等待待测成分3被洗脱溶液7洗脱后，将电离探针阵列10整体转移到质谱进样端。对电极丝依次施加电压，使用质谱依次检测和分析每一根电离探针1产生的电喷雾中的待测成分离子。
61.根据本发明的一些实施例，为了便于更换溶液，可以将多个待测溶液5、多个清洗溶液6以及多个洗脱溶液7分别放置在多孔板12上，从而实现待吸取溶液的快速更换。
62.在本发明的又一个方面，本发明提出了一种采用前述的电喷雾方法进行单细胞检测的应用，待测溶液为细胞内容物，从而可以实现极少体积的细胞内容物的质谱分析。
63.为了便于理解，下面对采用前述的电喷雾方法实现单细胞检测的应用进行简单说明，参考图11：
64.首先将电离探针1的尖端，即台体部刺入单细胞样品13内，吸取细胞内容物于电离探针的尖端内，等待多孔材料萃取单细胞样品中的待测成分后，释放细胞内容物，即完成一次第一处理；然后吸取少量的清洗溶液6于电离探针的尖端内，等待清洗溶液将多孔材料上黏附的盐和基质成分洗脱后，释放清洗溶液；随后吸取少量的洗脱溶液7至电离探针尖端内，等待洗脱溶液将多孔材料上吸附的待测成分洗脱，获得待测成分的洗脱溶液；最后将台
体部内含有单细胞样品13的待测成分的洗脱溶液的电离探针转移到质谱进样端，从采样探针尾端插入电极丝，使用非接触感应电喷雾电离方式使尖端内的洗脱溶液形成电喷雾，使用质谱仪对电喷雾中的待测成分离子进行检测和分析。
65.总言之，采用前述的电喷雾方法进行单细胞检测的应用在定性分析方面，可用于确定待测成分的元素组成和分子结构，以及对磷脂的sn异构体和碳碳双键位置异构体等分析；在定量分析方面，可用于通过在多孔材料上或洗脱溶液中添加内标物实现对待测成分的定量检测。
66.下面通过具体的实施例对本技术的方案进行说明，需要说明的是，下面的实施例仅用于说明本技术，而不应视为限定本技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
67.实施例1：
68.形成毛细管的材料为玻璃，多孔材料为丙烯酰胺-乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚物小球，小球直径约2μm。参考图5，毛细管内壁中间位置处的多孔材料的厚度为50-100μm，第一开口的直径为50μm，第一开口处的多孔材料的厚度为0μm。待测溶液为血浆，待测成分为血浆中的脂质和脂肪酸。
69.电喷雾方法如下：
70.1、将电离探针的尖端在待测溶液中快速吸取-释放，吸取-释放次数为100次，频率为1hz；
71.2、将电离探针的尖端在清洗溶液中快速吸取-释放，吸取-释放次数为5次，频率为1hz；
72.3、吸取少量的洗脱溶液至电离探针尖端内，洗脱溶液体积为10μl，等待10分钟后，获得待测成分的洗脱溶液；
73.4、将尖端内含有待测成分洗脱溶液的电离探针转移到质谱仪进样端，从电离探针尾端插入电极丝，使电极丝接触待测成分的洗脱溶液，并在电极丝上施加电压，在电离探针尖端形成电喷雾，使用质谱仪对电喷雾中的待测成分离子进行检测和分析。
74.实施例2：
75.实施例2与实施例1保持一致，所不同的是，多孔材料为zif-8，厚度为0.1μm。电离探针第一开口的直径为200μm。待测溶液为血浆，待测成分为血浆中的药物代谢物浓度。
76.电喷雾方法如下：
77.1、将96根电离探针组成的阵列固定在电离探针固定平台上，探针内插有电极丝；
78.2、使电离探针阵列可以对96孔板12上的96份液体同时进行吸取-释放操作。先放置装载96份不同待测溶液的96孔板，操控电离探针阵列完成100次吸取-释放操作，频率为5hz。
79.3、再放置全部装载清洗溶液的96孔板，操控电离探针阵列完成10次吸取-释放操作，频率为5hz；
80.4、放置全部装载洗脱溶液的96孔板，操控电离探针阵列吸取10μl洗脱溶液至每根电离探针尖端内，等待10分钟后，将电离探针阵列整体转移到质谱进样端；
81.5、选择常规电喷雾电离方式，对电极丝依次施加电压，使用质谱依次检测和分析
每一根电离探针产生的电喷雾中的待测成分离子。
82.实施例3：
83.实施例3与实施例1保持一致，所不同的是，电离探针第一开口直径为1μm，待测单细胞为海拉细胞，待测成分为海拉细胞内脂质及代谢物。
84.1、将电离探针尖端刺入单细胞内，吸取少量细胞内容物于电离探针尖端内；
85.2、吸取清洗溶液于电离探针的尖端内，随后释放清洗溶液；
86.3、吸取10pl洗脱溶液至电离探针尖端内，等待1分钟后，获得待测成分的洗脱溶液；
87.4、将尖端内含有单细胞样品待测成分洗脱溶液的电离探针转移到质谱进样端，从采样探针尾端插入电极丝，使用非接触感应电喷雾电离方式使尖端内的洗脱溶液形成电喷雾，使用质谱仪对电喷雾中的待测成分离子进行检测和分析。
88.对比例1：
89.传统质谱方法，针对实施例1。
90.以传统脂质提取方法folch方法为例：
①
将1.5ml甲醇添加到200μl的待测样品中，涡旋混匀。
②
加入3ml氯仿，在室温下将混合物振荡1小时。
③
加入1.25ml水诱导相分离。在室温下放置10分钟，再以1000g加速度离心10分钟，然后收集下层氯仿相。
④
将上层相用2ml的溶剂混合物(氯仿/甲醇/水，体积比86:14:1)洗涤，洗涤后提取下层相。
⑤
将两次提取的下层相合并，并在真空离心机中干燥，最后溶解于1ml的甲醇中。
91.测试结果表明：图6、图7和图8分别为实施例1和对比例1中血浆样品的正离子模式质谱图、高质量端负离子模式质谱图、低质量端负离子模式质谱图。从图6、图7和图8中分别可以得到血浆样品脂质的正离子模式谱峰、血浆样品脂质的负离子模式谱峰、血浆样品脂肪酸的谱峰，证明本发明的电离探针及其使用方法可以有效提取血浆样品中脂质和脂肪酸的信息。使用本发明的电离探针方法和传统液液提取方法分析同份一血浆样品中的脂质信号，分析结果对比如图9所示，其中pc为磷脂酰胆碱；sm为鞘磷脂；tag为甘油三脂；pe为磷脂酰乙醇胺；pi为磷脂酰肌醇；fa为脂肪酸。通过图9的对比结果可以明显看出，采用本技术中的电离探针进行电喷雾方法的质谱分析所得到的数据，与传统液液提取方法获得的血浆样品中磷脂酰胆碱、鞘磷脂、为甘油三脂、磷脂酰乙醇胺的信号强度接近，电离探针方法获得的磷脂酰肌醇信号强度为传统液液提取方法的一半，而电离探针方法获得的脂肪酸信号整体略高于传统液液提取方法。
92.实施例2的质谱分析测试结果表明，使用本发明的高通量质谱分析方法，可以在15分钟以内完成对96个血浆样品的全部质谱分析，有效检测出血浆样品中的亲脂性药物的浓度，包括多塞平、阿米替林、表睾酮等多种物质。
93.实施例3的质谱分析测试结果表明，使用本发明的单细胞检测方法，可以有效检测出单细胞内容物中的脂质，包括脂肪酸、甘油酯和甘油磷脂。利用这些脂质的信息，可以实现对细胞群体中不同耐药特性单细胞的准确鉴别，为研究单细胞脂质组学提供了有效的分析手段。
94.结果表明，本技术中的电离探针及其电喷雾方法具有待测溶液用量少、检测步骤简单、检测时间短、适用多种电喷雾模式，可以实现原位质谱分析，适用于小型、便携质谱分析仪器的现场快速检测、高通量质谱分析以及单细胞检测等多种质谱分析检测应用的优
点。
95.除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。在本发明中，无论是否使用“大约”或“约”等字眼，所有在此公开了的数字均为近似值。每一个数字的数值有可能会出现10％以下的差异或者本领域人员认为的合理的差异，如1％、2％、3％、4％或5％的差异。
96.在本发明的描述中，需要理解的是，术语“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
97.在本发明的描述中，“第一特征”、“第二特征”可以包括一个或者更多个该特征。
98.在本发明的描述中，第一特征在第二特征“之上”或“之下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外的特征接触。
99.在本发明的描述中，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。
100.在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“另一个实施例”等的描述意指结合该实施例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。另外，需要说明的是，本说明书中，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。
101.尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。