1.本发明涉及新的淀粉样蛋白-β(aβ、abeta、aβ)结合分子，特别是涉及aβ抗体或其抗原结合片段和/或其用途。所提供的分子还可用于确定对淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症的倾向性(predisposition)，监测疾病、障碍或病症，或者预测患有这样的疾病、障碍或病症的患者对用特定药物进行的治疗的响应性。因此，本发明涉及新的可用于诊断和/或治疗与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍或病症的分子。
背景技术：
2.阿尔茨海默病(alzheimer
′
s disease，ad)是老年人痴呆的最常见原因，其影响了全世界估计1500万人并且其中40％的群体超过85岁。该疾病的特征在于记忆、语言和运动的进行性丧失，患者完全丧失能力并最终死亡。ad对患有该疾病的那些人以及其家人、朋友和照料者造成大且毁灭性的影响。
3.当今，治疗集中于控制ad的症状及其各个阶段。目前可用的ad治疗选择可有助于在有限的时段内延缓ad症状发生恶化。然而，没有这些药物对疾病的潜在进展有任何作用的证据。ad目前尚无法有效治愈，因此早期ad治疗是必要的。在目前无可用的疾病修饰治疗选择的情况下，对早期诊断的良好生物标志物的需要与以往一样重要。ad的唯一最突出且早期的生物化学特征是在脑中形成胞外淀粉样蛋白-β(aβ)斑块(calderon-garciduenas&duyckaerts，2017)，其主要包含42个氨基酸形式的aβ。aβ斑块由39至43个氨基酸长的aβ肽(由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein，app)的切割产生)形成，该肽在其天然非病理形式下呈无规卷曲构象。在向病理状态转变期间，其主要转变成β-折叠二级结构，自发地聚集成不溶性沉积物。即使aβ在ad发生中的确切作用仍有争议，但广泛接受的是可溶性aβ寡聚体损害突触结构和功能，并且最小的突触毒性(synaptotoxic)物质是二聚体或小的可溶性多聚体，而aβ单体或斑块核心均未显著改变神经元生存力或突触可塑性(shankar et al.，2008)。
4.唐氏综合征(down syndrome，ds)，也称为21三体(trisomy 21)，是智力残疾的最常见原因之一，影响1/800的新生儿。该病症最常见地涉及21号染色体的三倍量(belichenko，2016)。患有ds的对象具有特征性的面部特征、免疫和内分泌系统的缺陷以及认知发展的延迟。患有ds的成人对象的一个关键特征是他们发生阿尔茨海默病(ad)的类似临床症状的风险提高，其特征在于提示痴呆诊断的特定认知域的衰退。年长于40岁的患有ds的几乎所有对象均表现出类似于ad的神经病理学变化，其形式为老年斑形成和神经原纤维缠结(head，2012)。普遍接受的是，ad样认知衰退的神经病理学涉及β-淀粉样蛋白(aβ)肽沉积和随后的斑块形成、神经原纤维缠结、血管损伤、神经炎症以及最终神经元细胞死亡。编码aβ的前体蛋白的淀粉样蛋白前体(app)的基因位于21号染色体上。在患有ds的对象中，21号染色体的全部或至少一部分以三份存在。因此，这导致编码app的基因的三个拷贝，从而导致过多aβ的产生。已表明提高的aβ蛋白产生与ds对象中以及发生ad的一般群体中的ad样症状相关(head，2012)。这些发现最终表明，野生型app的终生过表达在患有ds的对象中
以与用于描述患有ad的对象的淀粉样蛋白级联假说类似的方式导致认知衰退。唐氏综合征相关阿尔茨海默病的特征在于阿尔茨海默病的脑神经病理学特征的存在(尤其包括脑淀粉样蛋白斑块和神经原纤维缠结的积聚)，这在脑病变充分发展时可导致临床症状如认知衰退和功能损伤的出现。
5.淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症是神经障碍，例如阿尔茨海默病(ad)。根据本发明的淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症的另一些实例包括轻度认知损伤(mild cognitive impairment，mci)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、心脏淀粉样变性、脑淀粉样血管病(cerebral amyloid angiopathy，caa)、多发性硬化、帕金森病(parkinson
′
s disease，pd)、帕金森病痴呆(parkinson’s disease with dementia，pdd)、路易体痴呆、als(肌萎缩侧索硬化)、成人发病糖尿病(adult onset diabetes)、包涵体肌炎(inclusion body myositis，ibm)、眼部淀粉样变性、青光眼、黄斑变性、网格状营养不良(lattice dystrophy)、视神经炎、强直性肌营养不良和肝功能障碍或衰竭。这些病症中的许多以认知记忆能力的丧失为特征或与其相关。因此，根据本发明以认知记忆能力丧失为特征或与其相关的病症包括ad、轻度认知损伤(mci)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、心脏淀粉样变性、脑淀粉样血管病(caa)、多发性硬化、帕金森病、帕金森病痴呆(pdd)、路易体痴呆、als(肌萎缩侧索硬化)、强直性肌营养不良、肝功能障碍或衰竭和包涵体肌炎(ibm)。
6.目前，无患者样品(例如，血液、脑脊液、尿等)的经临床验证的生物标志物可用于在对象中特异性诊断、分层或监测淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症的进展或消退。大多数ad生物标志物研究均集中于来自ad患者的脑脊液中tau和aβ蛋白的定量变化以及这些蛋白水平的修饰，其中aβ水平显示出较早的变化(buchhave et al.，2012)。对于ad生物标志物和诊断领域，非常需要可针对给定生物标志物用途和特定诊断技术平台而改造和优化的aβ抗体。
7.ad以及其中aβ在病理学中发挥作用和/或aβ水平作为疾病进展标志物在易受影响的身体组织中改变的另一些病症的早期诊断对于早期干预至关重要。ad中生物化学改变的进展缓慢，并且在疾病的第一临床体征可见之前经过了相对长的时间。在可做出可靠的ad诊断并可将其与其他形式的痴呆区分开来之前，还要经过甚至更长的时间(knopman et al.，2001)。在神经退行性变在临床症状有可靠诊断之前20年或更多年开始是可能的的情况下，可注意到轻度认知损伤(mci)的症状，这提示ad处于前驱期(britt et al.，2011)。尽管mci是ad前驱期的特征，但其具有高度可变的自然史，其中认知状态随时间的波动使其成为ad临床诊断进展的不可靠预测因子(gauthier et al.，2006)。在易受影响的组织中用作疾病进展替代物的生物标志物的改变被认为发生在ad的临床前前驱期期间的早期(robb et al.，2017)。在此，描述了针对用于aβ生物标志物测定以用于早期诊断和/或治疗与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍或病症而产生的抗体。
技术实现要素：
8.本发明的一个目的是提供结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其可用于与淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症相关的用途，例如如诊断。本发明的结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，可选择性结合或捕获溶液中，特别是
体液或缓冲溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质。出乎意料地发现，本发明的淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段还可选择性结合或捕获溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，和/或与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性，特别是与由α-分泌酶切割产生的可溶性app(本文中称为“可溶性appα”或“sappα”)无交叉反应性。提及选择性结合或选择性捕获意指结合分子不与溶液(例如体液)中存在的任何其他物质(除了淀粉样蛋白-β，无论构象状态如何)显著结合。这可适用于体外背景和体内背景二者。如本文中所述，选择性对于在多种诊断应用中的有效性能是重要的。因此，在一些优选实施方案中，本发明的结合分子不与血浆中发现的其他蛋白质物质(其包括载脂蛋白、免疫球蛋白、白蛋白、纤维蛋白原等)显著结合。换言之，当在血浆样品中结合或捕获时，本发明的结合分子对淀粉样蛋白-β具有特异性，无论构象状态如何。本发明的结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段与无关的非淀粉样蛋白-β蛋白的结合程度可小于抗体与淀粉样蛋白-β的结合的约10％，如例如通过放射免疫测定(radioimmunoassay，ria)测量的。当提及与sappα“无交叉反应性”时，其旨在意指结合分子与sappα无明显(appreciable)结合。这可例如通过将与sappα的结合和与aβ1-42的结合进行比较来测量。当针对aβ1-42结合进行归一化时，与sappα的结合的水平可小于与aβ1-42结合的10％，优选小于5％或更优选小于3％。这样的比较可通过elisa，例如间接elisa进行。参考图8a在实施例3中描述了合适的测定。这些抗体特别可用于本发明中，特别是作为夹心免疫测定形式中的捕获抗体和/或检测抗体。术语“捕获”和“检测”是本领域的术语。捕获抗体与抗原结合并将其捕获，通常是与固体表面(捕获抗体附接在其上)结合。检测抗体也与抗原结合，通常是与非重叠表位结合，因为捕获抗体和检测抗体同时结合。检测抗体产生用于测定的信号。检测可以是直接的(例如通过直接标记的抗体，例如酶或荧光标记)或间接的(例如使用继而标记的二抗)。已经发现，假如捕获抗体或检测抗体之一是与sappα无交叉反应性的抗体，则夹心免疫测定总体上将是特异性的并且不给出针对sappα的信号，即使另一种抗体与sappα反应。显示出与sappα无交叉反应性的特异性抗体示于表1中(最后一列，
“‑”
表示未结合)。在本发明的一些方面中，与sappα无交叉反应性的抗体被用作捕获抗体和检测抗体二者。这样的测定提供了对aβ的灵敏检测，而不检测sappα(即也具有良好的特异性)。
9.因此，本发明的一些结合分子可显示出与sappα的低交叉反应性。其有用地与显示出无交叉反应性的本发明的结合分子组合使用。同样，可例如通过将与sappα的结合和与aβ1-42的结合进行比较来测量低交叉反应性。当针对aβ1-42结合进行归一化时，与sappα结合的水平可以为与aβ1-42结合的大于10％至60％，例如约50％。这样的比较可通过elisa，例如间接elisa进行。参考图8a在实施例3中描述了合适的测定。针对经测试的本发明的抗体的结果在表1中示出。已确定，当和与sappα无交叉反应性的结合分子组合使用时，与sappα具有低水平交叉反应性的结合分子可以是特别有利的。因此，根据本发明，可使用与sappα具有低水平交叉反应性的结合分子和与sappα无交叉反应性的结合分子的组合来进行夹心免疫测定。特别地，与sappα具有低水平交叉反应性的结合分子可用作捕获抗体或检测抗体，并且与sappα无交叉反应性的结合分子可用作检测抗体或捕获抗体。参考图8b在实施例3中描述了这种类型的本发明的合适的测定。因此，例如，抗体aci-31-25b1-ab2可用作捕获抗体并且aci-24-41f12-ab2用作检测抗体。
cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：101的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：102的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：103的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：105的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：106的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：107的氨基酸序列的vl-cdr3。
18.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：111的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：112的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：113的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：115的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：116的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：117的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：111的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：112的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：113的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：115的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：116的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：117的氨基酸序列的vl-cdr3。
19.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：121的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：122的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：123的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：125的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：126的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：127的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：121的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：122的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：123的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：125的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：126的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：127的氨基酸序列的vl-cdr3。
20.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：131的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：132的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：133的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：135的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：137的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：131的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：132的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：133的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：135的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：137的氨基酸序列的vl-cdr3。
21.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：141的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：142的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：133的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：137的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：141的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：142的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：133的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：15的氨基
酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：137的氨基酸序列的vl-cdr3。
22.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：151的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：152的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：153的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：155的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：151的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：152的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：153的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：155的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：161的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：162的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：163的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：165的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：166的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：167的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：161的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：162的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：163的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：165的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：166的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：167的氨基酸序列的vl-cdr3。
23.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：171的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：172的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：173的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：175的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：171的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：172的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：173的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：175的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。
24.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：181的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：182的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：183的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：95的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：96的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：187的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：181的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：182的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：183的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：95的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：96的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：187的氨基酸序列的vl-cdr3。
25.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：181的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：182的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含
seq id no：183的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：195的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：196的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：197的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：181的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：182的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：183的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：195的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：196的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：197的氨基酸序列的vl-cdr3。
26.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。
27.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)。
28.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：40的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：44的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：40的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：44的序列的轻链可变区(vl)。
29.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：60的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：64的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：60的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：64的序列的轻链可变区(vl)。
30.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：70的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：74的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：70的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：74的序列的轻链可变区(vl)。
31.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：80的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：84的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：80的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：84的序列的轻链可变区(vl)。
32.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：90的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：94的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发
no：170的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：174的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：170的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：174的序列的轻链可变区(vl)。
41.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：180的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：184的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：180的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：184的序列的轻链可变区(vl)。
42.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：180的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：194的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：180的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：194的序列的轻链可变区(vl)。
43.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。
44.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
45.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：40的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：40的氨基酸序列具有至少93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：44的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：44的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：40的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：40的氨基酸序列具有至少93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：44的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：44的氨基酸
no：110的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：110的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：114的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：114的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：110的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：110的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：114的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：114的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
52.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：120的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：120的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：124的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：124的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：120的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：120的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：124的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：124的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
53.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：130的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：130的氨基酸序列具有至少94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：134的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：130的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：130的氨基酸序列具有至少94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：134的序列的轻链可变区(vl)。
54.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：140的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：140的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：144的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：140的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：140的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：144的序列的轻链可变区(vl)。
55.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：150的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：154的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：150的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：154的序列的轻链可
变区(vl)或与seq id no：154的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
56.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：160的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：160的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：164的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：164的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：160的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：160的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：164的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：164的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
57.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：170的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：170的氨基酸序列具有至少92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：174的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：170的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：170的氨基酸序列具有至少92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：174的序列的轻链可变区(vl)。
58.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：180的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：180的氨基酸序列具有至少94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：184的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：180的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：180的氨基酸序列具有至少94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：184的序列的轻链可变区(vl)。
59.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：180的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：180的氨基酸序列具有至少94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：194的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：180的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：180的氨基酸序列具有至少94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：194的序列的轻链可变区(vl)。
60.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
61.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、
93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
62.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：40的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：40的氨基酸序列具有至少93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：40的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：40的氨基酸序列具有至少93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
63.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：60的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：60的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：60的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：60的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
64.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：70的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：70的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：70的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：70的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
65.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：80的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：80的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：80的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：80的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的重链可变区(vh)。
66.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：90的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：90的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：90的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：90的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
67.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：100的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：100的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：100的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：100的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的重链可变区(vh)。
68.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：110的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：110的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是
淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：110的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：110的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
69.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：120的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：120的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：120的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：120的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
70.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：130的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：130的氨基酸序列具有至少94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：130的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：130的氨基酸序列具有至少94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
71.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：140的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：140的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：140的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：140的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
72.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：150的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：150的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
73.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：160的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：160的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：160的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：160的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
74.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：170的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：170的氨基酸序列具有至少92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：170的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：170的氨基酸序列具有至少92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
75.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：180的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：180的氨基酸序列具有至少94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：180的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：180的氨基酸序列具有至少94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
76.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。
77.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
78.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：44的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：44的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：44的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：44的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
79.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：64的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：64的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：64的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：64的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
80.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：74的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：74的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：74的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：74的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
81.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：84的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：84的序列的轻链可变区(vl)。
82.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：94的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：94的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：94的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：94的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
83.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：104的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：104的序列的轻链可变区(vl)。
84.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：114的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：114的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：114的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：114的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
85.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：124的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：124的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：124的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：124的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
86.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：134的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：134的序列的轻链可变区(vl)。
87.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：144的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：144的序列的轻链可变区(vl)。
88.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：154的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：154的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
89.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：164的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：164的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：164的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：164的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
90.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：174的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：174的序列的轻链可变区(vl)。
91.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：184的序列的轻链可变区(vl)。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：184的序列的轻链可变区
no：125的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：126的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：127的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：125的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：126的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：127的氨基酸序列的vl-cdr3。
119.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：135的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：137的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：135的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：137的氨基酸序列的vl-cdr3。
120.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：137的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：137的氨基酸序列的vl-cdr3。
121.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：155的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：155的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。
122.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：175的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：175的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。
123.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：95的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：96的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：187的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：95的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：96的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：187的氨基酸序列的vl-cdr3。
124.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：195的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：196的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：197的氨基酸序列的vl-cdr3。因此，本发明还提供了淀粉样蛋白-β结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段，其包含：包含seq id no：195的氨基酸序列的
vl-cdr1；包含seq id no：196的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：197的氨基酸序列的vl-cdr3。
125.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：20的氨基序列的重链(heavy chain，hc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：22的氨基序列的重链(hc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：24的氨基序列的重链(hc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：27的氨基序列的重链(hc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：38的氨基序列的重链(hc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：48的氨基序列的重链(hc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：50的氨基序列的重链(hc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：56的氨基序列的重链(hc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：58的氨基序列的重链(hc)。
126.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：21的氨基序列的轻链(light chain，lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：23的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：25的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：28的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：39的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：49的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：51的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：57的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：59的氨基序列的轻链(lc)。
127.在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：20的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：21的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：22的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：23的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：24的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：25的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：27的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：28的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：38的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：39的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：48的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：49的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包含：包含seq id no：50的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：51的氨基序列的轻链(lc)。在一些实施方案中，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段包
cdr1；包含seq id no：106的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：107的氨基酸序列的vl-cdr3。结合分子、抗体或其抗原结合片段可另外地或替代地包含其中包含的cdr序列中的并且是与在以下中提供的cdr序列相比的氨基酸变化：包含seq id no：111的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：112的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：113的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：115的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：116的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：117的氨基酸序列的vl-cdr3。结合分子、抗体或其抗原结合片段可另外地或替代地包含其中包含的cdr序列中的并且是与在以下中提供的cdr序列相比的氨基酸变化：包含seq id no：121的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：122的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：123的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：125的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：126的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：127的氨基酸序列的vl-cdr3。结合分子、抗体或其抗原结合片段可另外地或替代地包含其中包含的cdr序列中的并且是与在以下中提供的cdr序列相比的氨基酸变化：包含seq id no：131的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：132的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：133的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：135的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：137的氨基酸序列的vl-cdr3。结合分子、抗体或其抗原结合片段可另外地或替代地包含其中包含的cdr序列中的并且是与在以下中提供的cdr序列相比的氨基酸变化：包含seq id no：141的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：142的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：133的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：137的氨基酸序列的vl-cdr3。结合分子、抗体或其抗原结合片段可另外地或替代地包含其中包含的cdr序列中的并且是与在以下中提供的cdr序列相比的氨基酸变化：包含seq id no：151的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：152的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：153的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：155的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。结合分子、抗体或其抗原结合片段可另外地或替代地包含其中包含的cdr序列中的并且是与在以下中提供的cdr序列相比的氨基酸变化：包含seq id no：161的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：162的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：163的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：165的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：166的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：167的氨基酸序列的vl-cdr3。结合分子、抗体或其抗原结合片段可另外地或替代地包含其中包含的cdr序列中的并且是与在以下中提供的cdr序列相比的氨基酸变化：包含seq id no：171的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：172的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：173的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：175的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。结合分子、抗体或其抗原结合片段可另外地或替代地包含其中包含的cdr序列中的并且是与在以下中提供的cdr序列相比的氨基酸变化：包含seq id no：181的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：182的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：183的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：95的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：96的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：187的氨基酸序列的vl-cdr3。结合分子、抗体或其抗原结合片段
可另外地或替代地包含其中包含的cdr序列中的并且是与在以下中提供的cdr序列相比的氨基酸变化：包含seq id no：181的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：182的氨基酸序列的vh-cdr2；以及包含seq id no：183的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：195的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：196的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：197的氨基酸序列的vl-cdr3。特别地，结合分子、抗体或其抗原结合片段中包含的cdr序列可包含相对于本文中提供的cdr序列的一个、两个或三个氨基酸变化。“氨基酸变化”可与氨基酸的突变、缺失或添加有关。其还可与氨基酸的化学改变有关，例如如非天然氨基酸的形成。
129.考虑了本文中提供的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列变体。例如，可期望改善抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性。抗体的氨基酸序列变体可通过将合适的修饰引入到编码抗体的核苷酸序列中，或通过肽合成来制备。这样的修饰包括，例如，在抗体氨基酸序列内缺失和/或插入和/或替换残基。可进行缺失、插入和替换的任意组合以获得最终的构建体，前提是最终的构建体具有所期望的特征，例如抗原结合。
130.在某些实施方案中，提供了具有一个或更多个氨基酸替换的抗体变体。替换型诱变的目的位点包括cdr和框架区(framework region，fr)。保守替换示于表a中“优选替换”的标题下。更多的显著变化提供于表a中“示例性替换”的标题下，并且如以下参考氨基酸侧链类别进一步描述的。可将氨基酸替换引入到目的抗体中，并针对所期望活性，例如保留/改善的抗原结合或改善的选择性来筛选产物。
131.表a
132.[0133][0134]
氨基酸可根据共同的侧链特性进行分组：
[0135]
(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
[0136]
(2)中性亲水性：cys、ser、thr、asn、gln；
[0137]
(3)酸性：asp、glu；
[0138]
(4)碱性：his、lys、arg；
[0139]
(5)影响链取向的残基：gly、pro；
[0140]
(6)芳香族：trp、tyr、phe。
[0141]
非保守替换将需要将这些类别之一的成员更换为另一类别。
[0142]
一种类型的替换型变体涉及替换亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或更多个高变区残基。通常，选择用于进一步研究的所得变体将相对于亲本抗体在某些生物学特性方面具有改进(例如，改善)(例如，提高的亲和力、降低的免疫原性)和/或将基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。一种示例性替换型变体是亲和力成熟抗体，其可例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术来方便地产生。简言之，使一个或更多个cdr残基突变，将变体抗体展示在噬菌体上并针对特定的生物活性，例如，结合亲和力)进行筛选。
[0143]
可在cdr中进行改变(例如，替换)，例如以提高抗体亲和力。这样的改变可在cdr“热点”，即由在体细胞成熟过程期间以高频率发生突变的密码子编码的残基(参见，例如，chowdhury，methods mol.biol.207：179-196(2008))，和/或sdr(a-cdr)中进行，并测试所得变体vh或vl的结合亲和力。通过构建二级文库和从二级文库中再选择而进行的亲和力成
熟已描述于例如hoogenboom et al.，in methods in molecular biology 178：1-37(o
′
brien et al.，ed.，human press，totowa，nj，(2001).)中。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法(例如，易错pcr、链混编或寡核苷酸定向诱变)中的任一种将多样性引入选择用于成熟的可变基因中。然后创建二级文库。然后筛选该文库以鉴定具有所期望亲和力的任何抗体变体。用于引入多样性的另一方法涉及cdr指导的方法，其中数个cdr残基(例如，一次4至6个残基)是随机化的。涉及抗原结合的cdr残基可例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特别地鉴定。特别地，cdr-h3和cdr-l3通常被靶向。
[0144]
在某些实施方案中，替换、插入或缺失可在一个或更多个cdr中发生，只要这样的改变基本上不降低抗体结合抗原的能力即可。例如，可在cdr中进行基本上不降低结合亲和力的保守改变(例如，如本文中提供的保守替换)。这样的改变可在cdr“热点”或sdr之外。在上文提供的变体vh和vl序列的某些实施方案中，每个cdr是未经改变的，或包含不超过一个、两个或三个氨基酸替换。
[0145]
用于鉴定抗体的可靶向诱变的残基或区域的可用方法称为“丙氨酸扫描诱变”，如由cunningham and wells(1989)science，244：1081-1085所述。在该方法中，鉴定残基或靶残基组(例如，带电荷的残基，例如arg、asp、his、lys和glu)，并将其用中性或带负电荷的氨基酸(例如，丙氨酸或聚丙氨酸)进行替换以确定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可在氨基酸位置引入另外的替换，显示对初始替换的功能敏感性。替代地或另外地，抗原-抗体复合体的晶体结构用于鉴定抗体与抗原之间的接触点。这样的接触残基和邻近残基可作为替换的候选物被靶向或消除。可对变体进行筛选以确定其是否包含所期望的特性。
[0146]
氨基酸序列插入包括长度从一个残基到包含一百个或更多残基的多肽在氨基末端和/或羧基末端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的一些实例包括具有n端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的另一些插入型变体包括抗体的n或c端与提高抗体的血清半衰期的酶或其他标记(例如，hrp或ap)或多肽的融合体。
[0147]
在本发明的范围内，淀粉样蛋白-β可具有aβ1-43(seq id no：3)、aβ1-42(seq id no：1)、aβ1-41(seq id no：4)、aβ1-40(seq id no：5)或aβ1-39(seq id no：6)或其片段的序列。
[0148]
术语“淀粉样蛋白-β肽或物质”是指通过β-和γ-分泌酶活性切割淀粉样前体蛋白(app)而产生的淀粉样蛋白-β。因此，“淀粉样蛋白-β肽或物质”是指通过促淀粉样变(amyloidogenic)途径产生的淀粉样蛋白-β。然而，该术语还旨在涵盖合成产生的肽。那些肽将具有相同的氨基酸序列，但不是通过体内发生的过程产生的。肽合成的方法是本领域公知的并且可商购获得。淀粉样蛋白-β肽或物质可主要包含淀粉样蛋白-β1-42(aβ1-42)或淀粉样蛋白-β1-43(aβ1-43)及其(较短的)片段。淀粉样蛋白-β肽或物质可并入翻译后修饰(post-translational modification，ptm)，其包括但不限于磷酸化(例如在淀粉样蛋白-β的第8位氨基酸残基处的丝氨酸的磷酸化(ps8-aβ))、糖基化、寡聚化和/或蛋白水解切割。可使用合成过程以添加一些ptm。这可涉及例如在体外环境中使用的天然组分，例如激酶。淀粉样蛋白-β肽或物质可包括(但不限于)以下淀粉样蛋白-β肽：aβ1-38、aβ1-39、aβ1-40、ps8-aβ1-40、aβ1-42、ps8-aβ1-42和aβ1-43及其(较短的)片段。aβ肽片段将包含由结合分子识别的表位。淀粉样蛋白-β肽或物质可采用不同的构象状态，例如单体、寡聚体或纤维状结构。
[0149]
淀粉样前体蛋白(app)是完整的膜蛋白，其经过蛋白水解处理以产生多个肽片段，其中一些被释放并存在于体液(其在本文中可称为“生物流体”)样品中。在生物流体中发现的最突出的app肽片段包含aβ家族中由促淀粉样变途径的β-和γ-分泌酶活性释放的肽(aβ1-43、aβ1-42、aβ1-41、aβ1-40和aβ1-39)。在生物流体中发现的另一种app切割产物是可溶性appα(sappα)，其由非促淀粉样变途径的α-分泌酶释放。与sappα无交叉反应性的本发明的结合分子在组合使用时，例如当在夹心测定中与第二aβ抗体配对时，有利地不检测sappα。
[0150]
因此，本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可选择性结合或捕获溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，与可溶性appα无交叉反应性。一些本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可选择性结合或捕获溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，具有与可溶性appα的低交叉反应性。一些本发明的结合分子可显示出与sappα的较高交叉反应性。可将显示出与可溶性appα无交叉反应性、低交叉反应性或高交叉反应性的结合分子组合以用于夹心免疫测定，并且前提是使用本发明的结合分子之一显示与sappα无交叉反应性。在这种情况下，该测定显示针对aβ的整体配对的特异性信号并且针对sappα无信号。优选地，溶液是如本文中所述的体液，或者缓冲溶液。更优选地，溶液是体液。体液样品限定为唾液、尿、鼻分泌物、血液、脑和/或csf、脑和/或isf，更特别地是血液、脑和/或csf或者脑和/或isf。例如，血液样品可以是全血、血清或血浆样品，但优选地是血浆样品。
[0151]
本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段与seq id no：1的氨基酸序列内的表位结合。seq id no：1是人aβ1-42的氨基酸序列。应当理解，非人aβ中存在等同的结合区。因此，例如，小鼠aβ1-42氨基酸序列与人序列有93％(39/42个残基)相同。本发明涵盖结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段，其与非人aβ，特别是鼠aβ中与以上参考seq id no：1指定的那些等同的区域/肽结合。aβ1-42氨基酸序列在小鼠与大鼠之间是相同的。在某些实施方案中，本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段与seq id no：1的第1至8位氨基酸残基(seq id no：2)内的表位结合。在某些实施方案中，本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段与seq id no：1的第1至8位(seq id no：2)、第1至5位(seq id no：7)、第17至23位(seq id no：9)、第22至35位(seq id no：29)或第26至34位(seq id no：8)氨基酸残基内的表位结合。在一些实施方案中，aβ1-42的第1和2位氨基酸是与抗体结合，特别是针对抗体aci-24-41f12-ab2和如本文中所述的相关的(例如通过共同cdr和/或vh/vl序列)(参见seq id no 10至25和相关实施方案)必不可少。不希望受理论束缚，认为该抗体与可溶性appα中不可接近的表位结合。可溶性appα包含aβ1-42的第1至5位和第1至8位氨基酸，但该抗体不以高亲和力与sappα结合。
[0152]
在某些实施方案中，本发明的和如本文中提供的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的解离常数(dissociation constant，kd)为≤1μm、≤100nm、≤10nm、≤1nm、≤0.1nm、≤0.01nm或≤0.001nm(例如10-8
m或更小，例如10-8
m至10-13
m，例如10-9
m至10-13
m)，特别是关于结合aβ1-42。在一些实施方案中，提供了结合人淀粉样蛋白-β的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段，其中结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段以小于100nm、小于10nm、小于1nm、小于200pm或小于100pm的kd与aβ结合。在本发明中，优选的是使用elisa来确定kd，例如本文中提供的实施例3中所述。
[0153]
本文中使用的术语“结合分子”、“淀粉样蛋白-β抗体”、“抗-淀粉样蛋白-β抗体”、“aβ抗体”或简称“抗体”是指结合分子，更特别地是能够以足够的亲和力结合aβ单体和/或可溶性aβ寡聚物以使得结合分子、抗体或其抗原结合片段可用作靶向淀粉样蛋白-β的诊断剂和/或治疗剂的抗体。在一个实施方案中，本发明的结合分子，特别是淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段与无关的非淀粉样蛋白-β蛋白的结合程度小于该抗体与淀粉样蛋白-β的结合的约10％，如例如通过放射免疫测定(ria)测量的。
[0154]
一般而言，术语“抗体”在本文中以最广义使用，并且涵盖多种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性、双互补位抗体)、完全人抗体和抗体片段，只要它们表现出所期望的抗原结合活性即可。在本发明内的抗体也可以是嵌合抗体、重组抗体、重组抗体的抗原结合片段、人源化抗体或者展示在噬菌体表面上或展示在嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)t细胞表面上的抗体。
[0155]
抗体的“抗原结合片段”是指不同于完整抗体的包含完整抗体的一部分并且结合与完整抗体结合的抗原的分子。抗体片段的一些实例包括但不限于fv、fab、fab’、fab
’‑
sh、f(ab’)2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scfv)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
[0156]
本文中使用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体的群体获得的抗体，即除可能少量存在的可能天然发生的突变外，构成群体的各抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原位点。经修饰的“单克隆”指示该抗体在基本上同质的抗体群体中的特征，并且不应解释为要求该抗体通过任何特定方法来产生。根据本发明使用的单克隆抗体可通过由kohler，nature 256(1975)，495所述的杂交瘤方法来制备。
[0157]
因此，在本发明的上下文中，术语“抗体”涉及完整的免疫球蛋白分子以及这样的免疫球蛋白分子的一部分(即，“其抗原结合片段”)。此外，如上所述，该术语涉及经修饰和/或经改变的抗体分子。该术语还涉及重组或合成产生/合成的抗体。该术语还涉及完整的抗体及其抗体片段，例如分离的轻链和重链、fab、fv、fab’、fab
’‑
sh、f(ab’)2。术语抗体还包括但不限于完全人抗体、嵌合抗体、人源化抗体、cdr接枝的抗体和抗体构建体，例如单链fv(scfv)或抗体融合蛋白。
[0158]
本文中使用的术语“cdr”涉及“互补决定区”，其是本领域中公知的。cdr是免疫球蛋白的一部分，其决定所述分子的特异性并且与特定配体接触。cdr是所述分子的最可变的部分，并且有助于这些分子的多样性。每个v结构域中均存在三个cdr区：cdr1、cdr2和cdr3。vh-cdr或cdr-h描述可变重链的cdr区，并且vl-cdr或cdr-l涉及可变轻链的cdr区。vh意指可变重链并且vl意指可变轻链。ig来源区域的cdr区可如kabat“sequences of proteins of immunological interest”，第5版.nih出版物no.91-3242 u.s.department of health and human services(1991)；chothia j.，mol.biol.196(1987)，901-917或chothia，nature 342(1989)，877-883中所述来确定。本文中提供的cdr序列根据kabat进行定义。然而，技术人员将理解，本发明旨在涵盖其中cdr序列根据任何有用的标识/编号方案进行定义的结合分子。例如，可采用以下编号方案以定义cdr：chothia(canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins.chothia c，lesk am.j mol biol.1987 aug 20；196(4)：901-17)、imgt(imgt，the international immunogenetics database.giudicelli v，chaume d，bodmer j，m
ü
ller w，busin c，marsh s，bontrop r，
marc l，malik a，lefranc mp.nucleic acids res.1997 jan 1；25(1)：206-11和unique database numbering system for immunogenetic analysis.lefranc mp.immunol today.1997 nov；18(11)：509)、maccallum(maccallum rm，martin ac，thornton jm，j mol biol.1996 oct 11；262(5)：732-45)以及martin(abhinandan kr，martin acr.analysis and improvements to kabat and structurally correct numbering of antibody variable domains.mol immunol.(2008)45：3832-9.10.1016/j.molimm.2008.05.022)。
[0159]“fc”区包含两个包含抗体的ch2和ch3结构域的重链片段。两个重链片段通过两个或更多个二硫键以及通过ch3结构域的疏水相互作用保持在一起。
[0160]“fv区”包含来自重链和轻链二者的可变区，但缺少恒定区。
[0161]“与蛋白质限定区域中表位结合的抗体”是要求该区域中存在一个或更多个氨基酸以与蛋白质结合的抗体。
[0162]
在某些实施方案中，可将一种或更多种氨基酸修饰引入本文中提供的抗体的fc区中，从而产生fc区变体。fc区变体可包含鼠fc区序列，其为在一个或更多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如替换)的抗体同种型或类别(例如igg1、igg2a、igg2b或igg2c)。fc区变体可包含在一个或更多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如替换)的人fc区序列(抗体同种型或类别，例如人igm、igg1、igg2、igg3或igg4 fc区)。抗体同种型或类别是指包含在其重链中的恒定结构域、区域或序列的类型。有五种主要的抗体类别：iga、igd、ige、igg和igm，并且这些中的数种还可分为亚类或同种型，例如iga1、iga2、igg1、igg2、igg2a(仅用于鼠)、igg2b(仅用于鼠)、igg2c(仅用于鼠)、igg3和igg4。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。抗体轻链恒定结构域、区域或序列可以是两种主要的类别κ或λ之一。当轻链类别未指定时，则假定其是更常见的κ轻链。在一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含鼠igg2a或嵌合(小鼠/人)igg1同种型。
[0163]
在一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段可重组产生。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中(分离的)核酸编码本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段。本文中使用的术语“核酸”是指核酸分子。在一些实施方案中，提供了宿主细胞或无细胞表达系统，其中该宿主细胞或无细胞表达系统包含编码本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的(分离的)核酸。在一些实施方案中，用包含编码本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的(分离的)核酸的载体转染宿主细胞。在一些实施方案中，用包含编码本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的重链(hc)和轻链(lc)的(分离的)核酸的载体转染宿主细胞。在一些实施方案中，用a)包含编码本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的重链(hc)的(分离的)核酸的第一载体，以及用b)包含编码本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的轻链(lc)的(分离的)核酸的第二载体来转染宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞可以是但不限于中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary，cho)细胞。合适的宿主细胞可以是原核生物、酵母、或高等真核生物的细胞，特别是哺乳动物细胞。可用的哺乳动物宿主细胞系的一些实例是由sv40转化的猴肾cv1系(cos-7，atcc crl 1651)；人胚肾系(293或用于在悬浮培养中生长的亚克隆的293细胞，graham et al.，j.gen.virol.36：59(1977))；幼仓鼠肾细胞(baby hamster kidney cell，bhk，atcc ccl 10)；中国仓鼠卵巢细胞/-dhfr(cho，urlaub et al.，proc.natl.acad.sci.usa 77：4216(1980))；小鼠塞托利细胞(tm4，mather，
biol.reprod.23：243-251(1980))；小鼠骨髓瘤细胞sp2/0-ag14(atcc crl 1581；atcc crl 8287)或ns0(hpa培养物保藏号85110503)；猴肾细胞(cv1 atcc ccl 70)；非洲绿猴肾细胞(vero-76、atcc crl-1587)；人宫颈癌细胞(hela，atcc ccl 2)；犬肾细胞(mdck，atcc ccl 34)；布法罗大鼠肝细胞(brl 3a，atcc crl 1442)；人肺细胞(w138，atcc ccl 75)；人肝细胞(hep g2，hb 8065)；小鼠乳腺肿瘤(mmt 060562，atcc ccl51)；tri细胞(mather et al.，annals n.y.acad.sci.383：44-68(1982))；mrc 5细胞；fs4细胞；和人肝癌细胞系(hep g2)，以及dsm’s perc-6细胞系。适用于这些宿主细胞中每一种的表达载体也是本领域公知的。术语“宿主细胞”通常是指培养的细胞系。因此，其中已引入编码根据本发明的抗原结合多肽的表达载体的全人类被明确排除在“宿主细胞”的定义之外。无细胞表达系统可基于细胞裂解物或提取物，例如cho细胞裂解物的使用(stech，m.，nikolaeva，o.，thoring，l.et al.cell-free synthesis of functional antibodies using a coupled in vitro transcription-translation system based on cho cell lysates.sci rep 7，12030(2017))。
[0164]
在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸编码如本文中提供的本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，提供了宿主细胞，其中该宿主细胞包含编码如本文中提供的本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的(分离的)核酸。在一些实施方案中，产生如本文中提供的本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的方法包括在适合于产生结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的条件下培养宿主细胞或无细胞表达系统。在一些实施方案中，用于产生(分离的)如本文中提供的本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的方法包括以下步骤：a)在适合于产生结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的条件下培养宿主细胞或无细胞表达系统，以及b)回收结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段。结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段的回收可通过如本领域技术人员将理解的任何合适的方式进行。回收可包括纯化至所期望的纯度水平。回收可包括从培养物中分离抗体。回收可涉及例如色谱的使用。这样的产生方法可规模化进行，并且因此可使得能够大规模生产本发明的结合分子。还提供了根据该方法产生的结合分子，其可被认为是分离的结合分子。
[0165]
本文中使用的术语“分离的”意指已经从其天然环境中分离和/或回收的分子，例如核酸或抗体。在本发明中，分子优选地是化学合成的，或者是在不同于其天然来源的细胞的细胞体系中合成的，并因此与其天然相关的组分“分离”。分子可通过例如纯化而从其天然环境中分离或者通过技术过程(包括但不限于基因合成、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，pcr)、载体纯化和蛋白质(抗体)纯化)来产生。这样的分子特别地可以是核酸，例如dna-、rna-或cdna-序列，或者肽、抗体或蛋白质。
[0166]
本发明不限于根据上述定义的分离的抗体或分离的核酸，还涉及与其来源无关的抗体或核酸本身。
[0167]
这同样适用于本发明提供的肽、核酸、dna、rna和/或cdna序列，其以分离的形式(如上文中定义的)或以任何其他形式涵盖在内。可使用本领域已知的不同技术，包括(但不限于)sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-polyacrylamide gel electrophoresis，sds-page)、柱色谱、过滤、等电聚焦、透析、重结晶、超滤、盐析、溶剂沉淀、溶剂萃取、蒸馏和免疫沉淀从细胞内部或从细胞外部(例如培养基)纯化、分离或分开本发明的结合分子，特别是抗体或
其抗原结合片段或衍生物。
[0168]
在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：18。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：19。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：52。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：53。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：54。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：55。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：68。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：69。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：78。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：79。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：88。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：89。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：98。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：99。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：108。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：109。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：118。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：119。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：128。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：129。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：138。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：139。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：148。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：149。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：158。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：159。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：168。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：169。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：178。在一
些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：179。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：188。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：189。在一些实施方案中，提供了(分离的)核酸，其中该(分离的)核酸包含编码aβ抗体或其抗原结合片段的seq id no：199。
[0169]
在一些实施方案中，提供了诊断组合物，其包含本发明的(和如本文中提供的)结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段以及可接受的载体和/或赋形剂。例如，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可视情况与可接受的载体或介质(例如如无菌水或盐水溶液、植物油、乳化剂、混悬剂、表面活性剂、稳定剂、矫味剂、赋形剂、载剂、防腐剂和黏合剂)组合，并配制成诊断制剂。优选的本发明的诊断组合物与作为受试样品使用的体液相容。因此，诊断组合物可允许直接与体液样品一起使用，而不需要对体液样品进行进一步处理。对于细胞和/或组织应用，诊断组合物在一些实施方案中可相同或不同地配制成有助于与这样的样品一起使用。
[0170]
在一些实施方案中，提供了诊断组合物，其包含至少两种本发明的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段以及可接受的载体和/或赋形剂。
[0171]
在一些实施方案中，提供了诊断组合物，其包含：
[0172]
a.第一淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质选择性结合，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，以及
[0173]
b.第二淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质选择性结合，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，
[0174]
其中该第一和第二抗体中的至少一者或二者显示出与可溶性淀粉样蛋白前体蛋白(app)无交叉反应性，特别是与可溶性appα无交叉反应性。
[0175]
一种或两种抗体可以是本发明的抗体。任一种抗体均可用作捕获抗体。因此，可提供其用于连接或附接至固体支持物。另一种抗体可用作检测抗体。因此，其可与合适的标记缀合。本文中描述了缀合的抗体，该描述适用于必要的修改(mutatis mutandis)。
[0176]
在一些实施方案中，第一和第二抗体二者均显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性，特别是与可溶性appα无交叉反应性。在另一些实施方案中，第一和第二抗体或其抗原结合片段中的至少一者显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)的交叉反应性。交叉反应性可以是低的或高的。另一抗体或其抗原结合片段显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性。在一些实施方案中，提供了诊断组合物，其包含至少两种淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段以及可接受的载体和/或赋形剂，其中该淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段选自：
[0177]
a)包含seq id no：11的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：12的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：13的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：17的氨基酸序列的vl-cdr3；和/或
[0178]
b)包含seq id no：31的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：32的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：33的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：35的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：36的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：37的氨基酸序列的vl-cdr3；和/或
[0179]
c)包含seq id no：151的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：152的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：153的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：155的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。
[0180]
在一些具体实施方案中，提供了包含上述a)和b)或者上述a)和c)的诊断组合物。
[0181]
在一个更优选的实施方案中，提供了诊断组合物，其包含至少两种淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段以及可接受的载体和/或赋形剂，其中该淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段选自：
[0182]
a)包含seq id no：11的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：12的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：13的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：17的氨基酸序列的vl-cdr3；和
[0183]
b)包含seq id no：31的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：32的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：33的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：35的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：36的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：37的氨基酸序列的vl-cdr3。
[0184]
在一些实施方案中，提供了诊断组合物，其包含至少两种淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段以及可接受的载体和/或赋形剂，其中该淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段选自：
[0185]
a)包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)；和/或
[0186]
b)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)；和/或
[0187]
c)包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)。
[0188]
在一些具体实施方案中，提供了包含上述a)和b)或者上述a)和c)的诊断组合物。
[0189]
在一个更优选的实施方案中，提供了诊断组合物，其包含至少两种淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段以及可接受的载体和/或赋形剂，其中该淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段选自：
[0190]
a)包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)；和
[0191]
b)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)。
[0192]
在一些实施方案中，提供了诊断组合物，其包含至少两种淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段以及可接受的载体和/或赋形剂，其中该淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原
结合片段选自：
[0193]
a)包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)；和/或
[0194]
b)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)；和/或
[0195]
c)包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：150的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：154的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
[0196]
在一些具体实施方案中，提供了包含上述a)和b)或者上述a)和c)的诊断组合物。
[0197]
在一些实施方案中，提供了诊断组合物，其包含至少两种淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段以及可接受的载体和/或赋形剂，其中该淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段选自：
[0198]
a)包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)；和
[0199]
b)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
[0200]
在一些实施方案中，提供了诊断组合物，其包含与至少一种本领域已知的淀粉样蛋白-β抗体以及可接受的载体和/或赋形剂组合的至少一种本发明的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，特别是显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本领域已知的淀粉样蛋白-β抗体是可商购获得的aβ结合抗体。在一些实施方案中，抗体选自：nab228(invitrogen)、6e10(covance)、2c8(invitrogen)、4g8(chemicon)、w0-2(merck)和de2(chemicon)。这样的抗体可用作捕获抗体，并且本发明的抗体可用作检测抗体(或反之亦然)。
[0201]
在一些实施方案中，提供了包含以下的缀合的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段：本文中所述的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段，和缀合分子。本发明的缀合物可被称为免疫缀合物。根据本发明可使用任何合适的缀合分子。一些合适的实例包括但不限于：酶(例如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶)、亲和素、链霉亲和素、生物素、蛋白a/g、磁珠、荧光团、放射性同位素(即放射性缀合物)、核酸分子、可检测标记、治疗剂、毒素和血脑屏障穿透部分。缀合方法是本领域公知的，并且用于使抗体与标记或其他分子缀合的数种技术是可商购获得的。缀合通常是通过包含在本发明结合分子内的氨基酸残基(例如赖氨酸、组氨酸或半胱氨酸)的。它们可依赖于例如nhs(琥珀酰亚胺)酯法、异硫氰酸酯法、碳二亚胺法和高碘酸盐法的方法。缀合可通过例如产生融合蛋白来实现。这在结合分子与另
一蛋白质分子缀合的情况下是合适的。因此，可形成合适的遗传构建体，其允许本发明的结合分子与标记或其他分子的融合体的表达。缀合可以是通过合适的接头部分的，以确保抗体与缀合分子(例如可检测标记)的合适空间分离。但是，可能并非在所有情况下都需要接头。
[0202]
在一些实施方案中，提供了诊断组合物，其包含本文中所述的分离的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段，以及可接受的载体和/或赋形剂。
[0203]
本发明的结合分子，特别是淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段具有许多用途。它们可用于研究用途，特别是作为分析工具或参考分子。它们可用于体外或体内检测淀粉样蛋白-β聚集体，包括斑块。结合分子可用于对淀粉样蛋白-β聚集体进行染色。例如，结合分子可用于死后脑组织中的组织化学检测。结合分子通常被标记并且可如本文中所讨论的被直接或间接标记。这样的用途可针对任何合适的动物，特别是哺乳动物进行。优选的对象是人和小鼠。
[0204]
在一些实施方案中，提供了诊断淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症的方法，该淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症例如阿尔茨海默病(ad)、轻度认知损伤(mci)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、心脏淀粉样变性、脑淀粉样血管病(caa)、多发性硬化、帕金森病(pd)、帕金森病痴呆(pdd)、路易体痴呆、als(肌萎缩侧索硬化)、成人发病糖尿病、包涵体肌炎(ibm)、眼部淀粉样变性、青光眼、黄斑变性、网格状营养不良、视神经炎、强直性肌营养不良和肝功能障碍或衰竭。该方法包括向对象施用本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段或者本发明的诊断组合物。更特别地，在一些实施方案中，提供了诊断淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症的方法，其中所述淀粉样蛋白β相关疾病、障碍或病症选自阿尔茨海默病(ad)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病(caa)、强直性肌营养不良和路易体痴呆。对象通常是哺乳动物对象，优选人。对于体内方法，结合分子通常用合适的标记进行标记以用于显现目的。
[0205]
在某些实施方案中，本发明的和如本文中提供的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可用于检测生物样品中的aβ的存在。在某些实施方案中，本发明的和如本文中提供的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可用于检测体液样品中的aβ的存在。术语“体液样品”包括通过进一步处理例如浓缩、离心和添加另外的物质(例如缓冲剂和防腐剂)的来源于体液的样品。在一些具体实施方案中，如本文中提供的本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可用于检测生物样品中的病理性aβ的存在。本文中使用的术语“检测”涵盖定量和/或定性检测。生物样品通常获自哺乳动物，特别是人。生物样品通常是来自怀疑患有根据本文中所述方法中任一种的淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症或者正在针对其进行筛查的对象的临床样品。样品的获得不形成本发明的方法的必需步骤，因此本发明的方法可从已经分离的样品开始。获得样品可根据由所讨论的样品确定的任何合适的技术来进行。在某些实施方案中，生物样品包括来自对象的细胞、组织和/或体液(鼻分泌物、尿、血液等)。合适的生物样品的一些实例包括脑脊液(cerebrospinal fluid，csf)、组织间液(interstitial fluid，isf)、脑的细胞或组织(例如，脑皮质或海马)。合适的体液的一些实例包括脑脊液(csf)、组织间液(isf)、血液(包括全血和衍生物，例如血清和血浆)、尿和鼻分泌物。在一些实施方案中，生物样品是脑脊液(csf)或血液。在一些实施方案中，生物样品是血浆。
[0206]
在某些实施方案中，提供了用于检测生物样品中的aβ的方法，其中该方法包括使生物样品与如本文中提供的本发明的结合分子，特别是aβ抗体或其抗原结合片段在允许结合分子，特别是aβ抗体或其抗原结合片段与aβ结合的条件下接触，以及检测在结合分子，特别是aβ抗体或其抗原结合片段与aβ之间是否形成复合物。如果检测到复合物的形成，则可确定样品包含aβ。在不存在复合物形成或复合物形成低于预定阈值的情况下，可确定样品不含aβ。这样的方法可以是体外或体内方法。此外，受试生物样品中在结合分子、aβ抗体或其抗原结合片段与aβ之间形成的复合物可与对照生物样品(例如来自一个或更多个健康对象的生物样品)中形成的复合物进行比较。也可量化受试生物样品中在结合分子、aβ抗体或其抗原结合片段与aβ之间形成的复合物的量并将其与对照生物样品(例如来自一个或更多个健康对象的生物样品)中形成的复合物的量或已知在健康对象中形成的复合物的平均量进行比较。
[0207]
在某些实施方案中，本发明的和如本文中提供的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可用于检测生物样品中的aβ的存在。在一些具体实施方案中，本发明的和如本文中提供的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可用作用于免疫测定(包括但不限于elisa、msd(meso scale discovery inc.，usa)、luminex(luminex corp.，usa)、alphalisa(perkinelmer，inc.，usa)、gyrolab(gyros protein technologies ab，sweden)、simoa(quanterix corp.，usa)、gyros
tm
(given et al.，2012)、singulex erenna(emd millipore，corp.，usa)、ir-sense/immuno-infrared测定(nabers et al，2016)、mitomi(piraino et al，2016)、与液相色谱质谱组合的免疫沉淀(ip lc-ms/ms；shimadzu，germany)、表面等离子体共振(surface plasmon resonance，spr；cytiva europe，switzerland)、原子力显微镜(atomic force microscope，afm)(kiio and park，2020)或任何其他依赖于抗体进行靶免疫捕获和/或检测的测定技术或试剂盒)的测定试剂、阳性对照、生物标志物检测试剂和/或校准物。因此，结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可用于验证/筛选结合分子、aβ或aβ片段、aβ抗体或其抗原结合片段的测定。本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可用作检测工具和/或阳性对照，因为它们以选择性方式与样品中的所有aβ物质结合。在一个实施方案中，至少两种淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段可用作如上列出的免疫测定的测定试剂、阳性对照、生物标志物检测试剂和/或校准物。在一个实施方案中，至少两种淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段可用于免疫测定，优选导致抗体的夹心配对的夹心测定(elisa)，其中优选地抗体选自aci-24-41f12-ab3、aci-31-25b1-ab2和aci-8041-5a2d4-ab1，甚至更优选地抗体是aci-24-41f12-ab3和aci-31-25b1-ab2。在一个实施方案中，该至少两种淀粉样蛋白-β抗体或其抗原结合片段可用于导致抗体的夹心配对的夹心测定(elisa)，其中一种抗体或其抗原结合片段用于捕获靶标(包括但不限于aβ)，优选aci-31-25b1-ab2，并且其中另一种抗体或其抗原结合片段用于检测所捕获的靶标，优选aci-24-41f12-ab3，更优选与可检测标记缀合的aci-24-41f12-ab3。
[0208]
本发明涉及检测获自对象的样品中的淀粉样蛋白-β的方法，该方法包括：
[0209]
a.用淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段捕获淀粉样蛋白-β，该淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段与溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质选择性结合，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，以及
[0210]
b.用淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段检测捕获的淀粉样蛋白-β，所述淀
粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段与溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质选择性结合，而与所述淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关
[0211]
其中捕获(a)和检测(b)抗体或其抗原结合片段中的至少一者或两者显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性，特别是与可溶性appα无交叉反应性。捕获抗体和检测抗体中的一者或两者可以是本发明的抗体。可提供捕获抗体以用于连接或附接至固体支持物。检测抗体可与合适的标记缀合。本文中描述了缀合的抗体，该描述适用于必要的修改。
[0212]
在一些实施方案中，捕获抗体和检测抗体二者均显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性，特别是与可溶性appα无交叉反应性。在另一些实施方案中，捕获抗体和检测抗体或其抗原结合片段中的一者显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)的交叉反应性。交叉反应性可以是低的或高的。另一抗体或其抗原结合片段显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性。
[0213]
在一些实施方案中，将捕获抗体或抗原结合片段固定在固体支持物，例如孔(例如多孔板中的孔)的表面上。在一些实施方案中，将检测抗体或抗原结合片段用可检测标记进行标记。
[0214]
在一些实施方案中，捕获或检测(优选检测)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：11的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：12的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：13的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：17的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些实施方案中，捕获或检测(优选检测)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。在一些实施方案中，捕获或检测(优选检测)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。
[0215]
在一些实施方案中，捕获或检测(优选捕获)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0216]
a.包含seq id no：31的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：32的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：33的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：35的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：36的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：37的氨基酸序列的vl-cdr3；或
[0217]
b.包含seq id no：151的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：152的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：153的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：155的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。
[0218]
优选的捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含上述a)。
[0219]
在一些实施方案中，捕获或检测(优选捕获)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0220]
a)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：34的序列的轻
链可变区(vl)；或
[0221]
b)包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)。
[0222]
在一些实施方案中，捕获或检测(优选捕获)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0223]
a)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)；和/或
[0224]
b)包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：150的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：154的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
[0225]
本发明还涉及检测获自对象的样品中的淀粉样蛋白-β的方法，该方法包括：
[0226]
a.用淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段捕获淀粉样蛋白-β，该淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段与溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质选择性结合，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，并且显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性，特别是与可溶性appα具有高交叉反应性；以及
[0227]
b.用淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段检测捕获的淀粉样蛋白-β，所述淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段与溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质选择性结合，而与所述淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，并且显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)的交叉反应性(低的或高的)，特别是与可溶性appα无交叉反应性。
[0228]
在一些实施方案中，将捕获抗体或抗原结合片段固定在固体支持物，例如孔(例如多孔板中的孔)的表面上。在一些实施方案中，捕获抗体和/或检测抗体或抗原结合片段对aβ具有高亲和力。在一些实施方案中，将检测抗体或抗原结合片段用可检测标记进行标记。在一些实施方案中，捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0229]
a.包含seq id no：31的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：32的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：33的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：35的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：36的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：37的氨基酸序列的vl-cdr3；或
[0230]
b.包含seq id no：151的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：152的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：153的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：155的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。
[0231]
优选的捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含上述a)。
[0232]
在一些实施方案中，捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0233]
a)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)；或
[0234]
b)包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：154的序列的
轻链可变区(vl)。
[0235]
在一些实施方案中，捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0236]
a)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)；和/或包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：150的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：154的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。在一些实施方案中，检测淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：11的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：12的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：13的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：17的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些实施方案中，检测淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。在一些实施方案中，检测淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。
[0237]
在一些实施方案中，本发明包括检测获自对象的样品中的淀粉样蛋白-β的方法，该方法包括用第一淀粉样蛋白-β结合抗体或其片段捕获淀粉样蛋白-β的步骤，以及用第二淀粉样蛋白-β结合抗体或其片段检测样品中的捕获的淀粉样蛋白-β的步骤，其中每种淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段独立地选自：aci-24-41f12-ab3、aci-31-25b1-ab2和aci-8041-5a2d4-ab1，优选地抗体是aci-24-41f12-ab3和aci-31-25b1-ab2，更优选与可检测标记缀合的aci-24-41f12-ab3。在本发明的另一个实施方案中，捕获淀粉样蛋白-β的步骤是用选自以下的第一淀粉样蛋白-β结合抗体或其片段进行的：aci-24-41f12-ab3、aci-31-25b1-ab2和aci-8041-5a2d4-ab1，优选地抗体是aci-24-41f12-ab3和aci-31-25b1-ab2，更优选aci-31-25b1-ab2。在本发明的另一个实施方案中，检测捕获的淀粉样蛋白β的步骤是用与可检测标记缀合并且选自以下的第二淀粉样蛋白-β结合抗体或其片段进行的：aci-24-41f12-ab3、aci-31-25b1-ab2和aci-8041-5a2d4-ab1，优选地抗体是aci-24-41f12-ab3和aci-31-25b1-ab2，更优选aci-24-41f12-ab3。在一些实施方案中，检测样品中的捕获的淀粉样蛋白-β的步骤是用第二淀粉样蛋白-β结合抗体或其片段进行的，其中每种淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段与本领域已知的可检测标记缀合。
[0238]
因此，本发明提供了检测获自对象的样品中的淀粉样蛋白-β的方法，该方法包括使该样品与本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段接触，以及检测抗体或其抗原结合片段的结合以检测该样品中的淀粉样蛋白-β。类似地，本发明提供了量化获自对象的样品中的淀粉样蛋白-β的方法，该方法包括使该样品与本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段接触，以及基于结合分子与淀粉样蛋白-β的结合进行量化。该方法可包括将该样品中的淀粉样蛋白-β水平与一个或更多个对照样品中的淀粉样蛋白-β水平进行比较。对照样品中的水平代表相对于其可确定受试样品中水平的已知水平。因此，对照样品不一
定与量化方法同时进行测试。然而，在一些实施方案中，参考水平是与受试样品平行确定的。例如，可进行定量elisa、elisa、msd(meso scale discovery inc.，usa)、luminex(luminex corp.，usa)、alphalisa(perkinelmer，inc.，usa)、gyrolab(gyros protein technologies ab，sweden)、simoa(quanterix corp.，usa)、gyros
tm
(given et al.，2012)、singulex erenna(emd millipore，corp.，usa)、ir-sense/immuno-infrared测定(nabers et al，2016)、mitomi(piraino et al，2016)、与液相色谱质谱组合的免疫沉淀(ip lc-ms/ms；shimadzu，germany)、表面等离子体共振(spr；cytiva europe，switzerland)、原子力显微镜(afm)(kiio and park，2020)。可生成标准曲线以允许基于aβ的稀释系列(系列稀释)进行量化。本发明的诊断组合物可用于这样的方法。并入了合适的捕获抗体和检测抗体或其抗原结合片段的本文中所述的夹心免疫测定可用于量化获自对象的样品中的淀粉样蛋白-β的方法。
[0239]
本发明还提供了用于诊断与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的方法，其包括使样品与本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段接触，并且将样品中的淀粉样蛋白-β水平与一个或更多个对照样品中的淀粉样蛋白-β水平进行比较。与基于健康对象的对照水平相比，样品中更高的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症。另外地或替代地，与患病对照(即来自患有与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的对象的一个或更多个样品)相比，样品中相似或更高的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症。本发明的诊断组合物可用于这样的方法。并入了合适的捕获抗体和检测抗体或其抗原结合片段的本文中所述的夹心免疫测定可用于诊断与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的方法。
[0240]
本发明的结合分子也可用于分类方法，例如，以指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的相对阶段。因此，本发明还提供了用于对与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症进行分类的方法，其包括：使来自对象的样品与本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段接触，以及将该样品中的淀粉样蛋白β水平与一个或更多个对照样品中的淀粉样蛋白β水平进行比较，以便对疾病进行分类。可使用表示不同疾病类别的一系列对照以便对样品进行分类。可基于与对照样品的最佳匹配来对受试样品进行分类。与基于健康对象的对照水平相比，样品中更高的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症。与某个疾病阶段的患病对照相比，样品中相似或更高的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的该阶段。这样的方法可相对于已知患有与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的对象和/或相对于尚未知道患有与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的对象进行。本发明的诊断组合物可用于这样的方法。并入了合适的捕获抗体和检测抗体或其抗原结合片段的本文中所述的夹心免疫测定可用于本发明的分类方法。
[0241]
本发明还提供了用于使用来自对象的样品在两个或更多个时间点监测与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的方法，该方法包括：使该样品与本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段接触，以及将样品中的淀粉样蛋白-β水平进行比较，其中与一个或更多个较早样品相比，较晚样品中更高的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的进展。类似地，本发明提供了用于使用来自对象的样品在两个或更多个时间点监测与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的方法，该方法包括：使该样
品与本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段接触，以及将样品中的淀粉样蛋白-β水平进行比较，其中与一个或更多个较早样品相比，较晚样品中更低的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的消退。这些方法还允许监测疾病进展的缺乏，其中与一个或更多个较早样品相比，较晚样品中的淀粉样蛋白-β水平无显著变化。这样的方法通常相对于已知患有与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的对象进行。本发明的诊断组合物可用于这样的方法。并入了合适的捕获抗体和检测抗体或其抗原结合片段的本文中所述的夹心免疫测定可用于本发明的监测方法。
[0242]
监测方法可用于确定特定治疗是否成功或相反。因此，本发明还提供了用于使用来自对象的样品在两个或更多个时间点监测与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的方法，该方法包括使该样品与本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段接触，其中与一个或更多个较早样品相比，较晚样品中更低的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症得到成功治疗。该治疗可以是任何合适的候选治疗剂，例如抗体或小分子治疗剂。这些方法还允许监测疾病进展的缺乏，其中与一个或更多个较早样品相比，较晚样品中的淀粉样蛋白-β水平无显著变化。在一些情况下，这也可被认为是得到成功治疗。实际上，与治疗之前的提高率相比，样品之间的aβ水平的提高率的下降也可被认为是指示得到成功治疗。这样的方法通常相对于已知患有与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的对象进行。与治疗之前的提高率相比，当治疗未提供样品之间的aβ水平的提高率的下降时，则可确定未得到成功治疗。本发明的诊断组合物可用于这样的方法。并入了合适的捕获抗体和检测抗体或其抗原结合片段的本文中所述的夹心免疫测定可用于本发明的监测治疗的方法。
[0243]
本发明的结合分子也可用于辅助治疗选择。因此，本发明提供了用于选择用于治疗与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的治疗的方法，该方法包括使在进行治疗之前和之后获取的样品与本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段接触，其中与在进行治疗之前获取的样品相比，在进行治疗之后获取的样品中更低的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症得到成功治疗，并且因此选择该治疗用于进行治疗。该治疗可以是任何合适的候选治疗剂，例如抗体或小分子治疗剂。也可选择阻止疾病进展的治疗，其中与一个或更多个较早样品相比，较晚样品中的淀粉样蛋白-β水平无显著变化。在一些情况下，这也可被认为是得到成功治疗。实际上，与治疗之前的提高率相比，样品之间的aβ水平的提高率的下降也可被认为是指示得到成功治疗，并且因此导致选择特定的治疗。这样的方法通常相对于已知患有与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的对象进行。与治疗之前的提高率相比，当治疗未提供样品之间的aβ水平的提高率的下降时，则可确定未得到成功治疗。不选择这样的治疗用于进行治疗。或者，与在进行治疗之前获取的样品相比，在进行治疗之后获取的样品中更高的淀粉样蛋白-β水平可指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症未得到成功治疗，并且因此不选择该治疗用于进行治疗。本发明的诊断组合物可用于这样的方法。并入了合适的捕获抗体和检测抗体或其抗原结合片段的本文中所述的夹心免疫测定可用于本发明的治疗选择方法(如应用于个体对象)。
[0244]
本发明的方法还可用于确定特定治疗在较大的对照研究(例如临床试验)的背景下是否成功或相反。因此，通常将这些方法应用于与未用治疗进行治疗的对象组进行比较的治疗对象组。在这样的背景下，未用治疗进行治疗的对照样品也可用于比较目的(安慰剂
组)。因此，本发明还提供了用于评估用于与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的候选治疗的方法，该方法包括在对一个或更多个对象进行治疗之后，使来自一个或更多个经治疗对象的样品与本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段接触，其中与来自未用治疗进行治疗的对象的相应样品中的水平相比，该样品中更低的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症得到成功治疗。该方法通常相对于多个(即至少两个)经治疗对象和多个对照对象进行。治疗组和对照组的大小可相同或可不同。在一些实施方案中，其各自可包含3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、10个或更多个、20个或更多个、50个或更多个对象。该治疗可以是任何合适的候选治疗剂，例如生物治疗剂，特别是抗体、疫苗或小分子治疗剂。该方法可在治疗组与安慰剂组之间的匹配样品中在多个时间点进行，以在限定的时间段内监测候选治疗的有效性。通常还获取初始治疗前样品。因此，该方法可包括在进行治疗之前，使来自一个或更多个经治疗对象和未用治疗进行治疗的对象的样品与本发明的结合分子，特别是抗体或抗原结合片段接触，以确定淀粉样蛋白-β的基础水平。“在进行治疗之前”意指在根据对象组施用治疗或安慰剂之前。因此，本发明的结合分子也可用于在临床试验的背景下辅助评估候选治疗。可选择提供成功治疗的候选治疗，并最终批准上市。本发明的诊断组合物可用于这样的方法。并入了合适的捕获抗体和检测抗体或其抗原结合片段的本文中所述的夹心免疫测定可用于本发明的治疗选择方法(如应用于临床试验)。
[0245]
根据所有相关方法，与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症可选自以下：阿尔茨海默病(ad)、轻度认知损伤(mci)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、心脏淀粉样变性、脑淀粉样血管病(caa)、多发性硬化、帕金森病、帕金森病痴呆(pdd)、路易体痴呆、als(肌萎缩侧索硬化)、成人发病糖尿病、包涵体肌炎(ibm)、眼部淀粉样变性、青光眼、黄斑变性、网格状营养不良、视神经炎、强直性肌营养不良和肝功能障碍或衰竭。在一些具体实施方案中，淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症是阿尔茨海默病(ad)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病(caa)、强直性肌营养不良或路易体痴呆。
[0246]
与多种方法一起使用的合适样品通常是如本文中所讨论的生物样品，特别是体液。合适的免疫测定形式是技术人员已知的，其包括但不限于elisa、msd(meso scale discovery inc.，usa)、luminex(luminex corp.，usa)、alphalisa(perkinelmer，inc.，usa)、gyrolab(gyros protein technologies ab，sweden)、simoa(quanterix corp.，usa)、gyros
tm
(given et al.，2012)、singulex erenna(emd millipore，corp.，usa)、ir-sense/immuno-infrared测定(nabers et al，2016)、mitomi(piraino et al，2016)、与液相色谱质谱组合的免疫沉淀(ip lc-ms/ms；shimadzu，germany)、表面等离子体共振(spr；cytiva europe，switzerland)、原子力显微镜(afm)(kiio and park，2020)。
[0247]
在一些实施方案中，本发明的结合分子、aβ抗体或其抗原结合片段是包含这样的结合分子、aβ抗体或其抗原结合片段的诊断试剂盒的一部分。这样的试剂盒可包含用于进行本文中提供的方法和/或测定的所有必要组分，例如如缓冲剂、可检测染料、实验室设备、反应容器、说明书等。结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可与如本文中所讨论的标记或其他分子缀合。根据每种相应的测定技术的要求，它们可用染料或标签(例如荧光团或荧光染料)进行标记或表达，或者与酶或固体支持物(例如测定芯片)偶联。在另一个实施方案
中，本发明的结合分子，特别是抗体或其抗原结合片段可与放射性同位素(即放射性缀合物)、核酸分子、可检测标记、治疗剂、毒素或与血脑屏障穿透部分缀合，形成免疫缀合物。试剂盒可用于进行本发明的任何方法，并且因此可并入进行那些方法所需的任何合适的组分，包括试剂。本发明还涉及包含本发明的aβ抗体或其抗原结合片段的试剂盒。试剂盒通常在合适的容器中包含本发明的aβ抗体或其抗原结合片段。aβ抗体或其抗原结合片段可以以准备应用的诊断组合物的形式提供，或者其可在具有用于重构产品的合适试剂(例如盐水溶液)的试剂盒中提供。该试剂盒可提供有使用说明书。因此，本发明的方法的讨论适用于必要的修改。还提供了用于进行本发明的夹心免疫测定的试剂盒。其并入了合适的捕获抗体和检测抗体或其抗原结合片段。因此，本发明涉及用于在获自对象的样品中检测淀粉样蛋白-β的试剂盒，该试剂盒包含：
[0248]
a.捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质选择性结合，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关；以及
[0249]
b.检测淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质选择性结合，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，
[0250]
其中捕获和检测抗体或其抗原结合片段中的至少一者显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性，特别是与可溶性appα无交叉反应性。
[0251]
一种或两种抗体可以是本发明的抗体。
[0252]
在一些实施方案中，将捕获抗体或抗原结合片段固定在固体支持物，例如孔(例如多孔板中的孔)的表面上，或者用固体支持物和/或用于将捕获抗体或抗原结合片段固定在固体支持物上的手段来提供捕获抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，将检测抗体或抗原结合片段用可检测标记进行标记，或者用标记和用于将抗体与该标记直接或间接缀合的手段来提供检测抗体或抗原结合片段。
[0253]
在一些实施方案中，捕获抗体和检测抗体二者均显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性，特别是与可溶性appα无交叉反应性。在另一些实施方案中，捕获抗体和检测抗体或其抗原结合片段中的一者显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)的交叉反应性。该交叉反应性可以是低的或高的。另一抗体或其抗原结合片段(捕获抗体或检测抗体)显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性。
[0254]
在一些实施方案中，捕获或检测(优选检测)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：11的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：12的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：13的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：17的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些实施方案中，捕获或检测(优选检测)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。在一些实施方案中，捕获或检测(优选检测)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。
[0255]
在一些实施方案中，捕获或检测(优选捕获)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0256]
a.包含seq id no：31的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：32的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：33的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：35的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：36的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：37的氨基酸序列的vl-cdr3；或
[0257]
b.包含seq id no：151的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：152的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：153的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：155的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。
[0258]
优选的捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含上述a)。
[0259]
在一些实施方案中，捕获或检测(优选捕获)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0260]
a)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)；或
[0261]
b)包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)。
[0262]
在一些实施方案中，捕获或检测(优选捕获)淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0263]
a)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)；和/或
[0264]
b)包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：150的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：154的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
[0265]
本发明还涉及用于检测获自对象的样品中的淀粉样蛋白-β的试剂盒，该试剂盒包含：
[0266]
a.捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质选择性结合，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，并且显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)无交叉反应性，特别是与可溶性appα具有高交叉反应性；以及
[0267]
b.检测淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与溶液中的任何淀粉样蛋白-β肽或物质选择性结合，而与该淀粉样蛋白-β肽或物质的构象状态无关，并且显示出与可溶性淀粉样前体蛋白(app)的交叉反应性(低的或高的)，特别是与可溶性appα无交叉反应性。
[0268]
在一些实施方案中，将捕获抗体或抗原结合片段固定在固体支持物，例如孔(例如多孔板中的孔)的表面上，或者用固体支持物和/或用于将捕获抗体或抗原结合片段固定在
固体支持物上的手段来提供捕获抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，检测抗体或抗原结合片段对aβ具有高亲和力。在一些实施方案中，将检测抗体或抗原结合片段用可检测标记进行标记，或者用标记和用于将抗体与该标记直接或间接缀合的手段来提供检测抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0269]
a.包含seq id no：31的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：32的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：33的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：35的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：36的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：37的氨基酸序列的vl-cdr3；或
[0270]
b.包含seq id no：151的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：152的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：153的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：155的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：156的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：157的氨基酸序列的vl-cdr3。
[0271]
优选的捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含上述a)。
[0272]
在一些实施方案中，捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0273]
a)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)；或
[0274]
b)包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)。
[0275]
在一些实施方案中，捕获淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：
[0276]
a)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)；和/或
[0277]
b)包含seq id no：150的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：150的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：154的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：154的氨基酸序列具有至少98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
[0278]
在一些实施方案中，检测淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：11的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：12的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：13的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：17的氨基酸序列的vl-cdr3。在一些实施方案中，检测淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。在一些实施方案中，检测淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。
[0279]
本发明还可在以下编号的条款中被限定：
[0280]
1.抗体或其抗原结合片段，包含：包含seq id no：11的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：12的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：13的氨基酸序列的vh-cdr3；包
含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：17的氨基酸序列的vl-cdr3，其中所述抗体或其抗原结合片段与淀粉样蛋白-β结合。
[0281]
2.条款1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段与人淀粉样蛋白-β seq id no：1的第1至8位氨基酸残基(seq id no：2)结合。
[0282]
3.条款1至2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
[0283]
4.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。
[0284]
5.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)。
[0285]
6.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：包含seq id no：20的氨基序列的重链(hc)，包含seq id no：21的氨基序列的轻链(lc)。
[0286]
7.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：包含seq id no：22的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：23的氨基序列的轻链(lc)。
[0287]
8.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：包含seq id no：24的氨基序列的重链(hc)，包含seq id no：25的氨基序列的轻链(lc)。
[0288]
9.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于在对象中诊断淀粉样蛋白-β相关疾病或病症。
[0289]
10.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于检测样品中的淀粉样蛋白-β。
[0290]
11.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于检测样品中的淀粉样蛋白-β，其中所述样品是唾液、尿、血液、脑和/或csf样品，更特别地是血液和/或csf样品。
[0291]
12.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于诊断淀粉样蛋白-β相关疾病或病症，其中所述淀粉样蛋白-β相关疾病或病症选自阿尔茨海默病(ad)、轻度认知损伤(mci)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、心脏淀粉样变性、脑淀粉样血管病(caa)、多发性硬化、帕金森病、路易体痴呆、als(肌萎缩侧索硬化)、成人发病糖尿病、包涵体肌炎(ibm)、眼部淀粉样变性、青光眼、黄斑变性、网格状营养不良和视神经炎。
[0292]
13.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于诊断淀粉样蛋白-β相关疾病或病症，其中所述淀粉样蛋白-β相关疾病或病症是阿尔茨海默病(ad)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病(caa)、强直性肌营养不良、路易体痴呆。
[0293]
14.前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于诊断淀粉样蛋白-β相关疾病或病症，其中所述淀粉样蛋白-β相关疾病或病症是阿尔
茨海默病(ad)。
[0294]
15.条款1至13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于诊断淀粉样蛋白-β相关疾病或病症，其中所述淀粉样蛋白-β相关疾病或病症是唐氏综合征。
[0295]
16.诊断组合物，其包含分离的前述条款中任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及可接受的载体和/或赋形剂。
[0296]
17.分离的核酸，其编码条款1至15中任一项所述的抗体。
[0297]
18.核酸，其包含seq id no：18或seq id no：19中提供的核苷酸序列。
[0298]
19.重组载体，其包含条款17或18所述的核酸。
[0299]
20.宿主细胞，其包含条款17或18所述的核酸和/或条款19所述的载体。
[0300]
21.分离的宿主细胞，其表达条款1至15中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
[0301]
22.用于产生分离的结合分子，特别是抗体的方法，其包括以下步骤：a)在适合于产生所述抗体或其抗原结合片段的条件下培养条款20或21所述的宿主细胞，以及b)分离所述抗体或其抗原结合片段。
[0302]
本发明还可在以下编号的条款中被限定：
[0303]
1.淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，包含：
[0304]
a)包含seq id no：11的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：12的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：13的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：15的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：16的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：17的氨基酸序列的vl-cdr3；或
[0305]
b)包含seq id no：31的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：32的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：33的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：35的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：36的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：37的氨基酸序列的vl-cdr3；或
[0306]
c)包含seq id no：41的氨基酸序列的vh-cdr1；包含seq id no：42的氨基酸序列的vh-cdr2；包含seq id no：43的氨基酸序列的vh-cdr3；包含seq id no：45的氨基酸序列的vl-cdr1；包含seq id no：46的氨基酸序列的vl-cdr2；以及包含seq id no：47的氨基酸序列的vl-cdr3。
[0307]
2.条款1所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其所述抗原结合片段包含：
[0308]
a)包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；或者
[0309]
b)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；或者
[0310]
c)包含seq id no：40的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：40的氨基酸序列具有至少93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)。
[0311]
3.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其所述抗原结合片段包含：
[0312]
a)包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：10的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)；或者
[0313]
b)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：30的氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：34的氨基酸序列具有至少96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)；或者
[0314]
c)包含seq id no：40的序列的重链可变区(vh)或与seq id no：40的氨基酸序列具有至少93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链可变区(vh)；以及包含seq id no：44的序列的轻链可变区(vl)或与seq id no：44的氨基酸序列具有至少97％、98％或99％序列同一性的轻链可变区(vl)。
[0315]
4.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其所述抗原结合片段包含：
[0316]
a)包含seq id no：10的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：14的序列的轻链可变区(vl)；或
[0317]
b)包含seq id no：30的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：34的序列的轻链可变区(vl)；或
[0318]
c)包含seq id no：40的序列的重链可变区(vh)和包含seq id no：44的序列的轻链可变区(vl)。
[0319]
5.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：
[0320]
a)包含seq id no：20的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：21的氨基序列的轻链(lc)；或
[0321]
b)包含seq id no：22的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：23的氨基序列的轻链(lc)；或
[0322]
c)包含seq id no：24的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：25的氨基序列的轻链(lc)；或
[0323]
d)包含seq id no：27的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：28的氨基序列的轻链(lc)；或
[0324]
e)包含seq id no：38的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：39的氨基序列的轻链(lc)；或
[0325]
f)包含seq id no：48的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：49的氨基序列的轻链(lc)；或
[0326]
g)包含seq id no：50的氨基序列的重链(hc)和包含seq id no：51的氨基序列的轻链(lc)。
[0327]
6.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与seq id no：1的第1至5位(seq id no：7)、第1至8位(seq id no：2)、第22至35位(seq id no：29)或第26至34位(seq id no：8)氨基酸残基内的表位结合或与非人淀粉样蛋白-β中的等同表位结合。
[0328]
7.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段是鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体或者其抗原结合片段。
[0329]
8.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段是igm、igg1、igg2、igg2a、igg2b、igg3或igg4抗体或者其抗原结合片段。
[0330]
9.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与另一种分子缀合，特别是与可检测标记缀合。
[0331]
10.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于在对象中诊断淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症。
[0332]
11.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于检测生物样品中的淀粉样蛋白-β。
[0333]
12.条款11所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，其中所述生物样品是体液样品或缓冲溶液。
[0334]
13.条款1至12中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于检测体液样品中的淀粉样蛋白-β，其中所述体液样品是唾液、尿、鼻分泌物、血液(包括全血、血浆和血清，优选血浆)、脑和/或csf样品、脑和/或isf样品，更特别地是血液、脑、csf和/或isf样品。
[0335]
14.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于诊断淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症，其中所述淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症选自阿尔茨海默病(ad)、轻度认知损伤(mci)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、心脏淀粉样变性、脑淀粉样血管病(caa)、多发性硬化、帕金森病、帕金森病痴呆(pdd)、路易体痴呆、als(肌萎缩侧索硬化)、成人发病糖尿病、包涵体肌炎(ibm)、眼部淀粉样变性、青光眼、黄斑变性、网格状营养不良、视神经炎、强直性肌营养不良和肝功能障碍或衰竭。
[0336]
15.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于诊断淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症，其中所述淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症是阿尔茨海默病(ad)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病(caa)、强直性肌营养不良或路易体痴呆。
[0337]
16.前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于诊断淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症，其中所述淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症是阿尔茨海默病(ad)。
[0338]
17.条款1至15中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于诊断淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症，其中所述淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症是唐氏综合征(ds)。
[0339]
18.条款1至15中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段用于诊断淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症，其中所述淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症是唐氏综合征相关阿尔茨海默病。
[0340]
19.检测获自对象的样品中的淀粉样蛋白-β的方法，所述方法包括使所述样品与前述条款中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段接触，以及检测所述抗体或其抗原结合片段的结合以检测所述样品中的淀粉样蛋白-β。
[0341]
20.量化获自对象的样品中的淀粉样蛋白-β的方法，所述方法包括使所述样品与条款1至18中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段接触，以及基于所述抗体或其抗原结合片段与淀粉样蛋白-β的结合水平量化样品中的淀粉样蛋白-β。
[0342]
21.用于诊断与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的方法，其包括进行条款19或20所述的方法，其中与基于健康对象的对照水平相比，所述样品中更高的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症。
[0343]
22.用于诊断与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的方法，其包括进行条款19或20所述的方法，其中与患病对照水平相比，所述样品中相似或更高的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症。
[0344]
23.用于对与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症进行分类的方法，其包括：
[0345]
a.进行条款21和/或22所述的方法，
[0346]
b.对所述与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症进行分类。
[0347]
24.用于使用来自对象的样品在两个或更多个时间点监测与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的方法，其包括使所述样品与条款1至18中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段接触，其中：
[0348]
a.与一个或更多个较早样品相比，较晚样品中更高的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的进展；
[0349]
b.与一个或更多个较早样品相比，较晚样品中更低的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的消退；和/或
[0350]
c.与一个或更多个较早样品相比，较晚样品中无显著变化的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症缺乏进展。
[0351]
25.用于选择用于治疗与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的治疗的方法，其包括使在用所述治疗进行治疗之前和之后获取的样品与条款1至18中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段接触，其中：
[0352]
a.与在进行治疗之前获取的样品相比，在进行治疗之后获取的样品中更低的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症得到成功治疗，并且因此选择所述治疗用于进行治疗；
[0353]
b.与在进行治疗之前获取的样品相比，在进行治疗之后获取的样品中无显著变化的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症得到成功治疗，并且因此选择所述治疗用于进行治疗；
[0354]
c.与在进行治疗之前获取的样品相比，在进行治疗期间获取的样品之间的淀粉样蛋白-β水平的提高率下降指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症得到成功治疗，并且因此选择所述治疗用于进行治疗；
[0355]
d.与在进行治疗之前获取的样品相比，在进行治疗之后获取的样品中更高的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症未得到成功治疗，并且因此不选择所述治疗用于进行治疗；或者
[0356]
e.与在进行治疗之前获取的样品相比，在进行治疗期间获取的样品之间的淀粉样蛋白-β水平的提高率未下降指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症未得到成功治疗，并且因此不选择所述治疗用于进行治疗。
[0357]
26.用于评估用于与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症的候选治疗的方法，所述方法包括在对一个或更多个对象进行治疗之后，使来自一个或更多个经治疗对象的样品与条款1至18中任一项所述的抗体或抗原结合片段接触，其中与来自未用所述治疗进行治疗的对象的相应样品中的水平相比，所述样品中更低的淀粉样蛋白-β水平指示与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症得到成功治疗。
[0358]
27.条款26所述的方法，其在治疗组与安慰剂组之间的匹配样品中在多个时间点进行，以在限定的时间段内监测所述候选治疗的有效性。
[0359]
28.条款26或27所述的方法，其包括在分别用所述治疗或安慰剂进行治疗之前，使来自所述一个或更多个经治疗对象和所述未用所述治疗进行治疗的对象的样品与条款1至18中任一项所述的抗体或抗原结合片段接触，以确定淀粉样蛋白-β的基础水平。
[0360]
29.根据条款19至28中任一项所述的方法，其中所述与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍和/或病症选自阿尔茨海默病(ad)、轻度认知损伤(mci)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、心脏淀粉样变性、脑淀粉样血管病(caa)、多发性硬化、帕金森病、帕金森病痴呆(pdd)、路易体痴呆、als(肌萎缩侧索硬化)、成人发病糖尿病、包涵体肌炎(ibm)、眼部淀粉样变性、青光眼、黄斑变性、网格状营养不良、视神经炎、强直性肌营养不良和肝功能障碍或衰竭。
[0361]
30.根据条款29所述的方法，其中淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症是阿尔茨海默病(ad)、唐氏综合征(ds)、唐氏综合征相关阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病(caa)、强直性肌营养不良或路易体痴呆。
[0362]
31.根据条款29或30所述的方法，其中淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症是阿尔茨海默病(ad)。
[0363]
32.根据条款29或30所述的方法，其中淀粉样蛋白-β相关疾病、障碍或病症是唐氏综合征(ds)。
[0364]
33.诊断组合物，其包含条款1至18中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段以及可接受的载体和/或赋形剂。
[0365]
34.核酸，其编码条款1至18中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段。
[0366]
35.核酸，其包含seq id no：18、seq id no：19、seq id no：52、seq id no：53、seq id no：54或seq id no：55中提供的核苷酸序列。
[0367]
36.重组载体，其包含条款34或35所述的核酸。
[0368]
37.宿主细胞，其包含条款34或35所述的核酸和/或条款36所述的载体。
[0369]
38.分离的宿主细胞，其表达条款1至18中任一项所述的淀粉样蛋白-β结合抗体或抗原结合片段。
[0370]
39.用于产生淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段的方法，其包括以下步骤：
[0371]
a.在适合于产生所述淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段的条件下培养条款37或38所述的宿主细胞，以及
[0372]
b.回收所述淀粉样蛋白-β结合抗体或其抗原结合片段。
[0373]
40.用于诊断与淀粉样蛋白-β相关的疾病、障碍或病症的试剂盒，或者用于条款19至32中任一项所述的方法的试剂盒，其包含根据条款1至18中任一项所述的淀粉样蛋白-β
24-41f12-ab3(鼠igg2a同种型和嵌合小鼠/人igg1同种型)，或者使用以四棕榈酰化人aβ22-35肽作为抗原的脂质体疫苗来产生aci-31-25b1-ab2(鼠igg2b/λ、鼠igg2a/λ和嵌合小鼠/人igg1同种型)和aci-31-30c11-ab1(鼠igg2b)，或者使用以四棕榈酰化人aβ1-23肽作为抗原的脂质体疫苗来产生aci-8037-103h5-ab2(鼠igg2a)和aci-8037-109f4-ab1(鼠igg2a)，或者使用以四棕榈酰化人aβ5-23肽作为抗原的脂质体疫苗来产生aci-8039-306h5-ab1(鼠igg2a)、aci-8039-307f7-ab2(鼠igg2a)和aci-8039-309d9-ab2(鼠igg2a)，或者使用以四棕榈酰化人aβ10-29肽作为抗原的脂质体疫苗来产生aci-8041-1f11b5-ab1(鼠igg2a)、aci-8041-2b9h5-ab1(鼠igg2a)、aci-8041-3g11b3-ab1(鼠igg2a)、aci-8041-4g6d2-ab1(鼠igg2a)、aci-8041-5a2d4-ab1(鼠igg2a)、aci-8041-5a6h9-ab1(鼠igg2a)、aci-8041-6c3c4-ab1(鼠igg2a)、aci-8041-9d7e1-ab1(鼠igg2a)和aci-8041-10h3b11-ab1(鼠igg2a)。小鼠(c57bl/6，9周龄，雌性)通过皮下(s.c.)注射用疫苗注射三次，其中在每次免疫接种之间间隔两周(在第0、14和28天)。在第一次免疫接种之前7天以及在每次免疫接种之后7天(在第7、21和35天)收集血液样品并制备血浆。在最后一次出血之后，基于疫苗应答选择小鼠，并在研究开始之后65天将脾细胞用于与小鼠骨髓瘤细胞融合。选择与靶标结合的杂交瘤，进行亚克隆以获得单克隆抗体，然后针对靶标结合特性进行排序以选择杂交瘤克隆用于测序和重组抗体产生。以下数据描述了aci-24-41f12-ab2、杂交瘤来源的鼠igg2b/κ抗体以及重组鼠igg2a/κ抗体(以下称为aci-24-41f12-ab3(igg2a同种型))和重组嵌合小鼠/人igg1同种型(以下称为aci-24-41f12-ab3(higg1同种型))(其与aci-24-41f12-ab2抗体具有相同可变重(vh)链序列和可变轻(vl)链序列以及结合特性(数据未示出))的特性。以下数据还描述了作为鼠igg2a/λ形式的aci-31-25b1-ab2，以及具有鼠igg2a同种型恒定区重链和k恒定区轻链(表5)的aci-31-30c11-ab1、aci-8037-103h5-ab2、aci-8037-109f4-ab1、aci-8039-306h5-ab1、aci-8039-307f7-ab2、aci-8039-309d9-ab2、aci-8041-1f11b5-ab1、aci-8041-2b9h5-ab1、aci-8041-3g11b3-ab1、aci-8041-4g6d2-ab1、aci-8041-5a2d4-ab1、aci-8041-5a6h9-ab1、aci-8041-6c3c4-ab1、aci-8041-9d7e1-ab1和aci-8041-10h3b11-ab1的一些特性。
[0396]
实施例2.用于测定的aβ1-42的制备
[0397]
将aβ1-42冻干粉末(bachem)在六氟异丙醇(hfip，sigma)中重构至1mm。将肽溶液在室温下声处理15分钟，搅拌过夜，并将等分试样制备到非硅化微量离心管中。然后在氩气流下蒸发hfip。将所得肽膜真空干燥10分钟并储存在-80℃下直至使用。或者，为了测定溶液中的靶标捕获，使用aβ1-42肽的生物素化形式。这以与上述类似的方式制备。
[0398]
实施例3.靶标结合
[0399]
通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay，elisa)评价抗体靶标结合。简言之，将nunc maxisorp 96孔板(nunc)在4℃下用50μl的在pbs中稀释的10μg/ml aβ1-42或牛血清白蛋白(bovine serum albumin，bsa，sigma)包被18小时。在选择的测定中，另外地由如上所述的包被孔但以4μg/ml(0.04μm)包含全长sappα片段(sigma)。然后将板用300μl的包含0.05％吐温20(millipore)的pbs洗涤4次。为了封闭与板的非特异性结合，将新鲜制备的包含0.05％吐温20和1％bsa的pbs溶液添加至每个孔中(100μl/孔)，并将板在37℃下孵育1小时。将一抗在包含1％bsa和0.05％吐温20的pbs中稀释至100nm，随后一式两份进行3倍连续稀释。将溶液以50μl/孔添加至板，并在37℃下孵育1小时。随后，将板用
300μl的包含0.05％吐温20的pbs洗涤4次。然后将板与经辣根过氧化物酶(hrp)缀合的山羊抗小鼠第二igg(abcam)一起在37℃下孵育1小时。在最后的洗涤步骤(用300μl的包含0.05％吐温20的pbs洗涤4次)之后，将板与3，3’，5，5
’‑
四甲基联苯胺(tmb)底物(bd biosciences)一起孵育，并用终止液(sigma)终止反应。最后，使用tecan infinite读板器在450nm吸收波长处读取光密度(o.d.)。测量值表示为来自重复运行的平均o.d.
±
1平均值的标准偏差(s.d.)。
[0400]
elisa测定用于评价抗体aci-24-41f12-ab3(重组鼠igg2a同种型，也称为aci-24-41f12-ab3-recl)、抗体aci-31-25b1-ab2(鼠igg2a/λ同种型)和抗体aci-31-30c11-ab1(鼠igg2a同种型)与aβ1-42的结合。抗体aci-24-41f12-ab3以66pm的kd与aβ1-42结合，并且在相同的蛋白质浓度下未观察到对bsa的交叉反应性(图1)。将该测定重复至少四个独立的次数，具有可比较的结果。抗体aci-31-25b1-ab2以41pm的kd与aβ1-42结合(图2)，并且抗体aci-31-30c11-ab1以196pm的kd与aβ1-42结合(图3)，对bsa无交叉反应性。
[0401]
使用通过elisa的靶标捕获测定进一步评价抗体aci-31-25b1-ab2、aci-8041-1f11b5-ab1、aci-8041-9d7e1-ab1和aci-8041-10h3b11-ab1与溶液中的aβ1-42的结合，作为生物流体中可溶性靶标捕获的指示。简言之，将nunc maxisorp 96孔板(nunc)在4℃下用50μl的在碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液中稀释的5μg/ml山羊抗小鼠igg、fc-γ片段特异性抗体(jackson immune research)包被18小时。然后将板用300μl的包含0.05％吐温20(millipore)的pbs洗涤4次。为了封闭与板的非特异性结合，将新鲜制备的包含0.05％吐温20和1％bsa的pbs溶液添加至每个孔中(100μl/孔)，并将板在37℃下孵育1小时。将一抗在包含1％bsa和0.05％吐温20的pbs中以5μg/ml(33.3nm)稀释，向每孔添加50μl/孔，并将板在37℃下孵育1小时。随后，将板用300μl的包含0.05％吐温20的pbs洗涤4次。将在肽c末端生物素化的人aβ1-42在包含1％bsa和0.05％吐温20的pbs中稀释至10μg/ml(2.2μm)，随后进行3倍连续稀释，向每孔添加50μl并将板在37℃下孵育1小时。在用300μl的包含0.05％吐温20的pbs洗涤4次之后，将板与50μl/孔的在包含1％bsa和0.05％吐温20的pbs中1：200稀释的链霉亲和素-hrp(r&d systems)在环境温度下孵育45分钟。将板再次用300μl的包含0.05％吐温20的pbs洗涤4次，然后与50或100μl/孔的3，3’，5，5
’‑
四甲基联苯胺(tmb)酶底物(bd biosciences)在环境温度下孵育20或30分钟。用1.2m hcl(sigma)溶液终止反应。最后，使用tecan infinite读板器在450nm吸收波长处读取光密度(o.d.)。测量值表示为o.d.。抗体aci-31-25b1-ab2以312pm的kd捕获溶液中的aβ1-42(图4)，抗体aci-8041-1f11b5-ab1以343pm的kd捕获溶液中的aβ1-42(图5)，抗体aci-8041-9d7e1-ab1以1.1nm的kd捕获溶液中的aβ1-42(图6)，以及抗体aci-8041-10h3b11-ab1以2.6nm的kd捕获溶液中的aβ1-42(图7)。抗体aci-24-41f12-ab3、aci-31-30c11-ab1、aci-8037-103h5-ab2、aci-8037-109f4-ab1、aci-8039-306h5-ab1、aci-8039-307f7-ab2、aci-8039-309d9-ab2、aci-8041-2b9h5-ab1、aci-8041-3g11b3-ab1、aci-8041-4g6d2-ab1、aci-8041-5a2d4-ab1、aci-8041-5a6h9-ab1和aci-8041-6c3c4-ab1也捕获溶液中的aβ1-42(数据未示出)。
[0402]
此外，通过使用配对或夹心elisa测定选择的抗体以验证aβ1-42的结合和选择性。简言之，将nunc maxisorp 96孔板(nunc)在4℃下用50μl的在碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液中稀释的5μg/ml的捕获抗体包被18小时。然后将板如先前段落中所述进行洗涤和封闭。随后，在包含1％bsa和0.05％吐温20的pbs中，将分析物蛋白质稀释至666nm(对于aβ1-42(bachem)
和无规aβ1-42(anaspec))或165nm(对于sappα(sigma))，随后进行3倍连续稀释并向每孔添加50μl。将板在37℃下孵育2小时并且然后如前所述进行洗涤，并且然后在37℃下与50μl/孔的在包含1％bsa和0.05％吐温20的pbs中稀释至2μg/ml的生物素化检测抗体一起孵育1小时。随后的步骤与先前段落中针对aβ1-42靶标捕获描述的相同，除了与tmb的孵育仅以100μl/孔进行30分钟之外。
[0403]
使用选择的抗体对运行的夹心elisa检测到溶液中的aβ1-42，kd范围为100pm。图8a中示出了使用抗体aci-24-41f12-ab3、与sappα交叉反应的n端aβ1-42黏合剂和一种不结合sappα的中间结构域黏合剂的夹心elisa的一个实例的结果。这表明了针对可溶性aβ1-42的测定选择性高于sappα，并且针对可溶性aβ1-42的kd为9.7nm(图8b)。抗体aci-24-41f12-ab3(检测)与aci-31-25b1-ab2(捕获)的夹心配对检测了可溶性aβ1-42。另外，当使用由人aβ1-42肽中存在的所有相同的42个氨基酸组成的无规aβ1-42作为测定分析物时，信号的完全缺乏进一步证实了针对可溶性aβ1-42的选择性。
[0404]
实施例4.表位作图
[0405]
aci-24-41f12-ab2、aci-31-25b1-ab2和aci-31-30c11-ab1的表位作图是使用横跨aβ1-42的氨基酸序列的肽文库通过elisa进行的，该肽文库由每种有8、9或10个残基的33种重叠生物素化肽组成(mimotopes ltd.，melbourne，australia)。将生物素化aβ1-42(bachem)用作对照肽。表位作图elisa是根据制造商的说明进行的。简言之，将经链霉亲和素包被的板(nunc)在4℃下在50rpm的水平摇床上用pbs中的0.1％bsa封闭18小时。在用包含0.05％吐温20的pbs洗涤之后，将板用来自文库的在pbs中包含0.1％叠氮化钠的0.1％bsa中稀释至10μm的终浓度的每种肽在环境温度下包被1小时。在洗涤之后，将板与在pbs中包含0.1％叠氮化钠的2％bsa中稀释的1μg/ml的aci-24-41f12-ab2、aci-31-25b1-ab2或aci-31-30c11-ab1在环境温度下孵育1小时。将板再次洗涤并与经碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ap)缀合的山羊抗小鼠igg(jackson immune research)在环境温度下孵育1小时。在最后的洗涤之后，将板与磷酸酶底物(pnpp，sigma)一起孵育2小时，并使用读板器(tecan)在405nm处读取吸光度。
[0406]
为了确定在aβ1-42上aci-24-41f12-ab2和aci-31-25b1-ab2的表位，使用链霉亲和素板和用末端生物素标记的肽通过elisa对抗体与覆盖整个aβ1-42序列的33种重叠8、9或10聚体肽的结合进行分析(表1)。在其中未对表位进行定位的情况下，使用与上述相同的测定但使用与用于产生抗体的不同疫苗抗原序列相对应的靶肽来确定结合区。与全长aβ1-42的结合用作阳性对照。aci-24-41f12-ab2的表位被定位到n端区域并被鉴定为在aβ1-42肽序列的第1至8号残基内(更准确地说是在第1至5位氨基酸残基内，其中aβ1-42的第1和2位氨基酸是抗体结合所必需的)。aci-31-25b1-ab2的表位被定位到中间结构域区域并被鉴定为在aβ1-42肽序列的第22至35位残基内，更准确地说是在第26至34位氨基酸残基内(表1)。对于aci-8037-103h5-ab2和aci-8037-109f4-ab1，aβ1-42结合区是aβ1-5；对于aci-8039-306h5-ab1、aci-8039-307f7-ab2、aci-8039-309d9-ab2、aci-8041-1f11b5-ab1、aci-8041-2b9h5-ab1、aci-8041-3g11b3-ab1、aci-8041-4g6d2-ab1、aci-8041-5a2d4-ab1、aci-8041-5a6h9-ab1、aci-8041-6c3c4-ab1、aci-8041-9d7e1-ab1、aci-8041-10h3b11-ab1，aβ1-42结合区是aβ17-23；以及对于aci-31-30c11-ab1，aβ1-42结合区是aβ22-35。与在第1至16位残基与人aβ1-42共有相同氨基酸序列的sappα的交叉反应性另外地显示在表1中。对于
抗体aci-24-41f12-ab2、aci-8037-103h5-ab2和aci-8037-109f4-ab1确定了交叉反应性。对于抗体aci-31-25b1-ab2、aci-31-30c11-ab1、aci-8039-306h5-ab1、aci-8039-307f7-ab2、aci-8039-309d9-ab2、aci-8041-1f11b5-ab1、aci-8041-2b9h5-ab1、aci-8041-3g11b3-ab1、aci-8041-4g6d2-ab1、aci-8041-5a2d4-ab1、aci-8041-5a6h9-ab1、aci-8041-6c3c4-ab1、aci-8041-9d7e1-ab1和aci-8041-10h3b11-ab1未确定交叉反应性。
[0407]
表1.aβ1-42结合区和表位，以及与sappα的相互作用：
[0408]
[0409][0410]
nd：未确定，-：末结合， ：低结合， ：高结合
[0411]
实施例5.抗体可变区基因测序
[0412]
收获小鼠杂交瘤细胞并将其使用使rna酶失活的包含胍盐的裂解缓冲液进行裂解。然后通过向样品中添加不含rna酶的dna酶来消除基因组dna。在细胞破碎和基因组dna消除之后，用基于二氧化硅的亲和柱使用多次洗涤纯化rna，并将其使用不含rna酶的水从柱中洗脱。一旦提取rna，就通过分光光度法测量其纯度和浓度。在变性琼脂糖凝胶上评估rna的完整性，并使用逆转录酶(reverse transcriptase，rt)将rna逆转录成cdna。在添加反应混合物之前，将rna加热至70℃持续10分钟以破坏rna二级结构。将rt产物直接用于pcr扩增。对于cdna的高保真pcr扩增，将对应于不同的编码抗体的基因家族的每个可变区引物独立地与单独用于可变重链结构域(vh)和可变轻链结构域(vl)的恒定引物混合。最初，使用简并引物合并物(vh为12以及vl为12)，并且根据结果，使用第二合并物以获得pcr产物。在pcr反应之后，通过在用溴化乙锭染色的2％琼脂糖凝胶上进行凝胶电泳来分析产物。vl和vh的pcr产物在琼脂糖凝胶上使用三乙酸-edta(tae)单独纯化。然后使用染料终止子测序法对从凝胶上切下的经纯化片段进行测序。使用与用于pcr的那些引物相同的引物进行测序反应。在两个方向上进行测序以在两个末端处提供重叠。通过ig blast/kabat数据库分析测序数据。vh和vl的核苷酸序列显示在表2中。vh和vl的蛋白质序列及其互补决定区(cdr)显示在表3中。小鼠igg2b、小鼠igg2a和小鼠/人嵌合igg1的hc和lc的蛋白质序列显示在表4中。
[0413]
表2.重链可变结构域和轻链可变结构域(vh和vl)的核苷酸序列
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[0416]
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[0418]
[0419]
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表3.重链可变结构域和轻链可变结构域(vh和vl)的氨基酸序列
[0422]
[0423]
[0424]
[0425]
[0426]
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[0430]
[0431][0432]
表4.重链(hc)和轻链(lc)可变区和恒定区的氨基酸序列
[0433]
[0434]
[0435]
[0436][0437][0438]
表5.重链(hc)和轻链(lc)鼠igg2a/κ同种型恒定区的氨基酸序列。
[0439][0440]
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员所通常理解的相同的含义。出于与本发明相关的所有目的，本文中具体提及的所有出版物和专利均通过引用以其整体并入。
[0441]
本发明的范围不受本文中描述的一些具体实施方案的限制。实际上，通过前面的描述和附图，除本文中所述的那些之外的本发明的多种修改对于本领域技术人员来说将变得明显。这样的修改旨在落入所附权利要求书的范围内。此外，本文中描述的本发明的所有方面和实施方案被认为是广泛适用的并且可与任何和所有其他一致的实施方案组合，包括适当地从本发明的其他方面获得的那些(包括单独的(in isolation))。
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再多了解一些
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