一种干式化学发光法的检测系统的制作方法

1.本发明涉及医学体外免疫诊断技术领域，具体的是一种干式化学发光法的检测系统。


背景技术：

2.近年来,在体外诊断领域中化学发光技术突飞猛进，但传统的化学发光技术的包被载体为聚乙烯96孔板或磁性微球，抗原抗体在液体内反应，反应时间长，反应完成后需要进行3至5次的清洗，清洗未反应的抗体杂质，然后加入底物或反应液进行发光，再在仪器中测读光子数。
3.操作中的清洗会使用大量清洗液并产生大量具有潜在传染性的液体，清洗过程中在不同样本的反应液仪器中会使用同一清洗系统进行清洗，容易造成交叉污染，降低了检测准确率；而且整个过程耗时长，全自动仪器庞大。
4.荧光免疫层析技术具有速度快、操作简单的优点，但是荧光是激发光，发光强度低，检测偏差大，检测时荧光物质层叠在检测线和质控线上，激光照射时光线互相遮挡严重，两条线也互相影响，另外没有冲洗步骤，层析条上的杂蛋白等较多也能产生荧光，从而影响检测结果；检测结果时检测线和质控线荧光比值，相应的引入的随机误差大，检测不准确。
5.在此基础上，本发明提供一种干式化学发光法的检测系统来解决此问题。


技术实现要素：

6.针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明提供一种干式化学发光法的检测系统，有效解决了现在技术中反应时间长、容易交叉感染、检测不准确的技术问题。
7.一种干式化学发光法的检测系统，其特征在于，包括试剂卡，所述试剂卡包括干式层析试纸条和检测卡壳，检测卡壳扣合在干式层析试纸条的上方和下方，所述试剂卡配合有启动液和检测仪器。
8.优选的，所述干式层析试纸条包括背板，背板上从左至右依次经不干胶粘附有样本处理垫、底物标记垫、包被垫、吸水纸。
9.优选的，所述样本处理垫的制作是使用植物凝集素和0.1m的磷酸缓冲盐溶液浸泡玻璃纤维纸，然后烘干后制成。
10.优选的，所述底物标记垫的制作是将吖啶酯标记的被检测物抗体或抗原喷涂在玻璃纤维纸上，然后烘干后制成。
11.优选的，所述包被垫的制作是使用被检测物的抗体或偶联抗原溶液点涂在硝酸纤维素膜上，然后进行烘干，使其形成包被圆点。
12.优选的，所述检测卡壳包括底壳和上盖，所述底壳安装在背板下表面，所述上盖置于干式层析试纸条的上方。
13.优选的，所述上盖上开设有置于样本处理垫处的加样孔和包被垫处的检测孔。
14.优选的，所述启动液为含过氧化氢、氢氧化钾、增强剂的混合溶液。
15.优选的，所述检测仪器包括检测模块和计算模块。
16.本发明提供一种能够在各种场合方便快速准确检测的干式发光检测系统体外免疫诊断试剂的方法。只需要微量的样本，不需要冲洗等步骤即可快速检测出抗原或抗体含量的方法。本发明背景发光低，信噪比高发光反应干扰因素少，发光释放快速集中、发光效率高、发光强度大易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少，从而增加灵敏。
17.本发明的干式发光检测系统，既保留了化学发光检测的灵敏度高、准确度好和抗干扰能力强的优点，又利用层析技术进行分离又避免洗涤等复杂操作步骤，简单方便，检测速度快，整个操作过程中发光后的启动液也会由试纸卡内的吸水纸吸走，没有液体的排出，操作方便。
附图说明
18.图1为本发明试剂卡整体结构立体示意图。
19.图2为本发明以抗原标准品浓度与测定的光子数平均值分别取自然对数绘制的标准曲线图。
具体实施方式
20.有关本发明的前述及其他技术内容、特点与功效，在以下配合参考附图1对实施例的详细说明中，将可清楚的呈现。以下实施例中所提到的结构内容，均是以说明书附图为参考。
21.下面将参照附图描述本发明的各示例性的实施例。
22.本发明为一种干式化学发光法的检测系统，包括试剂卡，而试剂卡包括干式层析试纸条和检测卡壳，干式层析试纸条装入检测卡壳内，检测卡壳扣合在干式层析试纸条的上方和下方，在具体使用时，试剂卡还要配合使用有启动液和检测仪器。
23.所述干式层析试纸条包括长条形的背板1，背板1上从左至右依次经不干胶粘附有样本处理垫2、底物标记垫3、包被垫4和吸水纸5，其宽度全部按要求切割成等宽度。
24.而样本处理垫2的制作方式是使用植物凝集素和0.1m的磷酸缓冲盐溶液浸泡玻璃纤维纸，然后经恒温鼓风干燥箱烘干。
25.底物标记垫3的制作方式是使用吖啶酯标记的被检测物抗体或抗原喷涂在玻璃纤维纸上，然后经恒温鼓风干燥箱烘干。
26.包被垫4的制作是使用被检测物的抗体或偶联抗原溶液点喷涂在硝酸纤维素膜上，然后经恒温鼓风干燥箱烘干，使其形成包被线或包被圆点。
27.检测卡壳包括底壳6和上盖7，底壳6安装在背板1下表面，上盖7安装在干式层析试纸条上方，而底壳6和上盖7之间预留条形固定槽，用来固定干式层析试纸条。
28.在上盖7上开设有置于样本处理垫2处的加样孔8和包被垫4处的检测孔9，检测孔9为圆形，加样孔8用来加注血液样本，检测孔9用来观察检测结果。
29.启动液为含过氧化氢、氢氧化钾、增强剂的混合溶液。
30.而检测仪器主要包含检测模块和计算模块，检测模块为上下移动带有加液钢针光导探头，然后通过中空不锈钢针加启动液，光导探头将试纸卡产生的光传递到光电转换器
经滤光片后检测430nm波长的光子数，计算模块根据所检测光子数模拟为检测浓度，并通过回归方程计算样本的监测浓度。
31.为了对本发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现说明具体实施方式，但不限于此产品，以下给出更为详细的实施例：
32.本发明的干式化学发光法的检测系统中为c反应蛋白(crp)干式发光试剂。
33.试剂卡各成分的制备：
34.(1)样品处理垫的制备：
35.用0.01m的pb将刀豆素a稀释到0.1mg/ml溶液，然后浸泡玻璃纤维纸，完全浸湿后经37℃烘干制成样品处理垫。
36.(2)包被垫的制备：
37.用包被稀释液(0.1mcb，0.138m的nacl，0.005medta-na-2h2o,ph7.5)将crp的包被单克隆抗体稀释至0.1mg/ml，然后喷涂到硝酸纤维素膜上形成一条粗线，然后经37℃后烘干制成包被垫。
38.(3)底物标记垫的制备：
39.用吖啶磺酰胺标记crp的单克隆抗体，用释放缓冲液(含有20％蔗糖、5％海藻糖、0.5％n，o-双三甲硅基乙酰胺(bsa)、0.1％叠氮钠)将其稀释到0.08mg/ml后喷涂到玻璃纤维膜上，然后经37℃烘干制成底物标记垫。
40.(4)试剂卡制备按照附图1的组合方式，在带有背胶的塑料底板上采用搭接的方式，首先粘贴硝酸纤维素膜(即形成后为包被垫)，然后在硝酸纤维素膜左右两端分别粘贴底物标记垫和吸水纸，然后在底物标记垫左端粘贴样品处理垫。将粘贴后的试纸条切成35mm的干式层析试纸条，将干式层析试纸条装入检测卡壳中，样品处理垫对准加样孔、硝酸纤维素膜的包被垫上的检测线对准检测孔。
41.启动液的制备：
42.取纯化水配制含有0.15m的氢氧化钠、0.5％的过氧化脲和1％的八烷基三甲基氯化铵。
43.试剂卡的定量检测：
44.(1)标准曲线绘制：
45.在制备好的crp干式层析试纸条上的加样孔中加入不同浓度的crp抗原标准品(取五个不同的浓度，分别为1、10、20、100、200mg/l，每个浓度设5个重复)，37℃膜层析10分钟。将检测仪器打开，在检测仪器启动液瓶内注入启动液，调整仪器使其启动液每次注入为50μl，将层析结束的试纸卡放入仪器读取光子数见下表：
46.表1 crp标准品检测结果：
47.[0048][0049]
表1
[0050]
以抗原标准品浓度与测定的光子数平均值分别取自然对数绘制标准曲线，标准曲线图为说明书附图2。
[0051]
用未知浓度的样本按照检测标准品方法检测出光子数并按照标准曲线回算出结果见表3。
[0052][0053]
表3本发明的检测系统与现有技术方法的优缺点对比：
[0054]
[0055][0056]
本发明提供一种能够在各种场合方便快速准确检测的干式发光检测系统体外免疫诊断试剂的方法。只需要微量的样本，不需要冲洗等步骤即可快速检测出抗原或抗体含量的方法。本发明背景发光低，信噪比高发光反应干扰因素少，发光释放快速集中、发光效率高、发光强度大易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少，从而增加灵敏。
[0057]
本发明的干式发光检测系统，既保留了化学发光检测的灵敏度高、准确度好和抗干扰能力强的优点，又利用层析技术进行分离又避免洗涤等复杂操作步骤，简单方便，检测速度快，整个操作过程中发光后的启动液也会由试纸卡内的吸水纸吸走，没有液体的排出，操作方便。
[0058]
本发明的有益效果为：
[0059]
1、样品处理垫使用植物凝集素，在使用全血样本测试时可以使红细胞凝集在样品处理垫上，实现血细胞与血浆的分离，比传统的滤血膜分离效率高，速度快，检测样本用量少。
[0060]
2、采用干式发光层析分离技术，无须使用清洗液，节约了大量的用水，没有废水排出(添加启动液在检测后会被检测条上的吸水纸吸走)，设备可以在检测车等移动检测设备上使用。
[0061]
3、干式发光取消了湿式发光繁琐的温育、清洗操作，检测效率显著提高，设备简单故障率低，15分钟左右即可以出结果，可以用到急诊等领域。
[0062]
4、采用吖啶酯自发光，发光迅速(0.9s内完成)、发光强度高、干扰低。检测头压紧卡壳检测，启动液加注和检测在检测头上同时进行，避免漏光。