1.本发明涉及组织化学染色技术领域，具体为一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法。
背景技术：
2.众所周知，幽门螺杆菌包含犬幽门螺杆菌、胃螺杆菌、黑氏螺杆菌、拉普尼螺杆菌和萨洛莫尼螺杆菌等，是一种革兰氏阴性杆菌，螺旋形、微需氧、对生长条件要求十分苛刻，1983年首次从慢性活动性胃炎的胃粘膜活检组织中分离成功，是所知能够在猕猴、大鼠、猪、犬等动物胃中生存的微生物种类。
3.胃幽门螺杆菌与胃十二指肠溃疡、慢性胃炎、胃癌、粘膜相关淋巴瘤发生密切相关。目前hp的主要检测方法有：血清学方法、同位素示踪方法、细胞形态学方法、微生物学方法和分子生物学方法
4.现有的幽门螺旋杆菌形态学的染色方法在使用中发现，其不方便查找和分辨胃幽门螺杆菌，检测复杂，染色剂不稳定，染色不鲜明，导致其使用局限性较高。
技术实现要素：
5.(一)解决的技术问题
6.针对现有技术的不足，本发明提供了一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法。
7.(二)技术方案
8.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，包括如下步骤：
9.步骤1、配制染色液；
10.步骤2、石蜡切片组织经脱蜡水洗后，沥干切片组织上多余水份；
11.步骤3、将配制好的染色液滴于切片组织上，所述染色液浸没所述切片组织；
12.步骤4、染色液对切片组织染色后，流水洗切片组织直至染料不再脱色；
13.步骤5、完全上色后的切片组织依次经过酒精脱水、二甲苯透明和中性胶封片处理；
14.步骤6、使用观察器械对封片处理好的切片组织进行观察。
15.进一步的，本发明提供了步骤1中配制染色液的方法包括如下步骤：
16.步骤a、取emb染料溶于100ml醋酸缓冲液，再分别加入伊红和美兰充分搅拌溶解，并将混合液放入棕色瓶中避光室温放置24小时备用；
17.步骤b、将放置24小时的混合液加入100ml氯仿搅拌后倒入分液漏斗，液体分层稳定后收集下层液体，再加入100ml氯仿搅拌后倒入分液漏斗，液体分层稳定后收集下层液体。如此反复3-4次至上层无染料析出，最后得到提纯后染色液放入棕色瓶中备用；
18.步骤c、提纯后染色液中加入10ml乙醇彻底溶解后，加入醋酸缓冲液至总体积1000ml彻底混均后，染色液配制完成可以使用。
19.优选的，所述步骤3中，切片组织染色时间为0.5min-1.5min，染色温度为20-25℃。
20.优选的，所述步骤a和步骤c中的醋酸缓冲液ph值为3.6。
21.优选的，所述步骤b中，每次加入100ml氯仿后搅拌时间为1-3min。
22.优选的，所述步骤a中emb染料、伊红和美兰重量份占比为1：1:1。
23.(三)有益效果
24.与现有技术相比，本发明提供了一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，具备以下有益效果：
25.该幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，方便耦合不同颜色的染色液，使不同颜色的耦合液更加的稳定，同时保证其染色颜色鲜亮，方便区分，染色步骤简洁，染色效果好，方便观察。
具体实施方式
26.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
27.一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，包括如下步骤：
28.步骤1、配制染色液；
29.步骤2、石蜡切片组织经脱蜡水洗后，沥干切片组织上多余水份；
30.步骤3、将配制好的染色液滴于切片组织上，所述染色液浸没所述切片组织；
31.步骤4、染色液对切片组织染色后，流水洗切片组织直至染料不再脱色；
32.步骤5、完全上色后的切片组织依次经过酒精脱水、二甲苯透明和中性胶封片处理；
33.步骤6、使用观察器械对封片处理好的切片组织进行观察。
34.进一步的，本发明提供了步骤1中配制染色液的方法包括如下步骤：
35.步骤a、取emb染料溶于100ml醋酸缓冲液，再分别加入伊红和美兰充分搅拌溶解，并将混合液放入棕色瓶中避光室温放置24小时备用；
36.步骤b、将放置24小时的混合液加入100ml氯仿搅拌后倒入分液漏斗，液体分层稳定后收集下层液体，再加入100ml氯仿搅拌后倒入分液漏斗，液体分层稳定后收集下层液体。如此反复3-4次至上层无染料析出，最后得到提纯后染色液放入棕色瓶中备用；
37.步骤c、提纯后染色液中加入10ml乙醇彻底溶解后，加入醋酸缓冲液至总体积1000ml彻底混均后，染色液配制完成可以使用。
38.优选的，所述步骤3中，切片组织染色时间为0.5min-1.5min，染色温度为20-25℃。
39.本实施例中，染色温度为20℃，染色时间为1min。
40.优选的，所述步骤a和步骤c中的醋酸缓冲液ph值为3.6。
41.优选的，所述步骤b中，每次加入100ml氯仿后搅拌时间为1-3min。
42.本实施例中，搅拌时间为2min。
43.优选的，所述步骤a中emb染料、伊红和美兰重量份占比为1：1:1。
44.综上所述，该幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，在使用时，伊红或碱性品红可以将
胃黏膜染成红色，但伊红或碱性品红和美兰由于化学性质两种物质不同混溶，会出现两种物质混合后其中一种物质会发生沉淀析出，本发明中以emb染料(pyronin-methyl-gruen)作为中间耦合物在一定条件下完美将美兰和伊红实现混溶，再通过提纯后使染色液与切片组织进行染色，方便观察。
45.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
技术特征：
1.一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，其特征在于,包括如下步骤：步骤1、配制染色液；步骤2、石蜡切片组织经脱蜡水洗后，沥干切片组织上多余水份；步骤3、将配制好的染色液滴于切片组织上，所述染色液浸没所述切片组织；步骤4、染色液对切片组织染色后，流水洗切片组织直至染料不再脱色；步骤5、完全上色后的切片组织依次经过酒精脱水、二甲苯透明和中性胶封片处理；步骤6、使用观察器械对封片处理好的切片组织进行观察。2.根据权利要求1所述的一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，其特征在于：所述步骤1中配制染色液的方法包括如下步骤：步骤a、取emb染料溶于100ml醋酸缓冲液，再分别加入伊红和美兰充分搅拌溶解，并将混合液放入棕色瓶中避光室温放置24小时备用；步骤b、将放置24小时的混合液加入100ml氯仿搅拌后倒入分液漏斗，液体分层稳定后收集下层液体，再加入100ml氯仿搅拌后倒入分液漏斗，液体分层稳定后收集下层液体。如此反复3-4次至上层无染料析出，最后得到提纯后染色液放入棕色瓶中备用；步骤c、提纯后染色液中加入10ml乙醇彻底溶解后，加入醋酸缓冲液至总体积1000ml彻底混均后，染色液配制完成可以使用。3.根据权利要求2所述的一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，其特征在于：所述步骤3中，切片组织染色时间为0.5min-1.5min，染色温度为20-25℃。4.根据权利要求3所述的一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，其特征在于：所述步骤a和步骤c中的醋酸缓冲液ph值为3.6。5.根据权利要求4所述的一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，其特征在于：所述步骤b中，每次加入100ml氯仿后搅拌时间为1-3min。6.根据权利要求5所述的一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，其特征在于：所述步骤a中emb染料、伊红和美兰重量份占比为1：1:1。
技术总结
本发明涉及组织化学染色技术领域，具体为一种幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，包括如下步骤：步骤1、配制染色液；步骤2、石蜡切片组织经脱蜡水洗后，沥干切片组织上多余水份；步骤3、将配制好的染色液滴于切片组织上，所述染色液浸没所述切片组织；步骤4、染色液对切片组织染色后，流水洗切片组织直至染料不再脱色；步骤5、完全上色后的切片组织依次经过酒精脱水、二甲苯透明和中性胶封片处理；步骤6、使用观察器械对封片处理好的切片组织进行观察。该幽门螺旋杆菌形态学的染色方法，方便耦合不同颜色的染色液，使不同颜色的耦合液更加的稳定，同时保证其染色颜色鲜亮，方便区分，染色步骤简洁，染色效果好，方便观察。方便观察。
技术研发人员：余先根 黄生明 谢应雄
受保护的技术使用者：厦门迈威生物科技有限公司
技术研发日：2022.02.16
技术公布日：2022/5/20
再多了解一些
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