广西金边蚂蟥的净化养殖方法与流程

1.本发明属于蚂蟥养殖技术领域，具体涉及一种广西金边蚂蟥的净化养殖方法。


背景技术：

2.广西金边蚂蟥属于吸血类水蛭，水蛭素含量较高，是一种被作为医用水蛭用于治病最常见的水蛭品种。对于广西活体金边蚂蟥的应用从古至今民间一直都有，可用于皮肤瓣、皮肤移植物或其他组织遭受静脉循环受损的情况，但是现有的蚂蟥养殖技术均以室外大田养殖或者普通室内水箱养殖为主，养殖得到的活体蚂蟥中会携带一些致病菌，从而导致得到的活体蚂蟥不能直接在医疗上使用。
3.为了将养殖得到的活体蚂蟥用于医疗，需要根据使用者的自身的认知对活体蚂蟥进行消毒，这就导致了用于医疗的活体蚂蟥的质量安全不统一，存在安全隐患，从而导致了活体蚂蟥在医疗上的应用难以得到推广。
4.因此，亟需一种能够味医用提供质量可靠且安全的活体金边蚂蟥的广西金边蚂蟥的净化养殖方法。


技术实现要素：

5.本发明的目的是解决至少上述的缺陷，并提供以后将说明的优点。
6.为了实现本发明的这些目的和其他优点，现提供一种广西金边蚂蟥的净化养殖方法，包括：获得广西金边蚂蟥，经过至少30天的暂养，暂养期间每隔10天对金边蚂蟥进行一次抗菌药浴，得到金边蚂蟥亲本；将金边蚂蟥亲本经过喂养至蚂蟥个体≥8克/条，得到亲本蚂蟥的成熟个体；将亲本蚂蟥的成熟个体按照190～210条/平方米的密度进行产茧培育，得到二代蚂蟥茧；二代蚂蟥茧经过灭菌处理后孵化，得到二代蚂蟥幼苗；将二代蚂蟥幼苗喂养至蚂蟥个体≥8克/条，得到二代蚂蟥的成熟个体；二代蚂蟥的成熟个体经过至少6个月的禁食培育，禁食培育的最后1个月每隔10天对二代蚂蟥进行抗菌药浴一次，即得到净化的广西金边蚂蟥；其中，整个养殖期均在洁净度为d级的gmp车间内进行。
7.上述方案中，首先养殖培育在d级的gmp养殖车间内进行，能够有效的杜绝养殖过程中外源致病菌的干扰。
8.其次，将获得的广西金边蚂蟥经过暂养期间的抗菌药浴能够淘汰体质较差的个体，同时对获得的广西金边蚂蟥进行灭菌消毒以将获得的蚂蟥体内所携带的常见致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌杀死，以避免亲本传染给下一代的可能。
9.还有，最后经过禁食结合抗菌药浴以进一步对第二代金边蚂蟥进行灭菌消毒同时将第二代金边蚂蟥中体质较差的个体筛除，以保留活力较好的金边蚂蟥作为医用。
10.优选的是，所述抗菌药浴具体包括：将环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星或氟苯尼考中任意一种药物兑水调配成浓度为0.12～0.15g/l的药水，将蚂蟥个体放入药水中持续浸泡48小时。
11.优选的是，所述暂养和禁食培育具体包括：取经过净化得到的理化指标达到饮用天然矿泉水标准的纯净水作为养殖用水，且养殖用水中不含常见致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌；按照100升的养殖箱放35～45升养殖用水的比例将养殖用水放入养殖箱中，再将广西金边蚂蟥按照1～1.2公斤/箱的比例放入养殖箱中进行养殖；其中，每天更换一次养殖用水，每次更换养殖用水时将养殖箱中的水排尽同时将养殖箱内壁的水垢清除干净；进行抗菌药浴时，以药水替换养殖用水即可。
12.优选的是，所述产茧培育具体包括：在繁殖期，铺设厚度为10～15厘米的土壤，按照190～210条/平方米的密度投放亲本蚂蟥的成熟个体，每隔15天翻土并收集蚂蟥茧1次；其中，繁殖孵化的温度为20～25℃；土壤的温度为20～24℃。
13.优选的是，所述喂养具体包括：获得人工蛋白肠衣，将获得的人工蛋白肠衣经过20ppm的氯制剂浸泡15分钟，再使用生理盐水进行清洗，沥干后得到肠衣；将重量比为1.6～3.6％的猪或牛或鸭或鸡血球蛋白粉、2～4％的血浆蛋白粉、0.3～0.5％的复合氨基酸粉、0.1％的水溶性复合维生素和95％的纯净水混合得到混合饲料，将混合饲料灌装在肠衣内进行喂养，喂养量为蚂蟥重量的3～6倍；其中，获得的人工蛋白肠衣和混合饲料中均不含常见致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌。
14.上述方案中，以混合饲料灌装在肠衣内作为喂养的饲料进行喂养，不仅相对于新鲜血液的采集和保存更加容易，而且能够更好的避免传统的以新鲜畜禽血液作为饲料进行饲养而导致致病菌的交叉感染，相对较安全。
15.优选的是，经过至少6个月的禁食培育至蚂蟥个体为1～3克/条，且蚂蟥体内含血量应≦10％。
16.优选的是，二代蚂蟥茧经过灭菌处理具体包括：将环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星或氟苯尼考中任意一种药物兑水调配成浓度为0.12～0.15g/l的药水，将蚂蟥茧放入药水中持续10分钟。
17.上述方案中，通过对蚂蟥茧进行抗菌药浴能够进一步对蚂蟥茧进行消毒灭菌处理，同时控制抗菌药浴的时长从而保证蚂蟥茧的活性。
18.一种广西金边蚂蟥的净化养殖方法，具体包括：建立洁净度为d级的gmp养殖车间，并在养殖车间内设置相互独立的暂养间、养殖间、繁育间、第二养殖间和成品间，并在暂养间、养殖间、繁育间、第二养殖间和成品间内分别放置若干的养殖箱，按照100升的养殖箱放35～45升养殖用水的比例将养殖用水放入养殖箱中用于金边蚂蟥的养殖；在繁育间内还放置若干孵化箱用于蚂蟥茧的孵化。
19.获得广西金边蚂蟥并放入暂养间内暂养至少30天，每天更换养殖用水并移除死亡个体，得到金边蚂蟥亲本；暂养期间，每10天进行抗菌药浴1次，每次抗菌药浴持续48小时。
20.将金边蚂蟥亲本按照1～1.2公斤/箱的比例转移至养殖间的养殖箱内经过喂养至蚂蟥个体≥8克/条，得到亲本蚂蟥的成熟个体。
21.将亲本蚂蟥的成熟个体按照190～210条/平方米的密度转移至繁育间的养殖箱内进行产茧培育，得到二代蚂蟥茧。
22.将二代蚂蟥茧经过灭菌处理后转移至孵化箱内进行孵化，得到二代蚂蟥幼苗。
23.将二代蚂蟥的幼苗转移至第二养殖间的养殖箱内经过喂养至蚂蟥个体≥8克/条，得到二代蚂蟥成熟个体。
24.将二代蚂蟥成熟个体转移至成品间的养殖箱内经过至少6个月的禁食培育至蚂蟥个体为1～3克/条，禁食培育的最后1个月每隔10天对二代蚂蟥进行抗菌药浴一次，即得到净化的广西金边蚂蟥。
25.优选的是，所述土壤在使用前经过如下处理：将土壤粉碎并过8～10目筛网，然后采用20ppm的氯制剂或溴制剂进行喷淋消毒，再经过暴晒风干至土壤中的氯制剂或溴制剂达到不可检出的水平。
26.上述方案中，通过对土壤进行消毒处理，以避免将土壤中带有的致病菌造成的感染。
27.优选的是，所述土壤按照中间高旁边低的坡度铺设，坡度为5～30
°
。
28.上述方案中，通过将土壤铺设成中间高旁边低的结构，能够有效的将多余的水分蓄积在边沿高度较低的部分土壤，从而为蚂蟥的孵化提供适宜的环境。
29.本发明的优点：
30.首先，本发明的广西金边蚂蟥的净化养殖方法中养殖培育在d级的gmp养殖车间内进行，能够有效的杜绝养殖过程中外源致病菌的干扰。
31.其次，本发明的广西金边蚂蟥的净化养殖方法中将获得的广西金边蚂蟥经过暂养期间的抗菌药浴能够淘汰体质较差的个体，同时对获得的广西金边蚂蟥进行灭菌消毒以将获得的蚂蟥体内所携带的常见致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌杀死，以避免亲本传染给下一代的可能。
32.还有，本发明的广西金边蚂蟥的净化养殖方法中最后经过禁食结合抗菌药浴以进一步对第二代金边蚂蟥进行灭菌消毒同时将第二代金边蚂蟥中体质较差的个体筛除，以保留活力较好的金边蚂蟥作为医用。
33.还有，本发明的广西金边蚂蟥的净化养殖方法中以混合饲料灌装在肠衣内作为喂养的饲料进行喂养，不仅相对于新鲜血液的采集和保存更加容易，而且能够更好的避免传统的以新鲜畜禽血液作为饲料进行饲养而导致致病菌的交叉感染，相对较安全。
34.还有，本发明的广西金边蚂蟥的净化养殖方法中通过对蚂蟥茧进行抗菌药浴能够进一步对蚂蟥茧进行消毒灭菌处理，同时控制抗菌药浴的时长从而保证蚂蟥茧的活性。
35.还有，本发明的广西金边蚂蟥的净化养殖方法中通过对土壤进行消毒处理，以避免将土壤中带有的致病菌造成的感染；通过将土壤铺设成中间高旁边低的结构，能够有效的将多余的水分蓄积在边沿高度较低的部分土壤，从而为蚂蟥的孵化提供适宜的环境。
具体实施方式
36.下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
37.实施例1
38.一种广西金边蚂蟥的净化养殖方法，包括以下步骤：
39.步骤一、获得广西金边蚂蟥，经过30天的暂养，暂养期间每隔10天使用环丙沙星兑水调配成浓度为0.15g/l的药水对金边蚂蟥进行一次抗菌药浴，每次药浴持续48小时，得到
金边蚂蟥亲本。
40.步骤二、将金边蚂蟥亲本喂养至蚂蟥个体≥8克/条，得到亲本蚂蟥的成熟个体。
41.步骤三、将亲本蚂蟥的成熟个体按照200条/平方米的密度进行产茧培育，得到二代蚂蟥茧；二代蚂蟥茧经过灭菌处理后孵化，得到二代蚂蟥幼苗。
42.步骤四、将二代蚂蟥幼苗喂养至蚂蟥个体≥8克/条，得到二代蚂蟥的成熟个体。
43.步骤五、将二代蚂蟥的成熟个体经过6个月的禁食培育，禁食培育的最后1个月每隔10天采用环丙沙星兑水调配成浓度为0.15g/l的药水对二代蚂蟥进行抗菌药浴一次，每次药浴持续48小时，即得到净化的广西金边蚂蟥。
44.实施例2
45.在实施例1的基础上，将环丙沙星替换为恩诺沙星。
46.实施例3
47.在实施例1的基础上，将环丙沙星替换为诺氟沙星。
48.实施例4
49.在实施例1的基础上，将环丙沙星替换为氟苯尼考。
50.实施例5
51.在实施例1的基础上，将步骤五替换为：将二代蚂蟥的成熟个体经过6个月的禁食培育，禁食培育的最后1个月每隔10天采用环丙沙星兑水调配成浓度为0.12g/l的药水对二代蚂蟥进行抗菌药浴一次，每次药浴持续48小时，即得到净化的广西金边蚂蟥。
52.实施例6
53.在实施例1的基础上，还包括：获得人工蛋白肠衣，将获得的人工蛋白肠衣经过20ppm的氯制剂浸泡15分钟，再使用生理盐水进行清洗，沥干后得到肠衣；将480克的鸡血球蛋白粉、1200克的血浆蛋白粉、90克的复合氨基酸粉、30克的水溶性复合维生素和28.5升的纯净水混合得到混合饲料，将混合饲料灌装在人工蛋白肠衣内进行喂养，喂养量为蚂蟥重量的3倍。
54.其中，获得的人工蛋白肠衣和混合饲料中均不含常见致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌。
55.实施例7
56.在实施例1的基础上，还包括：获得人工蛋白肠衣，将获得的人工蛋白肠衣经过20ppm的氯制剂浸泡15分钟，再使用生理盐水进行清洗，沥干后得到肠衣；将780克的鸡血球蛋白粉、900克的血浆蛋白粉、90克的复合氨基酸粉、30克的水溶性复合维生素和28.5升的纯净水混合得到混合饲料，将混合饲料灌装在人工蛋白肠衣内进行喂养，喂养量为蚂蟥重量的3倍。
57.实施例8
58.在实施例1的基础上，还包括：获得人工蛋白肠衣，将获得的人工蛋白肠衣经过20ppm的氯制剂浸泡15分钟，再使用生理盐水进行清洗，沥干后得到肠衣；将重量比为1080克的鸡血球蛋白粉、600克的血浆蛋白粉、90克的复合氨基酸粉、30克的水溶性复合维生素和28.5升的纯净水混合得到混合饲料，将混合饲料灌装在人工蛋白肠衣内进行喂养，喂养量为蚂蟥重量的3倍。
59.实施例9
60.在实施例1的基础上，还包括：获得人工蛋白肠衣，将获得的人工蛋白肠衣经过20ppm的氯制剂浸泡15分钟，再使用生理盐水进行清洗，沥干后得到肠衣；将780克的鸡血球蛋白粉、900克的血浆蛋白粉、90克的复合氨基酸粉、30克的水溶性复合维生素和28.5升的纯净水混合得到混合饲料，将混合饲料灌装在人工蛋白肠衣内进行喂养，喂养量为蚂蟥重量的5倍。
61.实施例10
62.在实施例1的基础上，还包括：获得人工蛋白肠衣，将获得的人工蛋白肠衣经过20ppm的氯制剂浸泡15分钟，再使用生理盐水进行清洗，沥干后得到肠衣；将780克的鸡血球蛋白粉、900克的血浆蛋白粉、90克的复合氨基酸粉、30克的水溶性复合维生素和28.5升的纯净水混合得到混合饲料，将混合饲料灌装在人工蛋白肠衣内进行喂养，喂养量为蚂蟥重量的6倍。
63.实施例11
64.一种广西金边蚂蟥的净化养殖方法，包括以下步骤：
65.步骤一、取经过净化得到的理化指标达到饮用天然矿泉水标准的纯净水作为养殖用水，且养殖用水中不含常见致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌；按照100升的养殖箱放40升养殖用水的比例将养殖用水放入养殖箱中，用于金边蚂蟥的养殖。
66.步骤二、获得广西金边蚂蟥，将广西金边蚂蟥按照1公斤/箱的比例放入养殖箱中进行30天的暂养，暂养期间每天更换一次养殖用水，每次更换养殖用水时将养殖箱中的水排尽同时将养殖箱内壁的水垢清除干净；每隔10天使用环丙沙星兑水调配成浓度为0.15g/l的药水对金边蚂蟥进行一次抗菌药浴，进行抗菌药浴时，以药水替换养殖用水，每次药浴持续48小时，得到金边蚂蟥亲本。
67.步骤三、获得人工蛋白肠衣，将获得的人工蛋白肠衣经过20ppm的氯制剂浸泡15分钟，再使用生理盐水进行清洗，沥干后得到肠衣；将480克的鸡血球蛋白粉、1200克的血浆蛋白粉、90克的复合氨基酸粉、30克的水溶性复合维生素和28.5升的纯净水混合得到混合饲料，将混合饲料灌装在人工蛋白肠衣内作为金边蚂蟥的喂养料。其中，获得的人工蛋白肠衣和混合饲料中均不含常见致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌。
68.步骤四、采用步骤三制备得到的喂养料对金边蚂蟥亲本进行喂养，喂养量为蚂蟥重量的3倍，至蚂蟥个体≥8克/条，得到亲本蚂蟥的成熟个体。
69.步骤五、铺设厚度为10～15厘米的土壤，按照200条/平方米的密度投放亲本蚂蟥的成熟个体进行产茧培育，得到二代蚂蟥茧；使用环丙沙星兑水调配成浓度为0.15g/l的药水对二代蚂蟥茧进行持续10分钟的抗菌药浴，等待孵化，得到二代蚂蟥幼苗。
70.步骤六、采用步骤三制备得到的喂养料对二代蚂蟥幼苗进行喂养，喂养量为蚂蟥重量的3倍，至蚂蟥个体≥8克/条，得到二代蚂蟥的成熟个体。
71.步骤七、将二代蚂蟥的成熟个体经过6个月的禁食培育，禁食培育的最后1个月每隔10天采用环丙沙星兑水调配成浓度为0.15g/l的药水对二代蚂蟥进行抗菌药浴一次，每次药浴持续48小时，即得到净化的广西金边蚂蟥。
72.实施例12
73.一种广西金边蚂蟥的净化养殖方法，包括以下步骤：
74.步骤一、建立洁净度为d级的gmp养殖车间，并在养殖车间内设置相互独立的暂养间、养殖间、繁育间、第二养殖间和成品间，并在暂养间、养殖间、繁育间、第二养殖间和成品间内分别放置若干的养殖箱。取经过净化得到的理化指标达到饮用天然矿泉水标准的纯净水作为养殖用水，且养殖用水中不含常见致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌。按照100升的养殖箱放40升养殖用水的比例将养殖用水放入养殖箱中用于金边蚂蟥的养殖；在繁育间内还放置若干孵化箱用于蚂蟥茧的孵化，养殖车间的温度为24～28℃，养殖水温为23～27℃。
75.步骤二、获得广西金边蚂蟥，将广西金边蚂蟥按照1公斤/箱的比例放入暂养间的养殖箱中进行30天的暂养，暂养期间每天更换一次养殖用水，每次更换养殖用水时将养殖箱中的水排尽同时将养殖箱内壁的水垢清除干净；每隔10天使用环丙沙星兑水调配成浓度为0.15g/l的药水对金边蚂蟥进行一次抗菌药浴，进行抗菌药浴时，以药水替换养殖用水，每次药浴持续48小时，得到金边蚂蟥亲本。
76.步骤三、获得人工蛋白肠衣，将获得的人工蛋白肠衣经过20ppm的氯制剂浸泡15分钟，再使用生理盐水进行清洗，沥干后得到肠衣；将480克的鸡血球蛋白粉、1200克的血浆蛋白粉、90克的复合氨基酸粉、30克的水溶性复合维生素和28.5升的纯净水混合得到混合饲料，将混合饲料灌装在人工蛋白肠衣内作为金边蚂蟥的喂养料。其中，获得的人工蛋白肠衣和混合饲料中均不含常见致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌。
77.步骤四、将金边蚂蟥亲本按照1公斤/箱的比例转移至养殖间的养殖箱内，采用步骤三制备得到的喂养料对金边蚂蟥亲本进行喂养，喂养量为蚂蟥重量的3倍，至蚂蟥个体≥8克/条，得到亲本蚂蟥的成熟个体。
78.步骤五、繁育间的养殖箱不放入养殖水，铺设厚度为10～15厘米的土壤，按照200条/平方米的密度投放亲本蚂蟥的成熟个体进行产茧培育，每隔15天翻土并收集蚂蟥茧1次，得到二代蚂蟥茧；使用环丙沙星兑水调配成浓度为0.15g/l的药水对二代蚂蟥茧进行持续10分钟的抗菌药浴，再将蚂蟥茧转移至繁育间的孵化箱内等待孵化，得到二代蚂蟥幼苗。其中，繁殖孵化的温度为20～25℃；土壤的温度为20～24℃。
79.步骤六、将二代蚂蟥的幼苗转移至第二养殖间的养殖箱内，采用步骤三制备得到的喂养料对二代蚂蟥幼苗进行喂养，喂养量为蚂蟥重量的3倍，至蚂蟥个体≥8克/条，得到二代蚂蟥的成熟个体。
80.步骤七、将二代蚂蟥成熟个体转移至成品间的养殖箱内，经过6个月的禁食培育，禁食培育的最后1个月每隔10天采用环丙沙星兑水调配成浓度为0.15g/l的药水对二代蚂蟥进行抗菌药浴一次，每次药浴持续48小时，即得到净化的广西金边蚂蟥。
81.净化的广西金边蚂蟥的指标测定
82.1、根据gb4789.4-2016、gb4789.10-2016、gb4789.5-2012、gb4789.36-2016、gb4789.11-2014和gb4789.7-2013中的平板计数法分别测定经过实施例1～12的方法养殖得到的净化的广西金边蚂蟥中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌含量，结果如表1所示。
83.表1：
[0084][0085][0086]
从表1的数据可知，经过实施例1～12的方法养殖得到的净化的广西金边蚂蟥中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌和副溶血性弧菌均未检出，复合医用金边蚂蟥的标准。
[0087]
2、将按照实施例1～12的方法分别养殖得到的净化的广西金边蚂蟥按顺序分成1～12组，分别随机抽取6只/组蚂蟥进行称重以及含血量测定。其中，含血量测定的方法为：取称重结束后的蚂蟥进行解剖，刮除蚂蟥体内的血液，再将得到的血液进行称重。结果如表2所示。
[0088]
表2：
[0089]
项目蚂蟥总体重(克)血液中体重(克)含血量第1组13.21.39.8％第2组10.10.55％第3组12.60.64.8％第4组11.50.43.5％第5组16.81.58.9％第6组10.90.76.4％第7组15.51.17.1％第8组13.30.75.2％第9组12.80.53.9％第10组10.50.65.7％第11组13.91.17.9％
第12组9.30.89.6％
[0090]
从表2的数据可知，经过实施例1～12的方法养殖得到的净化的广西金边蚂蟥的含血量为3.5％～9.8％，均小于10％，可作为医用蚂蟥使用。
[0091]
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改。因此，在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。