包含凝集素家族分子CLEC18A的肝损伤和肝衰竭治疗药物及应用的制作方法

包含凝集素家族分子clec18a的肝损伤和肝衰竭治疗药物及应用
技术领域
1.本发明属于生物医药领域，涉及凝集素家族分子clec18a的药物应用，具体是一种包含凝集素家族分子clec18a的肝损伤治疗药物及应用。


背景技术：

2.急性肝损伤(acute liver injury，ali)是指在短期内因各种原因引起的肝功能突发异常的疾病。多由感染，有毒化学物质、病毒感染、药物、缺血-再灌注等引起，在药理研究中常以四氯化碳(ccl4)、脂多糖/d-氨基半乳糖(lps/galn)建立急性肝损伤/肝衰竭模型。在病理学上，急性肝损伤表现为肝实质细胞严重急性损害，肝细胞内谷丙转氨酶 (alt)和谷草转氨酶(ast))大量释放入血，造成血清内alt和ast 的增高。ali可诱发一系列并发症，也能加剧其他疾病的进展，是急诊医学研究的常见病之一。多数ali患者可以通过药物治疗恢复，但仍有部分患者会进展为高致死率的急性肝衰竭。
3.目前治疗ali是用多种方法参与的综合疗法。临床主要使用抗生素、护肝药、糖皮质激素和特异性抗体等。耐药菌的出现对抗生素治疗产生了挑战，且药物性肝损伤的风险不可完全避免：糖皮质激素增加感染等并发症的发生率；特异性抗体(抗内毒素抗体、tnfα拮抗剂、il-1β拮抗剂和hmgb1拮抗剂等)通过抑制炎症反应的某一环节来调节内毒素性 ali的进一步发展，但这种疗法价格昂贵，临床上还未被广泛验证。
4.新型c型凝集素家族分子18a(c-type lectin domain family 18 member a，clec18a)属于c-型凝集素受体c-type lectin receptors (ctlrs)家族成员。该家族是进化保守的模式识别受体，其天然配体是多糖，或蛋白质，脂质和无机分子等，在识别真菌，结核杆菌，病毒和寄生虫等过程中起着重要作用。人clec18a的分子结构于2015年首次得到证实。生理状况下，人的clec18a主要表达于髓系细胞和肝细胞，小鼠clec18a主要表达于脑组织，肾脏和心脏组织。目前对clec18a的研究仅限于人的hbv和hcv感染中表达增高以及作为toll样受体3 (toll like receptor 3，tlr3)共受体介导病毒感染免疫反应。作为该家族中唯一的外分泌分子，clec18a在其它疾病中的表达和作用均未见报导。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题是，提供一种能够利用凝集素分子 clec18a对肝损伤和肝衰竭产生较好治疗效果的包含凝集素家族分子 clec18a的肝损伤和肝衰竭治疗药物及应用。
6.本发明包含凝集素家族分子clec18a的肝损伤和肝衰竭治疗药物，其有效成份包含clec18a蛋白。
7.上述药物由有效成份clec18a蛋白和药学上可接受的辅料组成。
8.上述药物的剂型可以为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、贴剂、混悬剂、糖浆剂、口服液、注射剂、栓剂或它们的任意形式组合。
9.上述药物中clec18a蛋白的用药剂量为每千克体重注射1μg以上。
10.本发明的技术方案还包括clec18a蛋白在肝损伤或肝衰竭或急性肝损伤治疗药物中的应用。
11.本发明的包含clec18a蛋白的药物对肝损伤、肝衰竭、急性肝损伤具有很好的预防和治疗效果。采用包含小鼠重组clec18a的制剂进行小鼠体内注射，证明无论在lps/galn诱导的肝损伤(肝衰竭)模型还是 ccl4诱导的急性肝损伤模型，重组clec18a都具有明显预防和治疗作用。
附图说明
12.图1是本发明实施例1过程中对野生型小鼠(wild type，wt)和缺失clec18a小鼠(knockout，ko)用lps/galn诱导肝损伤对比试验结果图，其中a为这两组小鼠血清alt，ast浓度检测结果图，b为这两组小鼠肝脏组织he染色检测结果图；
13.图2是本发明实施例1中重组小鼠clec18a蛋白能够抑制由 lps/galn诱导c57bl/6小鼠肝损伤模型检测结果图，具体是检查 c57bl/6小鼠的血清alt和ast浓度；
14.图3是本发明实施例2过程中对野生型小鼠(wt)和缺失clec18a 小鼠(ko)用ccl4诱导肝损伤对比试验结果图，为这两组小鼠血清alt， ast浓度检测结果图；
15.图4是本发明实施例2中重组小鼠clec18a蛋白能够抑制由ccl4 诱导c57bl/6小鼠肝损伤的血清alt，ast浓度检测结果图。
具体实施方式
16.实施例1：
17.1、对小鼠肝脏特异敲除clec18a后，lps/galn诱导肝损伤加重进行验证。
18.运用cre-loxp技术，获得肝脏特异敲除clec18a小鼠(ko)，由南方模式动物中心构建和繁育鉴定。
19.选择8-10周龄ko小鼠为试验组，同时筛选同窝野生型小鼠(wt) 作为对照组，每组8只。腹腔注射lps(10mg/kg)/galn(750μg/kg)，注射总体积200μl。6小时后取小鼠血清，检测alt和ast浓度，肝脏组织切片，利用苏木精和酸性染液伊红(hematoxylin-eosin，he)染色检测肝损伤情况。
20.与同窝对照野生型(wt)小鼠相比，肝脏敲除clec18a小鼠(ko) 肝损伤明显加重。验证结果如图1所示。
21.2、采用重组小鼠clec18a蛋白对lps/galn诱导肝损伤的c57bl/6 小鼠进行治疗试验。
22.试验过程：选择8-10周龄c57bl/6小鼠随机分为2组，分别标记为治疗组和对照组，每组6只，对所有小鼠腹腔注射lps(10mg/kg)/galn (750μg/kg)，注射总体积200μl。1小时后，对照组小鼠腹腔注射100 μl pbs，治疗组小鼠腹腔注射100μl clec18a(1μg/kg)。6小时后取所有小鼠血清，检测alt和ast浓度。
23.结果：如图2所示，重组小鼠clec18a蛋白明显减轻由lps/galn 诱导的c57bl/6小鼠肝损伤。
24.实施例2：
25.1、对小鼠肝脏特异敲除clec18a后，ccl4诱导肝损伤加重进行验证。
26.运用cre-loxp技术，获得肝脏特异敲除clec18a小鼠(ko)，由南方模式动物中心构建和繁育鉴定。
27.选择8-10周龄肝脏特异敲除clec18a小鼠(ko)为试验组，筛选同窝野生型小鼠(wt)作为对照，每组6只。腹腔注射ccl4 1mg/kg，注射总体积200μl。24小时后取小鼠血清，检测alt和ast浓度。
28.与同窝对照野生型(wt)小鼠相比，肝脏敲除clec18a(ko)小鼠肝损伤明显加重。验证结果如图3所示。
29.2、采用重组小鼠clec18a蛋白对ccl4诱导肝损伤的c57bl/6小鼠进行治疗试验。
30.试验过程：选择8-10周龄c57bl/6小鼠随机分为2组，分别为治疗组和对照组，每组8只，对所有小鼠腹腔注射ccl4 1mg/kg，注射总体积200μl。4小时后，对照组小鼠腹腔注射100μl pbs，治疗组小鼠腹腔注射100μl clec18a(2μg/kg)，注射总体积200μl。24小时后取所有小鼠血清，检测alt和ast浓度。
31.结果：如图4所示，重组小鼠clec18a蛋白明显减轻由ccl4诱导肝损伤的c57bl/6小鼠肝损伤。