一种中药单体组合物在预防和/或治疗酒精性胃损伤中的应用

1.本发明涉及药物组合物领域，具体涉及一种包含小檗碱、巴马汀、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的组合物在预防和/或治疗酒精性胃损伤方面的应用。


背景技术：

2.近年来，随着生活方式、膳食结构的改变以及酒类品种及产量的增加，饮酒人群的比例呈逐步上升之势。酒的主要成分是乙醇，因其具有脂溶性，对胃黏膜组织具有很强的腐蚀性，破坏表面黏液层和颈黏液细胞，并破坏胃黏膜的正常代谢所需的生理环境。乙醇在胃黏膜代谢分解为乙醛后，乙醛与胃黏膜蛋白结合，参与了对胃黏膜的损伤，其局部毒性作用可能与胃癌的发生相关。无水乙醇或高浓度乙醇具有很强的脱水作用，能凝固组织蛋白。除上述直接损伤作用外，乙醇还可通过增强胃黏膜损伤因素、削弱胃黏膜保护因素和使细胞内钙超载等机制引起胃黏膜损伤。因此大量饮用高度酒精类制品可以引起胃粘膜损伤，导致胃粘膜出现充血、水肿、糜烂、出血、甚至溃疡形成等，患者表现为突然呕血、黑便，严重时可危及生命。研究显示饮酒人群的消化道疾病发生率明显高于非饮酒人群，且急性乙醇性胃溃疡的发病率呈逐年上升趋势，大量的动物实验证实当胃腔内的乙醇浓度大于时即可直接损伤胃劲膜屏障，使劲膜出现充血、水肿、出血、糜烂甚至急性溃疡。因此酒精作为胃粘膜损伤因子也是不容忽视的致病因子。
3.目前市场上治疗急性胃溃疡药物很多，因西药起效快且疗效肯定，因此多以西药为主。常用药物如奥美拉唑，它能抑制h k -atp酶的活性，阻断胃酸分泌，迅速升高胃内ph，缓解对胃灼热和疼痛。但其副作用明显，它可引起胃底部和胃体部肠嗜铬细胞增长，长期用药可能发生胃部类癌。
4.中医认为胃溃疡属中医“吞酸”“胃脘痛”范畴。其病因病机主要由于情志所伤、饮食劳倦等。忧思恼怒，七情刺激，肝失疏泄，横犯胃腑；或脾气郁结，运化失常；饮食失节或偏嗜，损伤脾胃；或湿热壅结中焦，胃膜受损等。左金方为经典名方，泻肝火，行湿，开痞结之功效。主治肝火犯胃，漕杂吞酸，等，现代研究表明其具有抗溃疡和抑制胃酸分泌的作用。常用治疗胃溃疡的中成药有左金胶囊、三九胃泰胃康宁胶囊、良附丸香砂养胃丸等，虽然中成药治疗胃溃疡副作用小，但其用量大，且效果不如西药明显。
5.cn1682807公开了一种左金滴丸，由盐酸小檗碱和含有吴茱萸碱的吴茱萸提取物以及作为机制的可要用载体构成，盐酸小檗碱∶吴茱萸提取物＝60∶1，(盐酸小檗碱 吴茱萸提取物)∶基质＝60∶1； cn 1969973 a公开了一种左金软胶囊；cn io289538o a公开了一种左金片的生产工艺；cn 104758241 a 公开了治疗胃院痛的左金微乳凝胶及其制备方法；cn 110680924 a公开了左金丸对人胃癌耐药细胞 rock/pten/pi3k信号通路的调控作用及其应用；cn 112451580 a公开了左金丸组分中药配伍组分的制备方法，由此可见左金方的优化主要在工艺和制剂方面，药理作用方面并未体现，同时有效成分不明确，不能保证药物质量的稳定性，因此，选择更为有效的抗溃疡药物尤为重要。
6.本发明基于左金方，选取左金方中的具有代表性的有效成分(小檗碱、巴马汀、吴茱萸碱、吴茱萸次碱)进行配比，体现组分中药标准物质清楚、质量可控的特点，同时，在疗效上与传统中药的疗效一致或更显著，达到“青出于蓝而胜于蓝”的效果。
7.盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、吴茱萸碱、吴茱萸次碱均具有成熟的化学合成工艺，价格低廉，可用于工业生产。
8.本专利所申请的药物是以中药单体组合的药物，对多种原因引起的胃粘膜损伤有明显的保护作用，特别是酒精性胃粘膜损伤有特殊的疗效。其作用机制强化胃粘膜——粘液屏障作用诱导胃粘膜内源性保护因子的合成和释放，增强胃粘膜细胞保护作用促进胃粘膜更新。研究结果表明，在大鼠予以无水乙醇造模前1h，本专利所申请的胃粘膜保护药物，能有效的保护胃粘膜免受酒精损伤。


技术实现要素：

8.有鉴于此，本发明提供了一种中药单体组合物在预防和/或治疗酒精性胃损伤的药物中的应用。
9.在本发明的一种实施方式中，所述预防和/或治疗酒精性胃损伤是指改善饮酒引起的胃组织的病理变化，和/或调节血清中相关氧化应激指标，降低炎症因子，抑制胃组织中炎症因子相关基因和蛋白的表达。
10.本发明的再一个目的在于提供一种上述中药单体组合物的用途。
11.所述组合物为小檗碱、巴马汀、吴茱萸碱和吴茱萸次碱，按照质量比33.41～44.87∶7.89～13.30∶0.15 ～3.67∶0.13～1.73配比。
12.本发明通过建立大鼠实验性溃疡模型，分别研究该中药单体组合物对乙醇短期所致大鼠胃溃疡的预防和保护作用。将大鼠处死，取出胃组织，通过光学显微镜胃粘膜组织的病理形态学的改变，通过elisa 法测定pge2、gas、mda、sod、il-1β、tnf-α、inos含量或活力，采用荧光实时定量法检测胃组织中炎症因子(il-1β、tnf-α、inos)rna的表达，采用western blotting测定胃组织中相关蛋白(il-1β、il-6、 tnf-α)的表达，评价该中药单体组合物对酒精性胃溃疡的预防和保护作用。
附图说明
图1是各组大鼠胃组织解剖图；图2是各组大鼠胃组织组织形态(he
×
40)；图3是大鼠血清中胃泌素(gas)、超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)、inos、il-1β、tnf-图4是大鼠胃组织中inos、il-1β、tnf-αmrna的相对表达；图5大鼠胃组织中il-1b、il-6、tnf-α蛋白的相对表达
具体实施方式
13.下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
14.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图和具体实施
例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明通过对左金方的化学成分的分析及药理进行系统研究，发现本发明的单体组合物为左金方中发挥预防和/或治疗酒精性胃损伤作用最关键的化学成分。上述单体化合物以本发明的用量配比组成组合物，其改善胃损伤效果明显优于左金方(左金胶囊)，因而提供了一种新的更有效预防和/或治疗酒精性胃损伤药物组合物，也为阐述中成药左金胶囊预防和/或治疗胃损伤作用的内涵和进行制剂的标准化提供了依据。
15.《中药单体组合物》
16.本发明预防和/或治疗酒精性胃损伤的中药单体组合物，由质量比为39.14∶10.60∶1.91∶0.93的盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、吴茱萸碱和吴茱萸次碱组成。
17.实验材料
18.实验动物
19.雄性sd大鼠，体重控制在200
±
20g，spf级，由北京大学医学部实验动物科学部提供。
20.主要药物与试剂
21.黄连(批号：hl-20190513-ysz-yc01)收集于重庆石柱，吴茱萸(批号：wzy-20190513-gjj-yc01) 收集于江西九江。
22.实验方法
23.大鼠急性胃损伤实验
24.30只sd雄性大鼠适应性饲养1周后随机分为四组，分别为(1)空白组(normal control)；(2)乙醇诱导模型组(ethanol)；(3)阳性对照(奥美拉唑)组(omeprazole)、(4)左金方组(5)中药单体组合物组(bper)，每组6只。空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃，连续给药3d，每天给药1次。第 3天给药后禁食不禁水24h，再给药1次，1h后除空白对照组外各组灌胃给予无水乙醇(5ml/kg) 诱导溃疡，1h后将大鼠处死。收集血清和胃进行进一步的组织学和生化分析。
25.取各组大鼠胃解剖进行拍照和整体观察，观察结果见图1。
26.取各组大鼠胃部组织he染色，通过病理切片扫描仪进行扫描，观察结果见图2。
27.elisa法测定血清中胃泌素(gas)、超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)、inos、il-1β、tnf-α，结果见图3。
28.荧光定量pcr仪检测各组大鼠胃组织中mrna的表达，结果见图4。
29.蛋白质印迹法(western blot)检测各组大鼠胃组织中il-1β、il-6、tnf-α的表达，结果见图5。
30.统计方法
31.灰度分析使用image j软件，数据处理使用graph pad prism 7.0软件。数据结果以平均值
±
标准差(means
±
sd)方式表现。采用单因素方差分析进行统计学分析和检验，以当p＜0.05被认为具有统计学上的差异，p＜0.01则被认为具有统计学上的显著差异。
32.实验结果
33.如图1所示，模型组病变表现为充血、水肿，并有黏液附着，给药组较模型组胃黏膜
充血、水肿和粘液附着情况有明显改善。
34.如图2所示，正常实验大鼠胃组织层次整齐，黏膜、黏膜下层、肌层及浆膜层层次分明，显微镜下无损伤或炎症。模型组实验动物病变集中于胃黏膜及其下层，表现为溃疡性糜烂、纤维化病变，黏膜水肿、充血及隐窝炎，黏膜下层可见大量炎性细胞浸润，以淋巴滤泡增生和炎细胞浸润为主。阳性药(奥美拉唑) 组、左金方提取物组和中药单体组合物组实验动物胃溃疡少见，黏膜水肿和充血现象明显减轻，几乎看不到炎细胞浸润。
35.如图3所示，与正常对照组比较，模型组大鼠血清中的gas、mda、inos、il-1β和tnf-α的含量显著升高，sod含量显著降低(p＜0.01)，预给药物组大鼠能够显著抑制gas、mda、inos、il-1β、tnf-α含量的升高和sod含量的降低。同时，经bper预给药后的大鼠，血清中相关因子的改善情况与zj组持平，甚至优于zj组。
36.如图4所示，与正常对照组比较，模型组大鼠胃组织中inos、il-1β、tnf-αmrna的相对表达显著升高(p＜0.01)，bper组和zj组能够抑制inos、il-1β、tnf-αmrna的相对表达，其中，bper组具有统计学查异(p＜0.01)，zj组可以显著抑制大鼠胃组织中il-1βmrna的相对表达(p＜0.05)。
37.如图5所示，与正常对照组比较，模型组大鼠胃组织中il-1β、il-6、tnf-α蛋白的相对表达显著升高(p＜0.01)。各给药组均能显著抑制il-1β、il-6、tnf-α蛋白的相对表达(p＜0.01)。bper组与omeprazole 组结果数值相近且低于zj组。
38.以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。