一种松材线虫快速检测试纸的制作方法

1.本实用新型属于生物工程技术领域，具体涉及一种松材线虫快速检测试纸。


背景技术：

2.松材线虫传统的检验检疫方法是用贝尔曼漏斗法分离出线虫后，在光学显微镜下依据线虫的形态特征来进行鉴定，但这种方法费时费工，需要2个工作日，不适应口岸检疫快速通关的要求。而松材线虫的近缘种——拟松材线虫在形态上与松材线虫极其相似，常单生或与松材线虫混居于松木样品中，给形态学鉴定造成困难，使松材线虫的检疫和防控工作受到严重影响，特别是口岸检疫。随着分子生物学技术的发展，pcr检测技术逐渐成为松材线虫检测的利器，但是这些方法仍然要用贝尔曼漏斗法分离线虫后进行检测，虽然其检测可以在一个工作日内完成，但加上分离过程，仍然需要个2工作日，并没有达到口岸检疫快速通关的要求。
3.目前，针对松材线虫检测的常见方法一般为直接观察、形态学分析，基因序列比对等，必须依靠专业的技术人员和仪器设备，缺乏能够在待测现场直接检测且灵敏度优异的技术，大大地限制了检测松材线虫的效率。因此，开发操作简洁、快速、灵敏的松材线虫检测手段，对有力地限制松材线虫病的蔓延，保护松林植被，减少经济损失具有重要意义。


技术实现要素：

4.本实用新型的目的是提供一种松材线虫快速检测试纸，用于快速检测松树被松材线虫侵染情况。
5.本实用新型的松材线虫快速检测试纸包括底板(6)，底板(6)上从前端到后端依次粘接有样品垫(2)、金标垫(3)、反应膜(4)和吸水垫(5)；样品垫(2)的后端与金标垫(3)的前端交叠设置，金标垫(3)的后端与反应膜(4)的前端交叠设置，反应膜(4)的后端与吸水垫(5)的前端交叠设置；金标垫(3)的表面包被有松材线虫多克隆抗体-胶体金结合物；反应膜(4)表面包被有松材线虫单克隆抗体的检测线(4-1)和羊抗鼠igg的质控线(4-2)。
6.上述的松材线虫快速检测试纸的上端粘有上不干胶带(9)，金标垫(3)的上方粘有下不干胶带(10)。
7.上述的下不干胶带(10)上标记有箭头，箭头指向样品垫(2)方向。
8.上述的松材线虫快速检测试纸的检测线(4-1)和质控线(4-2)所在区域作为观察区(8)，样品垫(2)所在区域作为反应区(7)。
9.上述的底板(6)的材质为pvc板。
10.上述的反应膜(4)的材质为硝酸纤维素膜。
11.上述的金标垫(3)的材质为聚酯膜。
12.上述的样品垫的材质为玻璃纤维膜。
13.上述的吸水垫(5)为滤纸。
14.本实用新型的松材线虫快速检测试纸使用方法按以下步骤进行：
15.试纸条有箭头标记端为样品端(反应区)，将试纸条的样品端垂直向下，插入准备好的待检测样本液中；试纸条样品端没入样本液的深度不能超过箭头指示的标记线，10-20分钟内即可从观察区判断结果；若c线显色，t线不显色，则表示待测液中无松材线虫；若c线显色，t线也显色，则表示待测液中有松材线虫；若c线不显色，表示检测结果无效。
16.上述方法中，当待测物为植物组织提取液，或主要成分为水时，直接作为待测样品。
17.上述方法中，当待测物为固体植物时，将待测物磨碎，加入ph值为8.0，浓度为10mm的pbs，混合均匀作为预处理混合溶液；将预处理混合溶液静置沉淀，分离出的上清液作为待测样品；或者将预处理混合溶液离心分离，分离出的上清液作为待测样品。
18.本实用新型同现有技术相比具有以下优点：
19.(1)特异性强、稳定性好。
20.(2)操作方法简便快速，检测时间短。不需要使用其他特殊仪器、设备，只要将试纸插入待测样品液中，10-20分钟内即可从观察区观察到结果，方法简便，适合现场快速检测；
21.(3)本产品为条形，体积小、重量轻，便于携带和保存，应用性更广。
22.本实用新型制备的试纸特异性强、稳定性好、操作简便、节时省力，适用于对松材线虫的快速检测以及松树疫情的快速评价。
附图说明
23.图1为本实用新型的松材线虫快速检测试纸的俯视结构示意图；
24.图2为本实用新型的松材线虫快速检测试纸的装配结构示意图；
25.图3为本实用新型的松材线虫快速检测试纸的外观照片图；
26.图4为本实用新型的松材线虫快速检测试纸的反应区和观察区结构示意图；
27.图中：1、试纸，2、样品垫，3、金标垫，4、反应膜，4-1、检测线，4-2、质控线，5吸水垫，6、底板，7、反应区，8、观察区，9、上不干胶带，10、下不干胶带。
具体实施方式
28.下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案。
29.本实用新型实施例中的羊抗鼠igg为市购产品配制成溶液后涂覆。
30.本实用新型实施例中的pvc板、硝酸纤维素膜、聚酯膜、玻璃纤维膜和滤纸为市购产品。本
31.实用新型中，上不干胶带粘贴在吸水垫的上方和反应膜顶端，下不干胶带粘贴在金标垫上方以及反应膜底端和样品垫顶端。
32.实施例1
33.松材线虫快速检测试纸包括底板(6)，底板(6)上从前端到后端依次粘接有样品垫(2)、金标垫(3)、反应膜(4)和吸水垫(5)；样品垫(2)的后端与金标垫(3)的前端交叠设置，金标垫(3)的后端与反应膜(4)的前端交叠设置，反应膜(4)的后端与吸水垫(5)的前端交叠设置；金标垫(3)的表面包被有松材线虫多克隆抗体-胶体金结合物；反应膜(4)表面包被有松材线虫单克隆抗体的检测线(4-1)和羊抗鼠igg的质控线(4-2)；结构如图1所示，装配结构如图2所示；
34.松材线虫快速检测试纸的上端粘有上不干胶带(9)，金标垫(3)的上方粘有下不干胶带(10)，外观如图3所示；
35.下不干胶带(10)上标记有箭头，箭头指向样品垫(2)方向；
36.松材线虫快速检测试纸的检测线(4-1)和质控线(4-2)所在区域作为观察区(8)，样品垫(2)所在区域作为反应区(7)；
37.底板(6)的材质为pvc板，反应膜(4)的材质为硝酸纤维素膜，金标垫(3)的材质为聚酯膜，样品垫的材质为玻璃纤维膜，吸水垫(5)为滤纸。
38.松材线虫快速检测试纸使用方法按以下步骤进行：
39.试纸条有箭头标记端为样品端，将试纸条的样品端垂直向下，插入准备好的待检测的样本液中；试纸条样品端没入样本液的深度不能超过箭头指示的标记线，10-20分钟内即可从观察区判断结果；若c线显色，t线不显色，则表示待测液中无松材线虫；若c线显色，t线也显色，则表示待测液中有松材线虫；若c线不显色，表示检测结果无效；
40.当待测物为植物组织提取液，或主要成分为水时，直接作为待测样品；
41.当待测物为固体植物时，将待测物磨碎，加入ph值为8.0，浓度为10mm的pbs，混合均匀作为预处理混合溶液；将预处理混合溶液静置沉淀，分离出的上清液作为待测样品；或者将预处理混合溶液离心分离，分离出的上清液作为待测样品。


技术特征：
1.一种松材线虫快速检测试纸，其特征在于包括底板(6)，底板(6)上从前端到后端依次粘接有样品垫(2)、金标垫(3)、反应膜(4)和吸水垫(5)；样品垫(2)的后端与金标垫(3)的前端交叠设置，金标垫(3)的后端与反应膜(4)的前端交叠设置，反应膜(4)的后端与吸水垫(5)的前端交叠设置；金标垫(3)的表面包被有松材线虫多克隆抗体-胶体金结合物；反应膜(4)表面包被有松材线虫单克隆抗体的检测线(4-1)和羊抗鼠igg的质控线(4-2)。2.根据权利要求1所述的松材线虫快速检测试纸，其特征在于所述的松材线虫快速检测试纸的上端粘有上不干胶带(9)，金标垫(3)的上方粘有下不干胶带(10)。3.根据权利要求2所述的松材线虫快速检测试纸，其特征在于所述的下不干胶带(10)上标记有箭头，箭头指向样品垫(2)方向。4.根据权利要求1所述的松材线虫快速检测试纸，其特征在于所述的松材线虫快速检测试纸的检测线(4-1)和质控线(4-2)所在区域作为观察区(8)，样品垫(2)所在区域作为反应区(7)。

技术总结
一种松材线虫快速检测试纸，其特征在于包括底板，底板上从前端到后端依次粘接有样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫；样品垫的后端与金标垫的前端交叠设置，金标垫的后端与反应膜的前端交叠设置，反应膜的后端与吸水垫的前端交叠设置；金标垫的表面包被有松材线虫多克隆抗体-胶体金结合物；反应膜表面包被有松材线虫单克隆抗体的检测线和羊抗鼠IgG的质控线。本实用新型制备的试纸特异性强、稳定性好、操作简便、节时省力，适用于对松材线虫的快速检测以及松树疫情的快速评价。以及松树疫情的快速评价。以及松树疫情的快速评价。


技术研发人员：刘雨晴 魏计东 周兴智 阎红 杨锡文 黄帅帅 曹彦金 张文静 李庚
受保护的技术使用者：基因赛奥（大连）生物科技发展有限公司
技术研发日：2021.10.29
技术公布日：2022/3/22