检测抗体亚型IgG4的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的制作方法

检测抗体亚型igg4的时间分辨荧光免疫分析试剂盒
技术领域
1.本实用新型涉及一种试剂盒，特别涉及一种检测抗体亚型igg4的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。


背景技术：

2.在我国成年人中肾脏病的患病率达到10.8%，其肾脏病理改变以肾小球基膜通透性增加为主，主要临床症状表现为尿液中大量蛋白尿、血清中白蛋白下降、血脂升高以及高度水肿。其中膜性肾病(membranous nephropathy，mn)是引起成人肾病综合征的一个最常见的病因之一，根据病因不同主要分为原发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy，imn)、继发性膜性肾病(second membranous nephropathy，smn)。imn约占膜性肾病的三分之二；smn约占膜性肾病的三分之一，常见的致病因素有自身免疫性疾病、病毒感染、肿瘤及药物等。
3.目前膜性肾病血清学诊断上要依靠anti-pla2r igg进行诊断，通过时间分辨技术进行分析。传统的时间分辨技术常采用微孔板式免疫分析，由于微孔板的固液相反应面积小，需要的免疫反应时间较久，一般至少需要1h才能达到免疫反应平衡。而采用磁性纳米颗粒可以减少反应所需的样本量、加快反应时间、减少成本，建立一种小型的定量分析待测物的时间分辨免疫分析法。
4.通过建立anti-pla2r-igg4 trfia方法，使检测可由全自动设备操作，准确率高，单人份检测，使用方便，将此技术应用于膜性肾病的研究，可以更准确的鉴别诊断原发性膜性肾病、继发性膜性肾病，以通过方便的血清学检查进行膜性肾病的疗效评估，而为膜性肾病的诊断和治疗提供一个非常便捷的新手段。现有技术中，anti-pla2r-igg4 trfia方法使用的试剂盒包含层叠设置的多个试剂条，一次检测需用的所有试剂被集成在一个单人份试剂条上，使用时需要从上层到下层依次拿取试剂条，取用不便；而且，试剂条中的试剂需要置于2-8℃下保存，低温状态下的冷凝水会集结于试剂条底部，对下层试剂条的清洁度造成影响。


技术实现要素：

5.本实用新型的目的在于提供一种存放结构合理且取用方便的检测抗体亚型igg4的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，解决背景技术中所述的问题。
6.本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是：
7.一种检测抗体亚型igg4的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括：
8.试剂条，侧部设有沿试剂条长度方向延伸的凸边；
9.盒体，内部设有用于层叠放置试剂条的容置腔，盒体前端和顶端开口，容置腔内壁设有与凸边配合的承托片，承托片沿盒体高度方向间隔设置，盒体后端设有沿盒体高度方向延伸且贯穿盒体外壁的排水孔；
10.隔板，设于盒体的容置腔内，隔板沿盒体高度方向间隔设置，相邻隔板之间的间距
大于试剂条的高度，隔板上表面设有排水流道，排水流道前端封闭，排水流道后端连通排水孔，排水流道前端位置高于排水流道后端位置。
11.作为优选，所述试剂条表面设有若干预留孔、若干清洗孔、至少一个增强液孔、至少一个检测孔、至少一个铕标记物孔、至少一个反应缓冲液孔和至少一个磁微粒溶液孔。
12.作为优选，所述试剂条包括集成于试剂条上的反应缓冲液、清洗液、增强液、包被pla2r抗原的磁微粒溶液、铕标记的抗人igg4抗体溶液和anti-pla2r igg4的冻干校准品。
13.作为优选，所述盒体为长方体，盒体后端设有拉手，拉手沿盒体高度方向设置。
14.作为优选，所述承托片长度大于凸边长度。
15.作为优选，所述凸边底部设有圆弧形折边，圆弧形折边底部与承托片表面相接。
16.作为优选，所述排水流道的轴向截面为圆弧形。
17.本实用新型的有益效果是：
18.本实用新型的检测抗体亚型igg4的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，实现以抽拉形式取用试剂条的便利操作，不需受到现有试剂盒从上到下依次取用试剂条的限制；本实用新型的试剂条在低温存放时，其底部的冷凝水通过排水流道由盒体内的排水孔及时排出，防止位于下层的试剂条被污染；本实用新型用于检测anti-pla2r igg4含量，anti-pla2r igg4对于原发性膜性肾病的检测明显优于anti-pla2r igg检测，其专属的特异性更强，为临床提供了原发性膜性肾病的高特异性血清学检测标记物。
附图说明
19.为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
20.图1是本实用新型的主视结构示意图；
21.图2是本实用新型的俯视结构示意图；
22.图3是本实用新型盒体的内部结构示意图；
23.图4是本实用新型排水孔的结构示意图；
24.图5是本实用新型排水流道的结构示意图；
25.图6是本实用新型圆弧形折边的结构示意图。
26.图中：1、试剂条，2、盒体，3、隔板，101、凸边，102、预留孔，103、清洗孔，104、增强液孔，105、检测孔，106、铕标记物孔，107、反应缓冲液孔，108、磁微粒溶液孔，109、圆弧形折边，201、容置腔，202、承托片，203、排水孔，204、拉手，301、排水流道。
具体实施方式
27.下面通过具体实施例，并结合附图，对本实用新型的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本实用新型的实施并不局限于下面的实施例，对本实用新型所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本实用新型保护范围。
28.在本实用新型中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域
的常规方法。下述实施例中的部件或设备如无特别说明，均为通用标准件或本领域技术人员知晓的部件，其结构和原理都为本技术人员均可通过技术手册得知或通过常规实验方法获知。
29.实施例1：
30.如图1-4所示的一种检测抗体亚型igg4的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括试剂条1、盒体2和隔板3。
31.试剂条1侧部设有沿试剂条长度方向延伸的凸边101。
32.盒体2内部设有用于层叠放置试剂条1的容置腔201，盒体2前端和顶端开口，容置腔201内壁设有与凸边101配合的承托片202，承托片202沿盒体2高度方向间隔设置，盒体2后端设有沿盒体2高度方向延伸且贯穿盒体2外壁的排水孔203。
33.隔板3设于盒体2的容置腔201内，隔板3沿盒体2高度方向间隔设置，相邻隔板3之间的间距大于试剂条1的高度，隔板3上表面设有排水流道301，排水流道301前端封闭，排水流道301后端连通排水孔203，排水流道301前端位置高于排水流道301后端位置。
34.通过上述技术方案，可方便的以抽拉形式取用试剂条，不需受到现有试剂盒从上到下依次取用试剂条的限制，本实施例的试剂条在低温存放时，其底部的冷凝水通过排水流道由盒体内的排水孔及时排出，防止位于下层的试剂条被污染。
35.实施例2：
36.如图1-4所示的一种检测抗体亚型igg4的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括试剂条1、盒体2和隔板3，盒体2内层叠设置五个试剂条1和五个隔板3。
37.试剂条1侧部设有沿试剂条长度方向延伸的凸边101。试剂条1表面设有四个预留孔102、四个清洗孔103、一个增强液孔104、一个检测孔105、一个铕标记物孔106、一个反应缓冲液孔107和一个磁微粒溶液孔108。通过上述各孔，反应缓冲液、清洗液、增强液、包被pla2r抗原的磁微粒溶液、铕标记的抗人igg4抗体溶液和anti-pla2r igg4的冻干校准品被集成于试剂条上。
38.反应缓冲液为ph7.8的50mmol/l tris-hcl含 8mmol/l nacl、0.1%bsa、50μmol/l dtpa、0.1ml/l tween-80和0.1%nan3。
39.清洗液为含0.48g/l的tris， 12.49g/l的nacl， 1.11g/l的tween-20，以盐酸调节ph为7.8的缓冲溶液。
40.增强液为含体积浓度为3.6
‰
的冰醋酸，0.5g/l的醋酸钠，0.05g/l的β-萘甲酰三氟丙酮，0.03g/l的三辛基氧化膦和体积浓度为1
‰
的triton x-100的混合溶液。
41.包被pla2r抗原的磁微粒溶液经直径为50-5000纳米的活化的磁微粒与pla2r抗原连接、洗涤、封闭、洗涤制备得到。
42.铕标记的抗人igg4抗体溶液以eu
3 -n
2-[p-异氰酸-苄基]-二乙烯三胺四乙酸钠标记抗人igg4抗体制备得到，抗人igg4抗体与eu
3 -n
2-[p-异氰酸-苄基]-二乙烯三胺四乙酸钠的质量比为5:1。
[0043]
anti-pla2r igg4的冻干校准品为用含2g/l的bsa和1g/l的nan3的50mmol/l的ph7.8 tris-hcl的反应缓冲液，之后将anti-pla2r igg4配制成不同浓度的校准品溶液后冻干保存。
[0044]
盒体2为长方体，盒体2内部设有用于层叠放置试剂条1的容置腔201，盒体2前端和
顶端开口。容置腔201内壁设有与凸边101配合的承托片202，以形成试剂条1与盒体2的抽拉结构。为了获得更好的抽拉效果，承托片202长度大于凸边101长度，凸边101底部设有圆弧形折边109，圆弧形折边109底部与承托片202表面相接。承托片202沿盒体2高度方向间隔设置，盒体2后端设有沿盒体2高度方向延伸且贯穿盒体2外壁的排水孔203。盒体2后端设有拉手204，拉手204沿盒体2高度方向设置。
[0045]
隔板3设于盒体2的容置腔201内，隔板3沿盒体2高度方向间隔设置，相邻隔板3之间的间距大于试剂条1的高度，隔板3上表面设有排水流道301，排水流道301前端封闭，排水流道301后端连通排水孔203，排水流道301前端位置高于排水流道301后端位置，如图5所示，排水流道301的轴向截面为圆弧形。
[0046]
为了获得更好的抽拉效果，承托片202长度大于凸边101长度，如图6所示，凸边101底部设有圆弧形折边109，圆弧形折边109底部与承托片202表面相接。
[0047]
本实施例的试剂条取用方便，操作时仅需抽拉即可，并不受到从上到下依次取用的限制，试剂条在低温存放时，其底部的冷凝水通过排水流道由盒体内的排水孔及时排出，防止位于下层的试剂条被污染。
[0048]
本实施例在40min内即可检测得到血清中anti-pla2r igg4的含量，检测结果准确可靠，除了拥有trfia技术的灵敏度高、储存时间长、无放射性污染、测量范围宽等诸多优点外，还可通过免疫磁微粒的富集作用以及磁微粒在液体中充分扩散使得结合表面积扩大的特性，大大缩短反应时间，提高检测灵敏度，同时磁微粒与抗体通过化学基团定向连接，大大减少了抗原的用量以及显著提高检测的精密度，同时实现自动化，克服了传统微孔板式酶联免疫法（elisa）技术需要样本积累到一定数量才能检测，实现了样本的即时检测，效率高。
[0049]
本实施例是以纳米磁微粒为载体的高效时间分辨荧光技术：磁微粒与pla2r抗原的自由氨基连接，形成包被有pla2r抗原的免疫磁微粒，该免疫磁微粒依靠其超大的比表面积可在短时间内结合大量anti-pla2r igg4，通过磁分离，加入eu标记的抗人igg4进行示踪，用增强液将eu从复合物上解离下来后，与增强液中的螫合剂螯合形成一种胶态分子团，分子团在紫外光的激发下能发出很强的发射波长的荧光，信号增强了百万倍，可灵敏的检测血清中anti-pla2r igg4的含量。
[0050]
本实施例用于检测anti-pla2r igg4含量，anti-pla2r igg4对于原发性膜性肾病的检测明显优于anti-pla2r igg检测，其专属的特异性更强。为临床提供了原发性膜性肾病的高特异性血清学检测标记物。
[0051]
以上所述的实施例只是本实用新型的一种较佳的方案，并非对本实用新型作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。