静电喷雾法制备的香叶木素固体自微乳纳米粒及制备方法与流程

1.本发明涉及药物制剂领域，特别是涉及难溶性活性成份香叶木素的固体自微乳纳米粒及其制备方法。


背景技术：

2.香叶木素(diosmetin)，分子式为c
16h12
o6，化学名称为3',5,7-三羟基-4'-甲氧基黄酮，主要提取自柠檬、柑橘、菊花、豆科植物以及橄榄叶，活性成分为黄酮类化合物，具有抗氧化、抗感染、抗休克等多种药理作用(参见：yang y,gong x-b,huang l-g,et al.diosmetin exerts anti-oxidative,anti-inflammatory and anti-apoptotic effects to protect against endotoxin-induced acute hepatic failure in mice[j].oncotarget.2017,8(19):30723-30733)。香叶木素为淡黄色粉末，无臭无味，在水中极难溶，但可溶于甲醇、乙醇等有机溶剂。此外还有研究报道，香木叶素可一定程度上减轻脂多糖诱导的急性肺损伤，同时选择性地降低体内细胞的促炎作用，并且香叶木素还具有清除活性氧的能力，可延缓ages及其受体的产生，从而综合改善阿尔兹海默症患者的空间学习记忆能力[参见：郝莉霞,卢蓉,马霞霞,樊书娟.香叶木素对胎粪诱导的新生大鼠急性肺损伤的作用及其机制探讨.实验动物与比较医学.2020,10.40(5):384-389；马纳,李亚静,范吉平.香叶木素药理作用研究进展[j].辽宁中医药大学学报.2018,20(09):214-217；chandler d,woldu a,rahmadi a,et al.effects of plant-derived polyphenols on tnf-a and nitric oxide production induced by advanced glycation endproducts[j].molecular nutrition food research.2010,54(s2):141-150.]。
[0003]
香叶木素与大多数黄酮类药物一样，存在水溶性差和高首过效应的问题，导致其生物利用度偏低，制约了香叶木素在功能性食品和临床治疗产品开发中的应用(参见：罗敏,陈秋红,向姝涵,白明勇,刘源,任静.香叶木素固体脂质纳米粒的制备及质量评价.中国抗生素杂志.2020,2:1-6.)。自微乳以油为载体，乳化剂和助乳化剂为增溶促吸成份，可极大提升药物水溶性，并且增强药物的淋巴转运，有效减弱药物的首过效应。但是自微乳存在储存不便、剂型受限、制剂稳定性较差、对胃肠道刺激性较强等缺点，而固体自微乳很好的解决了这些缺点并保持了药物的高度分散性及高溶解度，因此近年来开发更多的固化自微乳的方法成为研究重点。相较于其他固化工艺，例如：喷雾干燥技术、固体载体吸附技术、球晶造粒技术、离子凝胶化技术和液固压缩技术，本发明使用静电喷雾技术制备固体自微乳纳米粒，该工艺具有制备方法简单、工业化程度高、产品质量稳定、无加热过程、适用范围广等优势，采用该工艺制得的固体自微乳呈纳米单分散状态，因此其不仅具有液体自微乳的优点，而且固体载体可提升自微乳的稳定性，固化后可根据需求将纳米粒制成各种固体剂型，满足剂型开发的需要。(参见：孙娟娟,张靖,郭清清,刘梦,秦淑莲,臧洪梅.固体自微乳载体、固体化方法及稳定性研究进展.2017,8.37(16):1645-1650；agarwal v,siddiqui a,ali h,et al.dissolution and powder flow characterization of solid-emulsified drug delivery system[j].int j pharm.2009,366(1-2):44-52；d.w.kim,m.s.kwon,
a.m.yousaf,p.balakrishnan,j.h.park,d.s.kim,et al.comparison of a solid smedds and solid dispersion for enhanced stability and bioavailability of clopidogrel napadisilate.carbohydrate polymers.2014(114):365-374；j.guan,x.huan,q.liu,l.jin,h.wu,x.zhang,et al.synergetic effect of nucleation and crystal growth inhibitor on in vitro-in vivo performance of supersaturable lacidipine solid dispersion.int j pharm.2019,7(566):594-603)
[0004]
目前，关于制备固体自微乳纳米粒的专利较少，主要包括：cn 109985008 a公开了一种虾青素固体自微乳及其制备方法，将液体自微乳与二氧化硅进行物理混合吸附，使液体自微乳以固体形式储存，但是发明未公开该固体自微乳的体外释放数据、虾青素体内血药浓度测定和药动学参数；cn 111264860 a公开了含有虾青素和槲皮素的固体自微乳微囊及其制备方法和应用，将含有虾青素和槲皮素的自微乳与固体吸附剂混合得到固体自微乳微囊，但未公开该微囊的体外释放研究和药动学研究；cn 110151730 a公开了一种橙皮素固体自微乳渗透泵胶囊剂及其制备方法，利用球晶造粒技术制备橙皮素固体自微乳再制成渗透泵控释胶囊，但未公开药动学数据且主要利用固体自微乳易于转化成其他剂型的特性制备渗透泵胶囊。综上，公开的固体自微乳主要改善液体自微乳的剂型限制，实现了液体自微乳固化的要求，但其固体粒子工艺可控性不高，而静电喷雾技术的优势则在于可实现单分散微纳米粒子的成型，将自乳化技术与静电喷雾成型技术相结合以提高难溶性活性成分生物利用度的研究与专利鲜有报道。


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的在于提供一种溶解度好，释药速度快，口服生物利用度高的香叶木素固体自微乳纳米粒。该固体自微乳纳米粒系将液体自微乳分散于亲水性固体载体中，通过静电喷雾技术制得的粒子均一、形态圆整的球形纳米颗粒，从而提升难溶性生物活性成份的溶解度，实现快速释放，改善其口服生物利用度。
[0006]
本发明的另一目的是提供香叶木素固体自微乳纳米粒的制备方法。运用静电喷雾技术直接实现液体自微乳的固化并制备得到纳米级别的固体颗粒，有效发挥载体成分的增溶、增稳、促吸作用，为后续产品的开发奠定基础。
[0007]
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0008]
一种静电喷雾法制备的香叶木素固体自微乳纳米粒，其中液体自微乳由油相、乳化剂和助乳化剂组成，其中香叶木素、油相、乳化剂和助乳化剂的质量比为1:3-10:9-28:4-12，静电喷雾工作液的溶剂体系为纯水，工作液中含有液体自微乳、亲水性固体载体和助纺剂，其中液体自微乳、亲水性固体载体和助纺剂的质量比为＝1:3-5:0.1-0.33。
[0009]
上述的液体自微乳体系中的油相为蓖麻油、campul mcm c-8ep/nf(单辛酸甘油酯)、辛癸酸甘油三酯或椰子油中任意一种。
[0010]
上述的液体自微乳体系中的乳化剂为吐温20、吐温80、聚氧乙烯蓖麻油(cremophor el)或司盘80中任意一种。
[0011]
上述的液体自微乳体系中的助乳化剂为聚乙二醇400(peg 400)、1，2-丙二醇或正丁醇中任意一种。
[0012]
上述的亲水性固体载体为聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物
或聚乙烯吡咯烷酮(pvp)，pvp的规格包含pvp k12、pvp k17、pvp k25或pvp k30s。
[0013]
上述的助纺剂为聚乙烯醇(pva)或聚氧化乙烯(peo)，peo规格为peo(mn＝10,000)、peo(mn＝50,000)、peo(mn＝100,000)或peo(mn＝600,000)。
[0014]
上述的香叶木素固体自微乳纳米粒为白色粉末状，易溶于水，水中分散后粒径为200-400nm，呈规则球形。
[0015]
上述的香叶木素固体自微乳纳米粒可灌装于胶囊中制成胶囊剂或压制成片剂。
[0016]
上述一种静电喷雾法制备的香叶木素固体自微乳纳米粒的方法，按照下述步骤进行：
[0017]
(1)按比例称取油相、乳化剂和助乳化剂并将该油乳混合物放置于水浴锅中边搅拌边加热，搅拌速度400r/min，加热温度50℃，在该条件下搅拌30min后加入香叶木素，继续边加热边搅拌1h后即可得到呈深黄色且澄清的香叶木素液体自微乳。
[0018]
(2)量取10ml纯水并将其置于水浴锅中加热至37℃，随后加入一定量固体载体，搅拌至完全溶解，之后加入一定量的助纺剂，同样搅拌至完全溶解。最后，加入0.3g液体自微乳，搅拌20min直至溶液均一稳定，即可得到静电喷雾工作液。
[0019]
(3)将静电喷雾工作液置于注射器中，使用恒流泵控制流速缓慢推注工作液，推注速度为0.1-0.4ml/h，静电喷雾工作电压范围为12-20kv，静电喷雾喷头规格为23g，喷头与接收板间的距离为10-20cm，工作液经喷头喷出后雾化成纳米颗粒，在电场力的作用下吸附于接收板上，揭下置于接收板上的铝箔纸刮下即可得到香叶木素固体自微乳纳米粒。
[0020]
有益效果
[0021]
本发明具有以下的有益效果：
[0022]
1、本发明解决了香叶木素水溶性差的问题，制备出溶解度好、体外释放速度快的香叶木素固体自微乳纳米粒，该固体自微乳纳米粒使用亲水性固体载体，同时使用静电喷雾技术制备出纳米级别的固体颗粒，其比表面积大可显著提升固体制剂中药物的溶出速率，根据体外释放实验研究结果，香叶木素在水中几乎不溶，而所制得的香叶木素固体自微乳纳米粒在水中15分钟即可释放95％以上，与液体自微乳相当。
[0023]
2、本发明通过亲水性固体载体和油脂性载体的增溶、增稳、促吸作用，同时提高了香叶木素在水、ph1.2缓冲液和ph6.8缓冲液中的释放速度，从而提升香叶木素的口服生物利用度。大鼠的体内生物利用度研究表明，各时间点自微乳体系的药物浓度均显著高于，与液体自微乳相比固体自微乳纳米粒的相对生物利用度高达427.58％，显著提高了口服生物利用度。
[0024]
3、本发明提供了一种制备自微乳固体纳米粒的固化方法，即采用静电喷雾技术制备固体自微乳纳米粒，在使用静电喷雾技术制备的过程中，无加热过程、无有机试剂残留，制备出的香叶木素固体自微乳纳米粒为白色粉末状颗粒，形态呈现出规整球形，可迅速溶于水中，固体自微乳溶于水后平均粒径为213.65nm，zeta电位为-19.21
±
2.23mv，pdi指数为0.289
±
0.04，扫描电镜结果图显示纳米粒分布均匀。同时，通过附图3和附图4，可发现在高载药的情况下，液体自微乳粒子形态可能不规则，而通过静电喷雾及固体载体、助纺剂的共同作用，其制得的固体自微乳纳米粒子形态得到明显改善，说明该方法对固体粒子的成型具有显著影响。
附图说明：
[0025]
图1为静电喷雾法制备香叶木素固体自微乳纳米粒的工艺流程图；
[0026]
图2为实施例1制备的香叶木素液体自微乳的透射电镜图；
[0027]
图3为实施例2制备的香叶木素液体自微乳的透射电镜图；
[0028]
图4为实施例2制备的香叶木素固体自微乳纳米粒的扫描电镜图；
[0029]
图5为实施例2制备的香叶木素固体自微乳纳米粒的透射电镜图；
[0030]
图6为实施例1所制备的香叶木素液体自微乳的体外释放曲线；
[0031]
图7为实施例2所制备的香叶木素固体自微乳纳米粒的体外释放曲线；
[0032]
图8为实施例1所制备的香叶木素液体自微乳和实施例2所制备的香叶木素固体自微乳纳米粒的平均血药浓度-时间曲线图。
具体实施方式
[0033]
以下所列实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0034]
以下实施例所用主要仪器和材料
[0035]
实验材料：香叶木素(上海麦克林生化科技有限公司，纯度98％)；pvp(巴斯夫新材料有限公司)；peo(巴斯夫新材料有限公司)；(巴斯夫新材料有限公司)；campul mcm c-8ep/nf(美国abitec公司)；聚氧乙烯蓖麻油(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；聚乙二醇400(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)。
[0036]
实验仪器：电子天平(德国赛多利斯sartoriusbsa124s-cw)；数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；恒温振荡器(江苏金坛市中大仪器厂)；90plus pals粒径分析仪(美国brookhaven instruments)；lsp01-1a型微量注射泵(河北保定兰格有限公司)；hb-z303-1ac型直流高压电源(天津豪凯科技发展有限公司)；液相色谱仪(包括g1311b液相四元泵，g1329b进样器，g1316a柱温箱，g1315d紫外检测器，waters c18柱)(美国安捷伦)。
[0037]
实施例1香叶木素固体自微乳纳米粒
[0038]
(1)按质量比例5:14:6称取campul mcm c-8ep/nf、聚氧乙烯蓖麻油和聚乙二醇400共1g，并将该油乳混合物放置于水浴锅中边搅拌边加热，搅拌速度400r/min，加热温度50℃，在该条件下搅拌30min后加入20mg香叶木素，继续边加热边搅拌1h后即可得到呈深黄色且澄清的香叶木素液体自微乳。
[0039]
(2)量取10ml纯水并将其置于水浴锅中加热至37℃，随后加入900mg pvp k25，搅拌至完全溶解，之后加入80mg peo(mn＝50,000)，同样搅拌至完全溶解。最后，加入0.3g液体自微乳，搅拌20min直至溶液均一稳定，即可得到静电喷雾工作液。
[0040]
(3)将静电喷雾工作液置于注射器中，使用恒流泵控制流速缓慢推注工作液，推注速度为0.3ml/h，静电喷雾工作电压范围为16kv，静电喷雾喷头规格为23g，喷头与接收板间的距离为15cm，工作液经喷头喷出后雾化成纳米颗粒，在电场力的作用下吸附于接收板上，揭下置于接收板上的铝箔纸刮下即可得到香叶木素固体自微乳纳米粒。
[0041]
实施例2香叶木素固体自微乳纳米粒
[0042]
(1)按质量比例5:14:6称取campul mcm c-8ep/nf、聚氧乙烯蓖麻油和聚乙二醇400共1g，并将该油乳混合物放置于水浴锅中边搅拌边加热，搅拌速度400r/min，加热温度
50℃，在该条件下搅拌30min后加入60mg香叶木素，继续边加热边搅拌1h后即可得到呈深黄色且澄清的香叶木素液体自微乳。
[0043]
(2)量取10ml纯水并将其置于水浴锅中加热至37℃，随后加入900mg pvp k25，搅拌至完全溶解，之后加入80mg peo(mn＝50,000)，同样搅拌至完全溶解。最后，加入0.3g液体自微乳，搅拌20min直至溶液均一稳定，即可得到静电喷雾工作液。
[0044]
(3)将静电喷雾工作液置于注射器中，使用恒流泵控制流速缓慢推注工作液，推注速度为0.3ml/h，静电喷雾工作电压范围为16kv，静电喷雾喷头规格为23g，喷头与接收板间的距离为15cm，工作液经喷头喷出后雾化成纳米颗粒，在电场力的作用下吸附于接收板上，揭下置于接收板上的铝箔纸刮下即可得到香叶木素固体自微乳纳米粒。
[0045]
实施例3香叶木素固体自微乳纳米粒
[0046]
(1)按质量比例5:14:6称取campul mcm c-8ep/nf、聚氧乙烯蓖麻油和聚乙二醇400共1g，并将该油乳混合物放置于水浴锅中边搅拌边加热，搅拌速度400r/min，加热温度50℃，在该条件下搅拌30min后加入60mg香叶木素，继续边加热边搅拌1h后即可得到呈深黄色且澄清的香叶木素液体自微乳。
[0047]
(2)量取10ml纯水并将其置于水浴锅中加热至37℃，随后加入900mg搅拌至完全溶解，之后加入80mg peo(mn＝50,000)，同样搅拌至完全溶解。最后，加入0.3g液体自微乳，搅拌20min直至溶液均一稳定，即可得到静电喷雾工作液。
[0048]
(3)将静电喷雾工作液置于注射器中，使用恒流泵控制流速缓慢推注工作液，推注速度为0.2ml/h，静电喷雾工作电压范围为16kv，静电喷雾喷头规格为23g，喷头与接收板间的距离为15cm，工作液经喷头喷出后雾化成纳米颗粒，在电场力的作用下吸附于接收板上，揭下置于接收板上的铝箔纸刮下即可得到香叶木素固体纳米粒。
[0049]
实施例4香叶木素固体自微乳纳米粒
[0050]
(1)按质量比例5:14:6称取campul mcm c-8ep/nf、聚氧乙烯蓖麻油和聚乙二醇400共1g，并将该油乳混合物放置于水浴锅中边搅拌边加热，搅拌速度400r/min，加热温度50℃，在该条件下搅拌30min后加入60mg香叶木素，继续边加热边搅拌1h后即可得到呈深黄色且澄清的香叶木素液体自微乳。
[0051]
(2)量取10ml纯水并将其置于水浴锅中加热至37℃，随后加入900mg pvp k17，搅拌至完全溶解，之后加入100mg peo(mn＝50,000)，同样搅拌至完全溶解。最后，加入0.3g液体自微乳，搅拌20min直至溶液均一稳定，即可得到静电喷雾工作液。
[0052]
(3)将静电喷雾工作液置于注射器中，使用恒流泵控制流速缓慢推注工作液，推注速度为0.2ml/h，静电喷雾工作电压范围为12kv，静电喷雾喷头规格为23g，喷头与接收板间的距离为10cm，工作液经喷头喷出后雾化成纳米颗粒，在电场力的作用下吸附于接收板上，揭下置于接收板上的铝箔纸刮下即可得到香叶木素固体自微乳纳米粒。
[0053]
实施例5香叶木素固体自微乳纳米粒
[0054]
(1)按质量比例5:14:6称取campul mcm c-8ep/nf、聚氧乙烯蓖麻油和聚乙二醇400共1g，并将该油乳混合物放置于水浴锅中边搅拌边加热，搅拌速度400r/min，加热温度50℃，在该条件下搅拌30min后加入60mg香叶木素，继续边加热边搅拌1h后即可得到呈深黄色且澄清的香叶木素液体自微乳。
[0055]
(2)量取10ml纯水并将其置于水浴锅中加热至37℃，随后加入1500mg pvp k25，搅
拌至完全溶解，之后加入80mg peo(mn＝10,000)，同样搅拌至完全溶解。最后，加入0.3g液体自微乳，搅拌20min直至溶液均一稳定，即可得到静电喷雾工作液。
[0056]
(3)将静电喷雾工作液置于注射器中，使用恒流泵控制流速缓慢推注工作液，推注速度为0.3ml/h，静电喷雾工作电压范围为16kv，静电喷雾喷头规格为23g，喷头与接收板间的距离为20cm，工作液经喷头喷出后雾化成纳米颗粒，在电场力的作用下吸附于接收板上，揭下置于接收板上的铝箔纸刮下即可得到香叶木素固体自微乳纳米粒。
[0057]
实施例6香叶木素固体自微乳纳米粒
[0058]
(1)按质量比例5:14:6称取campul mcm c-8ep/nf、聚氧乙烯蓖麻油和聚乙二醇400共1g，并将该油乳混合物放置于水浴锅中边搅拌边加热，搅拌速度400r/min，加热温度50℃，在该条件下搅拌30min后加入60mg香叶木素，继续边加热边搅拌1h后即可得到呈深黄色且澄清的香叶木素液体自微乳。
[0059]
(2)量取10ml纯水并将其置于水浴锅中加热至37℃，随后加入900mg pvp k30s，搅拌至完全溶解，之后加入60mg peo(mn＝100,000)，同样搅拌至完全溶解。最后，加入0.3g液体自微乳，搅拌20min直至溶液均一稳定，即可得到静电喷雾工作液。
[0060]
(3)将静电喷雾工作液置于注射器中，使用恒流泵控制流速缓慢推注工作液，推注速度为0.3ml/h，静电喷雾工作电压范围为12kv，静电喷雾喷头规格为23g，喷头与接收板间的距离为15cm，工作液经喷头喷出后雾化成纳米颗粒，在电场力的作用下吸附于接收板上，揭下置于接收板上的铝箔纸刮下即可得到香叶木素固体自微乳纳米粒。
[0061]
实施例7香叶木素固体自微乳纳米粒
[0062]
(1)按质量比例5:14:6称取campul mcm c-8ep/nf、聚氧乙烯蓖麻油和聚乙二醇400共1g，并将该油乳混合物放置于水浴锅中边搅拌边加热，搅拌速度400r/min，加热温度50℃，在该条件下搅拌30min后加入60mg香叶木素，继续边加热边搅拌1h后即可得到呈深黄色且澄清的香叶木素液体自微乳。
[0063]
(2)量取10ml纯水并将其置于水浴锅中加热至37℃，随后加入1200mg搅拌至完全溶解，之后加入80mg peo(mn＝50,000)，同样搅拌至完全溶解。最后，加入0.3g液体自微乳，搅拌20min直至溶液均一稳定，即可得到静电喷雾工作液。
[0064]
(3)将静电喷雾工作液置于注射器中，使用恒流泵控制流速缓慢推注工作液，推注速度为0.4ml/h，静电喷雾工作电压范围为20kv，静电喷雾喷头规格为23g，喷头与接收板间的距离为20cm，工作液经喷头喷出后雾化成纳米颗粒，在电场力的作用下吸附于接收板上，揭下置于接收板上的铝箔纸刮下即可得到香叶木素固体自微乳纳米粒。
[0065]
实施例8实施例1所制备的香叶木素液体自微乳的形态学及粒径分布研究
[0066]
(1)使用透射电子显微镜(tem)进行形态观察。取适量制备香叶木素固体自微乳纳米粒的液体自微乳和香叶木素固体自微乳纳米粒充分分散于纯水中，以微量移液枪吸取后滴于碳膜铜网，同时以磷钼酸负染30s，随后样品放在红外灯下烘干，由分散到烘干过程控制在30min左右。将样品推入样品杆，使用tem观察样品的形态特征，结果见图2。由图2可知，香叶木素液体自微乳呈球形颗粒状分布均一，由比例尺换算可知香叶木素液体自微乳的粒径为10
–
30nm，粒径小穿膜能力强，符合自微乳的特征。
[0067]
(3)粒径分布及ζ电位。取适量香叶木素固体自微乳纳米粒和香叶木素液体自微乳，加入适量蒸馏水，振荡涡旋后使其完全溶解，随后使用90plus pals粒度分析仪(美国布
鲁克海文仪器公司)测定该香叶木素固体自微乳纳米粒和香叶木素液体自微乳的粒径分布，结果表明，该香叶木素液体自微乳的粒径为25.23nm，pdi指数为0.235，zeta电位为-6.83
±
2.55mv.。说明香叶木素液体自微乳系统分布均一且粒径小，与tem结果相符。
[0068]
实施例9实施例2所制备的香叶木素固体自微乳纳米粒的形态学及粒径分布研究
[0069]
(1)使用扫描电子显微镜(sem)进行形态观察。从铝箔纸上刮取适量香叶木素固体自微乳置于样品架上，使用导电胶将其固定于样品盘上，在真空条件下使用sem观测其表面形态，结果见图3。由图3可知，该香叶木素固体自微乳纳米粒呈规整的球形颗粒状，分布均匀，各球形固体载体之间存在轻微粘连，通过比例尺换算可知其粒径为150
–
300nm。
[0070]
(2)使用透射电子显微镜(tem)进行形态观察。取适量制备香叶木素固体自微乳纳米粒的液体自微乳和香叶木素固体自微乳纳米粒充分分散于纯水中，以微量移液枪吸取后滴于碳膜铜网，同时以磷钼酸负染30s，随后样品放在红外灯下烘干，由分散到烘干过程控制在30min左右。将样品推入样品杆，使用tem观察样品的形态特征，结果见图4和图5。由图4可知，该香叶木素液体自微乳由于载药量较大，自微乳液滴分布不均一且存在粘连现象，由比例尺换算可知香叶木素液体自微乳的粒径为50
–
200nm。由图5可知，香叶木素固体自微乳纳米粒分布均一，固体自微乳纳米粒分散均匀后呈球形颗粒状，其粒径为150
–
250nm，从图中可见固体载体上负载有许多由液体自微乳形成的微小球形液滴，液滴粒径约为20nm，与香叶木素液体自微乳的粒径相近，说明该辅料配比下可制备理想的香叶木素固体自微乳纳米粒。
[0071]
(3)粒径分布及ζ电位。取适量香叶木素固体自微乳纳米粒和香叶木素液体自微乳，加入适量蒸馏水，振荡涡旋后使其完全溶解，随后使用90plus pals粒度分析仪(美国布鲁克海文仪器公司)测定该香叶木素固体自微乳纳米粒和香叶木素液体自微乳的粒径分布，结果表明，该香叶木素液体自微乳的粒径为4562.78nm，pdi指数为0.894，zeta电位为-2.43
±
1.64mv.。说明香叶木素液体自微乳分布不均一且粒径较大，与tem结果相符。而该香叶木素固体自微乳纳米粒的粒径为183.49nm，pdi指数为0.296，ζ电位为-19.21
±
2.23mv，与tem和sem结果相符。说明pvp作为亲水性固体载体还可以起到稳定液体自微乳的作用，使固体自微乳纳米粒在水中分散均一。
[0072]
实施例10实施例1所制备的香叶木素液体自微乳的体外释药实验
[0073]
溶出介质为水、ph 1.2hcl、ph 6.8pbs，分别为100ml，将溶出介质置于250ml锥形瓶中，待加热至37℃后分别投入0.2g的香叶木素液体自微乳。37℃恒温搅拌8h，搅拌速度200r/min，于3、5、10、15、20、30、45、60、90、120、180、240、360和480min分别取样1ml并补充相应介质1ml，取500μl滤液，加500μl色谱甲醇破乳并稀释，经0.45μm微孔滤膜过滤后，高效液相色谱进样20μl，计算累积释药率。溶出曲线见图6。
[0074]
实施例11实施例2所制备的香叶木素固体自微乳纳米粒的体外释药实验
[0075]
溶出介质为水、ph 1.2hcl、ph 6.8pbs，分别为100ml，将溶出介质置于250ml锥形瓶中，待加热至37℃后分别投入0.2g的香叶木素固体自微乳纳米粒。37℃恒温搅拌8h，搅拌速度200r/min，于3、5、10、15、20、30、45、60、90、120、180、240、360和480min分别取样1ml并补充相应介质1ml，取500μl滤液，加500μl色谱甲醇破乳并稀释，经0.45μm微孔滤膜过滤后，高效液相色谱进样20μl，计算累积释药率。溶出曲线见图7。
[0076]
实施例12实施例1所制备的香叶木素液体自微乳和实施例2所制备的香叶木素固
体自微乳纳米粒的相对生物利用度实验
[0077]
(1)动物给药与血样处理。取15只健康雄性sd大鼠(250
±
20g)，随机分为3组(香叶木素组、香叶木素液体自微乳组、香叶木素固体自微乳纳米粒组)。每组大鼠在实验前均在实验室环境下饲养，适应环境3天。给药前禁食12h，自由饮水。以0.5％的羧甲基纤维素钠(cmc-na)溶液分散香叶木素，给药剂量为40mg/kg，制剂组给药剂量也为40mg/kg，给药后于5、15、30、60、90、120、180、240、360、480、600、720和1440min进行大鼠眼眶取血。大鼠眼眶静脉丛取血0.5ml，加入含50μl肝素钠1.5ml ep管中,37℃水浴0.5h，3700rpm/min离心10min，取上清，得血浆，-20℃储存备用。取血浆200μl于1.5ml离心管中，加入100μl异泽兰黄素(10μg/ml)，涡旋30s，随后加入乙酸乙酯700μl，涡旋30s，充分混合后放入离心机中8000rpm离心10min，取上层乙酸乙酯后吹干，使用100μl色谱级甲醇复溶，高效液相色谱进样20μl，计算各个时间点的药物浓度。
[0078]
(2)药时曲线绘制及药动参数拟合。绘制香叶木素、香叶木素液体和香叶木素固体自微乳纳米粒的血浆药时曲线，见图8。血药浓度数据经bapp软件(中国药科大学药代中心提供)拟合药动学参数，结果见表1。表1为实施例1制备的香叶木素液体自微乳和实施例2制备的香叶木素固体自微乳纳米粒的药物动力学参数，由结果可以看出，香叶木素固体自微乳纳米粒的t
1/2
、mrt、c
max
、t
max
和auc均高于香叶木素液体自微乳，且两者都要高于香叶木素，说明本发明制备的香叶木素固体自微乳纳米粒可显著提高香叶木素的口服吸收，亲水性固体载体pvp还具有增强稳定性和促进吸收的作用，相对于香叶木素液体自微乳，香叶木素固体自微乳纳米粒的口服相对生物利用度达427.58％。
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表1
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