四物胶囊提取物挥发油或其包合物特征图谱及其建立方法和应用与流程

1.本技术涉及药物分析技术领域，特别涉及一种四物胶囊提取物挥发油或包合物的特征图谱，及其在四物胶囊提取物挥发油或其包合物检测和质量控制中的应用。


背景技术：

2.挥发油是一类存在于植物体中具有挥发性、芳香气味、并可随水蒸气蒸馏出来的油状液体的总称。挥发油作为中草药中的一类主要的有效成分，广泛存在于中药中，通常用挥发油的含量高低来评判药材治疗的优劣。现代医药发展中，也越来越多的涉及到挥发油的应用，由于挥发油具有挥发性和不稳定性，如何将提取获得的挥发油加入到中药制剂中，保证制剂的治疗效用，使药物疗效发挥最大成为一个需要解决的关键问题。
3.传统中药挥发油处理方法为将挥发油首先提取，然后再将药材煎煮或粉碎，得到浸膏粉或药粉后，再将挥发油直接喷洒在药粉上或吸附在淀粉等辅料中然后制成各种剂型。这种方法简便易行，不需要过高的成本及设备，但药物的稳定性差，不能长时间储存，同时挥发油会逐渐逸散，同时也易产生霉变。
4.采用β-环糊精包合挥发油的工艺是现代制剂的新制法之一。环糊精是由淀粉经酶环合而成，具有环状中空筒形的特殊结构，是一类良好的包合材料。挥发油嵌入到筒状结构内形成超微粒分散物，分散效果好，易于吸收，同时缓慢释药，药物生物利用度较高，不良反应低。β-环糊精与挥发油包合是一种物理过程，不发生化学变化，挥发油仍保持原有的性质和作用。挥发油用β-环糊精包合可以增加挥发油的溶解度及溶出速度，可以提高挥发油的稳定性；使挥发油粉末化，降低其挥发性，提高挥发油的利用率；改善挥发油的不良臭味，减少挥发油的刺激性，降低其毒副反应等。
5.挥发油具有挥发性，不可避免造成其在制剂工艺中含量的损失。为了保证制剂的疗效，需对制剂中挥发油或包合物进行质量控制。测定挥发油性状、相对密度及含量等可以作为挥发油或包合物质量控制方法，然而这些方法无法反映出挥发油或包合物成分的整体情况，挥发油成分又是决定制剂疗效的关键因素。如何更加全面的控制挥发油质量至关重要。
6.四物胶囊是由川芎、当归、白芍、熟地黄4味药物组成，具有调经养血功能，用于营血虚弱，月经不调。在四物胶囊制备方法中，川芎、当归的挥发油被提取后，制备挥发油β-环糊精包合物，参与制剂工艺。因此，挥发油包合前后的质量控制是制备工艺中的关键环节之一。
7.现有技术中仍需要针对四物胶囊提取物挥发油及其包合物的改进的质量控制方法，其可以全面准确地对四物胶囊提取物挥发油及包合物的质量进行评价，保证挥发油及包合物质量的均一性、稳定性。


技术实现要素：

8.针对上述技术问题，本技术提供了一种四物胶囊提取物挥发油或其包合物的检测方法。该方法采用gc法建立四物胶囊提取物挥发油或其包合物特征图谱，可检测四物胶囊提取物挥发油及其包合物，全面地对四物胶囊提取物的质量进行评价，保证质量的均一性、稳定性。另外，本技术还提供一种四物胶囊提取物挥发油或其包合物的gc特征图谱。
9.中药特征图谱是指中药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到能够标示其中共有峰的图谱，是一种新的中药质量控制模式。
10.具体来说，本技术提供了一种四物胶囊提取物挥发油或其包合物的检测方法，所述方法包括以下步骤：
11.1)使用气相色谱(gc)法测定待检测药物制剂的气相色谱gc特征图谱；
12.2)使用gc法测定3-正丁烯基苯酞的gc图谱，并将其与步骤1)中的特征图谱比较；
13.其中，所述四物胶囊提取物挥发油或包合物gc特征图谱包括9个特征峰，将步骤2)得到的3-正丁烯基苯酞峰作为参照物峰(s峰)；
14.3)当各特征峰的相对保留时间和相对偏差满足以下条件，判定所述待检测药物制剂中含有四物胶囊提取物挥发油或包合物：
15.1号峰：相对保留时间0.121
±
0.012，相对偏差为0～10％；
16.2号峰：相对保留时间0.226
±
0.023，相对偏差为0～10％；
17.3号峰：相对保留时间0.389
±
0.039，相对偏差为0～10％；
18.4号峰：相对保留时间0.464
±
0.046，相对偏差为0～10％；
19.5号峰：相对保留时间0.872
±
0.087，相对偏差为0～10％；
20.6号峰：相对保留时间0.970
±
0.097，相对偏差为0～10％；
21.7号峰：相对保留时间1.000，相对偏差为0～10％；
22.8号峰：相对保留时间1.082
±
0.108，相对偏差为0～10％；
23.9号峰：相对保留时间1.111
±
0.111，相对偏差为0～10％；
24.其中，所述气相色谱法的条件包括以下：毛细管色谱柱，以(5％-苯基)-甲基聚硅氧烷为固定相；fid检测器；程序以升温条件运行。
25.术语“四物胶囊提取物挥发油”是指，比如按照四物胶囊的制备工艺从当归和/或川芎中提取得到的挥发油。
26.术语“包合物”是指，比如使用包合材料将四物胶囊提取物挥发油包合后所得的产物，再比如包合材料为β-环糊精。
27.术语“待检测药物”是指，比如包括但不限于四物胶囊及其类似物、制备所述四物胶囊的挥发油及其类似物、或者所述四物胶囊的挥发油的包合物及其类似物。
28.在一个优选的实施方案中，在本技术的检测方法中，所述色谱柱柱长为30m或60m，优选30m；内径为0.32mm或0.53mm，优选0.32mm；膜厚度为0.25μm、0.5μm或1μm，优选0.25μm。
29.在一个优选的实施方案中，在本技术的检测方法中，使用的载气为氮气或氦气，优选氮气。
30.在一个优选的实施方案中，在本技术的检测方法中，使用的载气流量为0.6～0.8ml/min，优选0.7ml/min。
31.在一个优选的实施方案中，在本技术的检测方法中，进样口温度为250℃～260℃，
优选250℃；检测器温度为260℃～270℃，优选260℃。
32.在一个优选的实施方案中，在本技术的检测方法中，分流比为10～20:1，优选20:1。
33.在一个优选的实施方案中，在本技术的检测方法中，进样量为1～2μl，优选2μl。
34.在一个优选的实施方案中，在本技术的检测方法中，所述升温条件为初始温度100℃，保持15分钟；以每分钟5℃的速率升温至110℃，保持25分钟；以每分钟4℃的速率升温至150℃，保持30分钟；以每分钟10℃的速率升温至250℃，保持10分钟。
35.在一个优选的实施方案中，本技术的检测方法应用于四物胶囊制剂工艺过程。
36.在一个实施方案中，本技术提供了一种四物胶囊提取物挥发油及包合物特征图谱，该方法包括以下所述的步骤与条件：
37.(1)参照物溶液制备：取3-正丁烯基苯酞约4mg，置于100ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
38.(2)挥发油供试品溶液制备：取挥发油10μl，置于20ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
39.(3)包合物供试品溶液制备：取包合物粉末约122mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，密塞，称定重量，超声(温度应不高于35℃，功率100w，频率40khz)处理40分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
40.(4)气相色谱法分析
41.色谱条件为：以(5％-苯基)-甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管色谱柱；fid检测器；载气为氮气，载气流量为0.7ml/min；进样口温度为250℃；检测器温度为260℃；分流比为20:1；进样量：2μl；程序升温条件。
42.(5)测定：分别精密吸取参照物溶液、挥发油供试品溶液与包合物供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，测定，记录色谱图。
43.采用gc-ms法结合对照品信息比对，确定了当归、川芎挥发油中的两个主要活性成分，分别为3-正丁烯基苯酞(峰7)和藁本内酯(峰9)。当以藁本内酯为参照物，9号峰为参照物峰(s峰)，其他8个峰相对保留时间则均小于1.000；由于峰9的峰面积较大，导致峰1、峰2、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰8的相对峰面积较小，均小于0.100；而以3-正丁烯基苯酞为参照物，该化合物峰处于色谱图的中间，且与其他色谱峰间的分离度良好，以3-正丁烯基苯酞相应的峰为s峰，计算出的各特征峰的相对保留时间和相对峰面积适中。显然，相比于藁本内酯(峰9)，3-正丁烯基苯酞(峰7)更适合作为参照物峰来测定四物胶囊提取物挥发油及包合物的gc特征图谱。
44.因此选择3-正丁烯基苯酞峰作为参照物峰来测定四物胶囊提取物挥发油或包合物。
45.本技术构建所得四物胶囊提取物挥发油或包合物的gc特征图谱包含9个共有主成分，以3-正丁烯基苯酞为参照物，7号峰为参照物峰(s峰)，该特征图谱中具有9个共有特征峰，以参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的
±
10％之内。规定值为峰1：0.121，峰2：0.226，峰3：0.389，峰4：0.464，峰5：0.872，峰6：0.970，峰7：1.000(s峰)，峰8：1.082，峰9：1.111。
46.在一个优选的实施方案中，本技术提供了一种四物胶囊提取物挥发油或其包合物
的检测装置，所述装置包括至少一个处理器，以及
47.存储器，其存储有指令，当通过至少一个处理器来执行该指令时，实施按照本技术任一项实施例所述的方法的比较步骤。
48.本技术至少取得了以下有益效果：
49.1)本技术通过气相色谱(gc)法建立了四物胶囊提取物挥发油及包合物的特征图谱，并通过试验确定了特征图谱的精密度、重复性及稳定性；
50.2)本技术建立得到的四物胶囊提取物挥发油及包合物特征图谱，可用于检测四物胶囊提取物挥发油和包合物；
51.3)通过分析四物胶囊提取物挥发油及包合物的特征图谱，可以全面地对四物胶囊制剂工艺中挥发油和包合物的质量进行控制与评价，保证药品质量的稳定性与一致性，从而用于四物胶囊提取物的药品质量标准与质量控制。
52.附图描述
53.图1.藁本内酯气相色谱图
54.图2.空白辅料气相色谱图
55.图3.3-正丁烯基苯酞(参照物)气相色谱图
56.图4.挥发油特征图谱
57.图5.包合物特征图谱
具体实施方式
58.实施例1
59.一种四物胶囊提取物挥发油及包合物特征图谱的构建方法，该方法包括以下所述的步骤和条件：
60.(1)参照物溶液制备：取藁本内酯2μl，置于10ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
61.(2)挥发油供试品溶液制备：取挥发油10μl，置于20ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
62.(3)包合物供试品溶液制备：取包合物粉末约122mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，密塞，称定重量，超声(温度应不高于35℃，功率100w，频率40khz)处理40分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
63.(4)气相色谱法分析
64.色谱条件为：以(5％-苯基)-甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管色谱柱；fid检测器；载气为氮气，载气流量为0.7ml/min；进样口温度为250℃；检测器温度为260℃；分流比为20:1；进样量：2μl；程序升温条件为初始温度100℃，保持15分钟；以每分钟5℃的速率升温至110℃，保持25分钟；以每分钟4℃的速率升温至150℃，保持30分钟；以每分钟10℃的速率升温至250℃，保持10分钟。
65.(5)测定：分别精密吸取参照物溶液、挥发油供试品溶液与包合物供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，测定，记录色谱图。
66.构建所得四物胶囊提取物挥发油及包合物的gc特征图谱包含9个共有主成分，以藁本内酯为参照物，9号峰为参照物峰(s峰)，该特征图谱中具有9个共有特征峰，以参照物
相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间和相对峰面积，其他8个峰相对保留时间则均小于1.000；并且峰1、峰2、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰8的相对峰面积值均较小，小于0.100。结果见表1～2。
67.表1挥发油与包合物的相对保留时间结果
[0068][0069]
表2挥发油与包合物的相对峰面积结果
[0070][0071]
实施例2
[0072]
一种四物胶囊提取物挥发油及包合物特征图谱的构建方法，该方法包括以下所述的步骤和条件：
[0073]
(1)参照物溶液制备：取3-正丁烯基苯酞约4mg，置于100ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0074]
(2)挥发油供试品溶液制备：取挥发油10μl，置于20ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
[0075]
(3)包合物供试品溶液制备：取包合物粉末约122mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，密塞，称定重量，超声(温度应不高于35℃，功率100w，频率40khz)处理40分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0076]
(4)气相色谱法分析
[0077]
色谱条件为：以(5％-苯基)-甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱；fid检测器；载气为氮气，载气流量为0.7ml/min；进样口温度为250℃；检测器温度为260℃；分流比为20:1；进样量：2μl；程序升温条件为初始温度100℃，保持15分钟；以每分钟5℃的速率升温至110℃，保持25分钟；以每分钟4℃的速率升温至150℃，保持30分钟；以每分钟10℃的速率升温至250℃，保持10分钟。
[0078]
(5)测定：分别精密吸取参照物溶液、挥发油供试品溶液与包合物供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，测定，记录色谱图。本技术构建所得四物胶囊提取物挥发油及包合物的gc特征图谱包含9个共有主成分，以3-正丁烯基苯酞为参照物，7号峰为参照物峰(s峰)，该特征图谱中具有9个共有特征峰，以参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的
±
10％之内。规定值为峰1：0.121，峰2：0.226，峰3：0.389，峰4：0.464，峰5：0.872，峰6：0.970，峰7：1.000(s峰)，峰8：1.082，峰9：1.111。
[0079]
以3-正丁烯基苯酞为参照物，该化合物峰处于色谱图的中间，且与其他色谱峰间的分离度良好，以3-正丁烯基苯酞相应的峰为s峰，计算出的各特征峰的相对保留时间和相
对峰面积适中。结果见表3～4。
[0080]
显然，相比于藁本内酯(峰9)，3-正丁烯基苯酞(峰7)更适合作为参照物峰来测定四物胶囊提取物挥发油及包合物的gc特征图谱。
[0081]
因此选择3-正丁烯基苯酞峰作为参照物峰来测定四物胶囊提取物挥发油或包合物。
[0082]
表3挥发油与包合物的相对保留时间结果
[0083][0084]
表4挥发油与包合物的相对峰面积结果
[0085][0086]
实施例3
[0087]
一种四物胶囊特征图谱的构建方法，该方法包括以下所述的步骤和条件：
[0088]
(1)参照物溶液制备：取3-正丁烯基苯酞约4mg，置于100ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0089]
(2)四物胶囊供试品溶液制备：取四物胶囊内容物约15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇400ml，密塞，超声(温度应不高于35℃，功率100w，频率40khz)处理40分钟，放冷，过滤，浓缩至15ml，将浓缩液转移至20ml容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0090]
(3)气相色谱法分析
[0091]
色谱条件为：以(5％-苯基)-甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱；fid检测器；载气为氮气，载气流量为0.7ml/min；进样口温度为250℃；检测器温度为260℃；分流比为20:1；进样量：2μl；程序升温条件为初始温度100℃，保持15分钟；以每分钟5℃的速率升温至110℃，保持25分钟；以每分钟4℃的速率升温至150℃，保持30分钟；以每分钟10℃的速率升温至250℃，保持10分钟。
[0092]
(4)测定：分别精密吸取参照物溶液、四物胶囊供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，测定，记录色谱图。本技术构建所得四物胶囊的gc特征图谱包含9个共有主成分，以3-正丁烯基苯酞为参照物，7号峰为参照物峰(s峰)，该特征图谱中具有9个共有特征峰，以参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的
±
10％之内。规定值为峰1：0.121，峰2：0.226，峰3：0.389，峰4：0.464，峰5：0.872，峰6：0.970，峰7：1.000(s峰)，峰8：1.082，峰9：1.111。
[0093]
与实施例2中的结果类似，对于四物胶囊的检测，以3-正丁烯基苯酞为参照物，该化合物峰处于色谱图的中间，且与其他色谱峰间的分离度良好，以3-正丁烯基苯酞相应的
峰为s峰，计算出的各特征峰的相对保留时间和相对峰面积适中。结果见表5～6。
[0094]
构建所得四物胶囊的gc特征图谱包含9个共有主成分，以藁本内酯为参照物，9号峰为参照物峰(s峰)，该特征图谱中具有9个共有特征峰，以参照物相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间和相对峰面积，其他8个峰相对保留时间则均小于1.000；并且峰1、峰2、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰8的相对峰面积值均较小，小于0.100。
[0095]
显然，相比于藁本内酯(峰9)，3-正丁烯基苯酞(峰7)更适合作为参照物峰来测定四物胶囊的gc特征图谱。
[0096]
因此选择3-正丁烯基苯酞峰作为参照物峰来测定四物胶囊。
[0097]
表5四物胶囊的相对保留时间结果
[0098][0099]
表6四物胶囊的相对峰面积结果
[0100][0101][0102]
实施例4
[0103]
本实施例提供上述四物胶囊提取物挥发油及包合物特征图谱构建的方法学考察。
[0104]
(1)专属性考察：取空白辅料样品，按实施例2中的特征图谱构建方法中供试品溶液制备方法制备空白辅料样品溶液，即得。同时，制备参照物溶液和供试品溶液。按实施例2中的特征图谱构建方法中的色谱条件，取上述溶液进行分析。
[0105]
专属性结论：空白辅料对四物胶囊提取物挥发油及包合物特征图谱检测无干扰。挥发油和包合物供试品特征图谱均呈现9个特征峰，其中与3-正丁烯基苯酞峰相对应的峰为参照峰(s峰)。结果如说明书附图图2～5。
[0106]
(2)重复性：取同一份挥发油和包合物供试品溶液，按上述实施例2所述的特征图谱构建方法中的色谱条件，连续进样6次，检测特征图谱，记录各共有峰保留时间及峰面积，以3-正丁烯基苯酞峰的保留时间和峰面积为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。
[0107]
重复性结论：各共有峰相对保留时间rsd值均小于5.0％；各共有峰相对峰面积rsd值均小于10.0％。说明方法重复性良好。
[0108]
表7重复性试验结果-挥发油供试品溶液(1)
[0109][0110]
表8精密度试验结果-挥发油供试品溶液(2)
[0111][0112]
表9重复性试验结果-包合物供试品溶液(1)
[0113][0114]
表10重复性试验结果-包合物供试品溶液(2)
[0115][0116][0117]
(3)精密度：由不同实验员，在不同日期，使用不同仪器，取同一份挥发油和包合物供试品溶液，按上述实施例2所述的特征图谱构建方法中的色谱条件，连续进样6次，检测特征图谱，记录各共有峰保留时间及峰面积，以3-正丁烯基苯酞峰的保留时间和峰面积为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。
[0118]
精密度结论：各共有峰相对保留时间rsd值均小于5.0％；各共有峰相对峰面积rsd值均小于10.0％。说明此方法精密度良好。
[0119]
表11精密度试验结果-挥发油供试品溶液(1)
[0120][0121]
表12精密度试验结果-挥发油供试品溶液(2)
[0122]
[0123][0124]
表13精密度试验结果-包合物供试品溶液(1)
[0125][0126]
表14精密度试验结果-包合物供试品溶液(2)
[0127][0128]
(4)溶液稳定性：取同一份挥发油和包合物供试品溶液，按上述实施例2所述的特征图谱构建方法中的色谱条件，分别于0h、6h、12h、24h、48h、60h进样，检测特征图谱，记录各共有峰保留时间及峰面积，以3-正丁烯基苯酞峰的保留时间和峰面积为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。
[0129]
溶液稳定性结论：各共有峰相对保留时间rsd值均小于5.0％；各共有峰相对峰面积rsd值均小于10.0％。提示供试品溶液稳定性良好。
[0130]
表15稳定性试验结果-挥发油供试品溶液(1)
[0131][0132]
表16稳定性试验结果-挥发油供试品溶液(2)
[0133][0134]
表17稳定性试验结果-包合物供试品溶液(1)
[0135][0136][0137]
表18稳定性试验结果-包合物供试品溶液(2)
[0138][0139]
本技术提供的四物胶囊提取物挥发油及包合物特征图谱的检测方法简单、易操作，特征性成分相应色谱峰保留完整，溶液稳定性良好，可用于检测四物胶囊提取物挥发油和包合物。同时，该方法精密度高，重现性良好，具有一定的专属性，所得特征图谱中各色谱峰之间分离效果良好。用本技术提供的四物胶囊提取物挥发油及包合物gc特征图谱的构建方法所构建的四物胶囊提取物挥发油或包合物特征图谱能有效表征其质量，保证药品质量的稳定性与一致性，有利于全面控制四物胶囊制剂的质量。