一种硫辛酸混合胶束及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及一种硫辛酸混合胶束，尤其涉及一种硫辛酸混合胶束及其制备方法和应用。


背景技术：

2.α-硫辛酸(a-lipoic acid，ala)是一种抗氧化能力非常强的天然抗氧化剂，在动物的肝脏组织及菠菜、番茄等植物中广泛分布。硫辛酸属于维生素b类化合物，在丙酮酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶、氨基己酸脱羧酶等多酶复合体中作为辅酶发挥作用。近些年来，硫辛酸的抗氧化性能受到越来越多的关注，成为了科学界研究的热点。α-硫辛酸(ala，氧化型)在体内可以转变为二氢硫辛酸(dhla，还原型)，ala和dhla均具有很强的抗氧化性，它们在体内发挥协同作用，是已知天然抗氧剂中效果最强的一种，其抗氧化能力是维生素c和维生素e联合能力的400多倍，被誉为“万能抗氧剂”。它们在预防及治疗与自由基有关的疾病，如癌症、衰老、糖尿病、动脉粥样硬化、脑和神经组织的退化性等疾病中发挥着重要的作用。
3.在化妆品领域，α-硫辛酸被认为是一种通用的抗氧化剂，它能增加所有细胞中谷胱甘肽的水平，起到美白、祛斑、抗衰老的作用。在国际上，α-硫辛酸作为化妆品原料已应用于一些知名的抗老化及美白祛斑产品中，例如裴礼康、reviva labs、paula's choice、hada-labo(肌研)等，并获得了良好的市场反馈。然而有关硫辛酸的应用依然存在一定的局限性，这主要与其特殊的物化性能有关，表现为在水中溶解度及其微弱，常温下溶解质量分数仅为0.08％，给后续产品的加工制备带来不便。且硫辛酸在氧气和光照下极易分解，生物利用度低，稳定性差，并且具有一定的刺激性。若要充分发挥硫辛酸在化妆品领域中的应用，就需要不同溶解态的硫辛酸，这主要是因为空气污染等问题造成皮肤表面粉尘较多，汗液中所含金属离子较多，此时就需要使用水溶性的硫辛酸可快速溶解于汗液等皮肤表面，与铁、铜、镉、铅、汞等金属离子螯合、清除，从而降低金属离子引起的脂质等大分子的过氧化反应；还需要脂溶性的硫辛酸能够快速进入细胞后可以直接对羟基自由基、单线态氧等自由基发挥清除作用，并恢复维生素e、谷胱甘肽等内源性抗氧化剂的能力，从而提升机体的整体抗氧化能力。因此，寻找一种能够解决硫辛酸的水溶性、脂溶性问题、且提高其存在的稳定性、降低刺激性的方法至关重要。


技术实现要素：

4.为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种硫辛酸混合胶束，该混合胶束大大提高了硫辛酸的水溶性和稳定性，具有很好的临床价值。
5.本发明的目的之二在于提供上述硫辛酸混合胶束的制备方法。
6.本发明的目的之三在于提供上述硫辛酸混合胶束的应用。
7.本发明的目的之一采用如下技术方案实现：
8.一种硫辛酸混合胶束，由硫辛酸、磷脂、硫辛酸钠、溶剂组成；
9.所述溶剂选自纯化水、氯化钠水溶液、ph 7.4-8.2磷酸盐溶液。
10.进一步地，所述磷脂与硫辛酸、硫辛酸钠、溶剂的添加比例为(2-4)mg：1mg：(1-2)mg：(0.1-0.5)ml。
11.进一步地，所述磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、丝氨酸磷脂、多烯磷脂酰胆碱中的一种。
12.本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
13.上述硫辛酸混合胶束的制备方法，包括以下步骤：将硫辛酸、磷脂溶于有机溶剂中，超声分散均匀，去除有机溶剂得到硫辛酸胶束共沉淀物薄膜；将硫辛酸钠溶于溶剂中得到混合溶液，将混合溶液加入至硫辛酸胶束共沉淀物薄膜中进行水化，超声、过滤后即得硫辛酸混合胶束。
14.进一步地，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、丙酮、氯仿、甲醇、乙醇、乙醚中的一种或多种。
15.进一步地，所述磷脂与有机溶剂的添加比例为1mg：0.01-0.5ml。
16.进一步地，所述过滤的滤膜孔径为0.22-0.8μm。
17.本发明的目的之三采用如下技术方案实现：
18.上述硫辛酸混合胶束的应用，所述硫辛酸混合胶束能够用于化妆品中、或与药学上可接受的药用辅料制备得到药物组合物。
19.进一步地，所述硫辛酸混合胶束用于美白、祛斑、抗衰老的化妆品中、或与药学上可接受的药用辅料制备具有抗氧化、治疗心血管疾病、治疗急慢性炎症、治疗痛风、保护肝脏的药物组合物。
20.进一步地，所述混合物胶束的最终剂型为软膏剂、凝胶剂、乳剂、纳米制剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、粉针剂中的一种。
21.相比现有技术，本发明的有益效果在于：
22.本发明提供了一种硫辛酸混合胶束，该混合胶束由硫辛酸、磷脂和硫辛酸钠制备得到，成分简单，且得到的混合胶束具有较强的稳定性，在不同的稀释倍数及长期存储后仍然能够保持胶束的性状。本发明还提供了上述硫辛酸混合胶束的制备方法，该制备方法工艺简单，重复性高，所使用的有机溶剂能够回收利用，适用于工业生产。且该混合胶束中磷脂与硫辛酸钠生物相容性好，无需乙醇、丙二醇等刺激大的有机溶剂增溶，所得到的混合胶束在使用时不具有副作用，安全可靠，原料来源广泛，成本低廉。本混合胶束中含有不同溶解态的硫辛酸，这主要是因为空气污染等问题造成皮肤表面粉尘较多，汗液中所含金属离子较多，此时就需要使用水溶性的硫辛酸钠可快速溶解于汗液等皮肤表面，与铁、铜、镉、铅、汞等金属离子螯合、清除，从而降低金属离子引起的脂质等大分子的过氧化反应；还需要脂溶性的原型硫辛酸可快速进入细胞后可以直接对羟基自由基、单线态氧等自由基发挥清除作用，并恢复维生素e、谷胱甘肽等内源性抗氧化剂的能力，从而提升机体的整体抗氧化能力。本发明还提供了上述硫辛酸混合胶束的应用，该混合胶束可用于化妆品的制备及与其药学上可接受的药用辅料制备得到药物组合物，硫辛酸混合胶束既可以制备口服制剂、皮肤涂覆，又可以不同程度稀释后使用，极大地方便了临床给药。
具体实施方式
23.下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的
前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
24.实施例1
25.一种硫辛酸混合胶束，其制备方法包括以下步骤：
26.称取150mg的大豆卵磷脂、50mg的硫辛酸置于50ml圆底烧瓶中，然后向其中加入10ml甲醇溶解，超声分散均匀。在水浴温度为40℃时旋蒸除去甲醇，形成一层透明硫辛酸胶束共沉淀物薄膜，将50mg的硫辛酸钠溶解于10ml纯化水得到混合溶液，将混合溶液加入至上述透明薄膜中水化薄膜，得到含药混合胶束的分散体溶液，探头超声(50w，间隔2s，2min)，然后用0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液、分装，得到硫辛酸混合胶束。
27.实施例2
28.一种硫辛酸混合胶束，其制备方法包括以下步骤：
29.称取150mg的大豆卵磷脂、50mg的硫辛酸置于50ml圆底烧瓶中，然后向其中加入10ml二氯甲烷溶解，超声分散均匀。在水浴温度为35℃时旋蒸除去二氯甲烷，形成一层透明硫辛酸胶束共沉淀物薄膜，将50mg的硫辛酸钠溶解于10ml纯化水得到混合溶液，将混合溶液加入至上述透明薄膜中水化薄膜，得到含药混合胶束的分散体溶液，探头超声(50w，间隔2s，2min)，然后用0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液、分装，得到硫辛酸混合胶束。
30.实施例3
31.一种硫辛酸混合胶束，其制备方法包括以下步骤：
32.称取150mg的大豆卵磷脂、50mg的硫辛酸置于50ml圆底烧瓶中，然后向其中加入10ml乙醇溶解，超声分散均匀。在水浴温度为45℃时旋蒸除去乙醇，形成一层透明硫辛酸胶束共沉淀物薄膜，将100mg的硫辛酸钠溶解于10ml纯化水得到混合溶液，将混合溶液加入至上述透明薄膜中水化薄膜，得到含药混合胶束的分散体溶液，探头超声(50w，间隔2s，2min)，然后用0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液、分装，得到硫辛酸混合胶束。
33.实施例4
34.一种硫辛酸混合胶束，其制备方法包括以下步骤：
35.称取150mg的蛋黄卵磷脂、50mg的硫辛酸置于50ml圆底烧瓶中，然后向其中加入10ml甲醇溶解，超声分散均匀。在水浴温度为45℃时旋蒸除去甲醇，形成一层透明硫辛酸胶束共沉淀物薄膜，将100mg的硫辛酸钠溶解于10ml纯化水得到混合溶液，将混合溶液加入至上述透明薄膜中水化薄膜，得到含药混合胶束的分散体溶液，探头超声(50w，间隔2s，2min)，然后用0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液、分装，得到硫辛酸混合胶束。
36.实施例5
37.一种硫辛酸混合胶束，其制备方法包括以下步骤：
38.称取150mg的蛋黄卵磷脂、50mg的硫辛酸置于50ml圆底烧瓶中，然后向其中加入10ml乙醇溶解，超声分散均匀。在水浴温度为45℃时旋蒸除去乙醇，直至无乙醇味，形成一层透明硫辛酸胶束共沉淀物薄膜，将50mg的硫辛酸钠溶解于10ml纯化水得到混合溶液，将混合溶液加入至上述透明薄膜中水化薄膜，得到含药混合胶束的分散体溶液，探头超声(50w，间隔2s，2min)，然后用0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液、分装，得到硫辛酸混合胶束。
39.实施例6
40.一种硫辛酸混合胶束，其制备过程包括以下步骤：
41.称取150mg的大豆卵磷脂、50mg的硫辛酸置于50ml圆底烧瓶中，然后向其中加入
10ml二氯甲烷溶解，超声分散均匀。在水浴温度为35℃时旋蒸除去二氯甲烷，形成一层透明硫辛酸胶束共沉淀物薄膜，将50mg的硫辛酸钠溶解于10ml纯化水得到混合溶液，将混合溶液加入至上述透明薄膜中水化薄膜，得到含药混合胶束的分散体溶液，探头超声(50w，间隔2s，2min)，然后用0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液、分装，得到硫辛酸混合胶束。
42.实施例7
43.一种硫辛酸混合胶束，其制备方法包括以下步骤：
44.称取150mg的多烯磷脂酰胆碱、50mg的硫辛酸置于50ml圆底烧瓶中，然后向其中加入10ml乙醚溶解，超声分散均匀。在水浴温度为35℃时旋蒸除去乙醚，形成一层透明硫辛酸胶束共沉淀物薄膜，将50mg的硫辛酸钠溶解于10ml的ph 7.4磷酸盐水溶液得到混合溶液，将混合溶液加入至上述透明薄膜中水化薄膜，得到含药混合胶束的分散体溶液，探头超声(50w，间隔2s，2min)，然后用0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液、分装，得到硫辛酸混合胶束。
45.实施例8
46.一种硫辛酸混合胶束，其制备方法包括以下步骤：
47.称取150mg的氢化大豆磷脂、50mg的硫辛酸置于50ml圆底烧瓶中，然后向其中加入10ml乙醇溶解，超声分散均匀。在水浴温度为45℃时旋蒸除去乙醇，形成一层透明硫辛酸胶束共沉淀物薄膜，将50mg的硫辛酸钠溶解于10ml纯化水得到混合溶液，将混合溶液加入至上述透明薄膜中水化薄膜，得到含药混合胶束的分散体溶液，探头超声(50w，间隔2s，2min)，然后用0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液、分装，得到硫辛酸混合胶束。
48.对比例1
49.对比例1与实施例3的区别在于：将硫辛酸钠省去，其余与实施例3相同，得到硫辛酸混合胶束。
50.实验例1
51.使用马尔文zs-90纳米粒度仪对实施例1至8、对比例1得到的硫辛酸混合胶束进行粒径、zeta电位、分布系数(pdi)考察，结果如表1所示：
52.表1
[0053][0054]
由表1可知，本发明实施例1至8所得硫辛酸混合胶束粒径在61.1-101.7nm范围内，zeta电位在-17.3～-28.1mv，pdi在0.162-0.231之间，因此硫辛酸胶束适宜制成混悬剂或粉针剂。对比例1与实施例3相比将硫辛酸钠省去，所得到的硫辛酸混合胶束粒径较小，zeta电位较低，pdi更大，不利于后期多种药物剂型的制备。
[0055]
实验例2
[0056]
稳定性实验
[0057]
2.1稀释稳定性实验
[0058]
分别将本发明实施例1至8、对比例1得到的硫辛酸混合胶束进行1倍、3倍、5倍的纯化水稀释，观察其在不同倍数稀释后的稳定性，结果如表2所示。结果表明本发明得到的硫辛酸混合胶束在不同倍数稀释后的外观性状均表现为淡黄色透明溶液，有乳光，且无沉淀析出，表现出良好的稳定性。对比例1与实施例3相比得到的硫辛酸混合胶束在稀释1倍时无明显区别，但当稀释至3倍、5倍时，稀释后的胶束不能稳定存在，逐渐出现絮凝、分层等胶束不稳定现象。
[0059]
表2
[0060][0061]
2.2长期稳定性检测
[0062]
将实施例1至8、对比例1得到的硫辛酸混合胶束置于冰箱4℃环境中静置0至3个月考察其长期稳定性，结果如表3所示。由表中可知各实施例制备的胶束外观性状均为淡黄色透明溶液，有乳光，静置3个月内均无沉淀析出，表现出良好的稳定性。对比例1与实施例3相比得到的新鲜制得的硫辛酸混合胶束外观性状无明显区别，但当分别在相同的测试条件下
静置1个月、3个月时，对比例1的硫辛酸混合胶束逐渐出现絮凝及分层现象，可知硫辛酸钠的省去降低了硫辛酸混合胶束的稳定性。
[0063]
表3
[0064][0065][0066]
实验例3
[0067]
硫辛酸混合胶束对dpph自由基清除能力检测
[0068]
将本发明实施例1至8、对比例1得到的硫辛酸混合胶束分别稀释10倍得到待测液。先将20mg dpph溶解于250ml乙醇中，0-4℃下避光保存。每个管中加入dpph乙醇溶液3ml，对
照管中加入等体积的水(a1)，样品管中加入等体积的实施例待测液(a2)，空白对照管中加入3ml水与等体积的实施例待测液(a3)。反应30min后，于517nm波长下测定各管的吸光值，并计算dpph自由基清除率。dpph自由基清除率公示计算如下，结果如表4所示。
[0069][0070]
表4
[0071][0072]
由表4可知，本发明实施例1至8得到的硫辛酸混合胶束对dpph自由基清除率达21.11％-44.18％。可知本发明制备的硫辛酸混合胶束未对硫辛酸自身所具备的自由基清除能力产生消极影响。而对比例1与实施例3相比，其dpph自由基清除率仅17.18％，可知硫辛酸钠的省去不能使硫辛酸混合胶束中硫辛酸完全有效地发挥自身的清除自由基功能。
[0073]
实验例4
[0074]
对炎症因子释放水平影响的检测
[0075]
取对数生长期hacat细胞(人类永生化表皮细胞)，以2
×
106个/ml的密度将细胞浑浊液接种于6孔细胞培养板上，每孔加入1ml细胞悬液，孵箱培养24h，小心吸取上清；空白组和模型组分别加入1ml dmem溶液；实施例3组为加入的待测液为将实施例3制备的硫辛酸混合胶束的稀释1000倍，对比例1组加入的为对比例1制备的硫辛酸混合胶束，其添加比例与实施例3组相同。加入后，继续培养6h，模型组和实施例3组、对比例1组均采用紫外光照射，光照功率为9j/cm2，照射时间1.5h，空白对照组不光照。光照后继续培养24h，每组样品重复3个平行，每个平行样品检测3次。处理细胞，收集细胞裂解液，在10000r/min，离心10min，得细胞裂解上清液，取20μl用bca试剂盒检测样品中的总蛋白含量。分别测定空白对照组、模型组、实施例3组和对比例1组中il-1α炎症因子的释放水平，按照elisa试剂盒说明书进行实验操作后，于450nm处测定各od值，根据od值计算il-1α炎症因子的释放水平，结果如表5所示：
[0076]
表5
[0077][0078]
由表中可知，实施例3组添加的硫辛酸混合胶束相较于模型组、空白组和对比例1组，对il-1α验证因子水平的释放表现出更强的抑制作用，其表达水平仅为0.87ng/l。可见本发明制备得到的硫辛酸混合胶束性状并未对硫辛酸自身所具有的性质产生影响。
[0079]
综上，本发明提供了一种硫辛酸混合胶束，由硫辛酸、磷脂和硫辛酸钠制备得到，成分简单、载药量高。所得到的硫辛酸混合胶束具有较强的稳定性，稀释5倍及长期存储后仍然能够保持较好的稳定性，无晶体及其他沉淀析出。且该混合胶束中磷脂与硫辛酸钠生
物相容性好，无需乙醇、丙二醇等刺激大的有机溶剂增溶，降低了后期制备药物、化妆品的毒性，对血管、皮肤刺激性小，有助于减少使用者们对药物或化妆品的不良反应。且本发明制备得到的硫辛酸混合胶束对自由基的清除作用及炎症因子释放水平并不受胶束的影响，对硫辛酸自身的性质不具有限制或其他消极影响。该硫辛酸混合胶束用于药物组合物的制备时，既可制备口服制剂、皮肤涂覆等方式使用，又可以不同程度稀释后使用，极大地方便了临床给药。
[0080]
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。