局部制剂的制作方法

1.本发明涉及用于局部递送的组合物。
2.背景
3.大于600da的药物分子通常难以渗入皮肤。对于多肽和肽，即使分子量低于600da，问题也突出，因为氨基酸通常极性太大而无法以适当的方式渗透角质层，这就是为什么大多数基于肽或蛋白的药物通过胃肠外制剂施用的原因，这对于包括局部靶向(例如真皮病症和疾病)在内的许多目的而言是不希望的。
4.因此，当尝试向毛囊施用(例如用于治疗与毛囊相关的病症或疾病)时，许多肽的极性也是有问题的。
5.对于具有生物活性并准备用于胃肠外施用的肽，通常需要将其溶解在水溶液中，这经常导致严重的稳定性问题，并具有不希望的特性如缩短的储存期限和生物活性丧失等效应。
6.因此，需要能够克服这些递送和稳定性问题的药物制剂。


技术实现要素：

7.出于多种原因，通过皮肤或其它身体表面局部递送活性成分以产生局部和全身效应对于患者而言是有吸引力的。对于局部治疗，需要较低的剂量以减少生物负载。最初的毒理学实验成本较低且耗时较少，并且所需的药物量通常较少。局部递送的另一个优点是，通过实现药物的贮库，在靶组织中的浓度变化较小。除了方便以外，局部制剂避免了经常伴随丸剂和胶囊剂的对胃肠道的刺激。
8.本发明的发明人已经开发了一种局部制剂，其促进大分子量分子的渗透，并同时保持药物处于固态以在产品的储存期限内提供化学稳定性。重要的是，局部制剂适用于将大分子量分子递送到毛囊和相关组织中。
9.作为毛囊的主要组分的皮脂是脂质的混合物。本发明的发明人已经开发了一种具有生物物理学特性的药物制剂，其能够以足以进行生物应答的量溶解在皮脂中并穿过皮脂。
10.毛囊施用途径代表优于侵入性施用形式的改进。当通过皮下或真皮内途径注射药物时，在施用部位处的药物浓度立即下降，并且在几小时内局部药物浓度不足以产生生物效应。当期望治疗疾病的局部部位时，胃肠外施用是不希望的。通常，在治疗时段期间恒定的药物浓度是更有利的。毛囊递送是克服这个问题的一种非侵入性方式。此外，由于可以使药物载荷最大化，因此毛囊递送允许贮库效应(depo effect)。
11.含有活性剂(诸如肽)和分散在基于脂质的媒介物中的糖的亲水性颗粒使药物渗透到毛囊及其环境中。这种向疾病区域呈递活性剂的方式可用于治疗许多病症和疾病，包括例如脱发、多毛症、银屑病、特应性皮炎、湿疹、致癌前状态和皮肤感染。
12.在一个方面，本发明提供了一种组合物，其包含：
13.a)肽；
14.b)糖；和
15.c)脂质。
16.在一个方面，本发明涉及一种组合物，其包含：
17.a.0.01-2重量％的肽或肽衍生物；
18.b.0.01-4重量％的糖或改性糖；
19.c.35-50重量％的矿脂；和
20.d.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯，
21.前提条件是，总组合物的组分的总和不超过100重量％。
22.在一个方面，所述组合物用作药物。
23.在一个方面，所述组合物用于治疗皮肤病学病况。
24.在另一个方面，本发明提供了根据以上方面的化合物用于在哺乳动物中刺激毛发生长的用途，其中所述用途是美容用途。
25.在另一个方面，本发明提供了根据以上方面的化合物用于治疗或预防脱发的用途。
26.在一个方面，本发明提供了一种用于刺激毛发生长的方法，所述方法包括给有此需要的患者局部施用有效量的以上方面中的任一个的组合物。
27.在另一个方面，本发明提供了一种用于治疗脱发的方法，所述方法包括给有此需要的患者局部施用有效量的以上方面中的任一个的组合物。
28.在一个方面，本发明提供了一种用于给有此需要的患者局部递送根据以上方面的组合物的方法，其包括将有效量的以上方面的组合物施用至患者的局部施用部位。
29.在另一个方面，本发明提供了一种制备药物的方法，所述药物用于局部递送根据以上方面中的任一个的组合物，所述方法包括以下步骤：
30.a)将所述肽或肽衍生物与糖或改性糖混合；
31.b)冷冻干燥a)的混合物；
32.c)将b)与脂质和表面活性剂混合；
33.d)研磨c)的混合物；和
34.e)任选地将d)的混合物与脂质和增稠剂混合。
附图说明
35.图1.稳定性研究-fol-005的基于水的溶液和基本上不含水的制剂的对比
36.将fol-005低压冻干的粉末溶解在ph 5、6、7或7.6的磷酸盐/柠檬酸盐缓冲液中。分别在25℃储存长达3个月后，使用高压液相色谱法分析每种制剂的样品的纯度。此外，将fol-005的基本上不含水的制剂在25℃储存，并在储存长达12个月后分析样品的纯度。
37.图2.稳定性研究-na-fol
‑‑
005和na-fol-005-蔗糖的对比
38.将fol-005/蔗糖低压冻干的粉末配制成在干燥的或未干燥的肉豆蔻酸异丙酯、石蜡油/矿脂、脱水山梨糖醇月桂酸酯和山嵛酸甘油酯中的悬浮液。分别在2-8、25和30℃储存长达12个月以后，使用高压液相色谱法分析每种制剂的样品的纯度。
39.图3.稳定性研究-干燥的ipm和普通的ipm的对比
40.将fol-005/蔗糖低压冻干的粉末配制成在干燥的或未干燥的肉豆蔻酸异丙酯、石
蜡油/矿脂、脱水山梨糖醇月桂酸酯和山嵛酸甘油酯中的悬浮液。分别在2-8、25和30℃储存长达12个月以后，使用高压液相色谱法分析每种制剂的样品的纯度。
41.图4：离体研究
42.在用含有肉豆蔻酸异丙酯、矿脂、脱水山梨糖醇月桂酸酯和山嵛酸甘油酯的fol-005/蔗糖制剂处理过的猪内耳皮肤切片中的fol-005分布。在第0和24小时将制剂应用于皮肤样品。在48小时时，将样品冷冻，并随后切片，并使用maldi msi进行分析。以黑色-灰色-白色显示fol-005的浓度。白色区域含有高浓度的fol-005，且黑色区域含有低浓度。a)h&e染色(相邻组织切片)，b)在处理过的组织切片中的fol-005msi分布，c)在msi分布与h&e染色之间的叠加。
43.图5：体内效力研究
44.小心地修剪处于稳定生长终期阶段(6-9周龄)的c57bl6小鼠。将三种不同强度的fol-005局部制剂和安慰剂每天一次应用于修剪过的区域，每周5天，直到第26天。为了对比，将米诺地尔每天两次施用给一组，每周5天，直到第26天。根据既定系统从0(无毛发生长，粉红色皮肤)到3(浓密的正常表皮毛发)对毛发生长进行评分。
45.图6：包含肽的组合物
46.a)肽在不含水制剂中的稳定性(参见实施例8)。制备了六种不同大小和氨基酸序列的肽的不含水制剂。肽的浓度为0.2％，并使用以下赋形剂和浓度(w/w％)：蔗糖0.4％，span20 4％，山嵛酸甘油酯3％，肉豆蔻酸异丙酯50％和矿脂42.4％。在20
±
5℃储存制剂，并且在研究开始时和在储存1、2和4周后使用高压液相色谱法分析峰纯度。b)缩宫素在不含水制剂中和在pbs溶液中的稳定性(参见实施例8)。制备了缩宫素的不含水制剂。使用以下赋形剂和浓度(w/w％)：缩宫素0.2％，蔗糖0.4％，span20 4％，山嵛酸甘油酯3％，肉豆蔻酸异丙酯50％和矿脂42.4％。另外，制备了缩宫素在pbs(ph 7.4)中的0.2％溶液。将制剂和溶液在20
±
5℃储存，并且在研究开始时和在储存1、2和4周后使用高压液相色谱法分析峰纯度。c)fol-004在不含水制剂中和在pbs溶液中的稳定性(参见实施例8)。制备了fol-004的不含水制剂。使用以下赋形剂和浓度(w/w％)：fol-004 0.2％，蔗糖0.4％，span20 4％，山嵛酸甘油酯3％，肉豆蔻酸异丙酯50％和矿脂42.4％。另外，制备了fol-004在pbs(ph 7.4)中的0.2％溶液。将制剂和溶液在20
±
5℃储存，并且在研究开始时和在储存1、2和4周后使用高压液相色谱法分析峰纯度。
47.详细描述
48.在一个方面，本发明提供了一种组合物，其包含：
49.a)肽；
50.b)糖；和
51.c)脂质。
52.在一个方面，本发明涉及一种组合物，其包含：
53.a.0.01-2重量％的肽或肽衍生物；
54.b.0.01-4重量％的糖或改性糖；
55.c.35-50重量％的矿脂；和
56.d.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯，
57.前提条件是，总组合物的组分的总和不超过100重量％。
58.肽
59.本发明的组合物包含至少一种肽或肽衍生物。在一个实施方案中，所述肽或肽衍生物是活性剂。重要的是，本发明的组合物促进肽或肽衍生物的渗透，并同时使肽或肽衍生物保持固态以在产品的储存期限内提供化学稳定性。
60.本文中使用的术语“肽”表示包含通过肽键彼此连接的两个或更多个氨基酸残基的分子。术语“肽”和“多肽”在本文中自始至终可互换使用。在一个实施方案中，术语“肽”还包括肽衍生物。
61.本文中使用的术语“肽衍生物”涉及经修饰或衍生化的肽。在一个实施方案中，肽衍生物是如本文公开的肽，其缀合至部分，诸如选自聚乙二醇(peg)、单糖、荧光团、生色团、放射性化合物和细胞穿透肽的部分。在一个实施方案中，所述肽是糖基化的。
62.在一个实施方案中，所述肽衍生物是如本文公开的肽，其通过糖基化或通过聚乙二醇化、酰胺化、酯化、酰化、乙酰化和/或烷基化进行修饰。
63.在一个实施方案中，所述肽衍生物是如本文公开的肽，其融合至另一种多肽，诸如选自谷胱甘肽-s-转移酶(gst)和蛋白a的多肽，或融合至标签。
64.本文使用的术语“氨基酸”包括标准的20种基因编码氨基酸及其相应的“d”形式(与天然的“l”形式相比)的立体异构体、ω-氨基酸和其它天然存在的氨基酸、非常规氨基酸(例如，α,α-二取代的氨基酸、n-烷基氨基酸等)和化学衍生的氨基酸(见下文)。
65.当具体列举氨基酸、诸如“丙氨酸”或“ala”或“a”时，除非另外明确地阐明，否则该术语表示l-丙氨酸和d-丙氨酸。其它非常规氨基酸也可以是本发明的肽的合适组分，只要肽保留了期望的功能特性。对于显示的肽，每种编码的氨基酸残基在适当的情况下用单字母名称表示，所述单字母名称对应于常规氨基酸的俗名。
66.根据惯例，本文公开的氨基酸序列以n-端到c-端的方向提供。
67.在一个实施方案中，所述肽包含3至50个氨基酸残基、诸如3至40个氨基酸残基、诸如5至30个氨基酸残基、诸如10至25个氨基酸残基或由其组成。
68.在一个实施方案中，所述肽由小于500个氨基酸(例如小于400、350、340、330、320、310、300、290、280、270、260、250、200、150、100、50、40、30、20、15、10个或更少的氨基酸的长度)组成。在一个实施方案中，所述肽由至少3个氨基酸(诸如至少5个、诸如至少10个、诸如至少15个、诸如至少20个、诸如至少25个、诸如至少30个或更多个氨基酸的长度)组成。
69.在一个实施方案中，所述肽包含串联重复或由其组成。在一个实施方案中，所述肽是环状的。
70.在一个实施方案中，所述肽是两亲的。两亲物是具有亲水的(喜水的、极性的)和亲脂的(喜脂肪的)特性的化学化合物。这样的化合物被称为两亲性的或两亲的。
71.在一个实施方案中，所述肽或肽衍生物是抗微生物肽。在一个实施方案中，所述抗微生物肽选自多粘菌素b、ll37(seq id no:188)和fol-199(seq id no:185)。
72.在一个实施方案中，所述肽或肽衍生物是抗炎肽。在一个实施方案中，所述抗炎肽选自fol-005(seq id no:1)、fol-004(seq id no:69)和fol-199(seq id no:185)。
73.在一个实施方案中，本发明的组合物的活性组分源自天然存在的肽，诸如骨桥蛋白(例如，所述肽包含对应于天然存在的骨桥蛋白的修饰形式(例如突变形式)的氨基酸序列的氨基酸序列)。在本发明的组合物中的骨桥蛋白衍生的肽的表征性特征是，在骨桥蛋白
中天然存在的rgd结构域被失活，使得它是无功能的(至少部分地)。例如，rgd结构域的失活可防止骨桥蛋白衍生的肽结合一种或多种结合天然存在的骨桥蛋白的整联蛋白。
74.因此，“修饰的骨桥蛋白肽”包括对应于天然存在的骨桥蛋白的修饰形式的肽，其中rgd结构域是无功能的(至少部分地)，以及保留“全长的”修饰的骨桥蛋白的毛发刺激特性的其片段和变体。
75.在一个实施方案中，所述肽可以包含seq id no:1fol-005的氨基酸序列的片段或其变体或由其组成。
76.本文中使用的术语“片段”可以包括任何片段，优选本文描述的氨基酸序列的生物活性片段。在一个实施方案中，所述片段是seq id no:1的氨基酸序列的至少6个连续氨基酸，例如seq id no:1的至少7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、100、150、200、210、220、230、240、250、255、260、265、270、275、280、285、286、287、288、289 290、291或292个连续氨基酸。
[0077]“变体”是指，肽与seq id no:1不具有100％氨基酸序列同一性，即seq id no:1的一个或多个氨基酸必须发生突变。例如，肽可以包含与seq id no:1的氨基酸序列具有至少50％同一性的氨基酸序列或由其组成，更优选地与所述序列具有至少60％、70％或80％或85％或90％同一性，且最优选地与所述氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性。
[0078]
变体肽还可以包含一个或多个额外的氨基酸，其插入在seq id no:1的氨基酸序列的n-端和/或c-端和/或内部。例如，肽可以在n-端和/或c-端和/或内部包含至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20个额外氨基酸或由其组成。
[0079]
有利地，变体肽是非天然存在的。
[0080]
在一个实施方案中，将fol-005的固体材料用于实现fol-005的化学稳定制剂，并通过毛囊将fol-005引导至皮肤，为此将fol-005研磨成小颗粒，主要级分的直径低于1μm和5μm之间。
[0081]
在一个实施方案中，所述肽与天然存在的生腱蛋白的亚区域具有氨基酸序列相似性。在一些实施方案中，所述肽可以被视作天然存在的生腱蛋白的活性片段或此类片段的变体。
[0082]
在一个实施方案中，所述肽包含以下或由以下组成：
[0083]
i)以下通式的氨基酸序列：
[0084]
kx2lax5x6x7x8ix
10
lx
12
ygik(seq id no:140)
[0085]
其中：
[0086]
x2是c、p或g；
[0087]
x5是e或g；
[0088]
x6是c、d或i；
[0089]
x7是d、i、s或g；
[0090]
x8是s、d或g；
[0091]
x
10
是e或g；
[0092]
x
12
是s或t；
[0093]
前提条件是，如果x
12
是t，则所述肽包含不超过25个氨基酸残基；且
[0094]
前提条件是，如果x2是p、x5是e、x6是i、x7是d、x8是s、x
10
是e且x
12
是s，则所述肽包含不超过85个氨基酸残基；
[0095]
ii)以下通式的氨基酸序列：
[0096]
x
10
lx
12
ygik(seq id no:177)
[0097]
其中：
[0098]
x
10
是e或g；
[0099]
x
12
是s或t；
[0100]
前提条件是，如果x
12
是t，则所述肽包含不超过25个氨基酸；且
[0101]
前提条件是，如果x
10
是e且x
12
是s，则所述肽包含不超过85个氨基酸残基；
[0102]
iii)以下通式的氨基酸序列：
[0103]
vdvpz5gdislayz
13
lr(seq id no:164)
[0104]
其中：
[0105]
z5是e或n；
[0106]z13
是r或g；
[0107]
iv)以下通式的氨基酸序列：
[0108]
vdtydgz7z8svvyglr(seq id no:165)
[0109]
其中：
[0110]
z7是d或g；
[0111]
z8是i或g；
[0112]
v)以下通式的氨基酸序列：
[0113]
gdpnz5z6z7z8z9svvyglr(seq id no:166)
[0114]
其中：
[0115]
z5是d或g；
[0116]
z6是d或g
[0117]
z7是i或r；
[0118]
z8是g或不存在；
[0119]
z9是d或不存在；
[0120]
vi)以下通式的氨基酸序列：
[0121]
kx2lax5x6x7x8ix
10
lsygik(seq id no:162)
[0122]
其中：
[0123]
x2是c、p或g；
[0124]
x5是e或g；
[0125]
x6是c、i或不存在；
[0126]
x7是d、g或不存在；
[0127]
x8是s、g或不存在；
[0128]
x
10
是e或g；
[0129]
vii)以下通式的氨基酸序列：
[0130]
kx2lax5ix
10
lsygik(seq id no:163)
[0131]
其中：
[0132]
x2是c、p或g；
[0133]
x5是e或g；
[0134]
x
10
是e或g；
[0135]
viii)以下通式的氨基酸序列：
[0136]
z7z8sz
10z11
yglr(seq id no:178)
[0137]
其中：
[0138]
z7是d或g；
[0139]
z8是i或g；
[0140]z10
是v或l；
[0141]z11
是v或a；
[0142]
或者
[0143]
ix)以下通式的氨基酸序列：
[0144]
vdz3z4z5gz7z8sz
10z11
yglr(seq id no:68)
[0145]
其中：
[0146]
z3是t或v；
[0147]
z4是y或p；
[0148]
z5是d或n；
[0149]
z7是d或g；
[0150]
z8是i或g；
[0151]z10
是v或l；
[0152]z11
是v或a。
[0153]
本文中使用的术语“不存在”，例如“x6是c、i或不存在”应理解为，与不存在的氨基酸直接相邻的氨基酸残基通过常规酰胺键彼此直接连接。
[0154]
在一个实施方案中，所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：gdpndgrgdsvvyglr(seq id no:137)、vdtydggisvvyglr(seq id no:138)、和vdtydgdgsvvyglr(seq id no:139)、vdvpegdislayglr(seq id no:157)、ldglvraydnispvg(seq id no:158)、gdpngdisvvyglr(seq id no:159)、vdvpngdislayrlr(seq id no:160)vdvpegdislayrlr(seq id no:161)。
[0155]
在一个实施方案中，所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：gdpndgrgdsvvyglr(seq id no:137)、vdtydggisvvyglr(seq id no:138)、和vdtydgdgsvvyglr(seq id no:139)、vdvpegdislayglr(seq id no:157)、ldglvraydnispvg(seq id no:158)、gdpngdisvvyglr(seq id no:159)、vdvpngdislayrlr(seq id no:160)vdvpegdislayrlr(seq id no:161)、v(β-d)tydgdisvvyglr(seq id no:167)、vdty(β-d)gdisvvyglr(seq id no:168)、vdtydg(β-d)isvvyglr(seq id no:169)。
[0156]
在一个实施方案中，所述肽包含vdtydgdisvvyglr(seq id no:1；fol-005)的氨基酸序列或其片段/变体或由其组成。
[0157]
在一个实施方案中，所述肽包含kplaeidsielsygik(seq id no:136，fol-014)的氨基酸序列或其片段/变体或由其组成。
[0158]
在一个实施方案中，所述肽包含vdvpngdislayglr(seq id no:69，fol-004)的氨
基酸序列或其片段/变体或由其组成。
[0159]
在一个实施方案中，所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：kclaecdsielsygik(seq id no:141)、claeidsc(seq id no:142)、cfkplaeidsiecsygik(seq id no:143)、kplaedisielsygik(seq id no:145)、kplaeigdielsygik(seq id no:146)、kplaegdielsygik(seq id no:147)、kplaeielsygik(seq id no:148)、kplaeidsieltygik(seq id no:149)、kplaeidgielsygik(seq id no:150)、kplaeidgieltygik(seq id no:151)、kplaeigsielsygik(seq id no:152)、kglaeidsielsygik(seq id no:153)、kplagidsiglsygik(seq id no:154)、kclaeidscelsygik(seq id no:155)和cfkplaeidsiec(seq id no:156)，或其变体或片段。
[0160]
在一个实施方案中，所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：laeidsielsygik(seq id no:170)、aeidsielsygik(seq id no:171)、eidsielsygik(seq id no:172)、idsielsygik(seq id no:173)、dsielsygik(seq id no:174)、sielsygik(seq id no:175)、ielsygik(seq id no:176)，或其变体或片段。
[0161]
在一个实施方案中，所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：kplaeidsielsygi(seq id no:179)、kplaeidsielsyg(seq id no:180)、kplaeidsielsy(seq id no:181)、kplaeidsiels(seq id no:182)、kplaeidsiel(seq id no:183)、kplaeidsie(seq id no:184)，或其变体或片段。
[0162]
在另一个实施方案中，所述肽选自seq id no:1、136、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、67、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、135、137、138、139、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187和188。
[0163]
在一个实施方案中，所述肽选自ghk(seq id no:188)、缩宫素(seq id no:186)、多粘菌素b、ll37(seq id no:187)、fol-199(seq id no:185)和贝卡普勒明。
[0164]
糖
[0165]
所述组合物包含至少一种糖或改性糖。糖类由通过糖苷键彼此连接的n个单糖单元组成，其中n是整数。在一个实施方案中，所述糖选自单糖、二糖和三糖。对于单糖，n为1，对于二糖，n为2，且对于三糖，n为3。在一个实施方案中，所述糖基本上由单糖、二糖或三糖组成，诸如糖的特性基本上由单糖、二糖或三糖部分决定。在一个实施方案中，所述糖是糖衍生物或改性糖，诸如糖醇。
[0166]
物质的熔点是物质从固态变为液态时的温度。在熔点，固相和液相处于平衡状态。在一个实施方案中，所述糖具有在60和140℃之间的熔化温度。在一个实施方案中，所述糖具有在60和65℃之间，诸如在65和70℃之间，例如在70和75℃之间，诸如在75和80℃之间，例如在80和85℃之间，例如在85和90℃之间，诸如在90和95℃之间，例如在95和100℃之间，诸如在100和105℃之间，例如在105和110℃之间，诸如在110和115℃之间，例如在115和120
℃之间，诸如在120和125℃之间，例如在125和130℃之间，诸如在130和135℃之间，例如在135和140℃之间的熔化温度。
[0167]
在一个实施方案中，所述糖是蔗糖。在一个实施方案中，所述糖是麦芽糖。在一个实施方案中，所述糖是海藻糖。在一个实施方案中，所述糖是棉子糖。在一个实施方案中，所述糖是麦芽三糖。在一个实施方案中，所述糖是水苏糖。在一个实施方案中，所述糖是葡萄糖。在一个实施方案中，所述糖是葡聚糖。在一个实施方案中，所述糖是糖醇，诸如甘露醇。
[0168]
在一个实施方案中，所述组合物的糖和肽的重量比是1:9至9:1，诸如1:9或9:1。在一个实施方案中，所述组合物的糖和肽的重量比是5:1至1:5，诸如2:1或1:1。
[0169]
颗粒
[0170]
可以将所述肽与蔗糖一起冷冻干燥以增加肽颗粒的溶解并增加肽的化学稳定性。在一个实施方案中，肽和糖形成亲水的颗粒。颗粒可以是固体、玻璃或橡胶状态。颗粒可以通过标准技术(诸如冷冻干燥、喷雾干燥或冷冻喷雾)制造，然后进行操作将颗粒尺寸减小到亚微米水平。
[0171]
在一个实施方案中，至少50％的颗粒具有在0.1和10μm之间，诸如在0.1和1μm之间，诸如在1和5μm之间，诸如在5和10μm之间，例如在10和15μm之间，诸如在15和20μm之间，例如在20和25μm之间，诸如在25和30μm之间，诸如在30和35μm之间，例如在35和40μm之间，诸如在40和45μm之间，例如在45和50μm之间的平均粒径。
[0172]
在一个实施方案中，至少50％的颗粒具有在0.1和50μm之间，例如在0.1和15μm之间，诸如在0.1和10μm之间，诸如在0.1和2μm之间的平均粒径。
[0173]
在一个实施方案中，所述颗粒的尺寸低于50μm，例如低于40μm，诸如低于30μm，例如低于20μm，诸如低于10μm。
[0174]
在一个实施方案中，所述组合物包含0.01-10重量％的颗粒，诸如0.1-5重量％的颗粒，诸如0.1-2重量％的颗粒。
[0175]
在一个实施方案中，所述颗粒一旦与水接触就迅速溶解。通常，所述颗粒应在37℃的水中在一分钟内溶解。
[0176]
脂质媒介物
[0177]
本发明的组合物包含至少一种脂质。脂质在组合物中作为媒介物起作用，即用作输送活性成分的介质。在一个实施方案中，所述脂质媒介物包含一种或多种不同的脂质。在一个实施方案中，所述组合物包含一种类型的脂质。在一个实施方案中，所述组合物包含两种类型的脂质。
[0178]
合适脂质的非限制性例子是c6至c22脂肪酸与醇诸如丙醇、丁醇、丙二醇和甘油的单酯、二酯和三酯，以及脂质的混合物诸如白色或黄色软石蜡。在一个实施方案中，所述脂质是肉豆蔻酸异丙酯或棕榈酸异丙酯。在一个实施方案中，所述脂质选自矿脂、肉豆蔻酸异丙酯和山嵛酸甘油酯。
[0179]
本文中使用的术语“矿脂”表示烃的半固体混合物(cas编号8009-03-8)。矿脂也被称作“石油胶”、“白矿脂”和“软石蜡”、或多烃。矿脂也作为凡士林销售。
[0180]
在一个实施方案中，所述脂质是凡士林或石蜡，诸如石蜡油。石蜡油或液状石蜡油在石油蒸馏过程中得到。因此，石油可以是石蜡油。
[0181]
在一个实施方案中，将肉豆蔻酸异丙酯与矿脂1:1混合。在一个实施方案中，所述
组合物包含肉豆蔻酸异丙酯和矿脂。在一个实施方案中，所述组合物包含2:1至1:2、诸如3:2至2:3、诸如约1:1的重量比的肉豆蔻酸异丙酯和矿脂。
[0182]
在一个实施方案中，所述组合物包含矿脂、肉豆蔻酸异丙酯和山嵛酸甘油酯。
[0183]
在一个实施方案中，所述脂质经干燥。在一个实施方案中，所述肉豆蔻酸异丙酯经干燥。
[0184]
在一个实施方案中，所述脂质用于促进向毛囊的分布，即与毛囊中的皮脂含量相容的脂质媒介物，并用于增加肽的化学稳定性。因而，在一个实施方案中，所述脂质溶解皮脂。
[0185]
在分布至毛囊后，脂质媒介物作为颗粒的载体并与毛囊的内容物接触是重要的。这样的媒介物的组分的例子是溶解皮脂的流体(在室温和体温)脂质。悬浮液中固体材料的量可以根据所需的剂量和待覆盖区域的尺寸而变化。本领域技术人员将能够根据个例推荐使用何种颗粒浓度。
[0186]
在一个实施方案中，所述脂质具有类似于皮脂的溶解特征。实际上，这意味着具有在6.5和10(cal/cm3)
1/2
之间的hildebrand溶解度系数的化合物的混合物是适合皮脂的溶剂。
[0187]
额外的赋形剂
[0188]
在一个实施方案中，将额外的赋形剂加入所述组合物。
[0189]
在一个实施方案中，所述组合物进一步包含表面活性剂。表面活性剂的亲水-亲脂平衡(hlb)是其亲水或亲脂程度的量度。在一个实施方案中，表面活性剂的hlb是在9和16之间。
[0190]
在一个实施方案中，加入表面活性剂，诸如脱水山梨糖醇月桂酸酯，以防止颗粒的沉降，即保持颗粒的均匀悬浮。
[0191]
在一个实施方案中，所述表面活性剂选自脱水山梨糖醇月桂酸酯、span 80和brij 72。在一个实施方案中，所述表面活性剂是脱水山梨糖醇月桂酸酯。术语脱水山梨糖醇月桂酸酯和span 20在本文中可互换地使用。
[0192]
在一个实施方案中，脱水山梨糖醇月桂酸酯的浓度是1％。
[0193]
在另一个实施方案中，所述表面活性剂是基于糖的。在一个实施方案中，所述基于糖的表面活性剂选自蔗糖椰油酸酯、脱水山梨糖醇月桂酸酯和聚山梨酯。在一个实施方案中，所述基于糖的表面活性剂具有在9和16之间的hlb值。
[0194]
在一个实施方案中，将上述颗粒调整为具有使得均匀悬浮液的制剂成为可能的表面特性。通过使用表面活性剂可以调整或优化表面特性。在一个实施方案中，所述表面活性剂选自具有9-16的hlb、亲水/亲脂平衡的非离子表面活性剂。
[0195]
在一个实施方案中，所述组合物包含甘油和/或丙二醇。
[0196]
在一个实施方案中，所述组合物进一步包含增稠剂。在一个实施方案中，加入山嵛酸甘油酯作为增稠剂以获得有吸引力的质地。可以使用本领域已知的其它增稠剂。在一个实施方案中，所述增稠剂是山嵛酸甘油酯或巴西棕榈蜡。
[0197]
在一个实施方案中，所述组合物进一步包含一种或多种额外的活性药物成分。在一个实施方案中，所述组合物进一步包含米诺地尔。在一个实施方案中，所述组合物进一步包含非那雄胺。在一个实施方案中，所述组合物进一步包含米诺地尔和非那雄胺。
[0198]
在一个实施方案中，将增加粘度的传统药物化合物、防腐剂和缓冲剂加入到组合物中以改善组合物的物理特征。
[0199]
组合物
[0200]
在一个实施方案中，所述组合物是药物组合物。在一个实施方案中，所述组合物是美容组合物。在一个实施方案中，所述组合物是局部制剂。在一个实施方案中，所述组合物是用于局部递送的药物。
[0201]
本文中使用的“颗粒组合物”表示在制剂中存在的固体颗粒，而“组合物”表示包含颗粒和脂质媒介物的预期产品的组合物。
[0202]
在一个实施方案中，所述组合物包含至少0.01重量％的肽，诸如至少0.1重量％的肽，诸如至少0.5重量％的肽，诸如至少1重量％的肽，诸如至少1.5重量％的肽，诸如至少2重量％的肽，诸如至少2.5重量％的肽，诸如至少3重量％的肽，诸如至少3.5重量％的肽，诸如至少6重量％的肽，诸如至少6.5重量％的肽，诸如至少7重量％的肽，诸如至少7.5重量％的肽，诸如至少8重量％的肽，诸如至少8.5重量％的肽，诸如至少9重量％的肽，诸如至少9.5重量％的肽，诸如至少10重量％的肽。
[0203]
在一个实施方案中，所述组合物包含不超过2重量％的肽，诸如不超过5重量％的肽，诸如不超过10重量％的肽，诸如不超过15重量％的肽，诸如不超过20重量％的肽。
[0204]
在一个实施方案中，所述组合物包含在0.01和5重量％之间的肽或肽衍生物，诸如在0.1和5重量％之间的肽或肽衍生物，诸如在0.1和2重量％之间的肽或肽衍生物，诸如在0.1和1重量％之间的肽或肽衍生物，诸如在1和5重量％之间的肽或肽衍生物，诸如在5和10重量％之间的肽或肽衍生物，诸如在10和15重量％之间的肽或肽衍生物，诸如在15和20重量％之间的肽或肽衍生物。在一个实施方案中，所述组合物包含在0.01和5重量％之间的肽，诸如在0.01和2重量％之间的肽，诸如在0.1和1重量％之间的肽，诸如在1和5重量％之间的肽，诸如在5和10重量％之间的肽，诸如在10和15重量％之间的肽，诸如在15和20重量％之间的肽。
[0205]
在一个实施方案中，所述组合物包含至少40重量％的脂质，50重量％的脂质，诸如至少55重量％的脂质，诸如至少60重量％的脂质，诸如至少65重量％的脂质，诸如至少70重量％的脂质，诸如至少75重量％的脂质，诸如至少80重量％的脂质，诸如至少85重量％的脂质，诸如至少90重量％的脂质，诸如至少95重量％的脂质。
[0206]
在一个实施方案中，所述组合物包含不超过55重量％的脂质，诸如不超过60重量％的脂质，诸如不超过65重量％的脂质，诸如不超过70重量％的脂质，诸如不超过75重量％的脂质，诸如不超过80重量％的脂质，诸如不超过85重量％的脂质，诸如不超过90重量％的脂质，诸如不超过95重量％的脂质。
[0207]
在一个实施方案中，所述组合物包含在40和99重量％之间的脂质，诸如在40和60重量％之间的脂质，诸如在50和60重量％之间的脂质，诸如在60和70重量％之间的脂质，诸如在70和80重量％之间的脂质，诸如在80和90重量％之间的脂质，诸如在90和99.95重量％之间的脂质，
[0208]
在一个实施方案中，所述组合物包含至少0.1重量％的糖，诸如至少0.5重量％的糖，诸如至少1重量％的糖，诸如至少1.5重量％的糖，诸如至少2重量％的糖，诸如至少2.5重量％的糖，诸如至少3重量％的糖，诸如至少3.5重量％的糖，诸如至少6重量％的糖，诸如
至少6.5重量％的糖，诸如至少7重量％的糖，诸如至少7.5重量％的糖，诸如至少8重量％的糖，诸如至少8.5重量％的糖，诸如至少9重量％的糖，诸如至少9.5重量％的糖，诸如至少10重量％的糖。
[0209]
在一个实施方案中，所述组合物包含不超过2重量％的糖，诸如不超过5重量％的糖，诸如不超过10重量％的糖，诸如不超过15重量％的糖，诸如不超过20重量％的糖。
[0210]
在一个实施方案中，所述组合物包含在0.01和5重量％之间的糖或改性糖，诸如在0.01和2重量％之间的糖或改性糖，诸如在0.1和2重量％之间的糖或改性糖，诸如在1和5重量％之间的糖，诸如在5和10重量％之间的糖或改性糖，诸如在10和15重量％之间的糖或改性糖，诸如在15和20重量％之间的糖或改性糖。在一个实施方案中，所述组合物包含在0.01和0.1和1重量％之间的糖，诸如在1和5重量％之间的糖，诸如在5和10重量％之间的糖，诸如在10和15重量％之间的糖，诸如在15和20重量％之间的糖。
[0211]
在一个实施方案中，所述糖是蔗糖且所述脂质是肉豆蔻酸异丙酯。在一个实施方案中，所述组合物进一步包含矿脂。在一个实施方案中，所述组合物进一步包含山嵛酸甘油酯。在一个实施方案中，所述组合物进一步包含脱水山梨糖醇月桂酸酯。在一个实施方案中，所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：肽；蔗糖；山嵛酸甘油酯；矿脂；肉豆蔻酸异丙酯；和脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0212]
应当理解，总组合物的组分的总和不超过100重量％。
[0213]
在一个实施方案中，所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约0.01-1重量％的肽或肽衍生物；0.01-4重量％的糖或改性糖；85-95重量％的脂质；和任选的2-10重量％的表面活性剂。
[0214]
在一个实施方案中，所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0215]
a.0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0216]
b.0.01-2重量％的糖或改性糖；
[0217]
c.35-50重量％的矿脂；和
[0218]
d.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯。
[0219]
在一个实施方案中，所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0220]
a.0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0221]
b.0.01-2重量％的糖或改性糖；
[0222]
c.1-6重量％的山嵛酸甘油酯；
[0223]
d.35-45重量％的矿脂；
[0224]
e.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯；和
[0225]
f.2-10重量％的表面活性剂，诸如脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0226]
在一个实施方案中，所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0227]
a.0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0228]
b.0.01-2重量％的蔗糖、甘露醇或葡萄糖；
[0229]
c.1-8重量％的山嵛酸甘油酯或巴西棕榈蜡；
[0230]
d.35-45重量％的矿脂；
[0231]
e.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯；和
[0232]
f.2-10重量％的表面活性剂，诸如脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0233]
在一个实施方案中，所述组合物包含40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯、2-6重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯和2-6重量％的山嵛酸甘油酯。在一个实施方案中，所述组合物包含50％肉豆蔻酸异丙酯、0.2％脱水山梨糖醇月桂酸酯和3％山嵛酸甘油酯或6％巴西棕榈蜡。在一个实施方案中，所述脂质包含肉豆蔻酸异丙酯、矿脂和山嵛酸甘油酯。在一个实施方案中，所述组合物包含50重量％的肉豆蔻酸异丙酯、4重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯和3重量％的山嵛酸甘油酯。在一个实施方案中，所述组合物包含50％肉豆蔻酸异丙酯、0.2％脱水山梨糖醇月桂酸酯和6％巴西棕榈蜡。
[0234]
在一个实施方案中，所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0235]
a.0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0236]
b.0.01-2重量％的蔗糖；
[0237]
c.1-6重量％的山嵛酸甘油酯；
[0238]
d.35-45重量％的矿脂；
[0239]
e.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯；和
[0240]
f.2-10重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0241]
在一个实施方案中，所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0242]
a.0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0243]
b.0.01-1重量％的蔗糖；
[0244]
c.1-6重量％的山嵛酸甘油酯；
[0245]
d.35-45重量％的矿脂；
[0246]
e.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯；和
[0247]
f.2-6重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0248]
在一个实施方案中，所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0249]
a.0.2重量％的肽；
[0250]
b.0.4重量％的蔗糖；
[0251]
c.3重量％的山嵛酸甘油酯；
[0252]
d.42.4重量％的矿脂；
[0253]
e.50重量％的肉豆蔻酸异丙酯；和
[0254]
f.4重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0255]
在一个实施方案中，所述组分的百分比量的总和不超过100％。
[0256]
在一个实施方案中，所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0257]
a)1重量％的肽；
[0258]
b)2重量％的蔗糖；
[0259]
c)95重量％的脂质；和任选的
[0260]
d)2重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0261]
在一个实施方案中，所述组合物是基本上不含水的组合物。
[0262]
在一个实施方案中，所述组合物呈软膏剂、粉末、喷雾剂、洗剂、凝胶、泡沫、乳膏剂、美容品或洗发剂的形式。在一个实施方案中，所述组合物呈粉末的形式。
[0263]
制备方法
[0264]
所述颗粒可以通过标准技术(诸如冷冻干燥、喷雾干燥或冷冻喷雾)制备，然后进
行操作将颗粒尺寸减小到亚微米水平。这样的尺寸减小可以使用标准研磨技术诸如球磨来进行。其它合适的技术是乳化和溶剂蒸发，并且还有其它用于产生颗粒的技术可以使用活性剂/糖的沉淀。
[0265]
在一个方面，本发明提供了一种制备如本文所述的组合物的方法，其包括以下步骤：
[0266]
a)将所述肽与糖混合；
[0267]
b)冷冻干燥a)的混合物；
[0268]
c)将b)与脂质和表面活性剂混合；
[0269]
d)研磨c)的混合物；和
[0270]
e)任选地将d)的混合物与脂质和增稠剂混合。
[0271]
可以将所述肽与蔗糖一起冷冻干燥以增加肽颗粒的溶解并增加肽的化学稳定性。
[0272]
在一个实施方案中，制备如本文所述的组合物的方法包括以下步骤：
[0273]
a)将所述肽与糖诸如蔗糖一起混合；
[0274]
b)低压冻干a)的混合物；
[0275]
c)将脂质(诸如肉豆蔻酸异丙酯)与表面活性剂(例如脱水山梨糖醇月桂酸酯)混合以得到均匀溶液；
[0276]
d)将b)的肽-糖混合物加入c)中的脂质-表面活性剂混合物中以获得悬浮液；
[0277]
e)研磨d)的混合物，例如通过使用标准化的珠子、湿磨方法；
[0278]
f)将脂质(诸如矿脂)与表面活性剂(诸如脱水山梨糖醇月桂酸酯)和增稠剂(诸如山嵛酸甘油酯)混合；和
[0279]
g)将e)的混合物与f)的混合物混合。
[0280]
递送区域
[0281]
本发明涉及适合用于局部递送一种或多种活性剂(诸如肽)的组合物。在一个实施方案中，所述局部施用部位是在患者的皮肤表面上。在一个实施方案中，所述局部施用部位是在患者的组织表面上。在一个实施方案中，本发明的产品旨在将医学活性物质递送到毛囊中或毛囊周围的皮肤中。
[0282]
在一个实施方案中，如本文所述的组合物是用于在哺乳动物中刺激毛发生长并且不限于用在头皮上，但是也可以应用于身体的其它地方(包括面部以促进胡须、睫毛、眉毛等的生长)。
[0283]
组合物的用途
[0284]
在一个方面，本发明提供了一种用于向有此需要的受试者局部递送肽或变体/片段的方法，所述方法包括向受试者的局部施用部位应用有效量的所述组合物。
[0285]
在一个实施方案中，可以应用所述组合物数天，例如数周，诸如数月。
[0286]
本发明不限于医学用途，而如本文所述的组合物也可用作美容剂(含义是，它本身不提供任何身体健康改善，而仅为哺乳动物提供美学益处)。
[0287]
技术人员将进一步理解，本发明的组合物可以在体内、离体或在体外使用。例如，当为了刺激毛发生长使用组合物时，该组合物可用于离体刺激毛发生长，例如在将皮肤移植到哺乳动物上之前在皮肤外植体中。
[0288]
在一个实施方案中，将所述组合物应用于受试者或患者。在一个实施方案中，所述
受试者或患者是哺乳动物。在一个实施方案中，所述哺乳动物选自人、狗、猫和马。在一个实施方案中，所述哺乳动物是人。
[0289]
所述组合物可具有伤口愈合、抗衰老、抗刺激、抗瘙痒、抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗炎、抗过敏、抗皱纹和/或抗痤疮的作用。
[0290]
医学用途
[0291]
在一个方面，本发明涉及用作药物的如本文所述的组合物。在一个实施方案中，药物组合物的肽是活性成分，诸如活性药物成分。因此，在一个实施方案中，药物组合物适用于治疗所述肽对其有效的适应症。
[0292]
在一个实施方案中，如本文所述的组合物是用于治疗皮肤病学病况。在一个方面，本发明提供了一种用于治疗皮肤病学病况的方法。在一个实施方案中，所述组合物是用于治疗皮肤病学病况。在一个实施方案中，所述皮肤病学病况选自银屑病、特应性皮炎、湿疹、致癌前状态和皮肤感染。致癌前状态涵盖癌前的皮肤病变。皮肤感染可以是细菌的、病毒的、真菌的和寄生虫的感染。
[0293]
在一个方面，本发明涉及如本文所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防与脱发有关的疾病或病况。
[0294]
在一个方面，本发明涉及如本文所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗皮肤病学病况。
[0295]
在一个实施方案中，将有效量的组合物施用给受试者。本文中使用的术语“有效的”是指足以实现期望的、预期的或期待的结果。例如，“有效量”或“美容有效量”或“治疗有效量”是指足以实现期望的、预期的或期待的结果的量。这是经计算产生期望的治疗效果的活性材料的预定量。如本领域技术人员领会的，化合物的量可以根据其比活性而变化。合适的剂量量可以含有预先确定的量的活性组合物，其经计算以与需要的稀释剂结合产生期望的治疗效果。在用于制备本发明的组合物的方法和用途中，提供了治疗有效量的活性组分。如本领域众所周知的，治疗有效量可以由具有普通技术的医学或兽医工作者基于患者特征(诸如年龄、体重、性别、状况、并发症、其它疾病等)确定。
[0296]
本文中使用的“治疗有效量”或“有效量”或“治疗有效的”表示，改善症状或病况的活性成分的量。例如，在一个实施方案中，“治疗有效量”表示对毛发生长提供刺激作用的量。
[0297]
脱发
[0298]
在一个实施方案中，如本文所述的组合物是用于治疗或预防与脱发有关的疾病或病况。
[0299]
在一个方面，本发明提供了一种用于刺激毛发生长的方法，所述方法包括给有此需要的患者局部施用有效量的所述组合物。
[0300]
在一个方面，本发明提供了一种用于治疗脱发的方法，所述方法包括给有此需要的患者局部施用有效量的所述组合物。
[0301]
在一个实施方案中，如本文所述的组合物是用于治疗脱发。脱发通常与生长初期毛发的脱落有关。但是，应当理解，本发明的组合物还可用于治疗与生长终期毛发的脱落相关的病况。
[0302]
在一个实施方案中，所述脱发选自：
[0303]
(a)雄激素性脱发(也被称作斑秃、秃发症、男性型脱发或女性型脱发)；
[0304]
(b)牵引性脱发；
[0305]
(c)再生期脱发；
[0306]
(d)生长终期脱发；
[0307]
(e)斑秃；
[0308]
(f)全秃；
[0309]
(g)普秃；
[0310]
(h)脱须(alopecia barbae)；
[0311]
(i)粘蛋白性脱发；
[0312]
(j)肿瘤性脱发；
[0313]
(k)瘢痕性脱发；和
[0314]
(l)疤痕性脱发。
[0315]
例如，所述脱发可以是雄激素性脱发。
[0316]
可替换地，所述脱发可以是再生期脱发。由毛发过早进入生长终期阶段而导致的这种病况可能由多种原因引起，包括进食障碍、发热、分娩、慢性疾病、大手术、贫血、严重的情绪障碍、节食、甲状腺功能减退和药物。
[0317]
因此，在一个实施方案中，所述脱发是由放射疗法和/或化疗剂诱导。例如，脱发是使用化疗药物(诸如顺铂、依托泊苷和紫杉醇)治疗的常见且令人痛苦的副作用。
[0318]
在一个实施方案中，在本发明的组合物中存在的修饰的骨桥蛋白肽能够在哺乳动物中刺激毛发生长。
[0319]
在一个实施方案中，所述肽能够刺激人毛发的生长。
[0320]
在另一个实施方案中，所述肽能够刺激体内毛发的生长。
[0321]
本领域技术人员将理解，毛发生长的刺激可以通过现有毛囊的作用和/或通过诱导新毛囊的形成来介导。因此，在一个实施方案中，所述修饰的骨桥蛋白肽能够刺激现有的毛囊(例如，通过延长生长初期阶段和/或通过缩短生长终期阶段使得静止的毛囊变得活跃)。
[0322]
在另一个实施方案中，所述肽能够诱导新毛囊或用于产生它们的干细胞的形成。
[0323]
美容用途
[0324]
在一个方面，如本文所述的组合物是供使用的，其中所述用途是美容用途。
[0325]
在一个方面，本发明提供了如本文所述的组合物在哺乳动物中刺激毛发生长的用途，其中所述用途是美容用途。在一个实施方案中，所述美容组合物是用于刺激现有毛囊和/或诱导新毛囊(或用于产生它们的干细胞)的生长。
[0326]
在一个实施方案中，所述美容组合物用于治疗或预防脱发，所述脱发可能与发际线后退和/或头发稀疏有关。
[0327]
联合治疗
[0328]
本领域技术人员将理解，本发明的组合物可以单独使用或与其它治疗剂或美容剂组合使用。例如，本发明的组合物可用于与现有治疗的联合疗法中以防止现有毛发的脱落和/或刺激新毛发的生长，例如钾通道开放剂，诸如米诺地尔(regaine rtm.,pharmacia corp.)和二氮嗪；5-α-还原酶抑制剂，诸如非那雄胺(propecia rtm.,merck&co.)；和免疫
抑制剂环孢素a。
[0329]
项目
[0330]
1.一种组合物，其包含
[0331]
a)多肽；
[0332]
b)糖；和
[0333]
c)脂质。
[0334]
2.根据项目1的组合物，其中所述多肽是肽。
[0335]
3.一种组合物，其包含
[0336]
a)肽或肽衍生物；
[0337]
b)糖或改性糖；和
[0338]
c)脂质。
[0339]
4.根据上述项目中的任一项的组合物，其中组合物包含颗粒，所述颗粒包含所述肽或肽衍生物和所述糖或改性糖或基本上由其组成。
[0340]
5.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含0.01-10重量％的颗粒，诸如0.1-5重量％的颗粒，诸如0.1-2重量％的颗粒。
[0341]
6.根据上述项目中的任一项的组合物，其中至少50％的颗粒具有在1和5μm之间，诸如在5和10μm之间，例如在10和15μm之间，诸如在15和20μm之间，例如在20和25μm之间，诸如在25和30μm之间，诸如在30和35μm之间，例如在35和40μm之间，诸如在40和45μm之间，例如在45和50μm之间的平均粒径。
[0342]
7.根据上述项目中的任一项的组合物，其中至少50％的颗粒具有小于50μm，例如小于40μm，诸如小于30μm，例如小于20μm，诸如小于10μm，诸如小于1μm的直径。
[0343]
8.根据上述项目中的任一项的组合物，其中至少50％的颗粒具有在0.1和50μm之间，例如在0.1和15μm之间，诸如在0.1和10μm之间，诸如在0.1和2μm之间的平均粒径。
[0344]
9.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含1-50个氨基酸残基，诸如3-40个氨基酸残基，诸如5-30个氨基酸残基，诸如10-25个氨基酸残基。
[0345]
10.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽是两亲的。
[0346]
11.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽或肽衍生物是抗微生物肽或肽衍生物。
[0347]
12.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述抗微生物肽选自多粘菌素b、ll37(seq id no:188)和fol-199(seq id no:185)。
[0348]
13.根据上述项目中的任一项的组合物，其中，所述肽或肽衍生物是抗炎肽或肽衍生物。
[0349]
14.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述抗炎肽选自fol-005(seq id no:1)、fol-004(seq id no:69)和fol-199(seq id no:185)。
[0350]
15.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽选自ghk(seq id no:188)、缩宫素(seq id no:186)、多粘菌素b、ll37(seq id no:187)和贝卡普勒明。
[0351]
16.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含：
[0352]
i)以下通式的氨基酸序列：
[0353]
kx2lax5x6x7x8ix
10
lx
12
ygik(seq id no:140)
[0354]
其中：
[0355]
x2是c、p或g；
[0356]
x5是e或g；
[0357]
x6是c、d或i；
[0358]
x7是d、i、s或g；
[0359]
x8是s、d或g；
[0360]
x
10
是e或g；
[0361]
x
12
是s或t；
[0362]
前提条件是，如果x
12
是t，则所述肽包含不超过25个氨基酸残基；且
[0363]
前提条件是，如果x2是p、x5是e、x6是i、x7是d、x8是s、x
10
是e且x
12
是s，则所述肽包含不超过85个氨基酸残基；
[0364]
ii)以下通式的氨基酸序列：
[0365]
x
10
lx
12
ygik(seq id no:177)
[0366]
其中：
[0367]
x
10
是e或g；
[0368]
x12是s或t；
[0369]
前提条件是，如果x
12
是t，则所述肽包含不超过25个氨基酸；且
[0370]
前提条件是，如果x
10
是e且x
12
是s，则所述肽包含不超过85个氨基酸残基；
[0371]
iii)以下通式的氨基酸序列：
[0372]
vdvpz5gdislayz
13
lr(seq id no:164)
[0373]
其中：
[0374]
z5是e或n；
[0375]z13
是r或g；
[0376]
iv)以下通式的氨基酸序列：
[0377]
vdtydgz7z8svvyglr(seq id no:165)
[0378]
其中：
[0379]
z7是d或g；
[0380]
z8是i或g；
[0381]
v)以下通式的氨基酸序列：
[0382]
gdpnz5z6z7z8z9svvyglr(seq id no:166)
[0383]
其中：
[0384]
z5是d或g；
[0385]
z6是d或gz7是i或r；
[0386]
z8是g或不存在；
[0387]
z9是d或不存在；
[0388]
vi)以下通式的氨基酸序列：
[0389]
kx2lax5x6x7x8ix
10
lsygik(seq id no:162)
[0390]
其中：
[0391]
x2是c、p或g；
[0392]
x5是e或g；
[0393]
x6是c、i或不存在；
[0394]
x7是d、g或不存在；
[0395]
x8是s、g或不存在；
[0396]
x
10
是e或g；
[0397]
vii)以下通式的氨基酸序列：
[0398]
kx2lax5ix
10
lsygik(seq id no:163)
[0399]
其中：
[0400]
x2是c、p或g；
[0401]
x5是e或g；
[0402]
x
10
是e或g；
[0403]
viii)以下通式的氨基酸序列：
[0404]
z7z8sz
10z11
yglr(seq id no:178)
[0405]
其中：
[0406]
z7是d或g；
[0407]
z8是i或g；
[0408]z10
是v或l；
[0409]z11
是v或a；
[0410]
或者
[0411]
ix)以下通式的氨基酸序列：
[0412]
vdz3z4z5gz7z8sz
10z11
yglr(seq id no:68)
[0413]
其中：
[0414]
z3是t或v；
[0415]
z4是y或p；
[0416]
z5是d或n；
[0417]
z7是d或g；
[0418]
z8是i或g；
[0419]z10
是v或l；
[0420]z11
是v或a。
[0421]
17.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：gdpndgrgdsvvyglr(seq id no:137)、vdtydggisvvyglr(seq id no:138)、和vdtydgdgsvvyglr(seq id no:139)、vdvpegdislayglr(seq id no:157)、ldglvraydnispvg(seq id no:158)、gdpngdisvvyglr(seq id no:159)、vdvpngdislayrlr(seq id no:160)vdvpegdislayrlr(seq id no:161)。
[0422]
18.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：gdpndgrgdsvvyglr(seq id no:137)、vdtydggisvvyglr(seq id no:138)、和vdtydgdgsvvyglr(seq id no:139)、vdvpegdislayglr(seq id no:157)、ldglvraydnispvg(seq id no:158)、gdpngdisvvyglr(seq id no:159)、vdvpngdislayrlr(seq id no:160)vdvpegdislayrlr(seq id no:161)、v(β-d)tydgdisvvyglr(seq id no:167)、vdty(β-d)
gdisvvyglr(seq id no:168)、vdtydg(β-d)isvvyglr(seq id no:169)。
[0423]
19.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：kclaecdsielsygik(seq id no:141)、claeidsc(seq id no:142)、cfkplaeidsiecsygik(seq id no:143)、kplaedisielsygik(seq id no:145)、kplaeigdielsygik(seq id no:146)、kplaegdielsygik(seq id no:147)、kplaeielsygik(seq id no:148)、kplaeidsieltygik(seq id no:149)、kplaeidgielsygik(seq id no:150)、kplaeidgieltygik(seq id no:151)、kplaeigsielsygik(seq id no:152)、kglaeidsielsygik(seq id no:153)、kplagidsiglsygik(seq id no:154)、kclaeidscelsygik(seq id no:155)和cfkplaeidsiec(seq id no:156)，或其变体或片段。
[0424]
20.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：laeidsielsygik(seq id no:170)、aeidsielsygik(seq id no:171)、eidsielsygik(seq id no:172)、idsielsygik(seq id no:173)、dsielsygik(seq id no:174)、sielsygik(seq id no:175)、ielsygik(seq id no:176)，或其变体或片段。
[0425]
21.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：kplaeidsielsygi(seq id no:179)、kplaeidsielsyg(seq id no:180)、kplaeidsielsy(seq id no:181)、kplaeidsiels(seq id no:182)、kplaeidsiel(seq id no:183)、kplaeidsie(seq id no:184)，或其片段的变体。
[0426]
22.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽是修饰的骨桥蛋白肽，其中rgd结构域被失活。
[0427]
23.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述rgd结构域在修饰的骨桥蛋白肽中的一个或多个氨基酸处发生突变。
[0428]
24.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述rgd结构域在修饰的骨桥蛋白肽中至少部分地被删除。
[0429]
25.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述rgd结构域在修饰的骨桥蛋白肽中的一个或多个氨基酸处被置换。
[0430]
26.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含以下或由以下组成：vdtydgdisvvyglr(seq id no:1；fol-005)的氨基酸序列或其片段/变体。
[0431]
27.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含以下或由以下组成：kplaeidsielsygik(seq id no:136,fol-014)的氨基酸序列或其片段/变体。
[0432]
28.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含以下或由以下组成：vdvpngdislayglr(seq id no:69,fol-004)的氨基酸序列或其片段/变体。
[0433]
29.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽由小于500个氨基酸(例如小于400、350、340、330、320、310、300、290、280、270、260、250、200、150、100、50、40、30、20、15、10个或更少氨基酸的长度)组成。
[0434]
30.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述变体包含以下或由以下组成：与seq id no:1的氨基酸序列具有至少50％同一性、更优选地与所述序列具有至少60％、70％或80％或85％或90％同一性且最优选地与所述氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。
[0435]
31.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述变体包含以下或由以下组成：
seq id no:1的氨基酸序列或其片段，其中一个或多个氨基酸被保守地置换。
[0436]
32.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽是非天然存在的。
[0437]
33.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽包含串联重复或由其组成。
[0438]
34.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽是环状的。
[0439]
35.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽被糖基化。
[0440]
36.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽衍生物是缀合至部分(诸如选自聚乙二醇(peg)、单糖、荧光团、生色团、放射性化合物和细胞穿透肽的部分)的肽。
[0441]
37.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽衍生物通过糖基化或通过聚乙二醇化、酰胺化、酯化、酰化、乙酰化和/或烷基化而进行修饰。
[0442]
38.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述肽衍生物是融合至另一种多肽(诸如选自谷胱甘肽-s-转移酶(gst)和蛋白a的多肽)或融合至标签的肽。
[0443]
39.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含至少0.1重量％的肽，诸如至少0.5重量％的肽，诸如至少0.01重量％的肽，1重量％的肽，诸如至少1.5重量％的肽，诸如至少2重量％的肽，诸如至少2.5重量％的肽，诸如至少3重量％的肽，诸如至少3.5重量％的肽，诸如至少6重量％的肽，诸如至少6.5重量％的肽，诸如至少7重量％的肽，诸如至少7.5重量％的肽，诸如至少8重量％的肽，诸如至少8.5重量％的肽，诸如至少9重量％的肽，诸如至少9.5重量％的肽，诸如至少10重量％的肽。
[0444]
40.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含不超过2重量％的肽，诸如不超过5重量％的肽，诸如不超过10重量％的肽，诸如不超过15重量％的肽，诸如不超过20重量％的肽。
[0445]
41.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含在0.01和5重量％之间的肽，诸如在0.01和2重量％之间的肽，诸如在0.1和1重量％之间的肽，诸如在1和5重量％之间的肽，诸如在5和10重量％之间的肽，诸如在10和15重量％之间的肽，诸如在15和20重量％之间的肽。
[0446]
42.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述糖是糖(sugar)。
[0447]
43.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述糖具有在60和140℃之间的熔化温度。
[0448]
44.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述糖具有在60和65之间，诸如在65和70之间，例如在70和75之间，诸如在75和80之间，例如在80和85之间，例如在85和90之间，诸如在90和95之间，例如在95和100之间，诸如在100和105之间，例如在105和110之间，诸如在110和115之间，例如在115和120之间，诸如在120和125之间，例如在125和130之间，诸如在130和135之间，例如在135和140之间的熔化温度。
[0449]
45.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述糖是蔗糖(sucrose)。
[0450]
46.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述糖是甘露醇。
[0451]
47.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述糖是葡萄糖。
[0452]
48.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述糖选自麦芽糖、海藻糖、棉子糖、麦芽三糖、水苏糖、葡聚糖、葡萄糖、甘露醇和蔗糖。
[0453]
49.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含至少0.1重量％的糖，诸如至少0.5重量％的糖，诸如至少1重量％的糖，诸如至少1.5重量％的糖，诸如至少2
重量％的糖，诸如至少2.5重量％的糖，诸如至少3重量％的糖，诸如至少3.5重量％的糖，诸如至少6重量％的糖，诸如至少6.5重量％的糖，诸如至少7重量％的糖，诸如至少7.5重量％的糖，诸如至少8重量％的糖，诸如至少8.5重量％的糖，诸如至少9重量％的糖，诸如至少9.5重量％的糖，诸如至少10重量％的糖。
[0454]
50.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含不超过2重量％的糖，诸如不超过5重量％的糖，诸如不超过10重量％的糖，诸如不超过15重量％的糖，诸如不超过20重量％的糖。
[0455]
51.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含在0.01和5重量％之间的糖或改性糖，诸如在0.01和2重量％之间的糖或改性糖，诸如在0.1和2重量％之间，诸如在0.1和1重量％之间的糖或改性糖，诸如在1和5重量％之间的糖或改性糖，诸如在5和10重量％之间的糖或改性糖，诸如在10和15重量％之间的糖或改性糖，诸如在15和20重量％之间的糖或改性糖。
[0456]
52.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述脂质化合物具有在6.5和10(cal/cm3)
1/2
之间的hildebrand溶解度系数。
[0457]
53.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述脂质是肉豆蔻酸异丙酯。
[0458]
54.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述脂质是矿脂和/或肉豆蔻酸异丙酯。
[0459]
55.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含甘油或丙二醇。
[0460]
56.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述脂质溶解皮脂。
[0461]
57.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含至少50重量％的脂质，诸如至少55重量％的脂质，诸如至少60重量％的脂质，诸如至少65重量％的脂质，诸如至少70重量％的脂质，诸如至少75重量％的脂质，诸如至少80重量％的脂质，诸如至少85重量％的脂质，诸如至少90重量％的脂质，诸如至少95重量％的脂质。
[0462]
58.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含不超过55重量％的脂质，诸如不超过60重量％的脂质，诸如不超过65重量％的脂质，诸如不超过70重量％的脂质，诸如不超过75重量％的脂质，诸如不超过80重量％的脂质，诸如不超过85重量％的脂质，诸如不超过90重量％的脂质，诸如不超过95重量％的脂质。
[0463]
59.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含在40和99重量％之间的脂质，诸如在40和60重量％之间的脂质，诸如在50和60重量％之间的脂质，诸如在60和70重量％之间的脂质，诸如在70和80重量％之间的脂质，诸如在80和90重量％之间的脂质，诸如在90和99.95重量％之间的脂质。
[0464]
60.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含增稠剂。
[0465]
61.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述增稠剂是山嵛酸甘油酯或巴西棕榈蜡。
[0466]
62.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含表面活性剂。
[0467]
63.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述表面活性剂是脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0468]
64.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述表面活性剂选自脱水山梨糖醇月桂酸酯、span 80和brij 72。
[0469]
65.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述表面活性剂是基于糖的表面活性剂。
[0470]
66.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述基于糖的表面活性剂选自蔗糖椰油酸酯、脱水山梨糖醇月桂酸酯和聚山梨酯。
[0471]
67.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述基于糖的表面活性剂具有在9和16之间的hlb值。
[0472]
68.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述脂质是石蜡油。
[0473]
69.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0474]
a.0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0475]
b.0.01-2重量％的糖或改性糖；
[0476]
c.35-50重量％的矿脂；和
[0477]
d.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯。
[0478]
70.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含50重量％的肉豆蔻酸异丙酯、0.2重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯和3重量％的山嵛酸甘油酯或6重量％的巴西棕榈蜡。
[0479]
71.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯、2-6重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯和2-6重量％的山嵛酸甘油酯。
[0480]
72.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含50重量％的肉豆蔻酸异丙酯、0.2重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯和6重量％的巴西棕榈蜡。
[0481]
73.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0482]
a.0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0483]
b.0.01-2重量％的糖或改性糖；
[0484]
c.1-6重量％的山嵛酸甘油酯；
[0485]
d.35-45重量％的矿脂；
[0486]
e.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯；和
[0487]
f.2-10重量％的表面活性剂，诸如脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0488]
74.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0489]
a.0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0490]
b.0.01-2重量％的蔗糖、甘露醇或葡萄糖；
[0491]
c.1-8重量％的山嵛酸甘油酯或巴西棕榈蜡；
[0492]
d.35-45重量％的矿脂；
[0493]
e.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯；和
[0494]
f.2-10重量％的表面活性剂，诸如脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0495]
75.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0496]
a)0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0497]
b)0.01-4重量％的糖或改性糖；
[0498]
c)85-95重量％的脂质；和任选的
[0499]
d)2-10重量％的表面活性剂。
[0500]
76.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述脂质包含肉豆蔻酸异丙酯、矿脂和山嵛酸甘油酯。
[0501]
77.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：肽；蔗糖；山嵛酸甘油酯；矿脂；肉豆蔻酸异丙酯；和脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0502]
78.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述糖是蔗糖且所述脂质是肉豆蔻酸异丙酯。
[0503]
79.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含矿脂。
[0504]
80.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含山嵛酸甘油酯。
[0505]
81.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0506]
82.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0507]
a.0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0508]
b.0.01-2重量％的蔗糖；
[0509]
c.1-6重量％的山嵛酸甘油酯；
[0510]
d.35-45重量％的矿脂；
[0511]
e.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯；和
[0512]
f.2-10重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0513]
83.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0514]
a.0.01-1重量％的肽或肽衍生物；
[0515]
b.0.01-1重量％的蔗糖；
[0516]
c.1-6重量％的山嵛酸甘油酯；
[0517]
d.35-45重量％的矿脂；
[0518]
e.40-60重量％的肉豆蔻酸异丙酯；和
[0519]
f.2-6重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0520]
84.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含以下物质或基本上由其组成：约
[0521]
a.0.2重量％的肽或肽衍生物；
[0522]
b.0.4重量％的蔗糖；
[0523]
c.3重量％的山嵛酸甘油酯；
[0524]
d.42.4重量％的矿脂；
[0525]
e.50重量％的肉豆蔻酸异丙酯；和
[0526]
f.4重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0527]
85.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物包含以下物质或基本上
由其组成：约
[0528]
a)1重量％的肽；
[0529]
b)2重量％的蔗糖；
[0530]
c)95重量％的脂质；和任选的
[0531]
d)2重量％的脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0532]
86.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组分的百分比量的总和不超过100％。
[0533]
87.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物基本上不含水。
[0534]
88.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物呈软膏剂、粉末、喷雾剂、洗剂、凝胶、泡沫、乳膏剂、化妆品或洗发剂的形式。
[0535]
89.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物能够刺激人毛发。
[0536]
90.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物能够刺激现有毛囊。
[0537]
91.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物能够诱导新毛囊或用于产生它们的干细胞的形成。
[0538]
92.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含活性药物成分。
[0539]
93.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含米诺地尔。
[0540]
94.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含非那雄胺。
[0541]
95.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物进一步包含米诺地尔和非那雄胺。
[0542]
96.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物是药物组合物。
[0543]
97.根据上述项目中的任一项的组合物，其用作药物。
[0544]
98.根据上述项目中的任一项的组合物，其用于治疗皮肤病学病况。
[0545]
99.根据项目98所用的组合物，其中所述皮肤病学病况选自银屑病、特应性皮炎、湿疹、致癌前状态和皮肤感染。
[0546]
100.根据上述项目中的任一项的组合物，其用于治疗或预防与脱发有关的疾病或病况。
[0547]
101.根据上述项目中的任一项的组合物，其用于在哺乳动物中刺激毛发生长。
[0548]
102.根据上述项目中的任一项的组合物，其用于刺激现有毛囊。
[0549]
103.根据上述项目中的任一项的组合物，其用于诱导新毛囊或用于产生它们的干细胞的生长。
[0550]
104.根据上述项目中的任一项的组合物，其用于治疗或预防脱发。
[0551]
105.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述脱发与生长初期毛发的脱落有关。
[0552]
106.根据上述项目中的任一项所用的组合物，其中所述脱发与生长终期毛发的脱落有关。
[0553]
107.根据上述项目中的任一项所用的组合物，其中所述脱发选自：
[0554]
a.雄激素性脱发(也被称作斑秃、秃发症、男性型脱发或女性型脱发)；
[0555]
b.牵引性脱发；
[0556]
c.再生期脱发；
[0557]
d.生长终期脱发；
[0558]
e.斑秃；
[0559]
f.全秃；
[0560]
g.普秃；
[0561]
h.脱须；
[0562]
i.粘蛋白性脱发；
[0563]
j.肿瘤性脱发；
[0564]
k.瘢痕性脱发；和
[0565]
l.疤痕性脱发。
[0566]
108.根据上述项目中的任一项所用的组合物，其中所述脱发是雄激素性脱发。
[0567]
109.根据上述项目中的任一项所用的组合物，其中所述脱发是再生期脱发。
[0568]
110.根据上述项目中的任一项所用的组合物，其中所述脱发由放射疗法和/或化疗剂诱导。
[0569]
111.根据上述项目中的任一项所用的组合物，其中所述哺乳动物选自人、狗、猫和马。
[0570]
112.根据上述项目中的任一项的化合物的用途，其中所述用途是美容用途。
[0571]
113.根据上述项目中的任一项的化合物用于在哺乳动物中刺激毛发生长的用途，其中所述用途是美容用途。
[0572]
114.根据上述项目中的任一项的化合物用于治疗或预防脱发的用途。
[0573]
115.根据上述项目中的任一项的化合物的用途，其中所述脱发与发际线后退有关。
[0574]
116.根据上述项目中的任一项的化合物的用途，其中所述脱发与发际线稀疏有关。
[0575]
117.根据上述项目中的任一项的化合物用于促进胡须、睫毛或眉毛的生长的用途。
[0576]
118.根据上述项目中的任一项的化合物的用途，其中所述哺乳动物是人。
[0577]
119.一种用于刺激毛发生长的方法，所述方法包括给有此需要的患者局部施用有效量的上述项目中的任一项的组合物或药物组合物。
[0578]
120.一种用于治疗脱发的方法，所述方法包括给有此需要的患者局部施用有效量的上述项目中的任一项的组合物或药物组合物。
[0579]
121.一种用于给有此需要的患者局部递送根据上述项目中的任一项的组合物的方法，所述方法包括向个体的局部施用部位施用有效量的根据上述项目中的任一项的组合物。
[0580]
122.一种用于治疗皮肤病学病况的方法，所述方法包括给有此需要的患者局部施用有效量的上述项目中的任一项的组合物或药物组合物。
[0581]
123.根据项目119-122中的任一项的方法，其中所述患者是人。
[0582]
124.根据项目119-122中的任一项的方法，其中所述局部施用部位是在个体的皮肤上。
[0583]
125.根据项目119-122中的任一项的方法，其中所述局部施用部位是在患者的组织上。
[0584]
126.根据上述项目中的任一项的组合物在药物制备中的用途，所述药物用于治疗或预防与脱发有关的疾病或病况。
[0585]
127.根据上述项目中的任一项的组合物在药物制备中的用途，所述药物用于治疗皮肤病学病况。
[0586]
128.一种制备根据上述项目中的任一项的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0587]
a)将所述肽与糖混合；
[0588]
b)冷冻干燥a)的混合物；
[0589]
c)将b)与脂质和表面活性剂混合；
[0590]
d)研磨c)的混合物；和
[0591]
e)任选地将d)的混合物与脂质和增稠剂混合。
[0592]
129.根据项目128的方法，其中所述脂质是肉豆蔻酸异丙酯。
[0593]
130.根据项目128的方法，其中所述表面活性剂是脱水山梨糖醇月桂酸酯。
实施例
[0594]
实施例1.fol-005溶解度和稳定性测试.
[0595]
fol-005的最有前途的局部递送途径是皮脂途径。本研究的目的是确定fol-005在潜在赋形剂和人工皮脂中的溶解度和相容性。
[0596]
材料和方法
[0597]
表1.用于溶解度和相容性测试的化学物质.
[0598][0599]
表2.用于制备人工皮脂的化学物质.
[0600][0601][0602]
结果
[0603]
fol-005在媒介物赋形剂和人工皮脂中的溶解度
[0604]
测试了fol-005在室温在媒介物赋形剂中和在37℃在人工皮脂中的溶解度。通过加入0.1％(w/w)的fol-005和99.90％的赋形剂来进行测试。如果fol-005不溶解，则添加双倍量的赋形剂。用磁力搅拌器搅拌混合物2小时。如果剩余fol-005的颗粒，则将混合物以14000rpm或10000rpm(人工皮脂)离心5分钟，并取出上清液进行分析。
[0605]
在所有批次中通过hplc分析确定fol-005的浓度。
[0606]
表3a.制备用于溶解度测试的含有fol-005的赋形剂批次的组成.
[0607]
[0608][0609][0610]
表3b.fol-005(钠盐)在媒介物赋形剂和人工皮脂中的溶解度测试的结果.
[0611][0612]
结论
[0613]
fol-005(钠盐)在室温的溶解度：
[0614]
·
在含有cithrol的石蜡油中的溶解度0.01mg/ml
[0615]
·
在甘油中的溶解度0.31mg/ml
[0616]
·
在丙二醇中的溶解度0.16mg/ml
[0617]
·
在葡萄糖、甘露醇和蔗糖的糖溶液中的溶解度》1mg/ml
[0618]
·
在pbs缓冲液中的溶解度》1mg/ml
[0619]
·
在37℃在人工皮脂中的溶解度0.27mg/ml
[0620]
在糖溶液中的fol-005(钠盐)当在2-8℃储存7周时，在含有葡萄糖和蔗糖的水溶液中具有良好的化学稳定性。当在2-8℃储存7周时，在含有10％葡萄糖或10％蔗糖的水溶液中未看到fol-005含量的变化，而当在室温储存时，在10％葡萄糖溶液中的fol-005含量从0.9mg/ml下降至0.7mg/ml，且在10％蔗糖溶液中的fol-005含量从0.9mg/ml下降至0.04mg/ml。
[0621]
与蔗糖和葡萄糖相比，当在2-8℃储存7周时，发现fol-005的化学稳定性在含有甘露醇的水溶液中较差。当在2-8℃储存7周时在10％甘露醇溶液中的fol-005含量从0.9mg/ml下降至0.8mg/ml，且当在室温储存7周时从0.8mg/ml下降至0.2mg/ml。
[0622]
fol-005在甘油中具有良好的化学稳定性。当在2-8℃储存7周时，未看到fol-005含量的变化，而当在室温储存7周时，fol-005含量从0.3mg/ml下降至0.2mg/ml。
[0623]
发现fol-005的化学稳定性在丙二醇中较差。当在2-8℃储存7周时，fol-005含量
从0.16mg/ml下降至0.15mg/ml，且当在室温储存7周时，从1.6mg/ml下降至0.07mg/ml。
[0624]
确定fol-005在10％葡萄糖溶液中的溶解度高于4.38％(w/w)。
[0625]
实施例2.fol-005稳定性测试.
[0626]
材料和方法
[0627]
在筛选稳定性研究中研究的fol-005悬浮液的制备
[0628]
制备方法-悬浮液：
[0629]
·
将aerosil装入烧杯中
[0630]
·
在烧杯中加入石蜡油并小心混合
[0631]
·
搅拌直至形成均匀的粘稠凝胶
[0632]
·
在搅拌下加热至70℃
[0633]
·
在70℃均质化，直至获得均质凝胶
[0634]
·
冷却至室温
[0635]
·
添加肉豆蔻酸异丙酯
[0636]
·
搅拌直至形成均质悬浮液
[0637]
·
将fol-005蔗糖颗粒和脱水山梨糖醇月桂酸酯装入新烧杯中
[0638]
·
将悬浮液加入装有fol-005蔗糖颗粒和脱水山梨糖醇月桂酸酯的烧杯中
[0639]
·
在70℃均质化，直至形成均质悬浮液
[0640]
结果
[0641]
表4a.fol-005(钠盐)在三种悬浮液中的稳定性测试的结果.
[0642]
[0643][0644]
*fol-005蔗糖1:1含有45.8％fol-005
[0645]1对分析方法中的不同样品制备步骤进行了评价。在表中给出的数据来自给出最高回收率的分析。
[0646]2相关物质由于样品量过小(0.25g样品/25ml溶液)而没有检测到。
[0647]3样品制备四氢呋喃和水
[0648]4样品制备span、水和乙腈
[0649]
结论
[0650]
悬浮液：
[0651]
·
当在25℃储存时，fol-005在s3中的回收率是低的。但是，当改进分析取样制备时，它会增加。
[0652]
·
在25℃储存4和10周以及在30℃储存4周以后，在三种悬浮液中没有检测到β-asp(fol-005的降解产物)。
[0653]
·
在s2和s3中看到小量的降解产物rrt＝0.98，而在s1中看到更高量。
[0654]
·
结论是，fol-005的化学稳定性在s2和s3中看起来是有前途的。
[0655]
表4b-d显示了fol-005的纯度。在图1-3中也显示了数据。
[0656]
表4b.fol-005在不同ph的纯度.
[0657]
[0658][0659]
表4c.在肉豆蔻酸异丙酯(ipm)的不同条件下的fol-005纯度.
[0660][0661]
表4d.在不同温度在有或没有蔗糖存在下的fol-005纯度.
[0662][0663]
结论
[0664]
证实了fol-005在各种ph下降解，而在无水条件下降解是非常有限的。此外，干燥的ipm导致与未干燥的ipm相比在25和30℃下fol-005的更少降解，并且蔗糖颗粒导致与na盐相比在25和30℃下fol-005的更少降解。
[0665]
实施例3.fol-005与甘露醇一起的低压冻干
[0666]
通过冷冻干燥制备fol-005(乙酸盐)的颗粒的可能性，并测试在肽与原型媒介物之间的相容性。
[0667]
材料和方法
[0668]
在该研究中使用以下化学物质：
[0669]
甘露醇，氢氧化钠，hcl(37％)，api，fol-005ac-盐，β-asp fol-005(降解产物)，去离子水，石蜡油，甘油，丙二醇，cithrol
tm
dphs，吐温60bergabest mct油60/40。
[0670]
用于冷冻干燥测试的溶液的制备
[0671]
制备在表5a中给出的混合物用于冷冻干燥。将混合物分配到2ml玻璃管形瓶中。下表中给出了每种混合物的玻璃管形瓶的数目。每个瓶含有大约2mg fol-005。
[0672]
表5a.制备用于冷冻干燥的组合物混合物
[0673][0674][0675]
*ph倾向于随着时间而降低。在冷冻干燥之前，确定ph为7.1。
[0676]
冷冻干燥条件
[0677]
首先将管形瓶在-35℃储存2小时，且然后快速地转移到冷冻干燥器。将管形瓶在-55℃在真空下冷冻干燥24小时。
[0678]
用于相容性测试的制剂的制备
[0679]
在纯石蜡油中和在一种潜在制剂中测试了fol-005粉末和媒介物赋形剂之间的相容性。在表5b中呈现了制剂的组成。
[0680]
表5b.用于冷冻干燥的粉末的相容性测试的制剂.
[0681][0682]
测定方法
[0683]
通过hplc使用制剂中的fol-005的hplc-uv测定方法分析了测试项目。测定了flo-005的浓度，并且也测定了β-asp fol-005。
[0684]
结果
[0685]
在表6a-c中显示了fol-005的冷冻干燥粉末的hplc分析结果。
[0686]
表6a.fol-005(乙酸盐)和甘露醇的冷冻干燥粉末的hplc分析结果，初步分析以及在2-8℃和室温储存4周以后.
[0687][0688]
表6b.fol-005(乙酸盐)和甘露醇在石蜡油(制剂a)中的冷冻干燥粉末的hplc分析结果，初步分析以及在2-8℃和室温储存4周以后.
[0689][0690]
表6c.fol-005(乙酸盐)和甘露醇在制剂b中的冷冻干燥粉末的相容性测试结果，初步分析以及在2-8℃和室温储存4周以后.
[0691][0692]
结论
[0693]
以甘露醇为稳定剂成功地冷冻干燥fol-005的乙酸盐。测试了低压冻干混合物的两种不同ph，3.5和7.1，以及fol-005和甘露醇之间的两种不同比例，1:1和2:1。当在2-8℃储存4周时，未看到fol-005和甘露醇之间由于ph或配比而导致的冷冻干燥粉末的化学稳定性差异。
[0694]
当在2-8℃储存4周时，fol-005和甘露醇的冷冻干燥粉末是化学稳定的。当在室温储存4周时，可以看到相关物质的总和从5％至6％的增加。
[0695]
发现fol-005的冷冻干燥粉末当分散在含有100％石蜡油的制剂a中并在2-8℃和室温储存4周时是化学稳定的。
[0696]
发现在含有石蜡油(16％)、甘油(45％)、丙二醇(30％)、cithrol(3％)、吐温60(3％)和bergabest mct油(4％)的制剂b中的化学稳定性较差。当在2-8℃储存4周时，未见到fol-005含量的变化，但是可以看到相关物质的量从7.5％至10％的增加，并且看到相关物质的图谱的差异。当在室温储存4周时，fol-005含量从0.07％下降至0.03％，且相关物质的总和从7.5增加至50.8。
[0697]
实施例4：安慰剂制剂的增稠.
[0698]
在该研究中，我们已经研究了用矿脂和高浓度的肉豆蔻酸异丙酯形成粘稠制剂的积极性。
[0699]
材料和方法
[0700]
矿脂/肉豆蔻酸异丙酯制剂
[0701]
肉眼观察矿脂/肉豆蔻酸异丙酯混合物以确定是否可以使用这两种组分制备具有高粘度的制剂。在表7中给出了制备的制剂的组成。
[0702]
表7.制剂组成％(w/w).
[0703]
成分ism17165ism17166ism17167ism17168肉豆蔻酸异丙酯50302010矿脂50708090总计100100100100
[0704]
增稠剂的添加
[0705]
为了增加矿脂/肉豆蔻酸异丙酯制剂的粘度，加入增稠剂并肉眼观察制剂。在表8中给出了制剂组成。
[0706]
表8.制剂组成％(w/w).
[0707][0708]
含有蔗糖颗粒的安慰剂制剂
[0709]
进行含有蔗糖颗粒的制剂的离心以研究颗粒沉降。将2％(w/w)蔗糖添加到表7和8中的ism17167-ism17172中，并将1％(w/w)蔗糖添加到ism17166中。将制剂混合，然后将它们以1000rpm离心3分钟并进行肉眼观察。
[0710]
含有fol-005颗粒的制剂
[0711]
还通过分析含有离心制剂的试管中不同位置的fol-005含量来研究选定制剂中的颗粒沉降。将0.2％(w/w)fol-005加入根据表9的安慰剂制剂中，然后通过磁力搅拌将制剂混合2小时。将每种制剂分配到两个eppendorf管中，将其中一个以1000rpm离心3分钟。将试管储存在冰箱中直至测定fol-005含量。通过高压液相色谱法(rp-hplc)和紫外检测(uv)进行分析。在220nm监测化合物。将未鉴定的相关物质定量为％相对面积。将fol-005盐(钠)用作外标准品。
[0712]
表9.制剂组成％(w/w)
[0713][0714][0715]
结果
[0716]
矿脂/肉豆蔻酸异丙酯制剂
[0717]
如表10中所述，仅用肉豆蔻酸异丙酯和矿脂不可能产生良好的粘稠制剂。含有50％(w/w)或更少矿脂的制剂具有低粘度，而含有70％(w/w)或更高矿脂含量的制剂显示出相分离的趋势。
[0718]
表10.制剂特性.
[0719] ism17165ism17166ism17167ism17168肉豆蔻酸异丙酯50302010矿脂50708090粘度低中中高外观好分离的趋势分离的趋势分离的趋势
[0720]
增稠剂的添加
[0721]
将增稠剂添加到制剂中以增加粘度。此外，将0.2％(w/w)脱水山梨糖醇月桂酸酯添加到制剂中，因为它对fol-005颗粒具有稳定作用。如在表11中所见，巴西棕榈蜡和山嵛酸甘油酯的添加对制剂具有积极影响。通过添加这些成分，可以创建具有中至高粘度的制剂。
[0722]
表11.制剂特性.
[0723][0724]
结论
[0725]
发现仅肉豆蔻酸异丙酯和矿脂的混合物具有低粘度或显示出相分离的趋势。但是，通过添加山嵛酸甘油酯或巴西棕榈蜡，制剂显示出好外观和中粘度。
[0726]
研究了含有巴西棕榈蜡或山嵛酸甘油酯的制剂中的颗粒沉降，并且fol-005在这些制剂中似乎没有沉降。因此，含有50％(w/w)肉豆蔻酸异丙酯、0.2％(w/w)脱水山梨糖醇月桂酸酯和3％(w/w)山嵛酸甘油酯或6％(w/w)巴西棕榈蜡的矿脂制剂似乎是fol-005颗粒悬浮液的有前途的替代品。
[0727]
实施例5.fol-005颗粒的制剂的离体测试
[0728]
材料和方法
[0729]
在表12中给出了离体测试的组合物。
[0730]
表12a.在实验1中离体测试的组合物.
[0731]
[0732]
表12b.在实验2中离体测试的组合物.
[0733][0734][0735]
皮肤膜
[0736]
按以下方式制备猪耳朵全厚度膜：
[0737]
用微温水冲洗猪耳朵以除去污垢、血和蜡。将耳朵用面巾纸(kleenex)擦干，并用胡须修剪器除去猪鬃。将内耳皮肤用皮刀切成大约600-700μm的厚度,并从切割的皮肤片冲出膜。使用千分尺确定皮肤膜的厚度。皮肤膜应在离体实验前一天准备好，并应保存，用铝箔覆盖，在冰箱中直至使用它们。将皮肤膜放入扩散池设备中，并在为实验选择的温度水合1小时。水合1小时后，每个池施用100mg的每种制剂。使用小金属勺进行制剂的按摩，其顶部“包裹”在石蜡膜和玻璃棒中。在实验结束时，使用顶部和溶剂/流体清洁皮肤样品以除去多余制剂。使用无水丙二醇，因为fol-005在丙二醇中的溶解度是有限的(在室温在丙二醇中为0.16mg/ml)，并且它不以与非极性溶剂相同的方式与皮脂相互作用。
[0738]
离体实验设计
[0739]
以下述方式进行体外药物渗透实验：使用9格frans格设备(crown glass company,inc.)，并且格的体积为约7ml。将全厚度皮肤膜用于48小时实验时间，并在实验结束时取样。在franz格中的温度为32℃。在0和24h进行两次施用。在每次施用时，应用100mg制剂并使用玻璃棒轻轻按摩组织3分钟。在实验结束时，保存皮肤样品用于分析。在表12a和12b中给出了用于离体药物渗透实验中的制剂的组成。
[0740]
表13a.离体药物渗透实验编号1的实验设计.
[0741][0742]
表13b.离体药物渗透实验编号2的实验设计.
[0743][0744]
在实验结束时，使用顶部和液体清洁皮肤膜。将每个格用丙二醇洗涤5次。将回收的材料收集在管形瓶中。从设备中取出膜并快速冷冻。
[0745]
maldi质谱成像(msi)
[0746]
使用maldi质谱成像分析来自离体实验的样品。开发了一种分析方法，并研究了fol-005含量及其在皮肤中的分布。
[0747]
进行了通过maldi fticr ms成像对处理过的猪内耳皮肤样品中fol-005的检测的评估和优化。评价了四种不同的maldi基质(2,5-二羟基苯甲酸、α-氰基-4-羟基肉桂酸、9-氨基吖啶和1,5-二氨基萘)，并对最佳基质进行了溶剂优化。
[0748]
通过使用开发的maldi-fticr评价冷冻处理的皮肤样品(每种处理过的皮肤样品n
＝1)和安慰剂样品(每种安慰剂皮肤样品n＝1)，对猪内耳皮肤活组织检查样品进行质谱成像分析。简而言之，将冷冻的皮肤样品在毛囊平面中切片，并将每个样品的一个切片通过7t-maldi-fticr成像进行分析以确定fol-005的生物分布。将相邻切片用苏木精和曙红染色，并结合fol-005的分子分布来确认化合物的具体定位。基于生成的maldi图像，通过定量质谱成像(qmsi)计算每个组织学区域的化合物浓度。
[0749]
结果
[0750]
应用的制剂的分析
[0751]
对应用的制剂进行分析，并通过高压液相色谱法(rp-hplc)和紫外检测(uv)进行分析。在220nm监测化合物。将未鉴定的相关物质定量为％相对面积。fol-005盐(钠)用作外标准品。
[0752]
实验编号1
[0753]
发现fol-005含量在ism17209中为1.33％(w/w)，且在ism17216中为1.13％(w/w)。相关物质的总和在ism17209和ism17216中分别为3.30％和3.39％。两种制剂的测量粒径大致相同，其中fol-005/钠和fol-005/蔗糖颗粒的平均尺寸分别为7.2μm和8.4μm。
[0754]
实验编号2
[0755]
发现fol-005含量在ism18097中为1.35％(w/w)，且在ism18098中为0.47％(w/w)。相关物质的总和在ism18097和ism18098中分别为1.65％和1.87％。两种制剂的测量粒径大致相同，其中fol-005/钠和fol-005/蔗糖颗粒的平均尺寸分别为7.2μm和8.4μm。
[0756]
离体实验
[0757]
优选的maldi基质是dhb 40mg/ml甲醇/水和0.1％tfa(v/v)。在处理过的皮肤切片中fol-005的检测也得到证实，而没有检测到来自对照组织的干扰峰。
[0758]
实验编号1
[0759]
在用fol-005/蔗糖悬浮液和fol-005/na悬浮液处理的样品的表皮和真皮中均检测到fol-005。此外，在处理过的皮肤的毛囊中检测到fol-005。
[0760]
在每种处理过的皮肤中检测到fol-005，而在安慰剂处理过的样品中没有观察到信号。fol-005主要在表皮中检测到，其中fol-005存在从表皮到真皮的递减梯度。这指示，在该实验中fol-005通过经表皮运输途径进行运输。但是，对于一些具有比周围的真皮更大信号强度的毛囊，也可以观察到经毛囊渗透的一些迹象。在fol-005/蔗糖和fol-005/na处理的样品中均观察到分子分布和定量之间的强烈异质性。将fol-005在每种组织中的渗透深度计算为与检测到fol-005的表面的最大距离。
[0761]
此外，将在组织中的fol-005的浓度登记为表皮浓度、真皮浓度和总浓度。在表14中显示了fol-005的渗透深度和在组织中的浓度。尽管存在异质性和大变异性，但与fol-005/na处理过的皮肤(35.7
±
24.1μg/g)相比，在fol-005/蔗糖处理过的皮肤(71.4
±
34.4μg/g)中可以看到略大的fol-005积累。但是，在fol-005/蔗糖悬浮液和fol-005/na悬浮液之间没有检测到渗透深度的差异。
[0762]
表14.处理过的皮肤样品中的fol-005的定量.
[0763][0764]
测定了毛囊中fol-005的定量，并将结果呈现在表15中。与用fol-005/na悬浮液处理的皮肤样品(21％)相比，用fol-005/蔗糖悬浮液处理的皮肤样品具有更大的呈现fol-005的毛囊的百分比(56％)。看起来在用蔗糖悬浮液处理的皮肤活检组织中呈现fol-005检测的毛囊的深度(0.48
±
0.46mm)大于在用na盐悬浮液处理的皮肤活检组织中(0.15
±
0.16mm)。
[0765]
表15.在毛囊中的fol-005的定量.
[0766][0767]
*“nd”值被认为平均浓度计算为“0”[0768]
结果指示，与fol-005/蔗糖颗粒制剂相比，fol-005/蔗糖颗粒制剂具有优异的渗透特性。观察到的差异可能是颗粒组成差异的影响，其中应用的制剂之一包含具有fol-005和蔗糖的颗粒，而另一种制剂中的颗粒仅包含fol-005。两种制剂的测量粒径大致相同，其中fol-005/钠和fol-005/蔗糖颗粒的平均尺寸分别为7.2μm和8.4μm。但是，在制剂之间存在可能具有影响的其它差异。脱水山梨糖醇月桂酸酯的量在制剂之间是不同的，其中具有fol-005/蔗糖颗粒的制剂含有4％脱水山梨糖醇月桂酸酯，且具有fol-005/钠颗粒的制剂含有2％脱水山梨糖醇月桂酸酯。
[0769]
实验编号2
[0770]
在用制剂18098处理的组织的表皮和/或深层真皮中微弱地且不均匀地检测到fol-005。在用制剂18097处理的猪耳朵样品中观察到更强烈的检测，其中在表皮和深层真
皮中具有相似的分布。此外，观察到从表皮到真皮的被动扩散。在约530μm定量了真皮渗透(高生物学变异性计算为51.3％)。
[0771]
在一些组织中特别突出了跨毛囊通路。在这些组织中，fol-005的总体浓度被定量为144.0μg/g组织，其中低生物学变异性计算为8.1％。
[0772][0773][0774]
bloq定量下限＝53.7μg/g
[0775]
在图4中，关于用fol-005/蔗糖制剂处理的组织样品可以看到苏木精和曙红相邻切片之间的叠加和fol-005分子分布。
[0776]
结论
[0777]
实验编号1
[0778]
fol-005被成功地运输进组织中。在用fol-005/蔗糖颗粒处理的组织和用fol-005/钠颗粒处理的组织之间检测到差异。与用fol-005/钠颗粒处理的组织相比，fol-005在用fol-005/蔗糖处理的组织中的积累更大。对于用fol-005/蔗糖和fol-005/钠颗粒处理的组织，皮肤中fol-005的平均真皮浓度分别为71.4
±
34.4μg/g和35.7
±
24.1μg/g。在所有处理过的组织的毛囊中都发现了fol005。与用fol-005/钠颗粒处理的组织(21％)相比，在用fol-005/蔗糖颗粒处理的组织中，发现在组织中更大比例的毛囊含有fol-005(56％)。类似地，与用fol-005/钠颗粒处理的组织(0.15
±
0.16mm)相比，在用fol-005/蔗糖颗粒处理的组织中呈现fol-005的毛囊的平均深度更大(0.48
±
0.46mm)。结果指示，与fol-005/钠颗粒相比，fol-005/蔗糖颗粒可具有优异的渗透特性。
[0779]
实验编号2
[0780]
fol-005被成功运输到组织中。在用fol-005/蔗糖制剂处理的组织和用fol-005/蔗糖悬浮液处理的组织之间检测到差异。与用fol-005/蔗糖制剂处理的组织相比，在用fol-005/蔗糖悬浮液处理的组织中fol-005的积累更大。这至少部分地通过与悬浮液相比
制剂中的fol-005浓度较低来解释。
[0781]
观察到从表皮到真皮的被动扩散。在一些组织中特别突出了跨毛囊通路。
[0782]
数据显示在图4中。
[0783]
实施例6.体内测试
[0784]
进行本研究以通过局部施用途径评价fol-005在c57bl/6小鼠模型中的毛发生长促进效力。使用处于毛发生长周期的稳定生长终期阶段(静止期)的雄性c57bl/6小鼠。剪掉动物背上的毛，并用fol-005局部制剂、安慰剂制剂或商购可得的米诺地尔5％处理该区域。
[0785]
材料和方法
[0786]
通过在各个组中的动物的背部剃毛皮肤上应用50μl/cm2，将fol-005的三种制剂(高剂量-0.5％、中剂量-0.05％和低剂量-0.005％)与安慰剂一起针对毛发生长促进效力进行筛选。施用方案是共4周(5天/周)，随后是1周的观察期。在研究期间，观察所有动物从粉红色皮肤(生长终期)到黑色皮肤(生长初期)的皮肤颜色变化以及新毛发重新生长的外观。观察期结束后，观察到fol-005制剂以剂量响应方式导致毛发生长促进效力。在高剂量(3/7动物)中观察到更快的生长初期诱导，其次是中剂量(2/7动物)和低剂量(1/7动物)。在高剂量(3/7动物)和中剂量(1/7动物)中观察到毛发生长。在低剂量的制剂中没有观察到毛发生长。在高、中和低剂量，分别在3/7动物、2/7动物和1/7动物的剥离皮肤中也观察到肉眼可见的黑色素生成。
[0787]
将米诺地尔溶液(5％)用作对照并局部施用(50μl/cm2)在小鼠的背部剃毛皮肤上。施用方案是每天施用两次，共4周，然后是1周的观察期。在该组中的4/5动物中观察到生长初期诱导，随后是毛发生长。在4/5动物的剥离皮肤中也观察到肉眼可见的黑色素生成。
[0788]
结论
[0789]
fol-005的所有三种局部制剂(高剂量、中剂量和低剂量)均以剂量依赖性的方式表现出毛发生长促进效力，其中高剂量(0.5％)具有最高的毛发生长促进效力，其次是中剂量(0.05％)，且然后是低剂量(0.005％)。
[0790]
数据显示在图5中。
[0791]
实施例7.制备方法
[0792]
简而言之，制备过程如下所述：
[0793]
将fol-005钠盐与蔗糖一起冷冻干燥。将冷冻干燥的颗粒与干燥的肉豆蔻酸异丙酯和脱水山梨糖醇月桂酸酯混合，且然后进行球磨步骤。
[0794]
在环境温度将三种赋形剂(脱水山梨糖醇月桂酸酯、山嵛酸甘油酯、矿脂)加入到反应器中。反应器装有搅拌器。在室温混合赋形剂直到形成均匀的粘稠凝胶。然后在搅拌下将反应器加热至75℃，且然后冷却至室温。此后将球磨的fol-005/蔗糖-肉豆蔻酸异丙酯悬浮液加入反应器中，并搅拌混合物直至获得均匀混合物。
[0795]
实施例8.包含肽的组合物
[0796]
在该研究中，制备了包含许多代表性肽(见表16)的组合物。此外，将组合物在20℃储存4周以研究组合物中肽的稳定性。
[0797]
表16.肽.
[0798][0799]
制备
[0800]
根据标准低压冻干方法，将每种肽与蔗糖一起以w/w比率2:1(蔗糖/肽)低压冻干。将span20与ipm混合以获得4％(w/w)均匀溶液。
[0801]
将肽-蔗糖加入到span20-ipm混合物中以获得肽含量为0.4％的悬浮液。使用标准化的珠子湿磨方法，将肽-蔗糖颗粒在span20-ipm悬浮液中微粉化。
[0802]
通过混合89.5％矿脂、4.2％span20和6.3％山嵛酸甘油酯(w/w％)来生产软膏基质。在搅拌期间将混合物加热至75℃。继续搅拌直至山嵛酸甘油酯溶解。然后在温和搅拌下将软膏基质冷却至室温。
[0803]
当软膏基质已冷却至室温时，将软膏基质加入单独的肽悬浮液中以获得肽浓度为0.2％的软膏剂。将混合物在环境温度搅拌2小时。在表17中给出了总组成。
[0804]
表17.总组成.
[0805][0806][0807]
稳定性研究
[0808]
将单独制剂的样品在20℃储存。此外，分别制备缩宫素和fol-004的pbs溶液样品，并在20℃储存。
[0809]
当新鲜制备样品时(时间0)和在1、2和4周以后，使用标准hplc-uv-da方法进行软膏剂和pbs溶液中的肽纯度分析。数据显示在图6中。
[0810]
序列
[0811]
[0812]
[0813]
[0814]
[0815]
[0816]
[0817]
[0818]
[0819]