新型冠状病毒中和抗体类药物中和能力的检测方法与流程

技术特征：
1.一种检测样品中和新型冠状病毒能力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将标记物连接的新型冠状病毒刺突蛋白胞外结构域、样品与ace2过表达的细胞系接触孵育；(2)获得步骤(1)孵育后的细胞，并将所述细胞与检测物质接触孵育，所述检测物质能与所述标记物反应产生检测信号；(3)通过检测步骤(2)产生的信号强弱确定所述样品中和新型冠状病毒的能力。2.根据权利要求1所述的方法，所述新型冠状病毒刺突蛋白胞外结构域包含与seq id no：1或4所示氨基酸序列至少80％一致性的序列。3.根据权利要求1或2所述的方法，所述步骤(1)中加入的新型冠状病毒刺突蛋白胞外结构域浓度为0.8-3.2μg/ml，优选为1.2-2.0μg/ml。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，所述步骤(1)中的标记物选自his标签、flag标签、c-myc标签、ha标签、v5标签、hsv标签和生物素中的一种或多种，优选为his标签。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，所述步骤(1)中ace2过表达的细胞系选自hek293、hela、vero e6或cho，优选为ace2过表达的hela细胞。6.根据权利要求5所述方法，加入的所述ace2过表达的细胞系细胞浓度为4
ⅹ
10
5-1
ⅹ
106个细胞/ml，优选为5
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105个细胞/ml。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，所述步骤(1)中接触培养包括在18℃-37℃下孵育0.5-3小时，优选为室温下孵育1-2小时。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，所述步骤(2)中获得步骤(1)孵育后的细胞包括移除培养物上清和洗涤细胞步骤。9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，所述步骤(2)中检测物质选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或吖啶化合物连接的抗标记物抗体。10.根据权利要求9所述的方法，所述标记物包含his标签，所述检测物质包含辣根过氧化物酶连接的抗his标签抗体。11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，所述步骤(2)中接触孵育包括在18℃-37℃下孵育0.5-1.5小时，优选为室温下孵育1小时。12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，所述步骤(3)检测信号步骤包括移除步骤(2)孵育后细胞的上清，洗涤细胞，加入显色工作液孵育，再加入显色终止液，读取信号值。13.根据权利要求12所述的方法，所述显色工作液包括tmb过氧化物酶底物和过氧化物酶底物溶液b，所述显色终止液包括磷酸溶液。14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，所述样品为抗新型冠状病毒抗体类药物。15.一种检测样品中和新型冠状病毒能力的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括标记物连接的新型冠状病毒刺突蛋白胞外结构域、ace2过表达的细胞系以及能与所述标记物反应产生信号的检测物质，其中，所述ace2过表达的细胞系为贴壁细胞系。16.根据权利要求15所述的方法，所述新型冠状病毒刺突蛋白胞外结构域包括与seq id no：1或4所示氨基酸序列至少80％一致性的序列。17.根据权利要求15-16中任一项所述的检测试剂盒，所述标记物包含his标签，所述检测物质包含辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或吖啶化合物连接的抗his标签抗体。18.根据权利要求15-17中任一项所述的检测试剂盒，所述ace2过表达的细胞系选自
hek293、hela、vero e6或cho，优选为ace2过表达的hela细胞。19.根据权利要求18所述的检测试剂盒，所述ace2过表达的细胞系的细胞浓度为4
ⅹ
10
5-1
ⅹ
106个细胞/ml，优选为5
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105个细胞/ml。20.根据权利要求15-19任一项所述的检测试剂盒，所述固相支持物为微孔板、微孔管、磁颗粒、微珠或塑料珠。

技术总结
本发明属于生物技术领域，具体涉及新型冠状病毒中和抗体类药物中和能力的检测方法。本发明提供了一种检测样品中和新型冠状病毒能力的方法，运用新型冠状病毒S蛋白ECD和样品混合物与过表达人ACE2的HeLa细胞系进行Cell-based ELISA实验，最大限度地还原生理条件下新型冠状病毒与宿主细胞膜表面受体结合，更能准确反映所述样品中和新型冠状病毒结合受体的生物学活性，避免了使用病毒，大大增加了实验的安全性，减少实验复杂度和周期；该方法还能够通过严格控制检测方法实施过程中的各种变量，对结果进行定量分析，保证抗体类药物中和能力评估结果的稳定性。和能力评估结果的稳定性。


技术研发人员：王立豪 贾文双 魏照阳 郭剑鹏
受保护的技术使用者：南京蓬勃生物科技有限公司
技术研发日：2021.07.16
技术公布日：2022/1/18