一种改善癌因性疲乏引起的气滞血瘀体质的中药组合物的制作方法

1.本发明属于中药技术领域，具体涉及一种改善癌因性疲乏引起的气滞血瘀体质的中药组合物。


背景技术：

2.癌因性疲乏(cancer related fatigue,crf)是影响肿瘤患者生活质量的重要因素之一。美国国立肿瘤综合网络(na
‑
tional comprehensive cancer network，nccn)在2018年“癌因性疲乏指南”中将其定义为：一种痛苦的、持续的、主观的、有关躯体、情感或认知方面的疲乏感或疲惫感，与近期的活动量不符，与癌症或癌症的治疗有关，并且妨碍日常生活。大部分流行病学调查显示crf发生率高于60％，部分研究报道可高达90％。crf的发生与肿瘤本身、肿瘤相关治疗以及患者身体状况密切相关。西医目前虽有治疗crf的相关研究，但尚无特效药物，且治疗不良反应明显。crf的发生与癌症本身及癌症治疗有着不可忽视的联系，任何癌症在其发生发展及治疗过程中均可发生疲乏，它具有发生较快、程度较重、持续时间较长、难以通过休息缓解、不可预知等特点。根据crf的特点，中医学可将其归属于“虚劳”范畴，目前未有研究表明有合适的中医药对于治疗crf具有明显的疗效。


技术实现要素：

3.本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种有效改善癌因性疲乏引起的气滞血瘀体质的中药组合物。
4.本发明另一目的是提供上述有效改善癌因性疲乏引起的气滞血瘀体质的中药组合物的制备方法。
5.该组合物为纯中药制剂，具有固本扶正、养阴益气之功效。其处方主要包括破壁的灵芝孢子与女贞子，灵芝孢子是灵芝在发育成熟后形成的生殖细胞，性味甘平，能养精益气，可治疗虚劳；女贞子能够养神补中，将两药合用能够增强固本扶正、养阴益气的效果，具有协同增效的作用，有效改善患者机体的整体状况及提高免疫功能，且无不良反应。
6.本发明的目的是通过以下方式实现的：
7.一种改善癌因性疲乏引起的气滞血瘀体质的中药组合物，该中药组合物包括破壁灵芝孢子粉和女贞子，两者重量之比为1
‑
2：5
‑
8。
8.优选上述该中药组合物包括破壁灵芝孢子粉和女贞子，两者重量之比为2：5。
9.上述中药组合物与药学可接受的辅料制成制剂。优选所述的制剂为胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂。
10.上述改善癌因性疲乏引起的气滞血瘀体质的中药组合物的制备方法包括以下步骤：
11.(1)醇提：将女贞子加8倍重量的70％浓度乙醇，回流提取2次，每次1小时，合并回流液，静置12小时以上，滤过，减压回收乙醇，真空浓缩至60℃条件下相对密度1.25
‑
1.30的清膏；
12.(2)水提：取步骤(1)得到的女贞子醇提药渣加10倍重量水提取3次，每次2小时，合并水提液，静置12小时以上，滤过，真空浓缩至60℃条件下相对密度1.25
‑
1.30的清膏。
13.(3)混合干燥：将女贞子醇提和水提清膏合并加入破壁后的灵芝孢子粉混合均匀，干燥。
14.通过上述条件，醇提提取其中的齐墩果酸、熊果酸等功效成分后再通过水提充分提取其中的多糖类功效成分。
15.优选上述干燥温度≤80℃。
16.本发明中药组合物在制备用于改善癌因性疲乏引起的气滞血瘀体质的药物具有显著的效果。
17.与现有技术比较本发明的有益效果：
18.目前对于癌因性疲乏治疗的药物治疗包括：纠正贫血、生长因子、兴奋剂、抗抑郁药、糖皮质激素等，然而这类药物的副作用很大，常规使用受到限制。
19.本发明的中药组合物为固本扶正、养阴益气的中药组合物，对人体无副作用，治疗效果显著，对治疗癌因性疲乏的患者均具有良好的药效，且效果显著优于单独使用破壁灵芝孢子粉。
附图说明
20.图1为各组小鼠全血黏度变化图。
21.图2为各组小鼠血清纤维蛋白变化图；
22.图3为各组小鼠血清多巴胺变化图；
23.图4为各组小鼠血清去甲肾上腺素变化图；
24.图5为各组小鼠血清d
‑
二聚体变化图；
25.图6为各组小鼠血清5
‑
羟色胺变化图；
26.图7为各组小鼠瘤重变化图。
具体实施方式
27.以下通过具体实施例对本发明进行进一步解释说明：
28.实施例1
29.处方：破壁灵芝孢子粉150g，女贞子375g
30.1、净制：
31.取灵芝孢子粉、女贞子捡去杂质。
32.2、灭菌：
33.取灵芝孢子粉按1：0.2重量比例加入75％乙醇混合均匀，置容器内密闭12小时，取出自然挥干乙醇，≤60℃干燥。
34.3、破壁粉碎：
35.取灵芝孢子粉置于“贝利”细胞破壁微粉机(bfm
‑
100a型)进行破壁粉碎，装量2kg，每次30分钟。
36.4、醇提：
37.取女贞子375g，加70％乙醇8倍量，回流提取2次，每次1小时，合并回流液，静置12
小时以上，滤过，减压回收乙醇，真空浓缩至相对密度1.25
‑
1.30(60℃)的清膏。
38.5、水提：
39.取女贞子醇提药渣加10倍量水提取3次，每次2小时，合并水提液，静置12小时以上，滤过，真空浓缩至相对密度1.25
‑
1.30(60℃)的清膏。
40.6、混合干燥：
41.将女贞子醇提和水提清膏合并加入破壁后的灵芝孢子粉150g混合均匀，置真空干燥箱中≤80℃干燥。
42.7、粉碎、制粒：
43.取干膏粉碎，过80目筛得细粉，加入微晶纤维素适量混合均匀，以无水乙醇为润湿剂制软材，30目筛制粒，于≤60℃干燥，30目筛整粒，加入5％交联聚维酮和2％二氧化硅混合均匀。
44.8、胶囊填充：
45.灌装于1号胶囊中，每粒0.28克。制得1000粒。
46.实施例2
47.处方：破壁灵芝孢子粉100g，女贞子375g，
48.1、净制：
49.取灵芝孢子粉、女贞子捡去杂质。
50.2、灭菌：
51.取灵芝孢子粉按1：0.2比例加入75％乙醇混合均匀，置容器内密闭12小时，取出自然挥干乙醇，≤60℃干燥。
52.3、破壁粉碎：
53.取灵芝孢子粉置于“贝利”细胞破壁微粉机(bfm
‑
100a型)进行破壁粉碎，装量2kg，每次30分钟。
54.4、醇提：
55.取女贞子375g加70％乙醇6倍量，回流提取3次，每次1小时，合并回流液，静置12小时以上，滤过，减压回收乙醇，真空浓缩至相对密度1.25
‑
1.30(60℃)的清膏。
56.5、水提：
57.取女贞子醇提药渣加8倍量水提取2次，每次1小时，合并水提液，静置12小时以上，滤过，真空浓缩至相对密度1.25
‑
1.30(60℃)的清膏。
58.6、混合干燥：
59.将女贞子醇提和水提清膏合并加入破壁后的灵芝孢子粉100g混合均匀，置真空干燥箱中≤80℃干燥。
60.再加入片剂常用辅料，制成1000片。
61.试验例1
62.实验过程
63.一、实验材料
64.1.实验药物
65.受试药物：实施例1胶囊内容物样品，简称复方灵芝孢子粉。
66.配制方法：复方灵芝孢子粉高剂量为0.85g/kg*日，中剂量为0.65g/kg*日，低剂量
为0.43g/kg*日，破壁灵芝孢子粉组0.65g/kg*日。
67.分别精密称取442mg、338mg及224mg复方灵芝孢子粉，破壁灵芝孢子粉组338mg，并加入5.2ml0.5％浓度的cmc
‑
na，充分涡旋溶解，每日灌胃给药，给药体积0.2ml。
68.2.实验试剂
69.小鼠纤维蛋白原(fib)elisa试剂盒：江苏酶标生物科技有限公司出品，货号：mb
‑
5928a
70.小鼠多巴胺(da)elisa试剂盒：江苏酶标生物科技有限公司出品，货号：mb
‑
3092a
71.小鼠去甲肾上腺素(na)elisa试剂盒：江苏酶标生物科技有限公司出品，货号：mb
‑
3269ad
‑
72.二聚体检测试剂盒：南京建成生物工程研究所出品，货号：h416
‑1‑
45
73.羟色胺(5
‑
ht)检测试剂盒：南京建成生物工程研究所出品，货号：h104
‑1‑274.3.实验细胞
75.小鼠lewis肺癌细胞来源于atcc。细胞培养于含10％胎牛血清的dmem培养基。培养于37℃含5％co2的恒温培养箱。
76.4.实验动物
77.品系及级别：spf级c57bl/6小鼠
78.生产厂家：斯贝福(北京)生物技术有限公司
79.许可证号：scxk(京)2019
‑
0010
80.周龄：5
‑
6周
81.性别：雌
82.饲料：小鼠维持饲料，南京市江宁区青龙山动物繁殖场出品
83.饲养条件：空调房间，温度18
‑
24℃，相对湿度70％
84.5.实验仪器
85.血液黏度测试仪：北京中勤世帝科学仪器有限公司，型号：lg
‑
r
‑
80
86.酶标仪：molecular devices,inc
87.二、实验方法
88.1.实验分组
[0089][0090][0091]
2.实验方法
[0092]
气滞血瘀体质造模：每天上午10:00进行小鼠颈背部皮下注射0.1％盐酸肾上腺素(0.08mg/kg)，持续一周，同时用绷带细条束缚小鼠四肢，并加笼外木棒敲击5分钟，持续1周。对照组喂以普通饲料，自由饮水，注射相同剂量的生理盐水。造模结束后第二天，将对数生长期的鼠源肺癌lewis细胞收集成1
×
107/ml细胞悬液，小鼠腋窝皮下接种，0.2ml/只，接种后第5天，将动物分为8组并开始给药：空白对照组、气滞血瘀模型组、lewis肺癌组、气滞血瘀 lewis肺癌组、灵芝粉(高中低) 气滞血瘀 lewis肺癌组、破壁灵芝孢子粉组 气滞血瘀 lewis肺癌组。每天给药一次，连续给药15天。实验结束处死动物，取瘤，称重，每组5只小鼠取全血，使用血液黏度测试仪检测血液黏度；另外5只小鼠取全血，分离血清使用elisa试剂盒检测血清纤维蛋白原，多巴胺，去甲肾上腺素，d
‑
二聚体，5
‑
羟色胺的浓度。
[0093]
3.检测指标
[0094]
3.1动物日常生活情况：造模结束后，观察小鼠的精神、活动、毛发、大便等日常生
活情况，并进行记录。
[0095]
3.2动物体重：分别记录小鼠初始体重，给药第1天、第5天、第10天及第15天体重。
[0096]
3.3血液流变学检测：每组5只动物在实验结束后进行摘眼球取血，装入一次性使用负压采血容器中(含edta
‑
k2)。随后将小鼠处死。
[0097]
3.4血清纤维蛋白原，多巴胺，去甲肾上腺素，d
‑
二聚体，5
‑
羟色胺浓度检测：每组5只动物在实验结束后进行摘眼球取血，装入普通1.5ml tube管中，常温3000rpm，离心10min，收集上层的血清，使用相应的elisa试剂盒进行浓度检测。
[0098]
3.5瘤重和抑瘤率：分别记录各组瘤重，与气滞血瘀 lewis肺癌组进行比较，计算抑瘤率。抑瘤率计算公式：抑瘤率(％)＝100
‑
(给药组平均瘤重/气滞血瘀 lewis肺癌组平均瘤重)*100％。
[0099]
4.实验结果
[0100]
1)造模结束后动物日常生活情况
[0101]
气滞血瘀体质造模结束时，各组小鼠均未开始给药。与空白对照组相比，造模组小鼠均出现精神倦怠，反应迟钝，活动减少，易激怒，毛发无光，口周，耳缘及肛周出现不同程度的脉络瘀血，饮食饮水量减少，体形消瘦。按照轻重程度1
‑
5打分，结果如表1。
[0102]
表1造模后动物情况汇总表(n＝10,data＝mean
±
sd)
[0103]
[0104]
与空白对照组相比，
#
p<0.05，
##
p<0.01
[0105]
2)各组动物体重变化
[0106]
气滞血瘀体质造模结束后，与空白对照组相比，造模组的各组小鼠的体重均明显降低(
#
p<0.05)。复方灵芝孢子粉以高、中、低剂量，破壁灵芝孢子粉组灌胃给药后第5天，与气滞血瘀 lewis组比，小鼠各组体重均无明显变化，不具有统计学意义。给药第10天，与气滞血瘀 lewis组比，复方灵芝孢子粉高、中剂量组小鼠体重显著增高(
*
p<0.05)，复方灵芝孢子粉低剂量组、破壁灵芝孢子粉组小鼠体重无明显变化。给药第15天，复方灵芝孢子粉高、中剂量组，破壁灵芝孢子粉组小鼠体重显著增高(
*
p<0.05)，复方灵芝孢子粉低剂量组，体重无明显变化，不具有统计学意义。体重变化结果如表2所示。
[0107]
表2.各组小鼠体重变化(n＝10,data＝mean
±
sd)
[0108][0109][0110]
注：与气滞血瘀 lewis肺癌组相比，*p<0.05，**p<0.01；与空白对照组相比，
#
p<0.05，
##
p<0.01
[0111]
3)血液流变学指标变化
[0112]
与空白对照组相比，气滞血瘀模型组和lewis肺癌组以及气滞血瘀 lewis肺癌组
血液黏度极显著增高(
##
p<0.01)，说明造模成功；给药组，与气滞血瘀 lewis组比，复方灵芝孢子粉高剂量组，全血黏度极显著降低(
**
p<0.01)，复方灵芝孢子粉中剂量组全血黏度显著降低(
*
p<0.05)，复方灵芝孢子粉低剂量组，破壁灵芝孢子粉无明显差异。全血黏度变化结果如表3和图1所示。
[0113]
表3.各组小鼠全血黏度变化(n＝5,data＝mean
±
sd)
[0114][0115]
注：与气滞血瘀 lewis肺癌组相比，*p<0.05，**p<0.01；与空白对照组相比，
#
p<0.05，
##
p<0.01。
[0116]
4)血清中纤维蛋白原(fib)、多巴胺(da)、去甲肾上腺素(na)、d
‑
二聚体(d
‑
dimer)、5
‑
羟色胺(5
‑
ht)等指标变化。
[0117]
分离血清，检测血清纤维蛋白原，多巴胺，去甲肾上腺素素，d
‑
二聚体，5
‑
羟色胺测定结果如表4和图2
‑
图6所示：
[0118]
a.与气滞血瘀 lewis组比，复方灵芝孢子粉高、中、低剂量，破壁灵芝孢子粉组血清纤维蛋白原的浓度极显著降低(**p<0.01)。
[0119]
b.与气滞血瘀 lewis组比，复方灵芝孢子粉高、中、低剂量组血清多巴胺的浓度极显著降低(**p<0.01)，破壁灵芝孢子粉组无明显差异。
[0120]
c.与气滞血瘀 lewis组比，复方灵芝孢子粉高、中、低剂量组去血清甲肾上腺素的浓度极显著降低(**p<0.01)，破壁灵芝孢子粉组无明显差异。
[0121]
d.与气滞血瘀 lewis组比，复方灵芝孢子粉高剂量、破壁灵芝孢子粉组血清d
‑
二聚体的浓度显著降低(*p<0.05)，复方灵芝孢子粉中剂量血清d
‑
二聚体的浓度极显著降低(**p<0.01)，复方灵芝孢子粉低剂量组无明显差异。
[0122]
e.与气滞血瘀 lewis组比，复方灵芝孢子粉高剂量组血清5
‑
羟色胺的浓度显著增高(*p<0.05)，复方灵芝孢子粉中、低剂量组，破壁灵芝孢子粉组血清5
‑
羟色胺均无明显差异。
[0123]
f.本发明组合物与单组分效果比较有协同增效的作用。
[0124]
表4.血清纤维蛋白原，多巴胺，去甲肾上腺素，d
‑
二聚体，5
‑
羟色胺变化(n＝5,data＝mean
±
sd)
[0125]
[0126][0127]
注：与气滞血瘀 lewis肺癌组相比，*p<0.05，**p<0.01；与空白对照组相比，
#
p<0.05，
##
p<0.01。
[0128]
5)瘤重和抑瘤率
[0129]
与气滞血瘀 lewis组比，复方灵芝孢子粉高剂量的抑瘤率为43.83％，复方灵芝孢子粉中剂量的抑瘤率为20.55％，复方灵芝孢子粉低剂量的抑瘤率为6.94％，破壁灵芝孢子粉组抑瘤率为7.07％。瘤重和抑瘤率如表4和图7所示。
[0130]
表4.各组小鼠瘤重和抑瘤率变化(n＝10,data＝mean
±
sd)
[0131][0132]
注：与气滞血瘀 lewis肺癌组相比，*p<0.05
[0133]
5.实验结论
[0134]
本实验气滞血瘀体质造模成功；给药15天后，复方灵芝孢子粉对气滞血瘀体质的荷lewis肿瘤小鼠各指标具有较好的改善作用，其中高，中剂量组较为明显破壁灵芝孢子粉组别。说明本发明组方在对改善癌因性疲乏引起的气滞血瘀体质比单独使用破壁灵芝孢子粉有明显作用。