一种治疗肝病中药的快速薄层鉴别方法与流程

1.本发明涉及中药制剂的质量控制方法领域，具体涉及一种治疗肝病中药的快速薄层鉴别方法。


背景技术：

2.中药颗粒剂是以传统中药汤剂发展的现代剂型，是在质量控制技术下通过对中药汤剂进行浓缩、干燥、加上辅料制成的。对其进行质量分析成为控制质量关键技术，薄层色谱法作为重要的鉴别手段，广泛被用于中药材、中药饮片、中药制剂中。
3.治疗肝病中药作为复方制剂，属于新药研发中的第六类治疗肝病中药，具有益气疏肝、活血软坚的功效，其主要由黄芪、三七、柴胡、葛根、赤芍和丹参等组成，具体组成及制法如中国专利申请cn101214288b“一种治疗肝病的中药组合物及其制备方法”所记载。
4.黄芪为豆科植物蒙古黄芪astragelus membranaceus(fisch.)bge.var.mongholicus(bge.)hsiao的干燥根，主要含有黄酮类化合物、皂苷类化合物和多糖等，具有补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌等功效。用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，内热消渴，血虚萎黄，半身不遂，痹痛麻木，痈疽难溃，久溃不敛等。其《中国药典》2015年版一部的薄层鉴别方法是以黄芪甲苷为指标，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)的下层溶液为展开剂，10％硫酸乙醇溶液显色后，日光和紫外光灯下检视斑点。其文献报道复方制剂中黄芪的薄层鉴别也都与药典的方法大同小异，检测的都是黄芪甲苷，目前还未查阅到与三七、柴胡同时鉴别的报道。
5.三七为五加科植物三七panax notoginseng(burk.)f.h.chen的干燥根和根茎，主要含有皂苷类，如人参皂苷(ginsenoside)rb1、rb2、rg1、rc、f2和rg2等，其中尤以人参皂苷rg1和rb1含量最高。除此以外，也有一些是三七所独有的皂苷类成分，如三七皂苷r1，r2，r4等，具散瘀止血，消肿定痛之功效，用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。其《中国药典》2015年版一部的薄层鉴别方法是以人参皂苷rb1、re、rg1和三七皂苷r1为指标，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开后，喷以10％硫酸乙醇溶液显色，日光下检视颜色斑点。但目前还未查阅到与黄芪、柴胡同时鉴别的报道。
6.柴胡为伞形科植物柴胡bupleurum chinense dc.的干燥根，主要活性成分为三萜皂苷类化合物柴胡皂苷，具有疏散退热，疏肝解郁，升举阳气的功效，用于感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子宫脱垂和脱肛。其《中国药典》2015年版一部的薄层鉴别方法是以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d和柴胡对照药材为指标，以乙酸乙酯-乙醇-水(8:2:1)为展开剂，2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液显色后，日光和紫外光灯下检视斑点。但目前还未查阅到与黄芪、三七同时鉴别的报道。
7.葛根为豆科植物野葛pueraria lobata(willd.)ohwi的干燥根，主要含有异黄酮类、三萜类、皂苷类和多糖类等，具有解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络，解酒
毒等功效，用于外感发热头痛，项背强痛，口渴，消渴，麻疹不透，热痢，泄泻，眩晕头痛，中风偏瘫和胸痹心痛。其《中国药典》2015年版一部的薄层鉴别方法是以葛根素和葛根对照药材为指标，以三氯甲烷-甲醇-水(7:2.5:0.25)为展开剂，紫外光灯下检视斑点。但是目前还未查阅到与赤芍、丹参同时鉴别的报道。
8.赤芍为毛莨科植物芍药paeonia lactiflora pall.的干燥根，主要含有萜类及其苷、黄酮类及其苷、挥发油等多种化学成分，具有清热凉血，散瘀止痛等功效，用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，癥瘕腹痛，跌扑损伤和痈肿疮疡。其《中国药典》2015年版一部的薄层鉴别方法是以芍药苷为指标，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂，5％香草醛硫酸溶液显色后，日光下检视斑点。文献报道复方制剂中赤芍的薄层鉴别也都与药典的方法大同小异，但目前还未查阅到与葛根、丹参同时鉴别的报道。
9.丹参为唇形科植物丹参salvia miltiorrhiza bge.的干燥根和根茎，主要含有丹酚酸类和丹参酮类的化学成分，具有活血祛瘀，痛经止痛，清心除烦的功效，用于胸痹心痛，脘腹胁痛，癥瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经经闭和疮疡肿痛。其《中国药典》2015年版一部的薄层鉴别方法是以丹酚酸b、丹参酮iia和丹参对照药材为指标，进行二次展开，即先以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6:4:8:1:4)为展开剂，展开，展至约4cm，取出，晾干，再以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(4:1)为展开剂，日光和紫外光灯下检视斑点。文献报道复方制剂中丹参的薄层鉴别也都与药典的方法大同小异，但目前还未查阅到与葛根、赤芍同时鉴别的报道。
10.由上述可知，黄芪、三七、柴胡、葛根、赤芍及丹参的薄层鉴别方法，不论是药材，还是制剂都是鉴别一味药，薄层鉴别繁琐、费时、成本高且污染环境。目前还未查阅到复方制剂中黄芪、三七和柴胡同时鉴别的薄层鉴别方法以及丹参、葛根和赤芍同时鉴别的薄层鉴别方法。


技术实现要素：

11.鉴于现有技术存在的问题，提出了本发明的一种治疗肝病中药的快速薄层鉴别方法，以便克服上述问题或者至少部分地解决上述问题。
12.为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
13.根据本发明的一个方面，提供一种治疗肝病中药的快速薄层鉴别方法，该方法包括：
14.s1，精密称取供试品，经甲醇处理得第一供试品溶液，经甲醇、水、乙醚、正丁醇、氨试液处理得第二供试品溶液，精密称取第一对照品，加入甲醇得第一对照品溶液；精密称取第二对照品，加入甲醇得第二对照品溶液；精密称取对照药材，经水、乙醚、正丁醇、氨试液处理得对照药材溶液；
15.s2，分别取等量的第一供试品溶液和第一对照品溶液点于第一硅胶薄层板上，选用第一展开剂展开，取出，晾干后，再选用第二展开剂展开；分别取等量的第二供试品溶液、第二对照品溶液与对照药材溶液点于第二硅胶薄层板上，选用第三展开剂展开；
16.s3，用5％香草醛硫酸溶液对第一硅胶薄层板进行显色处理，2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液对第二硅胶薄层板进行显色处理。
17.可选地，所述第一供试品选用治疗肝病中药。
18.可选地，所述第一对照品包括：丹参酮iia、葛根素、芍药苷；所述第二对照品包括：黄芪甲苷、三七皂苷r1、柴胡皂苷a；所述对照药材包括：三七对照药材。
19.可选地，所述第一展开剂为三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液，其中，三氯甲烷、甲醇与水的比例为7:2.5:0.25；
20.所述第二展开剂为甲苯和乙酸乙酯的混合溶液，其中，甲苯与乙酸乙酯的比例为24:1；
21.所述第三展开剂为正丁醇、乙酸乙酯和水的混合溶液，其中，正丁醇、乙酸乙酯和水的比例为4:3:5。
22.可选地，在日光和波长为365nm的紫外光灯下检视第一硅胶薄层板；在日光下和波长为365nm的紫外光灯下检视第二硅胶薄层板。
23.可选地，所述精密称取供试品，经甲醇处理后得第一供试品溶液的具体方法为，精密称取供试品，研细，加甲醇溶解，超声30min，过滤，挥干滤液，再加入甲醇溶解，得第一供试品溶液。
24.可选地，所述精密称取供试品，经甲醇、水、乙醚、正丁醇、氨试液处理得第二供试品溶液的具体方法为，精密称取供试品，研细，加入甲醇溶解，超声30min，过滤，蒸干滤液，加水溶解后，用乙醚萃取3次，弃去乙醚层，水液用饱和正丁醇萃取2次，合并正丁醇层，再用氨试液洗涤3次，弃去氨试液，再用正丁醇饱和水洗涤2次，弃去水液，将正丁醇液蒸干，加甲醇溶解，得第二供试品溶液。
25.可选地，所述精密称取对照药材，经水、乙醚、正丁醇、氨试液处理得对照药材溶液的具体方法为，精密称取对照药材，加水回流30min后，放冷，过滤，滤液用乙醚萃取3次，弃去乙醚层，水液用水饱和正丁醇萃取2次，合并正丁醇层，再用氨试液洗涤3次，弃去氨试液，再用正丁醇饱和水洗涤2次，弃去水液，将正丁醇蒸干，加甲醇溶解，得对照药材溶液。
26.本发明的技术方案是，建立一种治疗肝病中药的快速薄层鉴别方法，根据治疗肝病中药所含成分化学成分的特性，再基于黄芪、葛根、柴胡、赤芍、丹参和三七的薄层鉴定特点，通过选用不同的展开剂及进行多次展开，可将黄芪、柴胡和三七同时进行鉴别，葛根、赤芍和丹参同时进行鉴别，而且葛根，赤芍和丹参的鉴别是甲醇超声直接点样、展开，克服了现有方法中一次只能鉴别一种成分的弊端，且本鉴别方法具有简便、快捷、高效和环保的效果。
附图说明
27.图1为本发明的一个实施例中提供的在日光下检视第一硅胶薄层板的结果的示意图；
28.图2为本发明的一个实施例中提供的在波长为365nm的紫外光灯下检视第一硅胶薄层板的结果的示意图；
29.图3为本发明的一个实施例中提供的在日光下检视第一硅胶薄层板的结果的示意图；
30.图4为本发明的一个实施例中提供的在日光下检视第二硅胶薄层板的结果的示意图；
31.图5为本发明的一个实施例中提供的在波长为365nm的紫外光灯下检视第二硅胶薄层板的结果的示意图。
32.其中，在第一硅胶薄层板上：1.丹参阴性样品；2.丹参酮iia对照品；3.葛根阴性样品；4.葛根素对照品；5.第一供试品溶液；6.芍药苷对照品；7.赤芍阴性样品；在第二硅胶薄层板上：1.柴胡阴性样品；2.柴胡皂苷a对照品；3.三七阴性样品；4.第二供试品溶液；5.三七皂苷r1对照品；6.三七对照药材；7.黄芪甲苷对照品；8.黄芪阴性样品。
具体实施方式
33.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。
34.本发明是建立一种治疗肝病中药的快速薄层鉴别方法，具体说明快速薄层鉴别方法的实施过程。
35.需要说明的是，治疗肝病中药的主要成分包含黄芪、三七、柴胡、葛根、赤芍及丹参等，在《中国药典》2015年版一部的薄层鉴别方法记载，黄芪选用黄芪甲苷为指标，三七选用三七皂苷r1为指标，柴胡选用柴胡皂苷a为指标，丹参选用丹参酮iia为指标，葛根选用葛根素为指标，赤芍选用芍药苷为指标，所以，在具体实施例中，选用丹参酮iia对照品来鉴别治疗肝病中药中含有的丹参成分，选用葛根素对照品来鉴别治疗肝病中药中含有的葛根成分，选用芍药苷对照品来鉴别治疗肝病中药中含有的赤芍成分；选用黄芪甲苷对照品来鉴别治疗肝病中药中含有的黄芪成分，选用三七皂苷r1对照品来鉴别治疗肝病中药中含有的三七成分，选用柴胡皂苷a对照品来鉴别治疗肝病中药中含有的柴胡成分。
36.实施例
37.一种治疗肝病中药的快速薄层鉴别方法，该方法包括：
38.1)精密称取治疗肝病中药3g，研细，加甲醇10ml，超声处理30min，过滤，40℃蒸干滤液后，再加入甲醇1ml溶解，得第一供试品溶液，精密称取丹参酮iia对照品、葛根素对照品和芍药苷对照品，分别加甲醇1ml制得1mg/ml的第一对照品溶液；
39.分别量取2μl第一供试品溶液，2μl第一对照品溶液点于第一硅胶薄层板上，使呈条带状，用比例为7:2.5:0.25的三氯甲烷、甲醇和水组成的第一展开剂展开约5cm，取出，晾干后，再用比例为24:1的甲苯和乙酸乙酯组成第二展开剂展开约8cm，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，置105℃下加热至斑点显色清晰，分别置于日光和波长为365nm的紫外光灯下检视。检视结果如下，图1为在日光下检视的第一硅胶薄层板的结果示意图，图2为在波长为365nm的紫外光灯下检视的第一硅胶薄层板的结果示意图，图3为在日光下检视的第一硅胶薄层板的结果示意图，由图1可知，在第一硅胶薄层板的第一供试品处可见丹参斑点，由图2可知，在第一硅胶薄层板的第一供试品处可见葛根斑点，由图3可知，在第一硅胶薄层板的第一供试品处可见赤芍斑点，综上所述，因第一供试品为治疗肝病中药，通过实施例中的鉴别方法，可将治疗肝病中药中含有的丹参、葛根和赤芍同时鉴别出来。
40.2)精密称取治疗肝病中药3g，研细，加甲醇25ml，超声处理30min，过滤，蒸干滤液后，残渣加入25ml水溶解，用乙醚萃取3次，每次25ml，弃去乙醚层，水层用水饱和正丁醇萃取2次，每次25ml，合并正丁醇层，再用氨试液洗涤3次，每次25ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，将正丁醇液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，得第二供试品
溶液。
41.分别称取黄芪甲苷对照品、三七皂苷r1对照品和柴胡皂苷a对照品，加1ml甲醇制得1mg/ml的第二对照品溶液；精密称取三七对照药材0.5g，加25ml水回流30min后，放冷，过滤，滤液用乙醚萃取3次，每次25ml，弃去乙醚层，水层用水饱和正丁醇萃取2次，每次25ml，合并正丁醇层，再用氨试液洗涤3次，每次25ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，将正丁醇液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，得对照药材溶液。
42.分别量取2μl第二供试品溶液、2μl第二对照品溶液和2μl对照药材溶液点于第二硅胶薄层板上，使呈条带状，用比例为4:3:5的正丁醇、乙酸乙酯和水组成的第三展开剂展开约17cm，取出，晾干后，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，置80℃下加热至斑点显色清晰，分别置于日光和波长为365nm的紫外光灯下检视。检视结果如下，图4为在日光下检视第二硅胶薄层板的结果示意图，图5为在波长为365nm的紫外光灯下检视第二硅胶薄层板的结果示意图，由图4、图5可知，在第二硅胶薄层板的第二供试品处可见黄芪、三七和柴胡斑点，综上所述，因第二供试品为治疗肝病中药，通过本实施例中的鉴别方法，可将治疗肝病中药中含有的黄芪、三七、柴胡同时鉴别出来。
43.需要说明的是，如图4、图5所示，在第二硅胶薄层板上，最上面的斑点和最下的斑点均为三七药材中含有的成分，具体名称还不确定，但对本实施例中的检视结果无影响。
44.本发明的技术方案的优点如下：
45.1、通过针对治疗肝病中药中所含化学成分的特性，再基于黄芪、葛根、柴胡、赤芍、丹参、三七的薄层鉴定特点，选用甲醇对治疗肝病中药进行处理，可鉴别出丹参、葛根和赤芍，选用甲醇、水、乙醚、正丁醇、氨水对治疗肝病中药进行处理，可鉴别出黄芪、三七、柴胡，本发明根据提取成分不同，选用与之相适应的提取制备工艺和所需的制剂，从而能够从治疗肝病中药的诸多有效成分中分离提取待测定成分。
46.2、针对黄芪、葛根、柴胡、赤芍、丹参、三七六种药味的鉴别，黄芪、柴胡和三七的鉴别采用了萃取除杂质的方法从治疗肝病中药中进行分离，且采用本除杂方法可将黄芪、柴胡和三七同时进行鉴别，而葛根、赤芍和丹参的鉴别是甲醇超声直接点样，展开，故本鉴别方法具有简便、快捷、高效和环保的适用效果。