流体盒中的板上裂解、内部对照物和体积扩展的制作方法
本公开文本涉及用于通过以下方式对测试平台(诸如流体盒)的样品室内的样品执行机械裂解的系统和方法:将样品提供到包含磁性元件和多个非磁性珠状件的裂解室并且用磁场搅动所述磁性元件,由此接触非磁性珠状件的被搅动的磁性元件搅动所述非磁性珠状件以裂解被包含在所述样品中的细胞。另外,本公开文本涉及一种具有扩展池(well)和室扩展器的流体盒,所述室扩展器可以被气密地密封到所述盒的本体以扩展所述扩展池的体积容量。本公开文本进一步涉及用于在样品添加之前向样品室提供内部对照物的装置和方法。内部对照物可以以干燥的(非液体的)可溶性形式提供,或者它可以被包含在囊状件或丸粒内,所述囊状件或丸粒在机械裂解期间碎解,进而将所述内部对照物释放到样品室中。
背景技术:
1、测试平台(诸如流体盒)中执行的分子测定规程往往需要裂解被包含在样品中的细胞以从所述细胞中释放核酸。可以通过例如化学方法、声学方法、机械(物理破坏)方法、和/或酶促方法进行裂解。可以在将样品引入流体盒中之前裂解细胞,进而如果采用例如声学或机械裂解方法,则在将样品引入流体盒中之前需要额外的样品处置和处理。在流体盒上至少部分地裂解细胞可以消除对在将样品引入流体盒中之前的这种样品处置和处理的需要。
2、另外,用于执行分子测定规程或其他测试的流体盒包括多个池或室,所述多个池或室通过通道互连,所述通道往往具有控制通过所述通道的流的阀。每个室的体积容量由所述室的内部空间的宽度和高度所确定。由于此类流体盒往往由模制塑料制造,模制技术中的限制可能限制可以在盒中实现的体积公制容量的可变性。例如,模制技术中的限制可能使得模制具有多个池(其中所述池中的一个显著高于剩余池)的盒是不切实际的。因此,如果池中的一个需要比剩余池显著更大的体积容量,则实现这种更大容量的唯一方式可以是使所述池比盒的其他池宽得多。这将使整个盒的宽度变大,或者,如果盒的允许宽度例如受在其中处理所述盒的仪器的大小所限制,则所述盒的其他池将需要做得更小。
3、相应地,存在针对增加流体盒的至少一个室的体积容量的需要。
4、在流体盒上执行分子测定的情况下,可能期望反应混合物包括内部对照物。内部对照物(诸如例如质粒、核酸转录物或从整个生物体(诸如酵母菌)中提取的核酸)将暴露于与样品相同的测定条件(诸如(在包含所述内部对照物的整个生物体的情况下)裂解、样品纯化、与扩增试剂和检测探针的组合、热循环等),使得如果正确地执行扩增和检测规程,即分子测定过程的所有步骤已经用测定中使用的可行试剂恰当地进行,则可以预期检测到指示存在所述内部对照物的信号(即,内部对照物核酸的阳性结果)。另一方面,未能检测到指示存在内部对照物的信号(即,内部对照物核酸的阴性结果),或检测到的内部对照物少于预期,可以指示样品制备步骤(例如,裂解或分析物纯化)、材料输送步骤、扩增步骤、和/或检测步骤中的一个或多个步骤中的错误或故障和/或试剂未按预期执行。此类错误或故障可以是基于系统的(例如,仪器或仪器内的模块已经发生故障)和/或基于材料的(例如,一种或多种试剂已经降解或变得不稳定)。
5、可以通过将一定量的包含内部对照物的试剂(“内部对照物试剂”或“icr”)与样品一起简单地分配到样品室中来向反应混合物提供所述内部对照物,或者可以在将内部对照物分配到样品室中之前向样品提供所述内部对照物。然而,这些途径向样品制备过程引入了附加步骤,这可能降低吞吐量并且可能导致错误、溢出或污染。
技术实现思路
1、以下呈现简化概述,以便提供对本文描述的一些方面的基本理解。本概述不是所要求保护的主题的广泛概述。它旨在既不标识所要求保护的主题的关键的或至关重要的要素,也不描绘其范围。它的唯一目的是以简化的形式呈现一些概念,作为稍后呈现的更详细描述的前奏。
2、可以鉴于以下实施方案描述本公开文本的实现方式,其特征可以以任何合理的方式组合。
3、一些实施方案涵盖:
4、a1.一种用于对流体样品执行细胞裂解规程的裂解囊状件,其中所述裂解囊状件包括:中空本体,所述中空本体具有开放式第一末端和开放式第二末端;被附装到所述本体的第一多孔膜,所述第一多孔膜覆盖所述开放式第一末端;被附装到所述本体的第二多孔膜,所述第二多孔膜覆盖所述开放式第二末端,其中所述中空本体限定所述第一多孔膜与所述第二多孔膜之间的裂解室;被布置在所述裂解室内的多个非磁性珠状件;以及被布置在所述裂解室内的至少一个磁性元件,其中所述第一多孔膜和所述第二多孔膜的管孔的大小被设计为将所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件保留在所述裂解室内。
5、a2.根据实施方案a1所述的裂解囊状件,其中所述第一多孔膜包括网状件。
6、a3.根据实施方案a1或a2所述的裂解囊状件,其中所述第一多孔膜是亲水性的。
7、a4.根据实施方案a1至a3中任一项所述的裂解囊状件,其中所述第二多孔膜包括网状件。
8、a5.根据实施方案a1至a3中任一项所述的裂解囊状件,其中所述第二多孔膜是过滤基质。
9、a6.根据实施方案a1至a5中任一项所述的裂解囊状件,其中所述第一多孔膜和所述第二多孔膜包括不同的孔隙度。
10、a7.根据实施方案a6所述的裂解囊状件,其中所述第一多孔膜的孔隙度或孔隙度范围比所述第二多孔膜的孔隙度或孔隙度范围大。
11、a8.根据实施方案a7所述的裂解囊状件,其中所述第一多孔膜具有70 µm至500 µm的孔隙度,并且所述第二多孔膜具有30 µm至100 µm的孔隙度。
12、a9.根据实施方案a1至a8中任一项所述的裂解囊状件,其中所述第一多孔膜被附装到所述本体的顶边沿,所述顶边沿限定所述开放式第一末端,并且其中所述第二多孔膜被附装到所述本体的底边沿,所述底边沿限定所述开放式第二末端。
13、a10.根据实施方案a1至a9中任一项所述的裂解囊状件,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个由陶瓷或玻璃组成。
14、a11.根据实施方案a1至a10中任一项所述的裂解囊状件,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有球形形状。
15、a12.根据实施方案a11所述的裂解囊状件,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有100 µm至2000 µm的直径。
16、a13.根据实施方案a1至a12中任一项所述的裂解囊状件,其中所述至少一个磁性元件用非磁性材料覆镀或包封。
17、a14.根据实施方案a13所述的裂解囊状件,其中所述非磁性材料是金属或塑料。
18、a15.根据实施方案a1至a14中任一项所述的裂解囊状件,其中所述至少一个磁性元件比所述多个非磁性珠状件中的任何一个占据更大的体积。
19、a16.根据实施方案a1至a15中任一项所述的裂解囊状件,其中所述至少一个磁性元件包括多个边缘。
20、a17.根据实施方案a16所述的裂解囊状件,其中所述多个边缘中的每一个是圆形的。
21、a18.根据实施方案a16或a17所述的裂解囊状件,其中所述至少一个磁性元件具有立方体的形状。
22、a19.根据实施方案a18所述的裂解囊状件,其中所述立方体的每个面的宽度为2.0毫米至4.3毫米。
23、a20.根据实施方案a1至a19中任一项所述的裂解囊状件,其中所述至少一个磁性元件由钕组成。
24、a21.根据实施方案a20所述的裂解囊状件,其中所述钕是n52级或n42级。
25、a22.根据实施方案a1至a21中任一项所述的裂解囊状件,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个和所述至少一个磁性元件是惰性的。
26、a23.根据实施方案a1至a22中任一项所述的裂解囊状件,其中所述多个非磁性珠状件占据所述裂解室的体积的50%至75%的体积。
27、a24.根据实施方案a23所述的裂解囊状件,其中所述至少一个磁性元件占据所述裂解室的体积的4.5%至11%的体积。
28、a25.根据实施方案a1至a24中任一项所述的裂解囊状件,其进一步包括被包含在所述裂解室内的内部对照物,其中所述内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证所述细胞裂解规程的有效性。
29、a26.根据实施方案a25所述的裂解囊状件,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述第一多孔膜和所述第二多孔膜中的至少一个上的,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解。
30、a27.根据实施方案a25所述的裂解囊状件,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解。
31、a28.根据实施方案a25所述的裂解囊状件,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述中空本体的内壁上,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解。
32、a29.根据实施方案a25所述的裂解囊状件,其中所述内部对照物的至少一部分被嵌入到或被包含在所述裂解室内包含的内部对照物丸粒中,并且其中所述内部对照物丸粒被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解和/或被适配成用于在搅动所述多个磁性珠状件时碎解。
33、a30.根据实施方案a29所述的裂解囊状件,其中所述内部对照物丸粒包括:芯,所述芯包括赋形剂,所述内部对照物被嵌入在所述赋形剂内;以及涂层,所述涂层围绕所述芯并且被适配成用于被机械裂解剪切力破坏,所述机械破解剪切力由所述多个非磁性珠状件在所述裂解室内的移动所施加,其中所述赋形剂被适配成用于在所述涂层被破坏后暴露于流体时至少部分地溶解。
34、a31.根据实施方案a30所述的裂解囊状件,其中所述赋形剂包括微晶纤维素和羟丙基纤维素中的至少一种,并且其中所述涂层包括纤维素衍生物。
35、a32.根据实施方案a25至a31中任一项所述的裂解囊状件,其中所述内部对照物是整个生物体、质粒或核酸转录物。
36、一些实施方案涵盖:
37、b1.一种流体盒,包括:盒本体,所述盒本体包括样品室,所述样品室具有开放式顶端;以及被布置在所述样品室内的根据实施方案a1至a24中任一项所述的裂解囊状件。
38、b2.根据实施方案b1所述的流体盒,其进一步包括与所述样品室连通的注射筒筒体,所述注射筒筒体被适配成用于接收注射筒止动件,所述注射筒止动件被连接到注射筒柱塞,以用于致动所述流体盒内的流体。
39、b3.根据实施方案b1或b2所述的流体盒,其进一步包括所述样品室内的位于所述裂解囊状件下方的死空间。
40、b4.根据实施方案b1至b3中任一项所述的流体盒,其中所述样品室由可移除密封件覆盖。
41、b5.根据实施方案b1至b3中任一项所述的流体盒,其进一步包括帽盖,所述帽盖被适配成用于被插入所述样品室的开放式顶端中。
42、b6.根据实施方案b5所述的流体盒,其中所述帽盖包括套筒,并且其中当所述帽盖被插入所述样品室的开放式顶端中时,所述套筒的外表面与所述样品室的内表面处于密封接合。
43、b7.根据实施方案b5或b6所述的流体盒,其中当所述帽盖被插入所述样品室的开放式顶端中时,所述帽盖的底端被布置成邻近所述裂解囊状件的顶端。
44、b8.根据实施方案b7所述的流体盒,其中当所述帽盖被插入所述样品室的开放式顶端中时,所述裂解囊状件的顶端与所述帽盖的底端之间存在间隙。
45、b9.根据实施方案b6至b8中任一项所述的流体盒,其中所述帽盖包括侧向延伸构件,其中所述侧向延伸构件的周缘区域被安坐在所述盒本体的顶表面上,并且其中所述套筒从所述侧向延伸构件悬垂,使得所述套筒的内表面和所述侧向延伸构件的底表面限定从所述帽盖的底端向上延伸的凹部。
46、b10.根据实施方案b9所述的流体盒,其中所述侧向延伸构件具有延伸穿过其中的通气口,当所述帽盖被插入所述样品室中时,所述通气口使空气能够从所述样品室中逸出。
47、b11.根据实施方案b10所述的流体盒,其中所述帽盖包括多孔通气膜,所述多孔通气膜被附装到所述侧向延伸构件的顶表面或底表面并且覆盖所述通气口。
48、b12.根据实施方案b11所述的流体盒,其中所述多孔通气膜对空气是可渗透的但对液体是不可渗透的。
49、b13.根据实施方案b11或b12所述的流体盒,其中所述多孔通气膜具有0.2 µm至0.4 µm的孔隙度。
50、b14.根据实施方案b9至b13中任一项所述的流体盒,其中所述帽盖包括从所述侧向延伸构件的周缘向上延伸的周缘壁。
51、b15.根据实施方案b14所述的流体盒,其中所述壁适用于手动抓握。
52、b16.根据实施方案b1至b15中任一项所述的流体盒,其进一步包括被包含在所述裂解室内的内部对照物,其中所述内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证所述细胞裂解规程的有效性。
53、b17.根据实施方案b16所述的流体盒,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述第一多孔膜和所述第二多孔膜中的至少一个上的,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
54、b18.根据实施方案b16或b17所述的流体盒,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述裂解室内的所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
55、b19.根据实施方案b16所述的流体盒,其中所述内部对照物的至少一部分被嵌入到或被包含在所述裂解室内包含的内部对照物丸粒中,并且其中所述内部对照物丸粒被适配成用于在由流体样品接触时溶解和/或被适配成用于在搅动所述多个非磁性珠状件时碎解。
56、b20.根据实施方案b19所述的流体盒,其中所述内部对照物丸粒包括:芯,所述芯包括赋形剂,所述内部对照物被嵌入在所述赋形剂内;以及涂层,所述涂层围绕所述芯并且被适配成用于被机械裂解剪切力破坏,所述机械破解剪切力由所述多个非磁性珠状件在所述接受器内的移动所施加,其中所述赋形剂被适配成用于在所述涂层被破坏后暴露于流体时至少部分地溶解。
57、b21.根据实施方案b20所述的流体盒,其中所述赋形剂包括微晶纤维素和羟丙基纤维素中的至少一种,并且其中所述涂层包括纤维素衍生物。
58、b22.根据实施方案b16至b21中任一项所述的流体盒,其中所述内部对照物是整个生物体、质粒或核酸转录物。
59、一些实施方案涵盖:
60、c1.一种用于处理被包含在流体样品中的细胞的方法,所述方法包括:(a) 将所述流体样品分配到根据实施方案b1至b3中任一项所述的流体盒的样品室中,以用所述流体样品至少部分地填充所述裂解囊状件的裂解室;(b) 在(a) 之后,用帽盖覆盖所述样品室的开放式顶端;以及(c) 在(b) 之后,使所述至少一个磁性元件经受磁场,进而使所述至少一个磁性元件在所述裂解囊状件的裂解室内移动,所述至少一个磁性元件在所述裂解囊状件的裂解室内的所述移动使所述多个非磁性珠状件在所述裂解囊状件的裂解室内移动,并且所述多个非磁性珠状件在所述裂解囊状件的裂解室内的所述移动使所述裂解囊状件的裂解室内的所述流体样品内包含的细胞裂解并释放核酸。
61、c2.根据实施方案c1所述的方法,其中在(a) 中分配的所述流体样品占据所述裂解囊状件的裂解室的体积的39%至45%。
62、c3.根据实施方案c1或c2的方法,其中(b) 包括将所述帽盖插入所述样品室中,使得所述帽盖与所述样品室处于密封接合。
63、c4.根据实施方案c3所述的方法,其中在将所述帽盖插入所述样品室之后,间隙将所述裂解囊状件的顶端与所述帽盖的底端分离开。
64、c5.根据实施方案c1至c4中任一项所述的方法,其中(b) 包括通过所述帽盖中的通气口将空气从所述样品室传递到外部环境。
65、c6.根据实施方案c5所述的方法,其中(b) 进一步包括使所述空气经过多孔通气膜,所述多孔通气膜被附装到所述帽盖并覆盖所述通气口,所述多孔通气膜对液体是不可渗透的。
66、c7.根据实施方案c1至c6中任一项所述的方法,其中在(c) 期间所述磁场由电磁体产生。
67、c8.根据实施方案c7所述的方法,其中(c) 包括交变到所述电磁体的电流以交变所述电磁体的极性。
68、c9.根据实施方案c8所述的方法,其中(c) 包括以20赫兹至200赫兹的频率交变所述电流以交变所述电磁体的极性。
69、c10.根据实施方案c9所述的方法,其中(c) 包括以两个或更多个不同频率脉冲所述电流以交变所述电磁体的极性。
70、c11.根据实施方案c1至c10中任一项所述的方法,其进一步包括:(d) 在(c) 之后,将所述流体样品的至少一部分从所述样品室输送到所述流体盒的处理室。
71、c12.根据实施方案c11所述的方法,其进一步包括:(e) 在(d) 期间,将来自(c)的经裂解的细胞材料保留在所述裂解室内,同时允许经释放的核酸经过所述第二多孔膜。
72、c13.根据实施方案c12所述的方法,其进一步包括:(f) 在(d) 期间使所述至少一个磁性元件经受所述磁场,进而使所述至少一个磁性元件在所述裂解囊状件的裂解室内移动,所述至少一个磁性元件在所述裂解室内的所述移动使所述多个非磁性珠状件在所述裂解室内移动,并且所述多个非磁性珠状件在所述裂解室内的所述移动使所述裂解室内的所述经裂解的细胞材料的至少一部分保持处于悬浮至少直到所述流体样品已经从所述裂解室中移除。
73、c14.根据实施方案c11至c13中任一项所述的方法,其进一步包括:(g) 在所述处理室中,将所述经释放的核酸的至少一部分固定化在固体支撑件上,并且将所述流体样品的未经固定化的组分移除到所述流体盒的废物室。
74、c15.根据实施方案c14所述的方法,其进一步包括:(h) 在(g) 之后,从所述固体支撑件洗脱经固定化的核酸并将洗脱后的核酸输送到所述流体盒的反应室。
75、c16.根据实施方案c15所述的方法,其进一步包括:(i) 在(h) 之后,使所述洗脱后的核酸经受第一反应的条件,所述第一反应提供感兴趣的分析物的存在或量的指示。
76、c17.根据实施方案c16所述的方法,其进一步包括:(j) 在(a) 期间或之后,将内部对照物释放到所述流体样品中,所述内部对照物在(a) 之前被包含在所述裂解室内;(k)在(g) 期间,将与所述内部对照物相关联的核酸(“ic核酸”)固定化在所述固体支撑件上;(l)在(g) 之后,从所述固体支撑件中洗脱所述ic核酸并将洗脱后的ic核酸输送到所述反应室;以及(m) 在(l) 之后,使所述ic核酸经受第二反应的条件,(m) 的结果被用来验证(i) 的结果和/或验证(c) 中所述裂解的有效性。
77、c18.根据实施方案c17所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,在(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述第一多孔膜和所述第二多孔膜中的至少一个上,并且其中在(a) 至(c) 中的任一个期间,所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
78、c19.根据实施方案c17所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,当(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上,并且其中在(a) 至(c) 中的任一个期间,被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上的所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
79、c20.根据实施方案c17所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,当(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述中空本体的内壁上,并且其中在(a) 至(c) 中的任一个期间,所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
80、c21.根据实施方案c17所述的方法,其中所述内部对照物被嵌入在或被包含在内部对照物丸粒内,并且其中所述内部对照物丸粒在存在所述流体样品时溶解和/或在(c)期间通过所述多个非磁性珠状件的所述移动而碎解,进而将所述内部对照物释放到所述流体样品中。
81、c22.根据实施方案c17至c21中任一项所述的方法,其中所述第一反应的条件和所述第二反应的条件是相同的条件。
82、c23.根据实施方案c17至c22中任一项所述的方法,其中所述第一反应和所述第二反应中的每一个是核酸扩增反应。
83、c24.根据实施方案c23所述的方法,其中所述核酸扩增反应是聚合酶链式反应(“pcr”)。
84、一些实施方案涵盖:
85、d1.一种用于执行细胞裂解的裂解容器,所述裂解容器包括:侧向延伸构件,所述侧向延伸构件具有延伸穿过其中的通气口;套筒,所述套筒从所述侧向延伸构件悬垂,其中所述套筒的底端限定所述容器的开放式底端;第一多孔膜,所述第一多孔膜被附装到所述侧向延伸构件的顶表面或底表面,所述第一多孔膜覆盖所述通气口;第二多孔膜,所述第二多孔膜被附装到所述套筒的底端,所述第二多孔膜覆盖所述开放式底端,其中所述侧向延伸构件的底表面、所述套筒的内表面、以及所述第一多孔膜和所述第二多孔膜限定裂解室;被包含在所述裂解室内的多个非磁性珠状件;以及被包含在所述裂解室内的至少一个磁性元件,其中所述第一多孔膜的和所述第二多孔膜的大小被设计为将所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件保留在所述裂解室内。
86、d2.根据实施方案d1所述的裂解容器,其进一步包括从所述侧向延伸构件的周缘向上延伸的周缘壁。
87、d3.根据实施方案d2所述的裂解容器,其中所述周缘壁适用于手动抓握。
88、d4.根据实施方案d1至d3中任一项所述的裂解容器,其中所述第二多孔膜包括网状件,所述网状件是液体可渗透的。
89、d5.根据实施方案d4所述的裂解容器,其中所述第二多孔膜是亲水性的。
90、d6.根据实施方案d4或d5所述的裂解容器,其中所述第一多孔膜是气体可渗透的但不是液体可渗透的。
91、d7.根据实施方案d6所述的裂解容器,其中所述第一多孔膜具有0.2 µm至0.4 µm的孔隙度,并且所述第二多孔膜具有30 µm至100 µm的孔隙度。
92、d8.根据实施方案d1至d7中任一项所述的裂解容器,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个由陶瓷或玻璃组成。
93、d9.根据实施方案d1至d8中任一项所述的裂解容器,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有球形形状。
94、d10.根据实施方案d9所述的裂解容器,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有100 µm至2000 µm的直径。
95、d11.根据实施方案d1至d10中任一项所述的裂解容器,其中所述至少一个磁性元件用非磁性材料覆镀或包封。
96、d12.根据实施方案d11所述的裂解容器,其中所述非磁性材料是金属或塑料。
97、d13.根据实施方案d1至d12中任一项所述的裂解容器,其中所述至少一个磁性元件比所述多个非磁性珠状件中的任何一个占据更大的体积。
98、d14.根据实施方案d1至d13中任一项所述的裂解容器,其中所述至少一个磁性元件包括多个边缘。
99、d15.根据实施方案d14所述的裂解容器,其中所述多个边缘中的每一个是圆形的。
100、d16.根据实施方案d14或d15所述的裂解容器,其中所述至少一个磁性元件具有立方体的形状。
101、d17.根据实施方案d16所述的裂解容器,其中所述立方体的每个面的宽度为2.0毫米至4.3毫米。
102、d18.根据实施方案d1至d17中任一项所述的裂解容器,其中所述至少一个磁性元件由钕组成。
103、d19.根据实施方案d18所述的裂解容器,其中所述钕是n52级或n42级。
104、d20.根据实施方案d1至d19中任一项所述的裂解容器,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个和所述至少一个磁性元件是惰性的。
105、d21.根据实施方案d1至d20中任一项所述的裂解容器,其中所述多个非磁性珠状件占据所述裂解室的体积的50%至75%的体积。
106、d22.根据实施方案d21所述的裂解容器,其中所述至少一个磁性元件占据所述裂解室的体积的4.5%至11%的体积。
107、d23.根据实施方案d1至d22中任一项所述的裂解容器,其进一步包括被包含在所述裂解室内的内部对照物,其中所述内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证所述细胞裂解规程的有效性。
108、d24.根据实施方案d23所述的裂解容器,其中 所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述第二多孔膜上,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
109、d25.根据实施方案d23所述的裂解容器,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分上的,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
110、d26.根据实施方案d23所述的裂解容器,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述侧向延伸构件的底表面和所述套筒的内表面中的至少一个上,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
111、d27.根据实施方案d23所述的裂解容器,其中所述内部对照物的至少一部分被嵌入在或被包含在内部对照物丸粒内,所述内部对照物丸粒被适配成用于在由流体样品接触时溶解和/或在所述多个非磁性珠状件被搅动时碎解,所述内部对照物丸粒被包含在所述裂解室内。
112、一些实施方案涵盖:
113、e1.一种流体盒,包括:盒本体,所述盒本体包括样品室,所述样品室具有开放式顶端;以及被布置在所述样品室内的根据实施方案d1至d28中任一项所述的裂解容器。
114、e2.根据实施方案e1所述的流体盒,其进一步包括与所述样品室连通的注射筒筒体,所述注射筒筒体被适配成用于接收注射筒止动件,所述注射筒止动件被连接到或可连接到注射筒柱塞,以用于致动所述注射筒筒体内的所述注射筒止动件以致动所述流体盒内的流体。
115、e3.根据实施方案e1或e2所述的流体盒,其进一步包括所述样品室内的位于所述裂解容器下方的死空间。
116、e4.根据实施方案e1至e3中任一项所述的流体盒,其中所述套筒的外表面与所述样品室的内表面处于密封接合。
117、e5.根据实施方案e1至e4中任一项所述的流体盒,其中所述侧向延伸构件的周缘区域安坐在所述盒本体的顶表面上。
118、一些实施方案涵盖:
119、f1.一种用于处理被包含在流体样品中的细胞的方法,所述方法包括:(a) 将所述流体样品分配到流体盒的样品室中,所述样品室具有开放式顶端;(b) 在(a) 之后,将根据实施方案d1至d22中任一项所述的裂解容器的套筒插入所述样品室的开放式顶端中;(c)在(b) 之后,使所述至少一个磁性元件经受磁场,进而使所述至少一个磁性元件在所述裂解容器的裂解室内移动,所述至少一个磁性元件在所述裂解容器的裂解室内的所述移动使所述多个非磁性珠状件在所述裂解容器的裂解室内移动,并且所述多个非磁性珠状件在所述裂解容器的裂解室内的所述移动使被包含在所述裂解容器的裂解室内的所述流体样品内的细胞裂解并且释放核酸。
120、f2.根据实施方案f1所述的方法,其中所述流体盒进一步包括与所述样品室连通的注射筒筒体,所述注射筒筒体被适配成用于接收注射筒止动件,所述注射筒止动件被连接到或可连接到注射筒柱塞,以用于致动所述注射筒筒体内的所述注射筒止动件以致动所述流体盒内的流体。
121、f3.根据实施方案f1或f2所述的方法,其中所述流体盒进一步包括所述样品室内的位于所述裂解容器下方的死空间。
122、f4.根据实施方案f1至f3中任一项所述的方法,其中在(b) 之后,所述套筒的外表面与所述样品室的内表面处于密封接合。
123、f5.根据实施方案f1至f4中任一项所述的方法,其中所述侧向延伸构件的周缘区域安坐在所述盒本体的顶表面上。
124、f6.根据实施方案f1至f5中任一项所述的方法,其中在(a) 中分配的所述流体样品占据所述裂解容器的裂解室的体积的39%至45%的体积。
125、f7.根据实施方案f1至f6中任一项所述的方法,其中(b) 进一步包括通过所述第一多孔膜和所述裂解容器中的所述通气口将空气从所述样品室传递到外部环境。
126、f8.根据实施方案f1至f7中任一项所述的方法,其中在(c) 期间所述磁场由电磁体产生。
127、f9.根据实施方案f8所述的方法,其中(c) 包括交变到所述电磁体的电流以交变所述电磁体的极性。
128、f10.根据实施方案f9所述的方法,其中(c) 包括以20赫兹至200赫兹的频率交变所述电流。
129、f11.根据实施方案f1至f10中任一项所述的方法,其进一步包括:(d) 在(c) 之后,将所述流体样品的至少一部分从所述样品室输送到所述流体盒的处理室。
130、f12.根据实施方案f11所述的方法,其进一步包括:(e) 在(d) 期间,将来自(c)的经裂解的细胞材料保留在所述裂解室内,同时允许经释放的核酸经过所述第二多孔膜。
131、f13.根据实施方案f12所述的方法,其进一步包括:(f) 在(d) 期间使所述至少一个磁性元件经受所述磁场,进而使所述至少一个磁性元件在所述裂解容器的裂解室内移动,所述至少一个磁性元件在所述裂解室内的所述移动使所述多个非磁性珠状件在所述裂解室内移动,并且所述多个非磁性珠状件在所述裂解室内的所述移动使所述裂解室内的所述经裂解的细胞材料的至少一部分保持处于悬浮至少直到所述流体样品已经从所述裂解室中移除。
132、f14.根据实施方案f11至f13中任一项所述的方法,其进一步包括:(g) 在所述处理室中,将所述经释放的核酸的至少一部分固定化在固体支撑件上,并且将所述流体样品的未经固定化的组分移除到所述流体盒的废物室。
133、f15.根据实施方案f14所述的方法,其进一步包括:(h) 在(g) 之后,从所述固体支撑件洗脱经固定化的核酸并将洗脱后的核酸输送到所述流体盒的反应室。
134、f16.根据实施方案f15所述的方法,其进一步包括:(i) 在(h) 之后,使所述洗脱后的核酸经受第一反应的条件,所述第一反应提供感兴趣的分析物的存在或量的指示。
135、f17.根据实施方案f16所述的方法,其进一步包括:(j) 在(a) 期间或之后,将内部对照物释放到所述流体样品中,所述内部对照物在(a) 之前被包含在所述裂解室内;(k)在(g) 期间,将与所述内部对照物相关联的核酸(“ic核酸”)固定化在所述固体支撑件上;(l) 在(g) 之后,从所述固体支撑件中洗脱所述ic核酸并将洗脱后的ic核酸输送到所述反应室;以及(m) 在(l) 之后,使所述ic核酸经受第二反应的条件,(m) 的结果被用来验证(i) 的结果和/或验证(c) 中所述裂解的有效性。
136、f18.根据实施方案f17所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,当(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述第二多孔膜上,并且其中所述内部对照物试剂在(b) 之后溶解在所述流体样品中。
137、f19.根据实施方案f17所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,当(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上,并且其中在(b) 和/或(c) 期间,被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上的所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
138、f20.根据实施方案f17所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被嵌入在或被包含在内部对照物丸粒内,并且其中所述内部对照物丸粒在存在所述流体样品时溶解和/或在(c) 期间通过所述多个非磁性珠状件的所述移动而碎解,进而将所述内部对照物释放到所述流体样品中。
139、f21.根据实施方案f17至f19中任一项所述的方法,其中,在(a) 之前,在与所述流体样品接触之前,所述内部对照物试剂是干燥试剂。
140、f22.根据实施方案f17至f21中任一项所述的方法,其中所述第一反应的条件和所述第二反应的条件是相同的条件。
141、f23.根据实施方案f17至f22中任一项所述的方法,其中所述第一反应和所述第二反应中的每一个是核酸扩增反应。
142、f24.根据实施方案f23所述的方法,其中所述核酸扩增反应是聚合酶链式反应(“pcr”)。
143、一些实施方案涵盖:
144、g1.一种制造包含裂解囊状件的流体盒的方法,所述方法包括:通过以下步骤组装所述裂解囊状件:(a) 提供具有开放式第一末端和开放式第二末端的中空本体;(b) 提供第一多孔膜和第二多孔膜并将所述第二多孔膜附装到所述中空本体,所述第二多孔膜覆盖所述中空本体的开放式第二末端;(c) 通过所述中空本体的开放式第一末端将多个非磁性珠状件引入所述中空本体中;(d) 通过所述中空本体的开放式第一末端将至少一个磁性元件引入所述中空本体中;(e) 在(c) 和(d) 之后,将所述第一多孔膜附装到所述中空本体,所述第一多孔膜覆盖所述中空本体的开放式第一末端,其中所述中空本体和附装的所述第一多孔膜和所述第二多孔膜限定裂解室,并且其中所述第一多孔膜的和所述第二多孔膜的管孔的大小被设计为将所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件保留在所述裂解室内;以及(f) 在(e) 之后,将所述裂解囊状件固定在流体盒的样品室内,所述流体盒具有与所述样品室流体连通的多个室。
145、g2.根据实施方案g1所述的方法,其中所述第一多孔膜包括网状件。
146、g3.根据实施方案g1或g2所述的方法,其中所述第二多孔膜包括网状件。
147、g4.根据实施方案g1至g3中任一项所述的方法,其中所述第一多孔膜是亲水性的。
148、g5.根据实施方案g1至g4中任一项所述的方法,其中所述第一多孔膜和所述第二多孔膜包括不同的孔隙度。
149、g6.根据实施方案g5所述的方法,其中所述第一多孔膜的孔隙度或孔隙度范围比所述第二多孔膜的孔隙度或孔隙度范围大。
150、g7.根据实施方案g6所述的方法,其中所述第一多孔膜具有70 µm至500 µm的孔隙度,并且所述第二多孔膜具有30 µm至100 µm的孔隙度。
151、g8.根据实施方案g1至g7中任一项所述的方法,其中所述第一多孔膜被附装到所述中空本体的限定所述开放式第一末端的顶边沿,并且其中所述第二多孔膜被附装到所述中空本体的限定所述开放式第二末端的底边沿。
152、g9.根据实施方案g1至g8中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个由陶瓷或玻璃组成。
153、g10.根据实施方案g1至g9中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有球形形状。
154、g11.根据实施方案g10所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有100 µm至2000 µm的直径。
155、g12.根据实施方案g1至g11中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件用非磁性材料覆镀或包封。
156、g13.根据实施方案g12所述的方法,其中所述非磁性材料是金属或塑料。
157、g14.根据实施方案g1至g13中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件比所述多个非磁性珠状件中的任何一个占据更大的体积。
158、g15.根据实施方案g1至g14中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件包括多个边缘。
159、g16.根据实施方案g15所述的方法,其中所述多个边缘中的每一个是圆形的。
160、g17.根据实施方案g15或g16所述的方法,其中所述至少一个磁性元件具有立方体的形状。
161、g18.根据实施方案g17所述的方法,其中所述立方体的每个面的宽度为2.0毫米至4.3毫米。
162、g19.根据实施方案g1至g18中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件由钕组成。
163、g20.根据实施方案g19所述的方法,其中所述钕是n52级或n42级。
164、g21.根据实施方案g1至g20中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个和所述至少一个磁性元件是惰性的。
165、g22.根据实施方案g1至g21中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件占据所述裂解室的体积的50%至75%的体积。
166、g23.根据实施方案g22所述的方法,其中所述至少一个磁性元件占据所述裂解室的体积的4.5%至11%的体积。
167、g24.根据实施方案g1至g23中任一项所述的方法,其进一步包括将内部对照物试剂布置到所述裂解囊状件的部件上,所述内部对照物试剂包含内部对照物,所述内部对照物被提供来验证测定和/或被提供来验证用所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件执行的细胞裂解规程的有效性。
168、g25.根据实施方案g24所述的方法,其中在(c) 之前,将所述内部对照物试剂的至少一部分布置到所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上。
169、g26.根据实施方案g24所述的方法,其中在(c) 之后,将所述内部对照物试剂的至少一部分布置到所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上。
170、g27.根据实施方案g24所述的方法,其中将所述内部对照物试剂布置到(i) 所述第一多孔膜、(ii) 所述第二多孔膜、(iii) 所述中空本体的内表面、(iv) 所述多个非磁性珠状件的至少一部分和(v) 在(e) 之前的所述至少一个磁性元件上。
171、g28.根据实施方案g24至g27中任一项所述的方法,其中所述内部对照物试剂以液体形式被布置,并且其中所述方法进一步包括在所述内部对照物试剂已经被布置到所述裂解囊状件上之后干燥所述内部对照物试剂。
172、g29.根据实施方案g1至g23中任一项所述的方法,其中内部对照物被嵌入在或被包含在内部对照物丸粒内,所述内部对照物丸粒被适配成用于在由流体样品接触时溶解和/或被适配成用于在所述裂解室中搅动所述多个磁性珠状件时碎解,并且其中在(e) 之前将所述内部对照物丸粒包含在所述中空本体内,并且其中内部对照物被提供来验证测定和/或被提供来验证用所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件执行的细胞裂解规程的有效性。
173、g30.根据实施方案g24至g29中任一项所述的方法,其中所述内部对照物是整个生物体、质粒或核酸转录物。
174、g31.根据实施方案g1至g30中任一项所述的方法,其中通过粘合剂、热封、或超声波焊接将所述第一多孔膜和所述第二多孔膜中的每一个附装到所述中空本体。
175、g32.根据实施方案g1至g31中任一项所述的方法,其中所述裂解囊状件被压配合在所述样品室内。
176、g33.根据实施方案g1至g31中任一项所述的方法,其中所述中空本体的外表面与所述样品室的内表面螺纹配合。
177、g34.根据实施方案g1至g33中任一项所述的方法,其进一步包括将可移除保护性盖附装到所述流体盒的顶表面,进而覆盖所述样品室。
178、一些实施方案涵盖:
179、h1.一种用于裂解被包含在流体样品中的细胞的方法,所述方法包括:(a) 将所述流体样品分配到流体盒的样品室中,所述样品室包含多个非磁性珠状件和至少一个磁性元件,其中所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件具有沉积在其上的内部对照物试剂,并且其中被包含在所述内部对照物试剂中的内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证细胞裂解规程的有效性;以及(b) 在(a) 之后,使所述流体样品经受所述细胞裂解规程,所述细胞裂解规程包括将所述至少一个磁性元件暴露于磁场,进而使被包含在所述样品室内的所述至少一个磁性元件移动,所述至少一个磁性元件的所述移动使被包含在所述样品室内的所述多个非磁性珠状件移动,并且所述多个非磁性珠状件在所述样品室内的所述移动使被包含在所述流体样品内的细胞裂解并释放核酸,其中所述内部对照物试剂在存在所述流体样品时溶解,进而将所述内部对照物释放到所述流体样品中,并且其中所述至少一个磁性元件的和所述多个非磁性珠状件的所述移动使被包含在所溶解的内部对照物试剂内的所述内部对照物分布在所述流体样品内。
180、h2.一种用于裂解被包含在流体样品中的细胞的方法,所述方法包括:(a) 将所述流体样品分配到所述流体盒的样品室中,所述样品室包含(i) 多个非磁性珠状件、(ii) 至少一个磁性元件、和(iii) 被包含在内部对照物丸粒内的内部对照物试剂,其中被包含在所述内部对照物试剂中的内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证细胞裂解规程的有效性;以及(b) 在(a) 之后,使所述流体样品经受所述细胞裂解规程,所述细胞裂解规程包括将所述至少一个磁性元件暴露于磁场,进而使被包含在所述样品室内的所述至少一个磁性元件移动,所述至少一个磁性元件的所述移动使被包含在所述样品室内的所述多个非磁性珠状件移动,并且所述多个非磁性珠状件在所述样品室内的所述移动使被包含在所述流体样品内的所述细胞裂解并释放核酸,其中所述内部对照物丸粒在由所述流体样品接触时溶解和/或所述多个非磁性珠状件在所述样品室内的所述移动使所述内部对照物丸粒碎解,进而将所述内部对照物释放到所述流体样品中,并且其中所述至少一个磁性元件的和所述多个非磁性珠状件的所述移动使被包含在所述溶解的内部对照物试剂内的所述内部对照物分布在所述流体样品内。
181、h3.根据实施方案h1或h2所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件被包含在限定裂解室的中空本体内,在(a) 和(b) 期间所述裂解室被布置在所述样品室内,并且其中所述接受器是可渗透液体的。
182、h4.根据实施方案h1至h3中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有球形形状。
183、h5.根据实施方案h4所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有100µm至2000 µm的直径。
184、h6.根据实施方案h1至h5中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件用非磁性材料覆镀或包封。
185、h7.根据实施方案h6所述的方法,其中所述非磁性材料是金属或塑料。
186、h8.根据实施方案h1至h7中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件比所述多个非磁性珠状件中的任何一个占据更大的体积。
187、h9.根据实施方案h1至h8中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件包括多个边缘。
188、h10.根据实施方案h9所述的方法,其中所述多个边缘中的每一个是圆形的。
189、h11.根据实施方案h9或h10所述的方法,其中所述至少一个磁性元件具有立方体的形状。
190、h12.根据实施方案h11所述的方法,其中所述立方体的每个面的宽度为2.0毫米至4.3毫米。
191、h13.根据实施方案h1至h12中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件由钕组成。
192、h14.根据实施方案h13所述的方法,其中所述钕是n52级或n42级。
193、h15.根据实施方案h1至h14中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个和所述至少一个磁性元件是惰性的。
194、h16.根据实施方案h1至h15中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件占据所述样品室的体积的50%至70%的体积。
195、h17.根据实施方案h16所述的方法,其中所述至少一个磁性元件占据所述样品室的体积的4.5%至11%的体积。
196、h18.根据实施方案h1至h17中任一项所述的方法,其中在(b) 期间所述磁场由电磁体产生。
197、h19.根据实施方案h18所述的方法,其中(b) 包括交变到所述电磁体的电流以交变所述电磁体的极性。
198、h20.根据实施方案h19所述的方法,其中(b) 包括以20赫兹至200赫兹的频率交变所述电流。
199、h21.根据实施方案h1至h20中任一项所述的方法,其进一步包括:(c) 在(b) 之后,将所述流体样品的至少一部分从所述样品室输送到所述流体盒的处理室。
200、h22.根据实施方案h21所述的方法,其进一步包括:(d) 在(c) 期间,将来自(c)的经裂解的细胞材料保留在所述样品室内,同时将经释放的核酸输送到所述处理室。
201、h23.根据实施方案h21或h22所述的方法,其进一步包括:(e) 在所述处理室中,将所述经释放的核酸的至少一部分固定化在固体支撑件上,并且将所述流体样品的未经固定化的组分移除到所述流体盒的废物室。
202、h24.根据实施方案h23所述的方法,其进一步包括:(f) 在(e) 之后,从所述固体支撑件洗脱经固定化的核酸并将洗脱后的核酸输送到所述流体盒的反应室。
203、h25.根据实施方案h24所述的方法,其进一步包括:(g) 在(f) 之后,使所述洗脱后的核酸经受第一反应的条件,所述第一反应提供感兴趣的分析物的存在或量的指示。
204、h26.根据实施方案h25所述的方法,其进一步包括(h) 在(e) 期间将与所述内部对照物相关联的核酸(“ic核酸”)固定化在所述固体支撑件上;(i)在(h) 之后,从所述固体支撑件中洗脱所述ic核酸并将洗脱后的ic核酸输送到所述反应室;以及(j) 在(i) 之后,使所述ic核酸经受第二反应的条件,所述第二反应提供(b) 中裂解程度的指示。
205、h27.根据实施方案h26所述的方法,其中所述第一反应的条件和所述第二反应的条件是相同的条件。
206、h28.根据实施方案h26或h27所述的方法,其中所述第一反应和所述第二反应中的每一个是核酸扩增反应。
207、h29.根据实施方案h28所述的方法,其中所述核酸扩增反应是聚合酶链式反应(“pcr”)。
208、一些实施方案涵盖:
209、i1.一种流体盒,所述流体盒包括盒本体,所述盒本体限定流体地连接或可流体地连接的两个或更多个池,其中所述两个或更多个池中的至少一个池包括扩展池,并且其中所述盒本体包括至少部分地围绕所述扩展池的第一联接结构,并且其中所述盒进一步包括室扩展器,所述室扩展器被附接到所述盒本体并且包括:基部,所述基部具有第二联接结构,所述第二联接结构位于所述基部的底侧上并且被配置为操作性地联接到所述第一联接结构以在所述室扩展器与所述盒本体之间形成气密密封;从所述基部延伸的扩展室,其中所述扩展室将所述扩展池的体积容量扩展至少所述扩展室的体积容量;嘴部,所述嘴部限定进入所述扩展室的内部空间的开口;以及帽盖,所述帽盖被配置为联接到所述嘴部以闭合所述开口。
210、i2.根据实施方案i1所述的流体盒,其中所述第一联接结构包括第一周缘壁,所述第一周缘壁形成在所述盒本体中并且至少部分地围绕所述扩展池,并且所述第二联接结构包括第二周缘壁,所述第二周缘壁在所述基部的底侧下方延伸并且被配置为适形于所述第一周缘壁的内表面或外表面。
211、i3.根据实施方案i2所述的流体盒,其中所述第二联接结构包括第三周缘壁,所述第三周缘壁在所述基部的底侧下方延伸并且与所述第二周缘壁间隔开以在所述基部的底侧上形成周缘凹槽,并且其中所述周缘凹槽被配置为将所述第一周缘壁接收在所述第二周缘壁与所述第三周缘壁之间。
212、i4.根据实施方案i1至i3中任一项所述的流体盒,其中所述扩展室和所述嘴部具有不同的形状。
213、i5.根据实施方案i4所述的流体盒,其中所述扩展室具有三条直边,并且所述嘴部具有圆形形状。
214、i6.根据实施方案i1至i5中任一项所述的流体盒,其进一步包括绕所述开口形成在所述嘴部的内表面中的周界倒角。
215、i7.根据实施方案i3所述的流体盒,其中所述第一周缘壁和所述周缘凹槽各自具有三个边。
216、i8.根据实施方案i7所述的流体盒,其中所述第一周缘壁具有通过圆角连接的三条直边,并且其中所述周缘凹槽具有通过圆角连接的三条直边。
217、i9.根据实施方案i2所述的流体盒,其中通过粘合剂或通过焊接将所述第一周缘壁附装到所述第二周缘壁。
218、i10.根据实施方案i3所述的流体盒,其中通过粘合剂或通过焊接将所述第一周缘壁附装到所述第二周缘壁和所述第三周缘壁中的至少一个。
219、i11.根据实施方案i1至i10中任一项所述的流体盒,其中所述帽盖包括:插入套筒,所述插入套筒被配置为被插入由所述嘴部限定的所述开口中;和护套,所述护套比所述插入套筒更宽并且包括基本上闭合所述插入套筒的一个末端的顶壁。
220、i12.根据实施方案i11所述的流体盒,其中所述插入套筒是中空的,并且所述护套包括通气孔,所述通气孔延伸穿过所述护套的顶壁并且对所述插入套筒的内部空间开放,并且其中所述帽盖进一步包括通气膜,所述通气膜被布置在所述通气孔之上,其中所述通气膜被配置为准许气体通过但防止液体通过。
221、i13.根据实施方案i12所述的流体盒,其中所述通气膜具有约0.2 µm的管孔大小。
222、i14.根据实施方案i12或i13所述的流体盒,其中所述通气孔包括内通气孔部分和外通气孔部分,所述内通气孔部分形成在所述护套的顶壁的内表面上,所述外通气孔部分形成在所述护套的顶壁的外表面中,其中所述内通气孔的宽度不同于所述外通气孔的宽度。
223、i15.根据实施方案i14所述的流体盒,其中所述内通气孔部分的宽度小于所述外通气孔部分的宽度。
224、i16.根据实施方案i11至i15中任一项所述的流体盒,其中所述帽盖进一步包括径向肋,所述径向肋在所述护套的内表面与所述插入套筒的外表面之间延伸,其中,当所述帽盖被联接到所述嘴部以闭合所述开口时,所述插入套筒被插入所述开口中,直到所述径向肋接触所述嘴部的围绕所述开口的边缘。
225、i17.根据实施方案i11至i16中任一项所述的流体盒,其中所述插入套筒通过摩擦配合被固定在由所述嘴部限定的所述开口内。
226、i18.根据实施方案i11至i17中任一项所述的流体盒,其中所述帽盖包括周向肋,所述周向肋围绕所述插入套筒的外表面延伸。
227、i19.根据实施方案i12至i18中任一项所述的流体盒,其进一步包括至少一个凹槽,所述至少一个凹槽形成在所述护套的顶壁的顶表面中,其中所述至少一个凹槽延伸穿过所述通气孔。
228、i20.根据实施方案i19所述的流体盒,其进一步包括至少两个凹槽,所述至少两个凹槽形成在所述护套的顶表面中,其中所述至少两个凹槽通过所述通气孔彼此交叉。
229、i21.根据实施方案i1至i20中任一项所述的流体盒,其中所述室扩展器进一步包括从所述基部延伸的支柱,并且其中所述帽盖铰接地连接到所述支柱。
230、i22.根据实施方案i21所述的流体盒,其进一步包括从所述帽盖延伸的凸舌,并且其中所述帽盖通过活动铰链被连接到所述支柱,所述活动铰链将所述支柱的自由端连接到所述凸舌的自由端。
231、i23.根据实施方案i1至i22中任一项所述的流体盒,其中所述扩展池包括围绕其开口的倾斜表面。
232、i24.根据实施方案i1至i23中任一项所述的流体盒,其进一步包括用于执行细胞裂解的被布置在所述扩展池内的裂解囊状件,其中所述裂解囊状件包括:中空本体,所述中空本体具有开放式第一末端和开放式第二末端;被附装到所述本体的第一多孔膜,所述第一多孔膜覆盖所述开放式第一末端;被附装到所述本体的第二多孔膜,所述第二多孔膜覆盖所述开放式第二末端,其中所述中空本体限定所述第一多孔膜与所述第二多孔膜之间的裂解室;被包含在所述裂解室内的多个非磁性珠状件;以及被包含在所述裂解室内的至少一个磁性元件,其中所述第一多孔膜的和所述第二多孔膜的管孔的大小被设计为将所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件保留在所述裂解室内。
233、i25.根据实施方案i24所述的流体盒,其中所述裂解囊状件的扩展池和中空本体具有适形的三边形状。
234、i26.根据实施方案i1至i25中任一项所述的流体盒,其中所述室扩展器由透明的或半透明的材料组成。
235、i27.根据实施方案i1至i26中任一项所述的流体盒,其中所述室扩展器由聚丙烯组成。
236、i28.根据实施方案i1至i27中任一项所述的流体盒,其中所述盒本体由不透明材料组成。
237、i29.根据实施方案i1至i28中任一项所述的流体盒,其中所述盒本体由热塑性聚合物材料组成。
238、i30.根据实施方案i1至i29中任一项所述的流体盒,其中所述盒本体由环烯烃共聚物(coc)或环烯烃聚合物(cop)组成。
239、i31.根据实施方案i1至i30中任一项所述的流体盒,其中所述盒本体由选自以下的材料组成:聚碳酸酯、聚丙烯酰胺、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯(pmma)、聚二甲基硅氧烷(pdms)、聚氯乙烯(pvc)、和聚丙烯(pp)。
240、一些实施方案涵盖:
241、j1.在包括限定流体地连接或可流体地连接的两个或更多个池的盒本体的流体盒中,一种用于扩展所述两个或更多个池的扩展池的体积容量的方法,所述方法包括:通过将至少部分地围绕所述扩展池的第一联接结构联接到室扩展器的第二联接结构并且在所述室扩展器与所述盒本体之间形成气密密封来将所述室扩展器固定到所述盒本体,其中所述室扩展器包括:基部,其中所述第二联接结构位于所述基部的底侧上;从所述基部延伸的扩展室,其中所述扩展室将所述扩展池的体积容量扩展至少所述扩展室的体积容量;嘴部,所述嘴部限定进入到所述扩展室的内部空间的开口;以及帽盖,所述帽盖被配置为被联接到所述嘴部以闭合所述开口。
242、j2.根据实施方案j1所述的方法,其中所述第一联接结构包括第一周缘壁,所述第一周缘壁形成在所述盒本体中并且围绕所述扩展池,并且所述第二联接结构包括第二周缘壁,所述第二周缘壁在所述基部的底侧下方延伸并且被配置为适形所述第一周缘壁的内表面或外表面,并且其中将所述第一联接结构联接到所述第二联接结构包括将所述第二周缘壁附装到所述第一周缘壁的内表面或外表面。
243、j3.根据实施方案j2所述的方法,其中将所述第二周缘壁附装到所述第一周缘壁的内表面或外表面包括通过粘合剂或通过焊接将所述第二周缘壁固定到所述第一周缘壁的内表面或外表面。
244、j4.根据实施方案j1所述的方法,其中所述第一联接结构包括第一周缘壁,所述第一周缘壁形成在所述盒本体中并且围绕所述扩展池,并且所述第二联接结构包括第二周缘壁和第三周缘壁,所述第二周缘壁在所述基部的底侧下方延伸,所述第三周缘壁在所述基部的底侧下方延伸并且与所述第二周缘壁间隔开以在所述基部的底侧上形成周缘凹槽,并且其中将所述第一联接结构联接到所述第二联接结构包括将所述第一周缘壁插入所述第二周缘壁与所述第三周缘壁之间的所述周缘凹槽中,并且将所述第一周缘壁附装到所述第二周缘壁和所述第三周缘壁中的至少一个。
245、j5.根据实施方案j4所述的方法,其中将所述第一周缘壁附装到所述第二周缘壁和所述第三周缘壁中的至少一个包括通过粘合剂或通过焊接将所述第一周缘壁固定到所述第二周缘壁和所述第三周缘壁中的至少一个。
246、j6.根据实施方案j1至j5中任一项所述的方法,其中所述帽盖包括插入套筒和护套,所述护套比所述插入套筒更宽,并且其中所述方法包括通过将所述插入套筒插入由所述嘴部限定的所述开口中来将所述帽盖联接到所述嘴部。
247、j7.根据实施方案j1至j6中任一项所述的方法,其进一步包括:将一定量的液体物质分配到由所述嘴部限定的所述开口中,其中所述一定量的液体物质完全填充所述扩展池并且至少部分地填充所述扩展室的内部空间;以及将所述帽盖联接到所述开口以闭合所述开口。
248、j8.根据实施方案j1至j7中任一项所述的方法,其中所述扩展室和所述嘴部具有不同的形状。
249、j9.根据实施方案j8所述的方法,其中所述扩展室具有三条直边,并且所述嘴部具有圆形形状。
250、j10.根据实施方案j1至j9中任一项所述的方法,其中所述室扩展器进一步包括绕所述开口在所述嘴部的内表面中形成的周界倒角。
251、j11.根据实施方案j4所述的方法,其中所述第一周缘壁和所述周缘凹槽各自具有三个侧面。
252、j12.根据实施方案j11所述的方法,其中所述第一周缘壁具有通过圆角连接的三条直边,并且其中所述周缘凹槽具有通过圆角连接的三条直边。
253、j13.根据实施方案j1至j4中任一项所述的方法,其中所述帽盖包括:插入套筒,所述插入套筒被配置为被插入由所述嘴部限定的所述开口中;和护套,所述护套比所述插入套筒更宽并且包括基本上闭合所述插入套筒的一个末端的顶壁。
254、j14.根据实施方案j13所述的方法,其中所述插入套筒是中空的,并且所述护套包括通气孔,所述通气孔延伸通过所述护套的顶壁并且对所述插入套筒的内部空间开放,并且其中所述帽盖进一步包括通气膜,所述通气膜被布置在所述通气孔之上,其中所述通气膜被配置为准许气体通过但防止液体通过。
255、j15.根据实施方案j13或j14所述的方法,其中所述帽盖进一步包括径向肋,所述径向肋在所述护套的内表面与所述插入套筒的外表面之间延伸,其中将所述帽盖联接到所述嘴部以闭合所述开口包括将所述插入套筒插入所述开口中,直到所述径向肋接触围绕所述开口的所述嘴部的边缘。
256、j16.根据实施方案j15所述的方法,其中所述插入套筒通过摩擦配合被固定在由所述嘴部限定的所述开口内。
257、j17.根据实施方案j16所述的方法,其中所述帽盖包括周向肋,所述周向肋绕所述插入套筒的外表面延伸。
258、j18.根据实施方案j14至j17中任一项所述的方法,其进一步包括至少一个凹槽,所述至少一个凹槽形成在所述护套的顶壁的顶表面中,其中所述至少一个凹槽延伸通过所述通气孔。
259、j19.根据实施方案j18所述的方法,其进一步包括至少两个凹槽,所述至少两个凹槽形成在所述护套的顶表面中,其中所述至少两个凹槽通过所述通气孔彼此交叉。
260、j20.根据实施方案j1至j19中任一项所述的方法,其中所述室扩展器进一步包括从所述基部延伸的支柱,并且其中所述帽盖铰接地连接到所述支柱。
261、j21.根据实施方案j20所述的方法,其进一步包括从所述帽盖延伸的凸舌,并且其中所述帽盖通过活动铰链被连接到所述支柱,所述活动铰链将所述支柱的自由端连接到所述凸舌的自由端。
262、j22.根据实施方案j1至j21中任一项所述的方法,其中所述扩展池包括围绕其开口的倾斜表面。
263、j23.根据实施方案j1至j22中任一项所述的方法,其进一步包括在将所述室扩展器固定到所述盒本体之前,将裂解囊状件插入所述扩展池的池开口中,所述裂解囊状件包括:中空本体,所述中空本体具有开放式第一末端和开放式第二末端;第一多孔膜,所述的第一多孔膜被附装到所述中空本体并覆盖所述开放式第一末端;第二多孔膜,所述第二多孔膜被附装到所述中空本体并覆盖所述开放式第二末端,其中所述中空本体限定所述第一多孔膜与所述第二多孔膜之间的裂解室;以及多个珠状件,所述多个珠状件被包含在所述裂解室内。
264、j24.根据实施方案j23所述的方法,其中所述多个珠状件包括多个非磁性珠状件和至少一个磁性元件。
265、一些实施方案涵盖:
266、k1.一种制造流体盒的方法,所述方法包括:(a) 提供盒本体,所述盒本体包括两个或更多个池,所述两个或更多个池是流体地连接的或可流体地连接的;(b) 将裂解囊状件插入所述两个或更多个池中的第一池的池开口中,所述裂解囊状件包括裂解室和被包含在所述裂解室内的多个裂解珠状件;以及(c) 在所述第一池的池开口之上将室扩展器固定到所述盒本体,其中所述室扩展器包括:扩展室,所述扩展室将所述第一池的体积容量扩展至少所述扩展室的体积容量;嘴部,所述嘴部将所述扩展室开口限定到所述扩展室的内部空间中;以及帽盖,所述帽盖被配置为被联接到所述嘴部以闭合所述扩展室开口。
267、k2.根据实施方案k1所述的方法,其中(c) 包括通过以下方式将所述室扩展器固定到所述盒本体:将所述盒本体的至少部分地围绕所述第一池的第一联接结构联接到所述室扩展器的第二联接结构并且在所述室扩展器与所述盒本体之间形成气密密封。
268、k3.根据实施方案k2所述的方法,其中所述第一联接结构包括第一周缘壁,所述第一周缘壁形成在所述盒本体中并且围绕所述扩展池,并且所述第二联接结构包括第二周缘壁,所述第二周缘壁在所述室扩展器的基部的底侧下方延伸并且被配置为适形所述第一周缘壁的内表面或外表面,并且其中将所述第一联接结构联接到所述第二联接结构包括将所述第二周缘壁附装到所述第一周缘壁的内表面或外表面。
269、k4.根据实施方案k3所述的方法,其中将所述第二周缘壁附装到所述第一周缘壁的内表面或外表面包括通过粘合剂或通过焊接将所述第二周缘壁固定到所述第一周缘壁的内表面或外表面。
270、k5.根据实施方案k2所述的方法,其中所述第一联接结构包括第一周缘壁,所述第一周缘壁形成在所述盒本体上并且围绕所述第一池,并且所述第二联接结构包括第二周缘壁和第三周缘壁,所述第二周缘壁在所述室扩展器的基部的底侧下方延伸,所述第三周缘壁在所述基部的底侧下方延伸并且与所述第二周缘壁间隔开以在所述基部的底侧上形成周缘凹槽,并且其中将所述第一联接结构联接到所述第二联接结构包括将所述第一周缘壁插入所述第二周缘壁和所述第三周缘壁之间的所述周缘凹槽中,并且将所述第一周缘壁附装到所述第二周缘壁和所述第三周缘壁中的至少一个。
271、k6.根据实施方案k5所述的方法,其中将所述第一周缘壁附装到所述第二周缘壁和所述第三周缘壁中的至少一个包括通过粘合剂或通过焊接将所述第一周缘壁固定到所述第二周缘壁和所述第三周缘壁中的至少一个。
272、k7.根据实施方案k1至k6中任一项所述的方法,其进一步包括将试剂分配到所述两个或多个池中的除了所述第一池之外的一个或多个中的每一个中,并且密封试剂已经被分配到其中的每个池。
273、k8.根据实施方案k7所述的方法,其中至少一种试剂是非液体试剂。
274、k9.根据实施方案k1至k8中任一项所述的方法,其中所述裂解囊状件包括:中空本体,所述中空本体具有开放式第一末端和开放式第二末端;第一多孔膜,所述第一多孔膜被附装到所述中空本体并覆盖所述开放式第一末端;第二多孔膜,所述第二多孔膜被附装到所述中空本体并覆盖所述开放式第二末端,其中所述中空本体限定所述第一多孔膜与所述第二多孔膜之间的所述裂解室。
275、k10.根据实施方案k1至k9中任一项所述的方法,其中所述裂解珠状件包括被包含在所述裂解室内的多个非磁性珠状件;并且其中所述裂解囊状件包括被包含在所述裂解室内的至少一个磁性元件。
276、k11.根据实施方案k1至k10中任一项所述的方法,其进一步包括覆盖所述两个或更多个池中的除了所述第一池之外的至少一个的池开口,以在每个被覆盖的池中形成至少部分封闭的室。
277、k12.根据实施方案k1至k11中任一项所述的方法,其中所述帽盖包括插入套筒和护套,所述护套比所述插入套筒更宽,并且其中所述方法包括通过将所述插入套筒插入所述扩展室开口中将所述帽盖联接到所述嘴部。
278、k13.根据实施方案k1至k11中任一项所述的方法,其进一步包括:将一定量的液体物质分配到所述扩展室开口中,其中所述一定量的液体物质完全地填充所述第一池并且至少部分地填充所述扩展室的内部空间;以及将所述帽盖联接到嘴部以闭合所述开口。
279、k14.根据实施方案k1至k13中任一项所述的方法,其中所述扩展室和所述嘴部具有不同的形状。
280、k15.根据实施方案k14所述的方法,其中所述扩展室具有三条直边,并且所述嘴部具有圆形形状。
281、k16.根据实施方案k1至k15中任一项所述的方法,其中所述室扩展器进一步包括周界倒角,所述周界倒角形成在所述嘴部的内表面中并且绕所述扩展室开口延伸。
282、k17.根据实施方案k5所述的方法,其中所述第一周缘壁和所述周缘凹槽各自具有三个侧面。
283、k18.根据实施方案k17所述的方法,其中所述第一周缘壁具有通过圆角连接的三条直边,并且其中所述周缘凹槽具有通过圆角连接的三条直边。
284、k19.根据实施方案k12所述的方法,其中所述插入套筒是中空的,并且所述护套包括通气孔,所述通气孔延伸通过所述护套的顶壁并且对所述插入套筒的内部空间开放,其中所述帽盖进一步包括通气膜,所述通气膜被布置在所述通气孔之上,并且其中所述通气膜被配置为准许气体通过但防止液体通过。
285、k20.根据实施方案k19所述的方法,其中所述通气孔包括内通气孔部分和外通气孔部分,所述内通气孔部分形成在所述护套的顶壁的内表面上,所述外通气孔部分形成在所述护套的顶壁的外表面中,并且其中所述内通气孔部分的宽度不同于所述外通气孔部分的宽度。
286、k21.根据实施方案k20所述的方法,其中所述内通气孔部分的宽度小于所述外通气孔部分的宽度。
287、k22.根据实施方案k12和k19至k21中任一项所述的方法,其中所述帽盖进一步包括径向肋,所述径向肋在所述护套的内表面与所述插入套筒的外表面之间延伸,并且其中将所述帽盖联接到所述嘴部以闭合所述开口包括将所述插入套筒插入所述开口中,直到所述径向肋接触所述嘴部的围绕所述扩展室开口的边缘。
288、k23.根据实施方案k22的方法,其中所述插入套筒通过摩擦配合被固定在所述扩展室开口内。
289、k24.根据实施方案k23所述的方法,其中所述帽盖包括周向肋,所述周向肋绕所述插入套筒的外表面延伸。
290、k25.根据实施方案k19至k24中任一项所述的方法,其进一步包括至少一个凹槽,所述至少一个凹槽形成在所述护套的顶壁的顶表面中,其中所述至少一个凹槽延伸通过所述通气孔。
291、k26.根据实施方案k25所述的方法,其进一步包括至少两个凹槽,所述至少两个凹槽形成在所述护套的顶表面中,其中所述至少两个凹槽通过所述通气孔彼此交叉。
292、k27.根据实施方案k1至k26中任一项所述的方法,其中所述室扩展器进一步包括基部和从所述基部延伸的支柱,并且其中所述帽盖铰接地连接到所述支柱。
293、k28.根据实施方案k27所述的方法,其进一步包括从所述帽盖延伸的凸舌,其中所述帽盖通过活动铰链被连接到所述支柱,所述活动铰链将所述支柱的自由端连接到所述凸舌的自由端。
294、k29.根据实施方案k1至k28中任一项所述的方法,其中所述扩展池包括围绕其开口的倾斜表面。
295、一些实施方案涵盖:
296、l1.一种用于处理流体盒中的流体样品的方法,所述流体盒包括均匀高度的两个或更多个池和室扩展器,所述室扩展器相对于所述两个或更多个池中的一个被固定,以将所述一个池的体积容量扩展所述室扩展器的体积容量,其中所述两个或更多个池流体地连接或可流体地连接,并且其中所述方法包括:(a) 将一定量的所述流体样品分配到由所述室扩展器的嘴部限定的开口中,其中所述一定量的所述流体样品完全填充所述一个池并且至少部分地填充所述室扩展器的内部空间;以及(b) 将帽盖联接到所述室扩展器的嘴部以闭合所述开口。
297、l2.根据实施方案l1所述的方法,其进一步包括(c) 通过所述帽盖中的通气孔将空气从所述室扩展器的内部空间传递到外部环境。
298、l3.根据实施方案l2所述的方法,其中(c) 包括使空气经过多孔通气膜,所述多孔通气膜被附装到所述帽盖并覆盖所述通气孔,所述多孔通气膜对液体是不可渗透的。
299、l4.根据实施方案l1至l3中任一项所述的方法,其中通过将至少部分地围绕所述一个池的第一联接结构联接到所述室扩展器的第二联接结构并在所述室扩展器与所述一个池之间形成气密密封来固定所述室扩展器。
300、l5.根据实施方案l1至l4中任一项所述的方法,其中除了所述流体样品被分配到其中的所述一个池之外,所述两个或更多个池中的至少一个包含用于处理所述流体样品的试剂。
301、l6.根据实施方案l5所述的方法,其中所述试剂是非液体试剂。
302、l7.根据实施方案l1至l6中任一项所述的方法,其中所述帽盖包括插入套筒和护套,所述护套比所述插入套筒更宽,并且其中(b) 包括将所述插入套筒插入所述开口中。
303、l8.根据实施方案l7所述的方法,其中所述插入套筒通过摩擦配合被固定在所述开口内。
304、l9.根据实施方案l1至l8中任一项所述的方法,其中所述一个池包括裂解室,所述裂解室包括限定在其之间的裂解室的第一多孔膜和第二多孔膜以及被包含在所述裂解室内的多个珠状件。
305、l10.根据实施方案l9所述的方法,其进一步包括(d) 搅动所述裂解室内的所述多个珠状件以裂解被包含在所述流体样品内的细胞,进而从经裂解的细胞中释放核酸。
306、l11.根据实施方案l10所述的方法,其中所述多个珠状件包括多个非磁性珠状件和至少一个磁性元件,并且其中(d) 包括使所述至少一个磁性元件经受磁场,进而使所述至少一个磁性元件在所述裂解室内移动,所述至少一个磁性元件在所述裂解室内的所述移动使所述多个非磁性珠状件在所述裂解室内移动。
307、l12.根据实施方案l11所述的方法,其中所述磁场由电磁体产生。
308、l13.根据权利要求l12所述的方法,其包括交变到所述电磁体的电流以交变所述电磁体的极性。
309、l14.根据实施方案l13所述的方法,其包括以20赫兹至200赫兹的频率交变所述电流以交变所述电磁体的极性。
310、l15.根据实施方案l14所述的方法,其包括以两个或更多个不同频率脉冲所述电流以交变所述电磁体的极性。
311、l16.根据实施方案l10至l15中任一项所述的方法,其进一步包括(e) 将经释放的核酸从所述一个池输送到所述盒的处理室。
312、l17.根据实施方案l16所述的方法,其进一步包括(f) 在(e) 期间,将经裂解的细胞材料保留在所述裂解室内,同时允许所述经释放的核酸经过所述第二多孔膜。
313、l18.根据实施方案l17所述的方法,其进一步包括(g) 在(e) 期间搅动所述裂解室内的所述多个珠状件,进而使所述裂解室内的所述经裂解的细胞材料的至少一部分保持处于悬浮,至少直到所述流体样品已经从所述裂解室中移除。
314、l19.根据实施方案l17或l18所述的方法,其进一步包括(h) 将所述处理室中的所述经释放的核酸的至少一部分固定化在固体支撑件上,并将所述流体样品的未经固定化的组分移除到所述盒的废物室中。
315、l20.根据实施方案l19所述的方法,其进一步包括(i) 从所述固体支撑件洗脱经固定化的核酸并将洗脱后的核酸输送到所述盒的反应室。
316、l21.根据实施方案l20所述的方法,其进一步包括(j) 使所述洗脱后的核酸经受第一反应的条件,所述第一反应提供感兴趣的分析物的存在或量的指示。
317、l22.根据实施方案l21所述的方法,其进一步包括:(k) 将内部对照物释放到所述流体样品中,所述内部对照物被包含在所述裂解室内;(l) 将与所述内部对照物相关联的核酸(“ic核酸”)固定化在所述固体支撑件上;从所述固体支撑件洗脱所述ic核酸;(m) 将洗脱后的ic核酸输送至所述反应室;以及(n) 使所述ic核酸经受第二反应的条件,所述第二反应提供裂解程度的指示,其中所述内部对照物被提供来验证测定和/或被提供来验证(d) 期间细胞裂解的有效性。
318、l23.根据实施方案l22所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在被布置在所述第一多孔膜上是内部对照物试剂中,并且其中所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
319、l24.根据实施方案l22或l23所述的方法,其中所述内部对照物被包含在被布置在所述多个珠状件的至少一部分上的内部对照物试剂中,并且其中被布置在所述多个珠状件的至少一部分上的所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
320、l25.根据实施方案l22所述的方法,其中所述内部对照物被嵌入到或被包含在内部对照物丸粒中,所述内部对照物丸粒被包含在所述裂解室内,并且其中所述内部对照物丸粒被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解和/或在(d) 期间碎解。
321、l26.根据实施方案l22至l25中任一项所述的方法,其中所述第一反应的条件和所述第二反应的条件是相同的条件。
322、l27.根据实施方案l22至l26中任一项所述的方法,其中所述第一反应和所述第二反应中的每一个是核酸扩增反应。
323、l28.根据实施方案l27所述的方法,其中所述核酸扩增反应是聚合酶链式反应(“pcr”)。
324、一些实施方案涵盖:
325、m1.一种用于将裂解剂分配到流体盒的样品池中的珠状件递送帽盖,所述帽盖包括:帽盖本体,所述帽盖本体包括限定室的可变形壁;下套筒,所述下套筒位于所述可变形壁下方并且限定向所述室开放的凹部;易碎膜,所述易碎膜被附装到所述下套筒的开放式底端并封闭所述凹部和所述室;以及裂解剂,所述裂解剂包括多个非磁性珠状件和至少一个磁性元件,其中所述裂解剂被包含在所述室和所述凹部内以其量使得所述可变形壁的变形使所述裂解剂破裂所述易碎膜,进而将所述裂解剂从所述室和所述凹部中释放。
326、m2.根据实施方案m1所述的珠状件递送帽盖,其中所述下套筒包括绕所述下套筒的外表面延伸的至少一个密封肋。
327、m3.根据实施方案m1或m2所述的珠状件递送帽盖,其中所述下套筒具有圆柱形形状。
328、m4.根据实施方案m1至m3中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述帽盖本体包括侧向延伸构件,所述下套筒的上端被连接到所述侧向延伸构件,并且其中所述可变形壁从所述侧向延伸构件向上延伸。
329、m5.根据实施方案m1至m4中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中当不处于变形状态时,所述可变形壁是圆顶形的。
330、m6.根据实施方案m4或m5所述的珠状件递送帽盖,其进一步包括上周缘壁,所述上周缘壁与所述可变形壁间隔开并且从所述侧向延伸构件的外周界向上突出。
331、m7.根据实施方案m6所述的珠状件递送帽盖,其中所述上周缘壁的顶端位于所述可变形壁上方。
332、m8.根据实施方案m1至m7中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述帽盖本体是由聚合物材料构成的整体结构。
333、m9.根据实施方案m8所述的珠状件递送帽盖,其中所述聚合物材料是热塑性弹性体。
334、m10.根据实施方案m1至m9中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述易碎膜包括多孔薄膜。
335、m11.根据实施方案m1至m10中任一项所述的珠状件递送帽盖,其进一步包括覆盖所述易碎膜的外表面的可剥离覆盖薄膜。
336、m12.根据实施方案m1至m11中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述易碎膜包括一个或多个破裂线,所述一个或多个破裂线被配置为使所述易碎膜更容易破裂。
337、m13.根据实施方案m12所述的珠状件递送帽盖,其中所述一个或多个破裂线由具有c形或u形的单条线组成。
338、m14.根据实施方案m1至m13中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述至少一个磁性元件邻近所述可变形壁的内表面布置。
339、m15.根据实施方案m1至m14中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中,所述可变形壁包括通气孔,所述通气孔形成在所述可变形壁中并且与所述室流体连通。
340、m16.根据实施方案m15所述的珠状件递送帽盖,其进一步包括覆盖所述通气孔的多孔膜,所述多孔膜被附装到所述可变形壁的顶表面或底表面。
341、m17.根据实施方案m1至m16中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个由陶瓷或玻璃组成。
342、m18.根据实施方案m1至m17中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有球形形状。
343、m19.根据实施方案m18的珠状件递送帽盖,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有100 µm至2000 µm的直径。
344、m20.根据实施方案m1至m19中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述至少一个磁性元件用非磁性材料覆镀或包封。
345、m21.根据实施方案m20所述的珠状件递送帽盖,其中所述非磁性材料是金属或塑料。
346、m22.根据实施方案m1至m21中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述至少一个磁性元件比所述多个非磁性珠状件中的任何一个占据更大的体积。
347、m23.根据实施方案m1至m22中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述至少一个磁性元件具有立方体的形状。
348、m24.根据实施方案m23所述的珠状件递送帽盖,其中所述立方体的每个面的宽度为2.0毫米至4.3毫米。
349、m25.根据实施方案m1至m24中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述至少一个磁性元件由钕组成。
350、m26.根据实施方案m25所述的珠状件递送帽盖,其中所述钕是n52级或n42级。
351、m27.根据实施方案m1至m26中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中所述至少一个磁性元件和所述多个非磁性珠状件中的每一个是惰性的。
352、m28.根据实施方案m1至m27中任一项所述的珠状件递送帽盖,其中需要向所述可变形壁施加1.0磅至5.0磅的力以破裂所述易碎膜。
353、m29.根据实施方案m1至m28中任一项所述的珠状件递送帽盖,其进一步包括被包含在所述帽盖本体内的内部对照物,其中所述内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证用裂解剂执行的细胞裂解规程的有效性。
354、m30.根据实施方案m29所述的珠状件递送帽盖,其中所述内部对照物被包含在内部对照物试剂中,其中所述内部对照物试剂的至少一部分被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
355、m31.根据实施方案m29所述的珠状件递送帽盖,其中所述内部对照物被嵌入在或被包含在内部对照物丸粒中,所述内部对照物丸粒被适配成用于在由流体样品接触时溶解和/或在搅动所述多个磁性珠状件时碎解,所述内部对照物丸粒被包含在所述帽盖本体内。
356、一些实施方案涵盖:
357、n1.一种流体盒,包括:盒本体,所述盒本体包括样品室,所述样品室具有开放式顶端;以及被插入所述样品室的开放式顶端中的根据实施方案m1至m32中任一项所述的珠状件递送帽盖。
358、n2.根据实施方案n1所述的流体盒,其进一步包括与所述样品室连通的注射筒筒体,所述注射筒筒体被适配成用于接收注射筒止动件,所述注射筒止动件被连接到注射筒柱塞,以用于致动所述流体盒内的流体。
359、一些实施方案涵盖:
360、o1.一种用于裂解被包含在样品中的细胞的方法,所述方法包括:(a) 将所述样品提供给流体盒的样品室;(b) 将根据实施方案m1至m32中任一项所述的珠状件递送帽盖插入所述样品池中,使得(i) 所述下套筒的外表面与所述样品室的侧壁的内表面密封接合,并且(ii) 所述易碎膜位于所述样品室中的所述样品上方;(c) 向所述可变形壁施加力,进而使所述可变形壁变形到所述裂解剂破裂所述易碎膜并且从所述室和所述凹部中释放到所述样品室中的程度;以及(d) 使所述样品和所述裂解剂经受磁场,所述磁场使所述至少一个磁性元件搅动所述多个非磁性珠状件以裂解被包含在所述样品内的细胞。
361、o2.根据实施方案o1所述的方法,其中(c) 包括移动珠状件递送帽盖致动器以将所述力施加到所述可变形壁。
362、o3.根据实施方案o1所述的方法,其中(c) 包括将所述力手动地施加到所述可变形壁。
363、o4.根据实施方案o1至o3中任一项所述的方法,其中所述裂解剂占据所述室的和所述帽盖的凹部的体积的至少90%。
364、o5.根据实施方案o1至o4中任一项所述的方法,其中(a) 包括用移液器将样品提供给所述样品室。
365、o6.根据实施方案o1至o5中任一项所述的方法,其中(c) 包括向所述可变形壁施加1.0磅至5.0磅的力。
366、一些实施方案涵盖:
367、p1.一种用于裂解被包含在流体样品中的细胞的方法,所述方法包括:(a) 将所述流体样品提供给流体盒的样品室;(b) 将帽盖固定到所述样品室的开放式末端,所述帽盖包括可变形壁,所述可变形壁限定包含裂解剂并且由易碎膜封闭的室,所述裂解剂包括多个非磁性珠状件和至少一个磁性元件,并且所述至少一个磁性元件的大小大于所述多个非磁性珠状件中的任一个的大小;(c) 向所述可变形壁的顶端施加力,进而使所述室塌缩至被包含在所述室内的所述裂解剂破裂所述易碎膜的程度,进而将所述裂解剂从所述室中释放到所述样品室中;以及(d) 使所述流体样品和所述裂解剂经受磁场,所述磁场使所述至少一个磁性元件搅动所述多个非磁性珠状件以裂解被包含在所述流体样品内的细胞。
368、p2.根据实施方案p1所述的方法,其中当不处于变形状态时,所述可变形壁是圆顶形的。
369、p3.根据实施方案p1或p2所述的方法,其中所述帽盖是由聚合物材料组成的整体结构。
370、p4.根据实施方案p3所述的方法,其中所述聚合物材料是热塑性弹性体。
371、p5.根据实施方案p1至p4中任一项所述的方法,其中所述易碎膜包括多孔薄膜。
372、p6.根据实施方案p1至p5中任一项所述的方法,其进一步包括在(b) 之前从所述易碎膜的外表面去除可剥离覆盖薄膜。
373、p7.根据实施方案p1至p6中任一项所述的方法,其中所述易碎膜包括一条或多条破裂线,所述一条或多条破裂线被配置为使所述易碎膜更易于破裂。
374、p8.根据实施方案p7所述的方法,其中所述一条或多条破裂线由具有c形或u形的单条线组成。
375、p9.根据实施方案p1至p8中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件邻近所述可变形壁的内表面被布置。
376、p10.根据实施方案p1至p9中任一项所述的方法,其中所述可变形壁包括通气孔,所述通气孔形成在所述可变形壁中并且与所述室流体连通。
377、p11.根据实施方案p10所述的方法,其进一步包括覆盖所述通气孔的多孔膜,所述多孔膜被附装到所述可变形壁的顶表面或底表面。
378、p12.根据实施方案p1至p11中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个由陶瓷或玻璃组成。
379、p13.根据实施方案p1至p12中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有球形形状。
380、p14.根据实施方案p13所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有100 µm至2000 µm的直径。
381、p15.根据实施方案p1至p14中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件用非磁性材料覆镀或包封。
382、p16.根据实施方案p15所述的方法,其中所述非磁性材料是金属或塑料。
383、p17.根据实施方案p1至p16中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件比所述多个非磁性珠状件中的任何一个占据更大的体积。
384、p18.根据实施方案p1至p17中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件具有立方体的形状。
385、p19.根据实施方案p18所述的方法,其中所述立方体的每个面的宽度为2.0毫米至4.3毫米。
386、p20.根据实施方案p1至p19中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件由钕组成。
387、p21.根据实施方案p20所述的方法,其中所述钕是n52级或n42级。
388、p22.根据实施方案p1至p21中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个和所述至少一个磁性元件是惰性的。
389、p23.根据实施方案p1至p22中任一项所述的方法,其中(c) 包括向所述可变形壁施加1.0磅至5.0磅的力。
390、p24.根据实施方案p1至p23中任一项所述的方法,其进一步包括将内部对照物布置在所述室内,其中所述内部对照物被提供为验证在(d) 之后对所述流体样品进行的测定和/或被提供来验证(d) 裂解所述细胞的有效性。
391、p25.根据实施方案p24所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上,其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解。
392、p26.根据实施方案p24所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被嵌入到或被包含在内部对照物丸粒内,所述内部对照物丸粒被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解和/或在搅动所述多个磁性珠状件时碎解,所述内部对照物丸粒被包含在所述室中。
393、一些实施方案涵盖:
394、q1.一种用于裂解被包含在流体样品中的细胞的方法,所述方法包括:(a) 将电磁体安置在距微流体装置的样品室的预先确定的距离内,所述样品池包含所述流体样品和裂解剂,所述裂解剂包括多个非磁性珠状件和至少一个磁性元件;(b) 通过所述电磁体生成磁场,所述磁场以所述样品和被包含在所述样品室中的所述裂解剂为目标;以及(c) 反转所述磁场的极性,使所述至少一个磁性元件在所述样品室内以随机方式移动,以搅动所述多个非磁性珠状件以裂解被包含在所述流体样品内的细胞,使得核酸从经裂解的细胞中释放,其中所述电磁体与所述样品室在空间上分离开并保持静止,同时生成以所述流体样品和被包含在所述样品室内的所述裂解剂为目标的所述磁场。
395、q2.根据实施方案q1所述的方法,其中(c) 包括以60赫兹至200赫兹的预先确定的频率反转所述磁场的极性。
396、q3.根据实施方案q1所述的方法,其中(b) 包括以10伏特至50伏特的预先确定的电压驱动所述电磁体。
397、q4.根据实施方案q1所述的方法,其中(c) 包括用开关放大器反转所述磁场的极性来对所述电磁体进行充电。
398、q5.根据实施方案q1至q4中任一项所述的方法,其进一步包括在(a) 之前,(d) 将所述流体样品手动地或以机器人方式分配到所述样品室中,可选地其中用移液器执行(d),并且其中在(d) 之前所述样品室包含所述裂解剂。
399、q6.根据实施方案q5所述的方法,其进一步包括(e) 在(d) 之后并且在(b) 和(c)之前用帽盖覆盖所述样品室的开放式顶端。
400、q7.根据实施方案q1至q6中任一项所述的方法,其进一步包括:(f) 在(c) 之后,将所述流体样品的至少一部分从所述样品室输送到所述流体盒的处理室。
401、q8.根据实施方案q7所述的方法,其进一步包括:(g) 在(e) 期间,将来自(c) 的经裂解的细胞材料保留在所述样品室内,同时允许来自经裂解的细胞的经释放的核酸经过多孔膜。
402、q9.根据实施方案q8所述的方法,其进一步包括:(h) 在(g) 期间反转所述磁场的极性,进而使所述至少一个磁性元件在所述样品室内移动,所述至少一个磁性元件在所述样品室内的所述移动使所述多个非磁性珠状件在所述样品室内移动,并且所述多个非磁性珠状件在所述样品室内的所述移动使所述样品室内的所述经裂解的细胞材料的至少一部分保持处于悬浮,至少直到所述流体样品已经从所述样品室中移除。
403、q10.根据实施方案q8至q9中任一项所述的方法,其进一步包括:(i) 在所述处理室中,将所述经释放的核酸的至少一部分固定化在固体支撑件上,并且将所述流体样品的未经固定化的组分移除到所述微流体装置的废物室。
404、q11.根据实施方案q10所述的方法,其进一步包括:(j) 在(i) 之后,从所述固体支撑件洗脱经固定化的核酸并且将洗脱后的核酸输送到所述微流体装置的反应室。
405、q12.根据实施方案q11所述的方法,其进一步包括:(k) 在(j) 之后,使所述洗脱后的核酸经受第一反应的条件,所述第一反应提供感兴趣的分析物的存在或量的指示。
406、q13.根据实施方案q12所述的方法,其进一步包括:(l) 在(a) 期间或之后,将内部对照物释放到所述流体样品中,在(a) 之前所述内部对照物被包含在所述样品室内;(m)在(i) 期间将与所述内部对照物相关联的核酸(“ic核酸”)固定化在所述固体支撑件上;(n) 在(i) 之后,从所述固体支撑件洗脱所述ic核酸并将洗脱后的ic核酸输送到所述反应室;以及(o) 在(n) 之后,使所述ic核酸经受第二反应的条件,(o) 的结果被用来验证(k)的结果和/或被用来验证(c) 中裂解的有效性。
407、q14.根据实施方案q13所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,当(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述样品室的至少一部分上,并且其中在(a) 至(c) 中的任一项期间所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
408、q15.根据实施方案q13所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,当(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上,并且其中在(a) 至(c) 中的任一个期间,被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上的所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
409、q16.根据实施方案q13所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,当(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述样品室的内壁上,并且其中在(a) 至(c) 中的任一项期间所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
410、q17.根据实施方案q13所述的方法,其中所述内部对照物被嵌入在或被包含在内部对照物丸粒内,并且其中所述内部对照物丸粒在存在所述流体样品时溶解和/或在(c)期间通过所述多个非磁性珠状件的所述移动而碎解,进而将所述内部对照物释放到所述流体样品中。
411、q18.根据实施方案q13至q17中任一项所述的方法,其中所述第一反应的条件和所述第二反应的条件是相同的条件。
412、q19.根据实施方案q13至q18中任一项所述的方法,其中所述第一反应和所述第二反应中的每一个是核酸扩增反应。
413、q20.根据实施方案q19所述的方法,其中所述核酸扩增反应是聚合酶链式反应(“pcr”)。
414、一些实施方案涵盖:
415、r1.一种流体盒,包括:样品室,所述样品室具有开放式顶端和样品出口端口;以及在所述样品室内的裂解室,其中所述裂解室由所述样品室的内壁、被附装在所述样品室内的第一多孔膜限定,所述第一多孔膜与所述开放式顶端重叠;以及第二多孔膜,所述第二多孔膜与被附装在所述样品室内的所述第一多孔膜间隔开,所述第二多孔膜与所述样品出口端口重叠;被包含在所述裂解室内的多个非磁性珠状件;以及被包含在所述裂解室内的至少一个磁性元件,其中所述第一多孔膜的和所述第二多孔膜的管孔的大小被设计为将所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件保留在所述裂解室内。
416、r2.根据实施方案r1所述的流体盒,其中所述第一多孔膜和所述第二多孔膜中的至少一个包括网状件。
417、r3.根据实施方案r1所述的流体盒,其中所述第一多孔膜和所述第二多孔膜中的至少一个包括过滤基质。
418、r4.根据实施方案r1至r3中任一项所述的流体盒,其中所述第一多孔膜的孔隙度或孔隙度范围比所述第二多孔膜的孔隙度或孔隙度范围大。
419、r5.根据实施方案r4所述的流体盒,其中所述第一多孔膜具有70 µm至500 µm的孔隙度,并且其中所述第二多孔膜具有30 µm至100 µm的孔隙度。
420、r6.根据实施方案r1至r5中任一项所述的流体盒,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个由陶瓷或玻璃组成。
421、r7.根据实施方案r1至r6中任一项所述的流体盒,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有球形形状,并且其中所述多个非磁性珠状件中的每一个可选地具有100 µm至2000 µm的直径。
422、r8.根据实施方案r1至r7中任一项所述的流体盒,其中所述至少一个磁性元件用非磁性材料覆镀或包封。
423、r9.根据实施方案r1至r8中任一项所述的流体盒,其中所述至少一个磁性元件比所述多个非磁性珠状件中的任何一个占据更大的体积。
424、r10.根据实施方案r1至r9中任一项所述的流体盒,其中所述至少一个磁性元件具有立方体的形状,并且其中所述立方体的每个面可选地具有2.0毫米至4.3毫米的宽度。
425、r11.根据实施方案r1至r10中任一项所述的流体盒,其中所述至少一个磁性元件由钕组成,并且其中所述钕可选地为n52级或n42级。
426、r12.根据实施方案r1至r11中任一项所述的流体盒,其进一步包括被包含在所述裂解室内的内部对照物,其中所述内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证用所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件执行的细胞裂解规程的有效性。
427、r13.根据实施方案r12所述的流体盒,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述第一多孔膜和所述第二多孔膜中的至少一个上的,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
428、r14.根据实施方案r12所述的流体盒,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
429、r15.根据实施方案r12所述的流体盒,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被布置在所述样品室的内壁上的,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
430、r16.根据实施方案r12所述的流体盒,其中所述内部对照物的至少一部分被嵌入到或被包含在所述裂解室内包含的内部对照物丸粒中,并且其中所述内部对照物丸粒被适配成用于在由流体样品接触时溶解和/或被适配成用于在搅动所述多个磁性珠状件时碎解。
431、r17.根据实施方案r1至r16中任一项所述的流体盒,其进一步包括与所述样品室连通的注射筒筒体,所述注射筒筒体被适配成用于接收被连接到注射筒柱塞的注射筒止动件,以用于致动所述流体盒内的流体。
432、r18.根据实施方案r1至r17中任一项所述的流体盒,其中所述样品室由可移除密封件覆盖。
433、r19.根据实施方案r1至r18中任一项所述的流体盒,其进一步包括帽盖,所述帽盖被适配成用于被插入所述样品室的开放式顶端中。
434、r20.根据实施方案r1至r19中任一项所述的流体盒,其中所述第一多孔膜压配合在所述样品室的一部分内。
435、r21.根据实施方案r1至r19中任一项所述的流体盒,其中所述第一多孔膜被热密封在所述样品室的一部分内,并且可选地其中所述样品室包括具有能量导向器的第一侧向壁架,所述第一多孔膜被热密封在所述第一侧向壁架上。
436、r22.根据实施方案r1至r21中任一项所述的流体盒,其中所述第二多孔膜压配合在所述样品室的一部分内。
437、r23.根据实施方案r1至r21中任一项所述的流体盒,其中所述第二多孔膜被热密封在所述样品室的一部分内,并且可选地其中所述样品室包括具有能量导向器的第二侧向壁架,所述第二多孔膜被热密封在所述第二侧向壁架上。
438、一些实施方案涵盖:
439、s1.一种用于裂解被包含在流体样品中的细胞的方法,所述方法包括:(a) 将所述流体样品分配到根据实施方案r1所述的流体盒的样品室中,以用所述流体样品至少部分地填充所述裂解室;(b) 在(a) 之后,用帽盖覆盖所述样品室的开放式顶端;以及(c) 在(b)之后,使所述至少一个磁性元件经受磁场,进而使所述至少一个磁性元件在所述裂解室内移动,所述至少一个磁性元件在所述裂解室内的所述移动使所述多个非磁性珠状件在所述裂解室内移动,并且所述非磁性珠状件在所述裂解室内的所述移动使被包含在所述裂解室内的所述流体样品内的细胞裂解并释放核酸。
440、s2.根据实施方案s1所述的方法,其进一步包括(d) 在(c) 之前,使所述流体样品与内部对照物接触,所述内部对照物被布置在所述样品室内并且可选地被布置在所述裂解室内,其中所述内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证(c) 在使被包含在所述裂解室内的所述流体样品内的细胞裂解和释放核酸方面的有效性。
441、s3.根据实施方案s2所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂内,所述内部对照物试剂被布置在所述样品室内并且可选地被布置在所述裂解室内。
442、s4.根据实施方案s3所述的方法,其中所述内部对照物试剂的至少一部分被布置在所述第一多孔膜和所述第二多孔膜中的至少一个上,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解。
443、s5.根据实施方案s3所述的方法,其中所述内部对照物试剂的至少一部分被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解。
444、s6.根据实施方案s3所述的方法,其中所述内部对照物试剂的至少一部分被布置在所述样品室的内壁上,并且其中所述内部对照物试剂被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解。
445、s7.根据实施方案s2所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被嵌入在或被包含在内部对照物丸粒中,所述内部对照物丸粒被适配成用于在由所述流体样品接触时溶解和/或被适配成用于在(c) 期间碎解。
446、s8.根据实施方案s1至s7中任一项所述的方法,其中所述流体盒包括与所述样品室连通的注射筒筒体,所述注射筒筒体被适配成用于接收被连接到注射筒柱塞的注射筒止动件,以用于致动所述流体盒内的流体。
447、s11.根据实施方案s1至s8中任一项所述的方法,其进一步包括用可移除密封件覆盖所述样品室。
448、s10.根据实施方案s1至s9中任一项所述的方法,其进一步包括将帽盖插入所述样品室的开放式顶端中。
449、s11.根据实施方案s1至s10中任一项所述的方法,其包括将所述第一多孔膜压配合在所述样品室的一部分内。
450、s12.根据实施方案s1至s10中任一项所述的方法,其包括将所述第一多孔膜热密封在所述样品室的一部分内,并且可选地其中所述样品室包括具有能量导向器的第一侧向壁架,所述第一多孔膜被热密封在所述第一侧向壁架上。
451、s13.根据实施方案s1至s12中任一项所述的方法,其包括将所述第二多孔膜压配合在所述样品室的一部分内。
452、s14.根据实施方案s1至s12中任一项所述的方法,其包括将所述第二多孔膜热密封在所述样品室的一部分内,并且可选地其中所述样品室包括具有能量导向器的第二侧向壁架,所述第二多孔膜被热密封在所述第二侧向壁架上。
453、s15.根据实施方案s1至s14中任一项所述的方法,其中在(c) 期间所述磁场由电磁体产生。
454、s16.根据实施方案s15所述的方法,其中(c) 包括交变到所述电磁体的电流以交变所述电磁体的极性。
455、s17.根据实施方案s16所述的方法,其中(c) 包括以20赫兹至200赫兹的频率交变所述电流以交变所述电磁体的极性。
456、s18.根据实施方案s17所述的方法,其中(c) 包括以两个或更多个不同频率脉冲所述电流以交变所述电磁体的场极性。
457、s19.根据实施方案s1至s18中任一项所述的方法,其进一步包括:(e) 在(c) 之后,将所述流体样品的至少一部分从所述样品室输送到所述流体盒的处理室。
458、s20.根据实施方案s19所述的方法,其进一步包括:(f) 在(e) 期间,将经裂解的细胞材料保留在所述裂解室内,同时允许所述经释放的核酸经过所述第二多孔膜。
459、s21.根据实施方案s20所述的方法,其进一步包括:(g) 在(e) 期间,使所述至少一个磁性元件经受所述磁场,从而使所述至少一个磁性元件在所述裂解室内移动,所述至少一个磁性元件在所述裂解室内的所述移动使所述多个非磁性珠状件在所述裂解室内移动,并且所述非磁性珠状件在所述裂解室内的所述移动使所述裂解室内的所述经裂解的细胞材料的至少一部分保持处于悬浮,直到所述流体样品从所述裂解室中移除。
460、s22.根据实施方案s19至s21中任一项所述的方法,其进一步包括:(h) 在所述处理室中,将所述经释放的核酸的至少一部分固定化在固体支撑件上,并且将所述流体样品的未经固定化的组分移除到所述流体盒的废物室。
461、s23.根据实施方案s22所述的方法,其进一步包括:(i) 在(h) 之后,从所述固体支撑件洗脱经固定化的核酸并将洗脱后的核酸输送到所述流体盒的反应室。
462、s24.根据实施方案s23所述的方法,其进一步包括:(j) 在(i) 之后,使所述洗脱后的核酸经受反应的条件,所述反应提供感兴趣分析物的存在或量的指示。
463、s25.根据实施方案s24所述的方法,其中所述反应是核酸扩增反应,并且可选地其中所述核酸扩增反应是聚合酶链式反应(“pcr”)。
464、一些实施方案涵盖:
465、t1.一种制造流体盒的方法,所述方法包括:(a) 提供盒本体,所述盒本体包括样品室和一个或多个室,所述样品室具有开放式第一末端和在所述样品室的第二末端处的样品出口端口,所述一个或多个室与所述样品室流体地连接或可与所述样品室流体地连接;(b) 提供第一多孔膜和第二多孔膜并将所述第二多孔膜附装在所述样品室内,所述第二多孔膜覆盖所述样品出口端口;(c) 通过所述样品室的开放式第一末端将多个非磁性珠状件引入所述样品室中;(d) 通过所述样品室的开放式第一末端将至少一个磁性元件引入所述样品室中;以及(e) 在(c) 和(d) 之后,将所述第一多孔膜附装在所述样品室内,所述第一多孔膜与所述样品室的开放式第一末端重叠,其中所述样品室的内壁和所附装的第一多孔膜和第二多孔膜限定裂解室,并且其中所述第一多孔膜的和所述第二多孔膜的管孔的大小被设计为将所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件保留在所述裂解室内。
466、t2.根据实施方案t1所述的方法,其中所述第一多孔膜包括网状件或过滤基质。
467、t3.根据实施方案t1或t2所述的方法,其中所述第二多孔膜包括网状件或过滤基质。
468、t4.根据实施方案t1至t3中任一项所述的方法,其中所述第一多孔膜是亲水性的。
469、t5.根据实施方案t1至t4中任一项所述的方法,其中所述第一多孔膜的孔隙度或孔隙度范围比所述第二多孔膜的孔隙度或孔隙度范围大。
470、t6.根据实施方案t5所述的方法,其中所述第一多孔膜具有70 µm至500 µm的孔隙度,并且所述第二多孔膜具有30 µm至100 µm的孔隙度。
471、t7.根据实施方案t1至t6中任一项所述的方法,其中所述第一多孔膜被压配合到所述样品室中。
472、t8.根据实施方案t1至t6中任一项所述的方法,其中所述第一多孔膜被热密封在所述样品室内。
473、t9.根据实施方案t1至t8中任一项所述的方法,其中所述第二多孔膜被压配合到所述样品室中。
474、t10.根据实施方案t1至t8中任一项所述的方法,其中所述第二多孔膜被热密封在所述样品室内。
475、t11.根据实施方案t1至t10中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个由陶瓷或玻璃组成。
476、t12.根据实施方案t1至t11中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个具有球形形状,并且其中所述多个非磁性珠状件中的每一个可选地具有100 µm至2000 µm的直径。
477、t13.根据实施方案t1至t12中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件用非磁性材料覆镀或包封。
478、t14.根据实施方案t1至t13中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件比所述多个非磁性珠状件中的任何一个占据更大的体积。
479、t15.根据实施方案t1至t14中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件具有立方体的形状,并且其中所述立方体的每个面的宽度可选地为2.0毫米至4.3毫米。
480、t16.根据实施方案t1至t15中任一项所述的方法,其中所述至少一个磁性元件由钕组成,并且其中所述钕可选地为n52级或n42级。
481、t17.根据实施方案t1至t16中任一项所述的方法,其中所述多个非磁性珠状件中的每一个和所述至少一个磁性元件是惰性的。
482、t18.根据实施方案t1至t18中任一项的方法,其进一步包括将内部对照物布置到所述裂解囊状件的部件上,其中所述内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证用所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件执行的细胞裂解规程的有效性。
483、t19.根据实施方案t18所述的方法,其包括在(c) 之前或在(c) 之后将所述内部对照物的至少一部分件布置到所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述磁性元件上,其中所述内部对照物被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
484、t20.根据实施方案t18所述的方法,其包括将所述内部对照物布置到以下中的至少一个上:(i) 所述第一多孔膜、(ii) 所述第二多孔膜、(iii) 所述样品室的内壁、(iv)所述多个非磁性珠状件的至少一部分、和(v) 在(e) 之前的所述至少一个磁性元件,其中所述内部对照物被包含在内部对照物试剂中,所述内部对照物试剂被适配成用于在由流体样品接触时溶解。
485、t21.根据实施方案t18至t20中任一项所述的方法,其中布置所述内部对照物包括布置液体形式的所述内部对照物试剂,并且在已经布置所述内部对照物试剂之后干燥所述内部对照物试剂。
486、t22.根据实施方案t1至t17中任一项所述的方法,其中内部对照物被嵌入到或被包含在内部对照物丸粒中,所述内部对照物丸粒被适配成用于在由流体样品接触时溶解和/或被适配成用于当在所述裂解室中搅动所述多个磁性珠状件时碎解,并且其中在(e)之前将所述内部对照物丸粒布置在所述裂解室内。
487、t23.根据实施方案t18至t22中任一项所述的方法,其中所述内部对照物是整个生物体、质粒或核酸转录物。
488、一些实施方案涵盖:
489、u1.一种用于对流体样品执行细胞裂解的方法,所述方法包括:(a) 将所述流体样品分配到裂解室中,其中所述裂解室包括侧壁、第一多孔膜、与所述第一多孔膜间隔开的第二多孔膜、多个非磁性珠状件和至少一个磁性元件,所述多个非磁性珠状件被包含在所述第一多孔膜与所述第二多孔膜之间的空间内,所述至少一个磁性元件被包含在所述空间内,其中所述第一多孔膜的和所述第二多孔膜的管孔的大小被设计为将所述多个非磁性珠状件和所述至少一个磁性元件保留在所述空间内,并且其中所述流体样品通过所述第一多孔膜被分配到所述裂解室中;以及(b) 使所述至少一个磁性元件经受变化极性的变化磁场,以在所述磁性元件寻求与所述变化磁场的变化极性重新对准时使所述磁性元件移动,其中所述磁性元件的所述移动赋予所述多个非磁性珠状件运动以实现被包含在所述裂解室内的所述流体样品中存在的细胞的机械裂解(“细胞裂解”)。
490、u2.根据实施方案u1所述的方法,其中所述变化磁场由电磁体产生。
491、u3.根据实施方案u2所述的方法,其中(b) 包括交变到所述电磁体的电流以交变所述电磁体的极性。
492、u4.根据实施方案u3所述的方法,其中(b) 包括以20赫兹至200赫兹的频率交变所述电流以交变所述电磁体的极性。
493、u5.根据实施方案u4所述的方法,其中(b) 包括以两个或更多个不同频率脉冲所述电流以交变所述电磁体的极性。
494、u6.根据实施方案u1至u5中任一项所述的方法,其进一步包括:(c) 在(b) 之后,将所述流体样品的至少一部分从所述裂解室输送到处理室,所述处理室被流体地连接到所述裂解室或可与所述裂解室连接,其中从所述裂解室输送的所述流体样品的所述部分经过所述第二多孔膜。
495、u7.根据实施方案u6所述的方法,其进一步包括:(d) 在(c) 期间,将经裂解的细胞材料保留在所述裂解室内,同时允许经释放的核酸经过所述第二多孔膜。
496、u8.根据实施方案u7所述的方法,其进一步包括:(e) 在(d) 期间,使所述至少一个磁性元件经受变化极性的变化磁场以使所述磁性元件在所述裂解室内移动,所述至少一个磁性元件在所述裂解室内的所述移动赋予所述多个非磁性珠状件的移动,并且所述多个非磁性珠状件在所述裂解囊状件的裂解室内的所述移动使所述裂解室内的所述经裂解的细胞材料的至少一部分保持处于悬浮,至少直到所述流体样品已经从所述裂解室中移除。
497、u9.根据实施方案u7或u8所述的方法,其进一步包括:(f) 在所述处理室中,将所述经释放的核酸的至少一部分固定化在固体支撑件上,并且将所述流体样品的未经固定化的组分从所述处理室中移除。
498、u10.根据实施方案u9所述的方法,其进一步包括:(g) 在(h) 之后,从所述固体支撑件洗脱经固定化的核酸并将洗脱后的核酸输送到所述流体盒的反应室。
499、u12.根据实施方案u11所述的方法,其进一步包括:(i) 在(a) 期间或之后,将内部对照物释放到所述流体样品中;(j) 在(f) 期间,将与所述内部对照物相关联的核酸(“ic核酸”)固定化在所述固体支撑件上;(k) 在(f) 之后,从所述固体支撑件洗脱所述ic核酸并将洗脱后的ic核酸输送到所述反应室;以及(l) 在(k) 之后,使所述ic核酸经受第二反应的条件,(l) 的结果被用来验证(h) 的结果和/或被用来验证(b) 中的所述细胞裂解的有效性。
500、u13.根据实施方案u12所述的方法, 其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,当(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述第一多孔膜和所述第二多孔膜中的至少一个上,并且其中在(a) 和(c) 中的任一个期间,所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
501、u14.根据实施方案u12所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,当(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上,并且其中在(a) 和(b) 中的任一个期间,被布置在所述多个非磁性珠状件的至少一部分和/或所述至少一个磁性元件上的所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
502、u15.根据实施方案u12所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被包含在内部对照物试剂中,当(a) 被启动时,所述内部对照物试剂被布置在所述裂解室的侧壁上,并且其中在(a) 和(b) 中的任一个期间所述内部对照物试剂溶解在所述流体样品中。
503、u16.根据实施方案u12所述的方法,其中所述内部对照物的至少一部分被嵌入在或被包含在内部对照物丸粒内,并且其中所述内部对照物丸粒在存在所述流体样品时溶解和/或在(c) 期间通过所述多个非磁性珠状件的所述移动而碎解,进而将所述内部对照物释放到所述流体样品中。
504、u17.根据实施方案u12至u16中任一项所述的方法,其中所述第一反应的条件和所述第二反应的条件是相同的条件。
505、u18.根据实施方案u12至u17中任一项所述的方法,其中所述第一反应和所述第二反应中的每一个是核酸扩增反应。
506、u19.根据实施方案u18所述的方法,其中所述核酸扩增反应是聚合酶链式反应(“pcr”)。
507、一些实施方案涵盖:继续
508、v1.一种丸粒,所述丸粒包含用于在核酸扩增反应中使用的内部对照物,其中所述内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证细胞裂解规程的有效性,并且其中所述丸粒被适配成用于在经受细胞破裂所需的碰撞力时被破坏,以进而释放所述内部对照物。
509、v2.根据实施方案v1所述的丸粒,其中所述内部对照物丸粒包括:芯,所述芯包括赋形剂,所述内部对照物被嵌入在所述赋形剂内;以及涂层,所述涂层围绕所述芯并且被适配成用于被机械裂解剪切力破坏,所述机械破解剪切力由所述多个非磁性珠状件在所述接受器内的移动所施加,其中所述赋形剂被适配成用于在所述涂层被破坏后暴露于流体时至少部分地溶解。
510、v3.根据实施方案v2所述的丸粒,其中所述赋形剂包括微晶纤维素和羟丙基纤维素中的至少一个,并且其中所述涂层包括纤维素衍生物。
511、v4.根据实施方案v1至v3中任一项所述的丸粒,其中所述内部对照物是整个生物体、质粒或核酸转录物。
512、一些实施方案涵盖:
513、w1.一种利用其执行细胞裂解的装置,所述装置包括:流体接受器;所述接受器内的多个非磁性珠状件和至少一个磁性元件;和内部对照物,所述内部对照物被布置在位于所述接受器内的丸粒内,其中所述丸粒被适配成用于在经受由所述接受器内的所述多个非磁性珠状件的移动所施加的力时被破坏,以进而从所述丸粒中释放所述内部对照物,并且其中所述内部对照物被提供来验证测定结果和/或被提供来验证所述接受器内的细胞裂解规程的有效性。
514、w2.根据权利要求w1所述的装置,其包括被布置在通过所述接受器的流路径中的至少一个多孔膜。
515、x3.根据实施方案x1或x2所述的装置,其中所述内部对照物丸粒包括:芯,所述芯包括赋形剂,所述内部对照物被嵌入在所述赋形剂内;以及涂层,所述涂层围绕所述芯并且被适配成用于被机械裂解剪切力破坏,所述机械破解剪切力由所述多个非磁性珠状件在所述接受器内的移动所施加,其中所述赋形剂被适配成用于在所述涂层被破坏后暴露于流体时至少部分地溶解。
516、w4.根据实施方案w3所述的装置,其中所述赋形剂包括微晶纤维素和羟丙基纤维素中的至少一个,并且其中所述涂层包括纤维素衍生物。
517、w5.根据实施方案w1至w4中任一项所述的装置,其中所述内部对照物是整个生物体、质粒或核酸转录物。
518、在考虑参考附图的以下描述和所附权利要求时,本公开文本的主题的其他特征和特性,以及操作的方法、结构的相关元件的功能和部件的组合、以及制造的经济状况将变得更加明显,所有附图形成本说明书的一部分,其中相同的附图标记指定各个附图中的对应部分。
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