青蒿纳米囊泡在制备治疗雄激素性脱发的药物中的应用

本发明涉及生物医药，更具体地，涉及青蒿纳米囊泡在制备治疗雄激素性脱发的药物中的应用。

背景技术：

1、雄激素性脱发（androgenetic alopecia，aga）是临床最常见的进行性脱发类型之一，以发病率高、病程迁延和逐步加重为主要特征，可显著影响患者的外观形象、自我认知、社交功能及整体生活质量。现有研究与诊疗指南明确指出，aga的核心病理基础包括雄激素依赖性毛囊微小化、毛囊周期异常（生长期缩短、退行期提前）以及毛囊局部微环境改变，最终表现为终毛逐渐向毳毛转化、毛发密度进行性下降。除遗传与雄激素因素外，毛囊周围炎症浸润、氧化应激及纤维化重塑等亦被认为是aga持续进展的重要促进因素。在上述微环境异常中，转化生长因子-β（transforming growth factor-β，tgf-β）信号通路发挥了尤为关键的作用——多项研究表明，tgf-β可诱导毛囊退行期启动、促进毛囊上皮细胞凋亡并参与毛囊周围纤维化重塑，在aga患者脱发区域毛囊中呈现明显上调；因此，针对tgf-β异常激活及其下游通路进行靶向干预，具有明确的病理生理学依据。

2、目前，aga的标准治疗主要包括外用米诺地尔和口服非那雄胺，两者均被国内外指南列为核心基础治疗方案，其中，中国《雄激素性秃发诊疗指南（2023版）》也明确推荐。然而，现有方案在临床实践中仍存在明显局限：①非那雄胺通常需连续治疗数月方可观察到较为明确的疗效，停药后脱发往往继续进展，且部分患者对其潜在性功能相关不良反应存有顾虑。②米诺地尔虽使用广泛，但其促毛发生长机制尚未完全阐明，需长期坚持局部使用，起效相对较慢，部分患者亦存在局部刺激或依从性欠佳等问题。总体而言，现有方案仍面临疗效个体差异明显、长期维持困难及作用机制局限等挑战，临床上迫切需要探索兼具新型作用机制与良好局部应用前景的干预策略。

3、植物源细胞外囊泡（plant-derived extracellular vesicles，pevs）是由植物细胞主动分泌的纳米级膜结构囊泡，直径范围30~500纳米，具有脂质双分子层结构，内含蛋白质、核酸及植物特异性代谢物等活性成分。其通过外泌体、微囊泡和凋亡小体等形式分泌，广泛存在于植物根、茎、叶等组织及分泌物中。pevs已应用于医药健康（如药物载体、疾病辅助治疗）、功能食品（天然保鲜与活性添加）、化妆品（功效成分递送与皮肤护理）及农业（抗逆调控、生长促进）等领域，为相关领域的研究与应用提供了新的可能性。不同植物pevs由于携带独特的生物活性分子，会导致功能分化，pevs功能分化的核心在于其内容物组成的特异性（例如mirna差异、代谢物差异、膜蛋白差异等），因此不同来源的pevs因携带特异性生物活性分子而表现出独特的治疗潜力。例如，西兰花来源的pevs在研究中显示出调节肠道菌群、改善代谢综合征的作用；绿茶来源的pevs可作为天然保鲜剂，延长草莓的货架期。此外，螺旋藻来源的pevs被探索用于骨关节炎，紫背天葵来源的pevs用于皮肤修复，苜蓿来源的pevs则用于提升小麦的抗旱性。

4、青蒿纳米囊泡是以菊科蒿属植物黄花蒿（artemisia annua l.） 的新鲜地上部分为原料提取的天然纳米级囊泡。该囊泡兼具新型药物载体与活性成分的双重属性，因其优异的生物相容性和极低的细胞毒性，在生物医学领域（如药物递送、抗炎及抗肿瘤治疗）中展现出广阔的应用前景。例如中国专利申请cn121891285a公开了其用于皮肤保湿、屏障修护及舒缓抗；wang等公开青蒿来源细胞外囊泡通过调控nf-κb/pparγ通路，抑制乳腺癌生长且无系统毒性（wang, y., meng, l., su, s. et al. artemisia annua-derivedextracellular vesicles reprogram breast tumor immune microenvironment viaaltering macrophage polarization and synergizing recruitment of tlymphocytes. chin med 20, 149 (2025). https://doi.org/10.1186/s13020-025-01210-1）；ye l等公开了青蒿源性的纳米囊泡治疗急性肺损伤和病毒性肺炎（ye l, gaoy, mok swf, liao w, wang y, chen c, yang l, zhang j, shi l. modulation ofalveolar macrophage and mitochondrial fitness by medicinal plant-derivednanovesicles to mitigate acute lung injury and viral pneumonia. jnanobiotechnology. 2024 apr 18;22(1):190. doi: 10.1186/s12951-024-02473-w.）。然而目前关于青蒿纳米囊泡在aga中的作用，还未见相关报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供青蒿纳米囊泡在制备治疗雄激素性脱发的药物中的应用。

2、本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

3、本发明研究显示，青蒿纳米囊泡可显著促进人毛乳头细胞（hhdpc）增殖，并在双氢睾酮（dht）诱导的微环境损伤中发挥保护作用，可显著抑制dht诱导的人毛乳头细胞中tgf-β异常表达，并可改善dht导致的细胞活性下降、促进细胞增殖，同时降低ros水平、改善线粒体膜电位下降，提示其具有明确的细胞保护作用。考虑到aga病变主要位于头皮毛囊及其周围微环境，而传统外用制剂受皮肤屏障限制，局部递送效率有限。本发明进一步采用微针递送策略，以提高青蒿活性提取物在头皮局部尤其是毛囊区域的渗透与富集。动物实验结果表明，青蒿活性提取物微针可显著改善aga模型小鼠脱发表型，促进毛发再生，增加生长期毛囊数量，改善毛囊微型化，并降低升高的血清睾酮和二氢睾酮水平，且未见明显体内毒性。上述结果表明，青蒿纳米囊泡可通过抑制tgf-β相关异常信号、缓解氧化应激、改善线粒体功能并增强局部有效递送，发挥延缓毛囊微小化和促进毛发生长的作用，可用于aga的有效治疗。

4、因此，本发明首先提供青蒿纳米囊泡在制备治疗雄激素性脱发的药物中的应用。

5、优选地，所述药物为经皮给药制剂。

6、本发明还提供负载青蒿纳米囊泡的可溶性微针在制备治疗雄激素性脱发的药物中的应用。

7、具体地，所述药物通过促进毛发再生，增加生长期毛囊数量，改善毛囊微型化从而发挥治疗作用。

8、进一步地，所述青蒿纳米囊泡的粒径为160～165 nm，zeta电位为-18~-20mv。

9、进一步地，所述青蒿纳米囊泡为采用差速离心法制备得到。

10、优选地，所述差速离心法制备包括如下步骤：将新鲜青蒿全草清洗、切碎，加水混匀、破碎，制成匀浆并过滤，梯度离心分离，重悬，0.20～0.25μm（优选0.22μm）滤膜过膜挤压，即得；所述梯度离心为依次按照3000~5000rpm离心25~35min（优选4000rpm离心30min），11000~13000rpm离心25~35min（优选12000rpm离心30min），30000~50000g离心55~65min（优选40000g离心60min），取其上清液140000~160000g离心85~95min（优选150000g离心90min），弃上清液。

11、进一步地，青蒿与水的质量比为1：4～6。

12、本发明以青蒿为提取对象，将青蒿预处理后，先低速离心除去杂质，再高速离心分离外泌体（即梯度离心分离），然后滤膜过膜挤压；通过控制梯度离心分离的转速、时间及滤膜的孔径，可以制备得到青蒿纳米囊泡。

13、进一步地，所述可溶性微针为甲基丙烯酰化明胶（gelma）可溶性微针。

14、优选地，负载青蒿纳米囊泡的甲基丙烯酰化明胶可溶性微针的制备方法为将青蒿纳米囊泡的悬液与甲基丙烯酰化明胶溶液混合，加入光引发剂，充分混匀，获得负载纳米囊泡的甲基丙烯酰化明胶预聚物溶液；将预聚物溶液注入微针模具中，进行光固化交联，即得。

15、优选地，所述光引发剂为2-羟基-4'-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮。

16、优选地，所述青蒿纳米囊泡与甲基丙烯酰化明胶的质量比为1:100~300（优选1:200）。

17、优选地，所述gelma的制备方法，包括以下步骤：将明胶（gelatin）溶解于磷酸盐缓冲液中，加热至50~60℃搅拌至完全溶解，配制成一定浓度（如5%~15% w/v）的明胶溶液。向明胶溶液中逐滴加入甲基丙烯酸酐（methacrylic anhydride），在50~60℃条件下搅拌反应1~3小时，使明胶分子链上的氨基与甲基丙烯酸酐发生酰胺化反应，得到甲基丙烯酰化明胶。将反应液转移至透析袋中，用去离子水或磷酸盐缓冲液透析一周，去除未反应的甲基丙烯酸酐及其他小分子杂质。将透析后的gelma溶液冷冻干燥，获得gelma干粉，于-20℃保存备用。

18、制备的甲基丙烯酰化明胶（gelma）基质材料安全性良好，对人毛乳头细胞无明显细胞毒性。负载该纳米囊泡的gelma可溶性微针整体安全性可靠；在雄激素性脱发（aga）模型小鼠中，该微针系统能够显著促进毛发生长，并通过抗炎、抗氧化双重机制有效逆转毛囊小型化进程，实现理想的毛发再生效果。另外，gelma可溶性微针具有1）高效经皮递送：采用gelma可溶性微针作为递送载体，通过物理穿刺作用突破皮肤屏障，将纳米囊泡高效递送至毛囊周围靶组织，解决了传统外用制剂透皮吸收率低的难题。2）缓释长效：利用gelma水凝胶的可降解特性，实现纳米囊泡在皮内的缓慢释放，延长了药物的作用时间，减少了给药频率，提高了患者依从性。

19、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

20、本发明提供了青蒿纳米囊泡在制备治疗雄激素性脱发的药物中的应用。本发明首次将青蒿纳米囊泡用于雄激素性脱发的治疗，青蒿纳米囊泡可有效抑制毛囊微环境中tgf-β信号通路异常激活的问题，并可实现兼具抗炎、抗氧化和促血管新生功能的多靶点治疗以克服现有单一作用机制药物无法同时解决毛囊微环境中氧化应激、炎症反应和血管供应不足等多重病理因素的问题，最终通过促进毛发再生，增加生长期毛囊数量，改善毛囊微型化从而发挥作用，从根源上阻断毛囊小型化的病理进程，而非仅仅改善症状。本发明为雄激素性脱发提供了一种安全、高效、微创的治疗新策略，具有广阔的临床应用前景。