预测利妥昔单抗治疗儿童原发性免疫性血小板减少症疗效的标志物及系统

本发明涉及生物检测，尤其涉及预测利妥昔单抗治疗儿童原发性免疫性血小板减少症疗效的标志物及系统。

背景技术：

1、原发性免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia，itp）是一种由免疫系统紊乱介导的获得性自身免疫性疾病，其核心病理特征为机体产生针对血小板膜糖蛋白的自身抗体，导致血小板破坏增加和/或生成减少，临床表现为外周血血小板计数持续降低。儿童itp是儿科最常见的出血性疾病之一，年发病率约为每10万儿童1.9-6.4例，多数患儿以皮肤粘膜自发性出血为首发表现，严重者可出现内脏出血甚至颅内出血，危及生命。约20%-30%的患儿对一线治疗（糖皮质激素、静脉注射免疫球蛋白）反应不佳或无法维持疗效，进展为持续性或慢性itp，病程迁延反复，给患儿及其家庭带来长期的疾病负担和经济压力。

2、利妥昔单抗是一种靶向b细胞表面cd20抗原的人鼠嵌合型单克隆抗体，通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用、补体依赖性细胞毒作用和直接诱导b细胞凋亡等机制清除b淋巴细胞，从而减少抗血小板抗体的产生，恢复血小板计数。该药于1997年首次获fda批准用于b细胞非霍奇金淋巴瘤的治疗，此后被广泛应用于多种b细胞介导的自身免疫性疾病。在儿童itp领域，利妥昔单抗已被证实可取得50%-60%的初始应答率，且具有用药方案简便、单次用药后缓解时间较长、治疗成本相对较低等优势，已成为国内外指南推荐的二线治疗选择之一。

3、然而，利妥昔单抗的疗效存在显著的个体化差异，目前尚无可靠的预测指标或方法能够在用药前识别出可能获益的患者。已有研究探索了多种潜在的预测因素，包括血小板表面相关抗体、抗核抗体、外周血b细胞计数、血清免疫球蛋白水平等，但上述指标的预测价值在不同研究中结论不一，且多数研究基于成人队列，针对儿童群体的高质量证据尤为匮乏。因此，开发能够在治疗前准确预测儿童itp患者对利妥昔单抗疗效的分子标志物，对于优化二线用药决策、实现个体化治疗具有重要的临床意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种血浆蛋白标志物组合在制备用于预测利妥昔单抗治疗儿童原发性免疫性血小板减少症疗效的产品中的应用，解决了现有技术中缺乏能够有效预测儿童itp患者对利妥昔单抗治疗应答的生物标志物、导致临床二线用药决策缺乏精准依据的技术问题。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种血浆蛋白标志物组合在制备用于预测利妥昔单抗治疗儿童原发性免疫性血小板减少症疗效的产品中的应用，所述血浆蛋白标志物组合选自vasn、cirbp、cpvl和txn中的至少一种。

4、优选的，所述血浆蛋白标志物组合选自vasn、cirbp、cpvl和txn中的任意两种。

5、优选的，所述血浆蛋白标志物组合由vasn、cirbp和cpvl组成。

6、优选的，所述血浆蛋白标志物组合由vasn、cpvl和txn组成。

7、优选的，所述血浆蛋白标志物组合由vasn、cirbp、cpvl和txn组成。

8、本发明还提供了一种用于预测利妥昔单抗治疗儿童原发性免疫性血小板减少症疗效的系统，所述系统包括：

9、检测单元，用于检测受试者血浆样本中血浆蛋白标志物vasn、cpvl、txn和cirbp的浓度；

10、处理单元，用于将vasn浓度与第一预定截断值比较、将cpvl浓度与第二预定截断值比较、将txn浓度与第三预定截断值比较、将cirbp浓度与第四预定截断值比较；

11、当vasn浓度高于所述第一预定截断值、cpvl浓度高于所述第二预定截断值、txn浓度低于所述第三预定截断值，且cirbp浓度低于所述第四预定截断值时，所述处理单元判断受试者对利妥昔单抗治疗有效；

12、所述第一预定截断值、第二预定截断值、第三预定截断值和第四预定截断值为基于训练样本集的roc曲线分析、以约登指数最大化为基础预先确定的截断值；

13、所述训练样本集由多个训练样本组成；各训练样本来源于一名受试者在接受利妥昔单抗治疗前采集的血浆样本；各训练样本包含所述血浆样本中vasn、cpvl、txn和cirbp的浓度数据；各训练样本还包含所述受试者接受利妥昔单抗治疗后为有效或无效的疗效结果。

14、优选的，所述第一预定截断值为vasn在所述训练样本集中的roc曲线上约登指数最大值所对应的浓度值；

15、所述第二预定截断值为cpvl在所述训练样本集中的roc曲线上约登指数最大值所对应的浓度值；

16、所述第三预定截断值为txn在所述训练样本集中的roc曲线上约登指数最大值所对应的浓度值；

17、所述第四预定截断值为cirbp在所述训练样本集中的roc曲线上约登指数最大值所对应的浓度值；

18、所述约登指数=灵敏度+特异度-1。

19、本发明还提供了另一种用于预测利妥昔单抗治疗儿童原发性免疫性血小板减少症疗效的系统，所述系统包括：

20、检测单元，用于检测受试者血浆样本中血浆蛋白标志物vasn、cirbp和cpvl的浓度；

21、处理单元，所述处理单元配置有二分类logistic回归模型；

22、所述二分类logistic回归模型根据如下公式计算预测概率p：

23、p=1/(1+ez)

24、其中，z=β0+β1×c_vasn+β2×c_cirbp+β3×c_cpvl，c_vasn、c_cirbp和c_cpvl分别为受试者血浆样本中vasn、cirbp和cpvl的浓度，β0、β1、β2和β3为回归系数；

25、所述logistic回归模型为利用训练样本集拟合得到，所述训练样本集由多个训练样本组成，各所述训练样本来源于一名受试者在接受利妥昔单抗治疗前采集的血浆样本，各所述训练样本包含所述血浆样本中vasn、cirbp和cpvl的浓度数据以及所述受试者接受利妥昔单抗治疗后为有效或无效的疗效结果，所述回归系数为利用所述训练样本集拟合确定；

26、所述处理单元用于将vasn浓度、cirbp浓度和cpvl浓度代入所述二分类logistic回归模型，计算得到预测概率p，当所述预测概率p大于预定阈值时，判断受试者对利妥昔单抗治疗有效；

27、所述预定阈值为基于所述训练样本集的roc曲线分析、以约登指数最大化为基础预先确定的概率值。

28、优选的，所述预定阈值为在所述训练样本集中，将各训练样本的预测概率p依次作为候选阈值，并分别计算每个候选阈值对应的灵敏度和特异度，以约登指数最大值所对应的候选阈值作为所述预定阈值；

29、所述约登指数=灵敏度+特异度-1。

30、优选的，所述有效为受试者接受利妥昔单抗治疗后达到完全缓解或部分缓解，所述无效为受试者接受利妥昔单抗治疗后无反应。

31、本发明的有益效果：

32、本发明提供了vasn、cirbp、cpvl和txn四种血浆蛋白作为标志物组合在制备预测产品中的应用，该标志物组合能够在利妥昔单抗给药前有效区分儿童原发性免疫性血小板减少症患者中可能获益与难以获益的人群，为临床二线用药决策提供分子水平的量化评估工具；基于该标志物组合的检测产品可在治疗启动前出具预测结果，有助于提高治疗应答率、避免无效治疗带来的医疗资源浪费和药物不良反应，同时减少患儿因治疗无效导致的病程迁延和心理负担，具有良好的临床应用前景和社会效益。

33、本发明提供了包含检测单元和处理单元的预测系统，通过检测受试者血浆样本中血浆蛋白标志物的浓度并自动与参考值比较或代入logistic回归模型计算，能够标准化、自动化地输出疗效预测结果，无需人工主观判断，适用于不同层级的医疗机构；该系统既支持基于单变量阈值联合规则的快速筛查模式，也支持基于logistic回归模型的多蛋白综合评估模式，两种模式可根据临床场景灵活选择，检测单元所采用的酶联免疫吸附测定法操作简便、设备要求低，便于在基层医疗机构推广使用，具有良好的转化可行性和市场推广价值。