用于分析多特异性结合蛋白中的链错配的方法与流程

本公开文本涉及用于监测通过宿主细胞产生多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的方法以及与之相关的产生和筛选的方法。本公开文本进一步涉及用于检测通过宿主细胞产生抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的方法以及与之相关的产生和筛选方法。

背景技术：

1、近年来，结合在相同或不同抗原上的两个或更多个不同表位的多特异性抗体已经成为免疫肿瘤学中有吸引力的治疗选择（baeuerle, p. a.和reinhardt, c., cancer res2009, 69 (12), 4941-4）。多靶向已经用于不同的目的，如实现增强的药物特异性或模仿信号传导通路中的天然配体，例如在血友病治疗中通过与相同细胞表面上的受体对同时结合（kitazawa, t.等人nat med 2012, 18 (10), 1570-4）。突出的应用是t细胞接合器（tce）概念，其中所述分子的一只臂经由cd3/cd28受体结合激活t细胞，而另一只臂靶向肿瘤抗原用于肿瘤杀伤（krah, s.等人n biotechnol 2017, 39 (pt b), 167-173；correnti, c. e.等人leukemia 2018, 32 (5), 1239-1243）。

2、igg样三特异性抗体（tsab）由两条不同的重链和两条不同的轻链构成，通常在单个宿主细胞中表达，然后进行细胞内链组装。尽管这种产生方法消除了具有两个单独的细胞系和纯化过程的需求，但是除了所希望的tsab之外，它可能还会产生不需要的错配种类。在不存在理性设计并且存在亚基的随机缔合的情况下，正确配对种类的理论产率仅为12.5%（图1b）。通过蛋白质工程方法（如杵臼设计）已经成功完成了重链的强迫异二聚化（ridgway, j. b.等人protein eng 1996, 9 (7), 617-21）。然而，轻链与正确重链的同源配对仍然是tsab产生中的重大挑战。

3、因此，仍然需要用于监测或分析多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的产生的方法。此外，仍然需要用于监测或分析包含分子量不同的多种种类的抗体或抗体衍生物（例如，具有不同的化学修饰（如化学修饰的半胱氨酸或其他残基）或具有不同的糖型）的产生的方法。

4、本文中引用的所有参考文献（包括专利申请、专利公开案和uniprotkb/swiss-prot登录号）都通过引用以其整体并入本文，如同每个单独的参考文献被明确地且单独地指示通过引用并入。

技术实现思路

1、为了满足这些和其他需求，本文提供了用于监测多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类（例如，通过细胞系）的产生的方法。这些方法尤其提供了一种基于变性sec-lc-完整ms的高通量分析平台，用于链错配种类和其他igg相关种类的鉴定和相对定量。有利地，这些方法允许绕过耗时且昂贵的纯化（例如，蛋白a亲和色谱法）和缓冲液交换步骤，直接从澄清细胞收获物中进行mab相关种类（例如，多特异性结合蛋白、抗体、fc融合蛋白、抗体片段等）的完整ms分析。因此，这些方法可以用于快速筛选大量的克隆，用于潜在的产生细胞系。

2、在一些实施方案中，本文提供了用于监测多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的产生的方法，所述方法包括：通过尺寸排阻超高液相色谱法和质谱法（se-uplc-ms）检测包含多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的细胞培养基中所述多特异性结合蛋白和所述一种或多种错配种类的量。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白包含两条或更多条多肽链的缔合物，所述多肽链至少包括第一多肽链和与所述第一多肽链不同的第二多肽链，并且所述一种或多种错配种类包含在除所述多特异性结合蛋白的缔合物之外的缔合物中的两条或更多条多肽链，所述多肽链包括所述第一多肽链和第二多肽链中的至少一条。

3、在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白是包含以下的多特异性抗体：第一抗体重链、第一抗体轻链、与所述第一抗体重链不同的第二抗体重链和与所述第一抗体轻链不同的第二抗体轻链。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白是双特异性抗体、抗体片段或fc融合蛋白。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白是三特异性抗体、抗体片段或fc融合蛋白。在一些实施方案中，所述一种或多种错配种类包含以下中的一种或多种：所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第一抗体重链的缔合物；所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第二抗体重链的缔合物；所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第一抗体轻链的缔合物；以及所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第二抗体轻链的缔合物。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白包含形成三个抗原结合位点的四条多肽链，

4、其中所述结合蛋白的第一多肽链包含由下式表示的结构：

5、vl2-l1-vl1-l2-cl[i]

6、并且所述结合蛋白的第二多肽链包含由下式表示的结构：

7、vh1-l3-vh2-l4-ch1-铰链-ch2-ch3[ii]

8、并且所述结合蛋白的第三多肽链包含由下式表示的结构：

9、vh3-ch1-铰链-ch2-ch3[iii]

10、并且所述结合蛋白的第四多肽链包含由下式表示的结构：

11、vl3-cl[iv]

12、其中：

13、vl1是第一免疫球蛋白轻链可变结构域；

14、vl2是第二免疫球蛋白轻链可变结构域；

15、vl3是第三免疫球蛋白轻链可变结构域；

16、vh1是第一免疫球蛋白重链可变结构域；

17、vh2是第二免疫球蛋白重链可变结构域；

18、vh3是第三免疫球蛋白重链可变结构域；

19、cl是免疫球蛋白轻链恒定结构域；

20、ch1是免疫球蛋白ch1重链恒定结构域；

21、ch2是免疫球蛋白ch2重链恒定结构域；

22、ch3是免疫球蛋白ch3重链恒定结构域；

23、铰链是连接所述ch1与ch2结构域的免疫球蛋白铰链区；并且

24、l1、l2、l3和l4是氨基酸接头；

25、其中所述式i的多肽和所述式ii的多肽形成交叉的轻链-重链对，其中vh1和vl1形成第一抗原结合位点，其中vh2和vl2形成第二抗原结合位点，并且其中vh3和vl3形成第三抗原结合位点。在一些实施方案中，所述一种或多种错配种类包含以下中的一种或多种：所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式i的多肽链的缔合物；所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式ii的多肽链的缔合物；所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式iii的多肽链的缔合物；以及所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式iv的多肽链的缔合物。

26、在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白和所述一种或多种错配种类的量的检测包括将通过ms获得的一个或多个ms光谱解卷积。在一些实施方案中，检测与所述一种或多种错配种类相比所述多特异性结合蛋白的相对量。在一些实施方案中，检测与一种或多种单独错配种类的量相比所述多特异性结合蛋白的相对量。在一些实施方案中，检测与错配种类的总量相比所述多特异性结合蛋白的相对量。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在检测之前，提供或获得（例如，从产生所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的细胞系）包含所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的细胞培养基。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在检测之前，将所述细胞培养基与产生所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的细胞系分离。在一些实施方案中，在检测之前，通过离心将所述细胞培养基与所述细胞系分离。在一些实施方案中，使所述细胞培养基不经先前的色谱分离而经受se-uplc。在一些实施方案中，使所述细胞培养基不经先前的蛋白a亲和色谱法而经受se-uplc。在一些实施方案中，所述ms是完整ms。在一些实施方案中，所述ms是四级杆飞行时间（qtof）ms。在一些实施方案中，所述se-uplc是变性se-uplc。在一些实施方案中，所述se-uplc与所述ms直接偶联。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在se-uplc-ms之前，使所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类与蛋白酶接触。在一些实施方案中，所述蛋白酶是ides或idez。在一些实施方案中，以小于约0.4 ml/min的初始流速进行se-uplc。在一些实施方案中，以约0.1 ml/min的初始流速进行se-uplc。在一些实施方案中，前25分钟以约0.1 ml/min的流速，然后以约0.4 ml/min的流速（例如，持续25-33分钟）进行se-uplc。在一些实施方案中，使用用流动相的等度洗脱进行se-uplc。在一些实施方案中，所述流动相包含含有30 : 70乙腈 : 水的溶液。在一些实施方案中，所述流动相包含甲酸和三氟乙酸（tfa）。在一些实施方案中，所述流动相包含约0.05%甲酸和约0.05%三氟乙酸（tfa）。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的量的检测在约33分钟或更短的时间内完成。在一些实施方案中，在一些实施方案中，所述方法在约33分钟或更短的时间内完成。在一些实施方案中，所述ms能够分辨在所述多特异性结合蛋白与所述一种或多种错配种类之间或在两种错配种类之间约300 da的质量差异。在一些实施方案中，所述ms能够分辨在所述多特异性结合蛋白或错配种类与一种或多种糖型之间约162 da的质量差异。

27、在一些实施方案中，所述细胞系是哺乳动物细胞系。在一些实施方案中，所述细胞系是中国仓鼠卵巢（cho）细胞系。在一些实施方案中，在检测之前，将所述细胞系在连续细胞培养中（例如，在搅拌罐生物反应器中）用所述细胞培养基培养。在一些实施方案中，在检测之前，将所述细胞系在分批细胞培养中用所述细胞培养基培养。

28、在一些实施方案中，本文提供了用于产生多特异性结合蛋白的方法，所述方法包括：(a) 将包含一种或多种编码所述多特异性结合蛋白的多核苷酸的细胞系在细胞培养基中在适于由所述细胞系产生所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的条件下培养；(b) 将包含所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的细胞培养基与所述细胞系分离；(c) 通过尺寸排阻超高液相色谱法和质谱法（se-uplc-ms），检测所述细胞培养基中所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的量；以及(d) 将所述错配种类中的一种或多种的至少一部分从由所述细胞系产生的多特异性结合蛋白中去除，或确定由所述细胞系产生的多特异性结合蛋白的品质或纯度之一或二者。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白包含两条或更多条多肽链的缔合物，所述多肽链至少包括第一多肽链和与所述第一多肽链不同的第二多肽链。在一些实施方案中，所述一种或多种错配种类包含在除所述多特异性结合蛋白的缔合物之外的缔合物中的两条或更多条多肽链，所述多肽链包括所述第一多肽链和第二多肽链中的至少一条。

29、在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白是包含以下的多特异性抗体：第一抗体重链、第一抗体轻链、与所述第一抗体重链不同的第二抗体重链和与所述第一抗体轻链不同的第二抗体轻链。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白是双特异性抗体或fc融合蛋白。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白是三特异性抗体或fc融合蛋白。在一些实施方案中，所述一种或多种错配种类包含以下中的一种或多种：所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第一抗体重链的缔合物；所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第二抗体重链的缔合物；所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第一抗体轻链的缔合物；以及所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第二抗体轻链的缔合物。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白包含形成三个抗原结合位点的四条多肽链，

30、其中所述结合蛋白的第一多肽链包含由下式表示的结构：

31、vl2-l1-vl1-l2-cl[i]

32、并且所述结合蛋白的第二多肽链包含由下式表示的结构：

33、vh1-l3-vh2-l4-ch1-铰链-ch2-ch3[ii]

34、并且所述结合蛋白的第三多肽链包含由下式表示的结构：

35、vh3-ch1-铰链-ch2-ch3[iii]

36、并且所述结合蛋白的第四多肽链包含由下式表示的结构：

37、vl3-cl[iv]

38、其中：

39、vl1是第一免疫球蛋白轻链可变结构域；

40、vl2是第二免疫球蛋白轻链可变结构域；

41、vl3是第三免疫球蛋白轻链可变结构域；

42、vh1是第一免疫球蛋白重链可变结构域；

43、vh2是第二免疫球蛋白重链可变结构域；

44、vh3是第三免疫球蛋白重链可变结构域；

45、cl是免疫球蛋白轻链恒定结构域；

46、ch1是免疫球蛋白ch1重链恒定结构域；

47、ch2是免疫球蛋白ch2重链恒定结构域；

48、ch3是免疫球蛋白ch3重链恒定结构域；

49、铰链是连接所述ch1与ch2结构域的免疫球蛋白铰链区；并且

50、l1、l2、l3和l4是氨基酸接头；

51、其中所述式i的多肽和所述式ii的多肽形成交叉的轻链-重链对，其中vh1和vl1形成第一抗原结合位点，其中vh2和vl2形成第二抗原结合位点，并且其中vh3和vl3形成第三抗原结合位点。在一些实施方案中，所述一种或多种错配种类包含以下中的一种或多种：所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式i的多肽链的缔合物；所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式ii的多肽链的缔合物；所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式iii的多肽链的缔合物；以及所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式iv的多肽链的缔合物。

52、在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的量的检测包括将通过所述ms获得的一个或多个ms光谱解卷积。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的检测包括评估通过所述细胞系产生的多特异性结合蛋白的总滴度。在一些实施方案中，所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的检测包括评估由所述细胞系产生的错配种类的总滴度。在一些实施方案中，检测与所述一种或多种错配种类相比所述多特异性结合蛋白的相对量。在一些实施方案中，检测与一种或多种单独错配种类的量相比所述多特异性结合蛋白的相对量。在一些实施方案中，检测与错配种类的总量相比所述多特异性结合蛋白的相对量。在一些实施方案中，通过离心将所述细胞培养基与所述细胞系分离。在一些实施方案中，使所述细胞培养基不经先前的色谱分离而经受 (c) 中的se-uplc。在一些实施方案中，使所述细胞培养基不经先前的蛋白a亲和色谱法而经受 (c) 中的se-uplc。在一些实施方案中，所述ms是完整ms。在一些实施方案中，所述ms是四级杆飞行时间（qtof）ms。在一些实施方案中，所述se-uplc是变性se-uplc。在一些实施方案中，所述se-uplc与所述ms直接偶联。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在培养所述细胞系之后并且在检测之前，使所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类与蛋白酶接触。在一些实施方案中，所述蛋白酶是ides或idez。在一些实施方案中，以小于约0.4ml/min的初始流速进行se-uplc。在一些实施方案中，以约0.1 ml/min的初始流速进行se-uplc。在一些实施方案中，前25分钟以约0.1 ml/min的流速，然后以约0.4 ml/min的流速进行se-uplc。在一些实施方案中，使用用流动相的等度洗脱进行se-uplc。在一些实施方案中，所述流动相包含含有30 : 70乙腈 : 水的溶液。在一些实施方案中，所述流动相包含甲酸和三氟乙酸（tfa）。在一些实施方案中，所述流动相包含约0.05%甲酸和约0.05%三氟乙酸（tfa）。在一些实施方案中，检测在约33分钟或更短的时间内完成。在一些实施方案中，所述方法在约33分钟或更短的时间内完成。在一些实施方案中，所述ms能够分辨在所述多特异性结合蛋白与所述一种或多种错配种类之间或在两种错配种类之间约300 da的质量差异。在一些实施方案中，所述ms能够分辨在所述多特异性结合蛋白或错配种类与一种或多种糖型之间约162 da的质量差异。

53、在一些实施方案中，所述细胞系是哺乳动物细胞系。在一些实施方案中，所述细胞系是中国仓鼠卵巢（cho）细胞系。在一些实施方案中，将所述细胞系在连续细胞培养中（例如，在搅拌罐生物反应器中）培养。在一些实施方案中，将所述细胞系在分批细胞培养中培养。

54、在一些实施方案中，本文提供了用于筛选用于产生多特异性结合蛋白的多种细胞系的方法，所述方法包括：根据以上实施方案中任一项所述的方法，检测由所述多种细胞系中的第一细胞系产生的多特异性结合蛋白的量；以及根据以上实施方案中任一项所述的方法，检测由所述多种细胞系中的第二细胞系产生的多特异性结合蛋白的量。

55、在一些实施方案中，所述方法进一步包括：将由所述第一细胞系产生的多特异性结合蛋白的量与由所述第二细胞系产生的多特异性结合蛋白的量进行比较；以及基于所述比较，选择产生较高量的所述多特异性结合蛋白的细胞系。在一些实施方案中，所述方法进一步包括：根据上述实施方案中任一项所述的方法，检测由所述第一细胞系产生的一种或多种错配种类的量；并且根据上述实施方案中任一项所述的方法，检测由所述第二细胞系产生的一种或多种错配种类的量。在一些实施方案中，所述方法进一步包括：在检测由所述第一细胞系和第二细胞系产生的一种或多种错配种类的量后：将由所述第一细胞系产生的所述一种或多种错配种类的量与由所述第二细胞系产生的所述一种或多种错配种类的量进行比较；并且基于所述比较，选择产生较高的多特异性结合蛋白与一种或多种错配种类的比率的细胞系。在一些实施方案中，所述细胞系是基于较高的多特异性结合蛋白与一种或多种单独错配种类的量的比率来选择的。在一些实施方案中，所述细胞系是基于较高的多特异性结合蛋白与错配种类的总量的比率来选择的。

56、在一些实施方案中，本文提供了用于监测抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的产生的方法，所述方法包括：通过尺寸排阻超高液相色谱法和质谱法（se-uplc-ms）检测包含抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的细胞培养基中所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的量，其中所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类在分子量方面存在差异。在一些实施方案中，本文提供了用于产生抗体或抗体衍生物的方法，所述方法包括：(a) 将包含一种或多种编码所述抗体或抗体衍生物的多核苷酸的细胞系在细胞培养基中在适于由所述细胞系产生所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的条件下培养；(b) 将包含所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的细胞培养基与所述细胞系分离；(c) 通过尺寸排阻超高液相色谱法和质谱法（se-uplc-ms），检测所述细胞培养基中所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的量；以及(d) 将所述重量变异种类中的一种或多种的至少一部分从由所述细胞系产生的抗体或抗体衍生物中去除，或确定由所述细胞系产生的抗体或抗体衍生物的品质或纯度之一或二者。

57、在一些实施方案中，本文提供了用于筛选用于产生抗体或抗体衍生物的多种细胞系的方法，所述方法包括：根据以上实施方案中任一项所述的方法，检测由所述多种细胞系中的第一细胞系产生的抗体或抗体衍生物的量；以及根据以上实施方案中任一项所述的方法，检测由所述多种细胞系中的第二细胞系产生的抗体或抗体衍生物的量。在一些实施方案中，所述方法进一步包括：将由所述第一细胞系产生的抗体或抗体衍生物的量与由所述第二细胞系产生的抗体或抗体衍生物的量进行比较；以及基于所述比较，选择产生较高量的所述抗体或抗体衍生物的细胞系。在一些实施方案中，所述方法进一步包括：根据上述实施方案中任一项所述的方法，检测由所述第一细胞系产生的一种或多种重量变异种类的量；并且根据上述实施方案中任一项所述的方法，检测由所述第二细胞系产生的一种或多种重量变异种类的量。在一些实施方案中，所述方法进一步包括：在检测由所述第一细胞系和第二细胞系产生的一种或多种重量变异种类的量后：将由所述第一细胞系产生的所述一种或多种重量变异种类的量与由所述第二细胞系产生的一种或多种重量变异种类的量进行比较；并且基于所述比较，选择产生较高的抗体或抗体衍生物与一种或多种重量变异种类的比率的细胞系，或选择产生相对于所产生的抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的总量较高相对比例的单个重量变异种类的细胞系。在一些实施方案中，根据本文所述的实施方案中任一项的抗体或抗体衍生物和/或一种或多种重量变异种类的量是指相对量（例如，与一种或多种其他种类相比或与所产生的抗体/种类的总量相比）。

58、在一些实施方案中，所述抗体或抗体衍生物包含在位置293处的半胱氨酸残基（cys293）。在一些实施方案中，所述抗体或抗体衍生物和所述一种或多种重量变异种类包括具有游离半胱氨酸（例如，不与所述抗体或抗体衍生物的另一个半胱氨酸二硫键合）的种类，所述具有游离半胱氨酸的种类已经被半胱氨酸化、n-乙酰基半胱氨酸化、或谷胱甘肽化。在一些实施方案中，所述抗体或抗体衍生物是未被n-糖基化的（例如，在抗体fc区中）。在一些实施方案中，所述抗体或抗体衍生物包含fc区中的突变，其减少或消除n-糖基化。在一些实施方案中，所述抗体或抗体衍生物包含n300a突变（eu索引）。在一些实施方案中，所述抗体或抗体衍生物是n-糖基化的（例如，在抗体fc区中），并且所述方法进一步包括（例如，在se-uplc-ms之前）去除所述抗体n-糖基化。在一些实施方案中，所述抗体n-糖基化的去除包括将所述抗体用肽 : n-糖苷酶（例如，png酶f）处理。在一些实施方案中，所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的量的检测包括将通过所述ms获得的一个或多个ms光谱解卷积。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在检测之前，提供或获得（例如，从产生所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的细胞系）包含所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的细胞培养基。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在检测之前，将所述细胞培养基与产生所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的细胞系分离。在一些实施方案中，在检测之前，通过离心将所述细胞培养基与所述细胞系分离。在一些实施方案中，使所述细胞培养基不经先前的色谱分离而经受se-uplc。在一些实施方案中，使所述细胞培养基不经先前的蛋白a亲和色谱法而经受se-uplc。在一些实施方案中，所述ms是完整ms。在一些实施方案中，所述ms是四级杆飞行时间（qtof）ms。在一些实施方案中，所述se-uplc是变性se-uplc。在一些实施方案中，所述se-uplc与所述ms直接偶联。在一些实施方案中，所述一种或多种重量变异种类表示包含经化学修饰的半胱氨酸残基的抗体或抗体衍生物的种类。在一些实施方案中，所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类在分子量方面的差异是至少119 da。在一些实施方案中，所述ms能够分辨半胱氨酸化（119 da质量偏移）、n-乙酰基半胱氨酸化（161 da质量偏移）与谷胱甘肽化（305 da质量偏移）种类之间的质量差异。所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类在分子量方面的差异是至少162 da。在一些实施方案中，所述抗体或抗体衍生物是n-糖基化的（例如，在所述抗体fc区），并且所述一种或多种重量变异种类表示所述抗体或抗体衍生物的糖型。在一些实施方案中，所述ms能够分辨所述抗体或抗体衍生物与一种或多种重量变异种类之间约162 da的质量差异，所述重量变异种类表示所述抗体或抗体衍生物的糖型。在一些实施方案中，所述抗体或抗体衍生物是多特异性抗体。

59、应当理解，本文中所描述的各种实施方案的一种、一些或全部特性都可以组合以形成本发明的其他实施方案。本发明的这些和其他方面对于本领域技术人员将变得清楚。本发明的这些和其他实施方案由随后的具体实施方式进行进一步描述。

60、本发明进一步包括如下各项：

61、1. 一种用于监测多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的产生的方法，所述方法包括：

62、通过尺寸排阻超高液相色谱法和质谱法（se-uplc-ms）检测包含多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的细胞培养基中所述多特异性结合蛋白和所述一种或多种错配种类的量，从而监测所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的产生；

63、其中所述多特异性结合蛋白包含两条或更多条多肽链的缔合物，所述多肽链至少包括第一多肽链和与所述第一多肽链不同的第二多肽链；并且

64、其中所述一种或多种错配种类包含在除所述多特异性结合蛋白的缔合物之外的缔合物中的两条或更多条多肽链，所述多肽链包括所述第一多肽链和第二多肽链中的至少一条。

65、2. 根据项1所述的方法，其中所述多特异性结合蛋白是包含以下的多特异性抗体：第一抗体重链、第一抗体轻链、与所述第一抗体重链不同的第二抗体重链和与所述第一抗体轻链不同的第二抗体轻链。

66、3. 根据项2所述的方法，其中所述一种或多种错配种类包含以下中的一种或多种：

67、(i) 所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第一抗体重链的缔合物；

68、(ii) 所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第二抗体重链的缔合物；

69、(iii) 所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第一抗体轻链的缔合物；以及

70、(iv) 所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第二抗体轻链的缔合物。

71、4. 根据项1所述的方法，其中所述多特异性结合蛋白包含形成三个抗原结合位点的四条多肽链，

72、其中所述结合蛋白的第一多肽链包含由下式表示的结构：

73、vl2-l1-vl1-l2-cl[i]

74、并且所述结合蛋白的第二多肽链包含由下式表示的结构：

75、vh1-l3-vh2-l4-ch1-铰链-ch2-ch3[ii]

76、并且所述结合蛋白的第三多肽链包含由下式表示的结构：

77、vh3-ch1-铰链-ch2-ch3[iii]

78、并且所述结合蛋白的第四多肽链包含由下式表示的结构：

79、vl3-cl[iv]

80、其中：

81、vl1是第一免疫球蛋白轻链可变结构域；

82、vl2是第二免疫球蛋白轻链可变结构域；

83、vl3是第三免疫球蛋白轻链可变结构域；

84、vh1是第一免疫球蛋白重链可变结构域；

85、vh2是第二免疫球蛋白重链可变结构域；

86、vh3是第三免疫球蛋白重链可变结构域；

87、cl是免疫球蛋白轻链恒定结构域；

88、ch1是免疫球蛋白ch1重链恒定结构域；

89、ch2是免疫球蛋白ch2重链恒定结构域；

90、ch3是免疫球蛋白ch3重链恒定结构域；

91、铰链是连接所述ch1与ch2结构域的免疫球蛋白铰链区；并且

92、l1、l2、l3和l4是氨基酸接头；

93、其中所述式i的多肽和所述式ii的多肽形成交叉的轻链-重链对，其中vh1和vl1形成第一抗原结合位点，其中vh2和vl2形成第二抗原结合位点，并且其中vh3和vl3形成第三抗原结合位点。

94、5. 根据项4所述的方法，其中所述一种或多种错配种类包含以下中的一种或多种：

95、(i) 所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式i的多肽链的缔合物；

96、(ii) 所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式ii的多肽链的缔合物；

97、(iii) 所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式iii的多肽链的缔合物；以及

98、(iv) 所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式iv的多肽链的缔合物。

99、6. 根据项1-5中任一项所述的方法，其中所述多特异性结合蛋白和所述一种或多种错配种类的量的检测包括将通过所述ms获得的一个或多个ms光谱解卷积。

100、7. 根据项1-6中任一项所述的方法，其中检测与所述一种或多种错配种类相比所述多特异性结合蛋白的相对量。

101、8. 根据项7所述的方法，其中检测与一种或多种单独错配种类的量相比所述多特异性结合蛋白的相对量。

102、9. 根据项7所述的方法，其中检测与错配种类的总量相比所述多特异性结合蛋白的相对量。

103、10. 根据项1-9中任一项所述的方法，其中所述细胞培养基是细胞培养收获物。

104、11. 根据项10所述的方法，所述方法进一步包括在检测之前，将所述细胞培养基与产生所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的细胞系分离。

105、12. 根据项11所述的方法，其中在 (a) 之前，通过离心将所述细胞培养基与所述细胞系分离。

106、13. 根据项1-12中任一项所述的方法，其中使所述细胞培养基不经先前的色谱分离而经受se-uplc。

107、14. 根据项1-12中任一项所述的方法，其中使所述细胞培养基不经先前的蛋白a亲和色谱法而经受se-uplc。

108、15. 根据项1-14中任一项所述的方法，其中所述ms是完整ms。

109、16. 根据项1-15中任一项所述的方法，其中所述ms是四级杆飞行时间（qtof）ms。

110、17. 根据项1-16中任一项所述的方法，其中所述se-uplc是变性se-uplc。

111、18. 根据项1-17中任一项所述的方法，其中所述se-uplc与所述ms直接偶联。

112、19. 根据项1-18中任一项所述的方法，其中以小于约0.4 ml/min的初始流速进行se-uplc。

113、20. 根据项19所述的方法，其中以约0.1 ml/min的初始流速进行se-uplc。

114、21. 根据项20所述的方法，其中前25分钟以约0.1 ml/min的流速，然后以约0.4ml/min的流速进行se-uplc。

115、22. 根据项1-21中任一项所述的方法，其中使用用流动相的等度洗脱进行se-uplc。

116、23. 根据项22所述的方法，其中所述流动相包含含有30 : 70乙腈 : 水的溶液。

117、24. 根据项22或项23所述的方法，其中所述流动相包含甲酸和三氟乙酸（tfa）。

118、25. 根据项24所述的方法，其中所述流动相包含约0.05%甲酸和约0.05%三氟乙酸（tfa）。

119、26. 根据项1-25中任一项所述的方法，其中检测在约33分钟或更短的时间内完成。

120、27. 根据项1-26中任一项所述的方法，其中所述ms能够分辨在所述多特异性结合蛋白与所述一种或多种错配种类之间或在两种错配种类之间约300 da的质量差异。

121、28. 根据项1-27中任一项所述的方法，其中所述ms能够分辨在所述多特异性结合蛋白或错配种类与一种或多种糖型之间约162 da的质量差异。

122、29. 根据项11-28中任一项所述的方法，其中所述细胞系是哺乳动物细胞系。

123、30. 根据项29所述的方法，其中所述哺乳动物细胞系是中国仓鼠卵巢细胞（cho）细胞系。

124、31. 根据项1-30中任一项所述的方法，其中在检测之前，将所述细胞系在连续搅拌罐生物反应器培养中用所述细胞培养基培养。

125、32. 根据项1-30中任一项所述的方法，其中在检测之前，将所述细胞系在分批细胞培养中用所述细胞培养基培养。

126、33. 一种用于产生多特异性结合蛋白的方法，所述方法包括：

127、(a) 将包含一种或多种编码所述多特异性结合蛋白的多核苷酸的细胞系在细胞培养基中在适于由所述细胞系产生所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的条件下培养；

128、(b) 将包含所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的细胞培养基与所述细胞系分离；

129、(c) 通过尺寸排阻超高液相色谱法和质谱法（se-uplc-ms），检测所述细胞培养基中所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的量；以及

130、(d) 将所述错配种类中的一种或多种的至少一部分从由所述细胞系产生的多特异性结合蛋白中去除，或确定由所述细胞系产生的多特异性结合蛋白的品质或纯度之一或二者；

131、其中所述多特异性结合蛋白包含两条或更多条多肽链的缔合物，所述多肽链至少包括第一多肽链和与所述第一多肽链不同的第二多肽链；并且

132、其中所述一种或多种错配种类包含在除所述多特异性结合蛋白的缔合物之外的缔合物中的两条或更多条多肽链，所述多肽链包括所述第一多肽链和第二多肽链中的至少一条。

133、34. 根据项33所述的方法，其中所述多特异性结合蛋白是包含以下的多特异性抗体：第一抗体重链、第一抗体轻链、与所述第一抗体重链不同的第二抗体重链和与所述第一抗体轻链不同的第二抗体轻链。

134、35. 根据项34所述的方法，其中所述一种或多种错配种类包含以下中的一种或多种：

135、(i) 所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第一抗体重链的缔合物；

136、(ii) 所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第二抗体重链的缔合物；

137、(iii) 所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第一抗体轻链的缔合物；以及

138、(ii) 所述多特异性抗体的四条多肽链包括两条所述第二抗体轻链的缔合物。

139、36. 根据项33所述的方法，其中所述多特异性结合蛋白包含形成三个抗原结合位点的四条多肽链，

140、其中所述结合蛋白的第一多肽链包含由下式表示的结构：

141、vl2-l1-vl1-l2-cl[i]

142、并且所述结合蛋白的第二多肽链包含由下式表示的结构：

143、vh1-l3-vh2-l4-ch1-铰链-ch2-ch3[ii]

144、并且所述结合蛋白的第三多肽链包含由下式表示的结构：

145、vh3-ch1-铰链-ch2-ch3[iii]

146、并且所述结合蛋白的第四多肽链包含由下式表示的结构：

147、vl3-cl[iv]

148、其中：

149、vl1是第一免疫球蛋白轻链可变结构域；

150、vl2是第二免疫球蛋白轻链可变结构域；

151、vl3是第三免疫球蛋白轻链可变结构域；

152、vh1是第一免疫球蛋白重链可变结构域；

153、vh2是第二免疫球蛋白重链可变结构域；

154、vh3是第三免疫球蛋白重链可变结构域；

155、cl是免疫球蛋白轻链恒定结构域；

156、ch1是免疫球蛋白ch1重链恒定结构域；

157、ch2是免疫球蛋白ch2重链恒定结构域；

158、ch3是免疫球蛋白ch3重链恒定结构域；

159、铰链是连接所述ch1与ch2结构域的免疫球蛋白铰链区；并且

160、l1、l2、l3和l4是氨基酸接头；

161、其中所述式i的多肽和所述式ii的多肽形成交叉的轻链-重链对，其中vh1和vl1形成第一抗原结合位点，其中vh2和vl2形成第二抗原结合位点，并且其中vh3和vl3形成第三抗原结合位点。

162、37. 根据项36所述的方法，其中所述一种或多种错配种类包含以下中的一种或多种：

163、(i) 所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式i的多肽链的缔合物；

164、(ii) 所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式ii的多肽链的缔合物；

165、(iii) 所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式iii的多肽链的缔合物；以及

166、(iv) 所述结合蛋白的四条多肽链包括两条根据式iv的多肽链的缔合物。

167、38. 根据项33-37中任一项所述的方法，其中所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的量的检测包括将通过所述ms获得的一个或多个ms光谱解卷积。

168、39. 根据项33-38中任一项所述的方法，其中所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的检测包括评估由所述细胞系产生的多特异性结合蛋白的总滴度。

169、40. 根据项33-39中任一项所述的方法，其中所述多特异性结合蛋白和一种或多种错配种类的检测包括评估由所述细胞系产生的错配种类的总滴度。

170、41. 根据项33-40中任一项所述的方法，其中检测与所述一种或多种错配种类相比所述多特异性结合蛋白的相对量。

171、42. 根据项41所述的方法，其中检测与一种或多种单独错配种类的量相比所述多特异性结合蛋白的相对量。

172、43. 根据项41所述的方法，其中检测与错配种类的总量相比所述多特异性结合蛋白的相对量。

173、44. 根据项33-43中任一项所述的方法，其中通过离心将所述细胞培养基与所述细胞系分离。

174、45. 根据项33-44中任一项所述的方法，其中使所述细胞培养基不经先前的色谱分离而经受 (c) 中的se-uplc。

175、46. 根据项33-44中任一项所述的方法，其中使所述细胞培养基不经先前的蛋白a亲和色谱法而经受 (c) 中的se-uplc。

176、47. 根据项33-46中任一项所述的方法，其中所述ms是完整ms。

177、48. 根据项33-47中任一项所述的方法，其中所述ms是四级杆飞行时间（qtof）ms。

178、49. 根据项33-48中任一项所述的方法，其中所述se-uplc是变性se-uplc。

179、50. 根据项33-49中任一项所述的方法，其中所述se-uplc与所述ms直接偶联。

180、51. 根据项33-50中任一项所述的方法，其中以小于约0.4 ml/min的初始流速进行se-uplc。

181、52. 根据项51所述的方法，其中以约0.1 ml/min的初始流速进行se-uplc。

182、53. 根据项52所述的方法，其中前25分钟以约0.1 ml/min的流速，然后以约0.4ml/min的流速进行se-uplc。

183、54. 根据项33-53中任一项所述的方法，其中使用用流动相的等度洗脱进行se-uplc。

184、55. 根据项54所述的方法，其中所述流动相包含含有30 : 70乙腈 : 水的溶液。

185、56. 根据项54或项55所述的方法，其中所述流动相包含甲酸和三氟乙酸（tfa）。

186、57. 根据项56所述的方法，其中所述流动相包含约0.05%甲酸和约0.05%三氟乙酸（tfa）。

187、58. 根据项33-57中任一项所述的方法，其中(c) 在约33分钟或更短的时间内完成。

188、59. 根据项33-58中任一项所述的方法，其中所述ms能够分辨在所述多特异性结合蛋白与所述一种或多种错配种类之间或在两种错配种类之间约300 da的质量差异。

189、60. 根据项33-59中任一项所述的方法，其中所述ms能够分辨在所述多特异性结合蛋白或错配种类与一种或多种糖型之间约162 da的质量差异。

190、61. 根据项33-60中任一项所述的方法，其中所述细胞系是哺乳动物细胞系。

191、62. 根据项61所述的方法，其中所述哺乳动物细胞系是中国仓鼠卵巢细胞（cho）细胞系。

192、63. 根据项33-62中任一项所述的方法，其中将所述细胞系在 (a) 中在连续搅拌罐生物反应器培养中培养。

193、64. 根据项33-62中任一项所述的方法，其中将所述细胞系在 (a) 中在分批细胞培养中培养。

194、65. 一种用于筛选用于产生多特异性结合蛋白的多种细胞系的方法，所述方法包括：

195、(a) 根据项33-64中任一项所述的方法，检测由所述多种细胞系中的第一细胞系产生的多特异性结合蛋白的量；以及

196、(b) 根据项33-64中任一项所述的方法，检测由所述多种细胞系中的第二细胞系产生的多特异性结合蛋白的量。

197、66. 根据项65所述的方法，所述方法进一步包括在 (a) 和 (b) 后，

198、(c) 将由所述第一细胞系产生的多特异性结合蛋白的量与由所述第二细胞系产生的多特异性结合蛋白的量进行比较；以及

199、(d) 基于所述比较，选择产生较高量的所述多特异性结合蛋白的细胞系。

200、67. 根据项65或项66所述的方法，所述方法进一步包括：根据项33-64中任一项所述的方法，检测由所述第一细胞系产生的一种或多种错配种类的量；并且根据项33-64中任一项所述的方法，检测由所述第二细胞系产生的一种或多种错配种类的量。

201、68. 根据项67所述的方法，所述方法进一步包括在检测由所述第一细胞系和第二细胞系产生的一种或多种错配种类的量后：将由所述第一细胞系产生的所述一种或多种错配种类的量与由所述第二细胞系产生的所述一种或多种错配种类的量进行比较；并且基于所述比较，选择产生较高的多特异性结合蛋白与一种或多种错配种类的比率的细胞系。

202、69. 根据项68所述的方法，其中所述细胞系是基于较高的多特异性结合蛋白与一种或多种单独错配种类的量的比率来选择的。

203、70. 根据项68所述的方法，其中所述细胞系是基于较高的多特异性结合蛋白与错配种类的总量的比率来选择的。

204、71. 一种用于监测抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的产生的方法，所述方法包括：

205、通过尺寸排阻超高液相色谱法和质谱法（se-uplc-ms）检测包含抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的细胞培养基中所述抗体或抗体衍生物和所述一种或多种重量变异种类的量，从而监测所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的产生；

206、其中所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类在分子量方面存在差异。

207、72. 一种用于产生多特异性结合蛋白的方法，所述方法包括：

208、(a) 将包含一种或多种编码所述抗体或抗体衍生物的多核苷酸的细胞系在细胞培养基中在适于由所述细胞系产生所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的条件下培养；

209、(b) 将包含所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的细胞培养基与所述细胞系分离；

210、(c) 通过尺寸排阻超高液相色谱法和质谱法（se-uplc-ms），检测所述细胞培养基中所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的量；以及

211、(d) 将所述重量变异种类中的一种或多种的至少一部分从由所述细胞系产生的抗体或抗体衍生物中去除，或确定由所述细胞系产生的抗体或抗体衍生物的品质或纯度之一或二者；

212、其中所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类在分子量方面存在差异。

213、73. 根据项71或项72所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物和所述一种或多种重量变异种类包括具有游离半胱氨酸的种类，所述具有游离半胱氨酸的种类已经被半胱氨酸化、n-乙酰基半胱氨酸化、或谷胱甘肽化。

214、74. 根据项71或项72所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物和所述一种或多种重量变异种类包括包含经化学修饰的半胱氨酸残基的种类。

215、75. 根据项71-74中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物包含在位置293处的半胱氨酸残基，根据eu索引进行编号。

216、76. 根据项71-75中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物在fc区未被n-糖基化。

217、77. 根据项71-76中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物包含在fc区的突变，所述突变消除了在fc区中的n-糖基化。

218、78. 根据项77所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物包含n300a突变，根据eu索引进行编号。

219、79. 根据项71-76中任一项所述的方法，所述方法进一步包括在经由se-uplc-ms检测之前，去除fc区中的n-糖基化。

220、80. 根据项79所述的方法，其中所述n-糖基化的去除包括将所述抗体或抗体衍生物用肽 : n-糖苷酶处理。

221、81. 根据项71-80中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类在分子量方面的差异是至少119 da。

222、82. 根据项71-81中任一项所述的方法，其中所述方法能够分辨半胱氨酸化种类、n-乙酰基半胱氨酸化种类与谷胱甘肽化种类之间的质量差异。

223、83. 根据项71或项72所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物和所述一种或多种重量变异种类包括所述抗体或抗体衍生物的糖型。

224、84. 根据项71-83中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类在分子量方面的差异是至少162 da。

225、85. 根据项71-84中任一项所述的方法，其中所述方法能够分辨所述抗体或抗体衍生物与一种或多种重量变异种类之间的质量差异，所述重量变异种类表示所述抗体或抗体衍生物的糖型。

226、86. 根据项71-85中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物是单克隆抗体。

227、87. 根据项71-85中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物是多特异性抗体或结合蛋白。

228、88. 根据项71-87中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的量的检测包括将通过所述ms获得的一个或多个ms光谱解卷积。

229、89. 根据项71-88中任一项所述的方法，其中检测与所述一种或多种重量变异种类相比所述抗体或抗体衍生物的相对量。

230、90. 根据项89所述的方法，其中检测与所述一种或多种单独重量变异种类的量相比所述抗体或抗体衍生物的相对量。

231、91. 根据项89所述的方法，其中检测与重量变异种类的总量相比所述抗体或抗体衍生物的相对量。

232、92. 根据项71所述的方法，其中所述细胞培养基是细胞培养收获物。

233、93. 根据项92所述的方法，所述方法进一步包括在检测之前，将所述细胞培养基与产生所述抗体或抗体衍生物和一种或多种重量变异种类的细胞系分离。

234、94. 根据项93所述的方法，其中在 (a) 之前，通过离心将所述细胞培养基与所述细胞系分离。

235、95. 根据项72所述的方法，其中通过离心将所述细胞培养基与所述细胞系分离。

236、96. 根据项71-95中任一项所述的方法，其中使所述细胞培养基不经先前的色谱分离而经受se-uplc。

237、97. 根据项71-95中任一项所述的方法，其中使所述细胞培养基不经先前的蛋白a亲和色谱法而经受se-uplc。

238、98. 根据项71-97中任一项所述的方法，其中所述ms是完整ms。

239、99. 根据项71-98中任一项所述的方法，其中所述ms是四级杆飞行时间（qtof）ms。

240、100. 根据项71-99中任一项所述的方法，其中所述se-uplc是变性se-uplc。

241、101. 根据项71-100中任一项所述的方法，其中所述se-uplc与所述ms直接偶联。

242、102. 根据项71-101中任一项所述的方法，其中所述细胞系是哺乳动物细胞系。

243、103. 根据项102所述的方法，其中所述哺乳动物细胞系是中国仓鼠卵巢细胞（cho）细胞系。

244、104. 根据项72-103中任一项所述的方法，其中将所述细胞系在连续搅拌罐生物反应器培养中培养。

245、105. 根据项72-103中任一项所述的方法，其中将所述细胞系在分批细胞培养中培养。

246、106. 一种用于筛选用于产生抗体或抗体衍生物的多种细胞系的方法，所述方法包括：

247、(a) 根据项72-105中任一项所述的方法，检测由所述多种细胞系中的第一细胞系产生的抗体或抗体衍生物的量；以及

248、(b) 根据项72-105中任一项所述的方法，检测由所述多种细胞系中的第二细胞系产生的抗体或抗体衍生物的量。

249、107. 根据项106所述的方法，所述方法进一步包括在 (a) 和 (b) 后，

250、(c) 将由所述第一细胞系产生的抗体或抗体衍生物的量与由所述第二细胞系产生的抗体或抗体衍生物的量进行比较；以及

251、(d) 基于所述比较，选择产生较高量的所述抗体或抗体衍生物的细胞系。

252、108. 根据项106或项107所述的方法，所述方法进一步包括：根据项72-105中任一项所述的方法，检测由所述第一细胞系产生的一种或多种重量变异种类的量；并且根据项72-105中任一项所述的方法，检测由所述第二细胞系产生的一种或多种重量变异种类的量。

253、109. 根据项108所述的方法，所述方法进一步包括在检测由所述第一细胞系和第二细胞系产生的一种或多种重量变异种类的量后：将由所述第一细胞系产生的所述一种或多种重量变异种类的量与由所述第二细胞系产生的一种或多种重量变异种类的量进行比较；并且基于所述比较，选择产生较高的抗体或抗体衍生物与一种或多种重量变异种类的比率的细胞系。

254、110. 根据项109所述的方法，其中所述细胞系是基于较高的抗体或抗体衍生物与一种或多种单独重量变异种类的量的比率来选择的。

255、111. 根据项109所述的方法，其中所述细胞系是基于较高的抗体或抗体衍生物与重量变异种类的总量的比率来选择的。