EV来源NRP1蛋白作为生物标志物的应用

本发明涉及生物医药领域，具体涉及ev来源nrp1蛋白作为生物标志物的应用。

背景技术：

1、2型糖尿病（t2dm）是心血管疾病的独立危险因素，而内皮功能障碍被广泛认为是血糖异常与后续糖尿病性心血管并发症之间的早期病理生理纽带。因此，早期识别t2dm患者的内皮功能障碍有助于及时实施针对性预防干预，从而降低后续心血管风险。然而，临床常用的代谢指标，如空腹血糖（fasting plasma glucose，fpg）和糖化血红蛋白（hba1c），主要反映血糖暴露情况，对于血管内皮损伤程度及个体间血管风险异质性的刻画能力有限。外周动脉张力测定（endopat 2000）可通过反应性充血指数（rhi）无创评估微血管内皮功能，通常以rhi<1.67定义内皮功能障碍；然而，其成本较高且可及性有限，制约了其在大规模筛查和纵向监测中的应用，因此目前亟需可推广的血液标志物。

2、细胞外囊泡（evs）是由大多数细胞释放的、具有膜结构包裹的纳米级囊泡，可携带蛋白质、脂质及核酸，反映来源细胞的生理或病理状态，因此是极具前景的液体活检生物标志物候选物。作为生物标志物，循环ev具有多方面优势：其较易从循环中分离和富集，可减少高丰度循环蛋白的干扰；同时，囊泡膜结构对其货物具有保护作用，可减少降解，从而提高分析的稳定性和重复性。在代谢性疾病中，越来越多证据表明，胰岛素抵抗和t2dm伴随着循环ev数量、来源细胞类型及货物组成的改变。此外，循环ev在多种心血管疾病中也显示出诊断和预后价值，包括急性冠脉综合征、心肌梗死后心室重构以及颈动脉粥样硬化性疾病。然而，针对t2dm患者中与客观量化的内皮功能障碍相关的ev生物标志物研究仍相对有限。

3、神经纤毛蛋白-1（neuropilin-1，nrp1）是一种多功能跨膜糖蛋白，在内皮细胞中高表达。作为vegf信号通路中的关键共受体，nrp1可调控vegfr2信号转导，从而影响血管生成信号及内皮细胞应答。除参与血管生成外，nrp1还可通过非vegf依赖机制维持内皮稳态，包括调控线粒体功能和减轻铁依赖性氧化应激，而这些过程与内皮损伤和细胞衰老密切相关。与其作为应激反应调节因子的作用一致，在缺氧、营养缺乏等代谢应激条件下，nrp1可经溶酶体途径快速下调，而这些应激条件正是糖尿病血管微环境的重要特征。此外，在糖尿病微血管并发症中，如人糖尿病肾病组织，有研究报道nrp1表达降低。然而，ev 来源的nrp1是否与t2dm患者的内皮功能障碍相关，仍不清楚。

技术实现思路

1、本发明提供了ev来源nrp1蛋白作为生物标志物的应用，以解决现有技术存在的问题。

2、第一方面，本发明提供了一种检测生物标志物的产品在制备内皮功能障碍的辅助诊断、诊断、风险评估或预测临床预后的产品中用途，所述生物标志物包括nrp1蛋白。

3、在一种可选的实施方式中，所述内皮功能障碍包括2型糖尿病相关的内皮功能障碍。

4、在一种可选的实施方式中，所述nrp1蛋白包括循环细胞外囊泡来源的nrp1蛋白。

5、在一种可选的实施方式中，所述循环细胞外囊泡来源于血清。

6、在一种可选的实施方式中，所述检测生物标志物的产品包括检测nrp1蛋白浓度水平的产品。

7、在一种可选的实施方式中，所述检测生物标志物的产品包括试剂盒、试纸、试剂、引物、生物芯片和探针中的至少一种。

8、在一种可选的实施方式中，用于检测生物标志物的待测样品包括外周血血清。

9、在一种可选的实施方式中，所述生物标志物的检测包括：分离血清中的循环细胞外囊泡；裂解细胞外囊泡并释放或溶解ev相关蛋白；检测所述ev相关蛋白中的nrp1蛋白水平。

10、在一种可选的实施方式中，所述检测释放的蛋白水平所用的方法包括免疫印迹法、微球夹心免疫分析法、流式细胞术、酶联免疫吸附试验、放射免疫测定法、免疫共沉淀法、高效液相色谱法、毛细管凝胶电泳法、近红外光谱法、质谱法、免疫化学发光法、胶体金免疫技术、荧光免疫层析技术、表面等离子共振技术和免疫-pcr技术中的至少一种。

11、在一种可选的实施方式中，所述检测释放的蛋白水平所用的方法为免疫印迹法或微球夹心免疫分析法。

12、本发明技术方案，具有如下优点：

13、本发明提供了一种检测生物标志物的产品在制备内皮功能障碍的辅助诊断、诊断、风险评估或预测临床预后的产品中用途，所述生物标志物包括nrp1蛋白。本发明研究表明，来源于循环细胞外囊泡（ev）的nrp1蛋白可以用于2型糖尿病相关内皮功能障碍的鉴别检测。本发明研究中，114例住院2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，t2dm）患者接受了endo pat检测，并依据反应性充血指数（reactive hyperemia index，rhi）分为内皮功能障碍组（n = 57）和内皮功能正常组（n = 57）。采用商业化沉淀法试剂盒分离血清evs，并采用流式细胞术多重检测阵列（flow cytometric multiplex array）测定ev nrp1及血清nrp1浓度。结果显示，内皮功能障碍组ev nrp1水平显著低于内皮功能正常组（224.04±155.09vs. 294.54±190.99 ng/ml, p = 0.045），血清nrp1亦呈类似下降趋势（206.33±54.99vs. 224.86±48.99 ng/ml, p = 0.040）。ev nrp1与反应性充血指数（rhi）和lnrhi呈正相关。较高的ev nrp1与较低的内皮功能障碍发生几率独立相关（or = 0.627，95% ci 0.417-0.944，p = 0.025），并与lnrhi呈正相关（每100 ng/ml，b = 0.003，95% ci 0.000-0.007，p= 0.038）。上述结果支持ev nrp1作为糖尿病内皮功能障碍潜在生物标志物。

1.一种检测生物标志物的产品在制备内皮功能障碍的辅助诊断、诊断、风险评估或预测临床预后的产品中用途，其特征在于，所述生物标志物包括nrp1蛋白。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述内皮功能障碍包括2型糖尿病相关的内皮功能障碍。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述nrp1蛋白包括循环细胞外囊泡来源的nrp1蛋白。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述循环细胞外囊泡来源于血清。

5.根据权利要求1-4任一项所述的用途，所述检测生物标志物的产品包括检测nrp1蛋白浓度水平的产品。

6.根据权利要求1-5任一项所述的用途，其特征在于，所述检测生物标志物的产品包括试剂盒、试纸、试剂、引物、生物芯片和探针中的至少一种。

7.根据权利要求1-6任一项所述的用途，其特征在于，用于检测生物标志物的待测样品包括外周血血清。

8.根据权利要求1-7任一项所述的用途，其特征在于，所述生物标志物的检测包括：分离血清中的循环细胞外囊泡；裂解细胞外囊泡并释放或溶解ev相关蛋白；检测所述ev相关蛋白中的nrp1蛋白水平。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述检测释放的蛋白水平所用的方法包括免疫印迹法、微球夹心免疫分析法、流式细胞术、酶联免疫吸附试验、放射免疫测定法、免疫共沉淀法、高效液相色谱法、毛细管凝胶电泳法、近红外光谱法、质谱法、免疫化学发光法、胶体金免疫技术、荧光免疫层析技术、表面等离子共振技术和免疫-pcr技术中的至少一种。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述检测释放的蛋白水平所用的方法为免疫印迹法或微球夹心免疫分析法。