基于源内裂解和平行反应监测的含PEG链段共聚物的分析方法与流程

本发明涉及药物分析，尤其涉及一种基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法。

背景技术：

1、soluplus为德国巴斯夫（basf）公司开发的一种新型两亲性非离子型药用高分子材料，其化学全称为聚乙烯己内酰胺-聚乙烯乙酸酯-聚乙二醇接枝共聚物（polyvinylcaprolactam-polyvinyl acetate-polyethylene glycol graft copolymer）。该聚合物由13%聚乙二醇（peg）6000、57%乙烯基己内酰胺和30%乙酸乙烯酯组成，平均分子量约为118,000 g/mol（分子量范围为90,000-140,000 g/mol）。soluplus兼具增溶、抑晶、空间稳定、成膜及热敏等多重功能，在固体分散体、过饱和自乳化给药系统、纳米混悬剂、聚合物胶束及可溶性微针等药物递送系统中显示出广阔的应用前景，同时，在抗肿瘤、抗炎、抗感染及经皮给药等领域亦展现出良好的应用潜力。现有毒理学信息表明，soluplus具有良好的初步安全性。然而，目前soluplus的安全性数据主要来自口服给药研究，透皮给药后对其局部暴露行为的系统评估仍然不足。因此，有必要对soluplus作为药用辅料的安全性进行更全面、系统的检测与评估，而这有赖于对soluplus在生物基质中准确定量分析方法的建立。

2、现有研究中已报道的可定量检测soluplus的方法包括体积排阻色谱-紫外检测法（sec-uv）、体积排阻色谱-示差折光检测法（sec-rid）、大气压化学电离质谱法（apci-ms）及热裂解-气相色谱-质谱联用法（py-gc/ms）等。然而，这些方法存在特异性与重现性差、灵敏度低、样本需求量大及样品制备复杂等局限性。例如，sec-uv法在样品浓度低于0.1 mg/ml时的精密度和准确度明显下降，难以满足低浓度生物样品中soluplus的定量需求。apci-ms和py-gc/ms虽可用于聚合物定量，但设备昂贵、操作复杂，不适用于常规生物分析。液相色谱-串联质谱（lc-ms/ms）作为现代生物分析的“金标准”技术，在聚合物定量方面相比上述方法具有显著优势。然而，soluplus作为一种多嵌段接枝共聚物，其分子量呈多分散分布，且含有多个可电离基团，在质谱中呈现复杂的多电荷分布特征，难以像小分子药物那样直接选取单一的母离子-子离子对进行定量，这成为采用lc-ms/ms对soluplus进行定量分析的核心挑战。尽管lc-ms/ms技术在生物基质中的聚合物的定量分析方面已展现出卓越性能，但其在soluplus定量分析中的应用尚未见报道。

3、综上，亟需建立一种新的分析方法，以实现生物基质中soluplus的准确定量检测。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服上述技术不足，提出一种基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，解决现有技术中soluplus定量分析方法存在的特异性与重现性差、灵敏度低、样本需求量大、样品制备复杂以及设备昂贵不适用于常规分析的技术问题。

2、本发明提供一种基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，包括以下步骤：

3、配制不同浓度的含peg链段共聚物标准溶液；

4、通过超高效液相色谱-串联质谱对含peg链段共聚物标准溶液进行测试，记录各浓度对应的监测离子对的色谱峰面积；

5、以含peg链段共聚物标准溶液中含peg链段共聚物的浓度为横坐标，以该浓度对应的监测离子对的色谱峰面积为纵坐标，进行回归分析，得到标准曲线；

6、通过超高效液相色谱-串联质谱对待测样品进行测试，记录待测样品对应的监测离子对的色谱峰面积，并基于待测样品对应的监测离子对的色谱峰面积和标准曲线，得到待测样品中含peg链段共聚物的浓度。

7、与现有技术相比，本发明的有益效果包括：

8、本发明通过利用源内裂解和平行反应监测将特异性的高分子聚合物转换成替代离子进行定量分析，实现生物基质中含peg链段共聚物的高灵敏度及高通量检测，为其经皮渗透行为研究、制剂开发及系统性安全性评价提供可靠技术手段，并为其他生物基质中同类聚合物的定量分析提供可借鉴的技术策略。本发明的方法特异性与重现性好、灵敏度高、样本需求量小、样品制备简单、设备成本低，能够适用于常规分析。

1.一种基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，其特征在于，所述含peg链段共聚物为soluplus。

3.根据权利要求1所述基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，其特征在于，所述含peg链段共聚物标准溶液采用空白基质溶液配制；其中，

4.根据权利要求1所述基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，其特征在于，所述含peg链段共聚物标准溶液的浓度范围为0.300~50.0μg/ml；和/或，

5. 根据权利要求1所述基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，其特征在于，所述色谱条件为：色谱柱为the xbridge protein beh c4 column；流动相a为体积分数0.1%的甲酸水溶液、流动相b为体积比为1：1的乙腈-异丙醇混合溶剂；采用梯度洗脱；柱温为30~50°c；流速为0.3~0.6 ml/min；进样量为5~20 μl。

6.根据权利要求5所述基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：0.1~0.4分钟，80%流动相a；0.4~2.5分钟，80%~60%流动相a；2.5~3分钟，60~40%流动相a；3~3.5分钟，40%~10%流动相a；3.5~4.5分钟，10%流动相a；4.5~4.51分钟，10%~80%流动相a；4.51~5.5分钟，80%流动相a。

7. 根据权利要求1所述基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，其特征在于，所述质谱条件为：采用正电喷雾电离模式；喷雾电压为3800 v；毛细管温度为320 ℃；分辨率为30000；agc目标值为2e5；最大注入时间为100 ms；源内碰撞诱导解离电压值为40~80 ev；碰撞能量为30~80 ev。

8. 根据权利要求1所述基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，其特征在于，所述监测离子对为m/z221.1383/89.0605，且质荷比的匹配容差为20 ppm。

9.根据权利要求1所述基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，其特征在于，所述色谱峰面积为监测离子对子离子的提取色谱峰面积。

10.根据权利要求1所述基于源内裂解和平行反应监测的含peg链段共聚物的分析方法，其特征在于，使用外标法进行回归分析；和/或，