一种百香果快速选育方法与流程

本发明属于选育领域，特别涉及百香果快速选育方法。

背景技术：

1、百香果是西番莲科西番莲属的多年生常绿藤本植物。现广泛种植于热带和亚热带地区，在中国广西、福建、海南、云南、广东等地均有栽培。该植物喜温暖湿润、阳光充足的环境。果实为椭圆形浆果，香气浓郁，酸甜可口，富含维生素c、氨基酸及多种矿物质。果实可直接鲜食，也常用于加工成果汁、果酱等产品，经济价值较高。

2、百香果产业面临市场品种高度单一（以‘钦果9号’为主导）、新品种选育周期长、单株评价成本高、珍贵母本易因保护不当而损失等突出问题，且现有技术缺乏从促花、带花嫁接至接后保花的全链条协同设计，严重制约品种多元化和产业升级。

技术实现思路

1、为了解决上述现有技术的不足之处，本技术提供了一种百香果快速选育方法，该方法能缩短百香果选育周期，为选育新的百香果资源提供更方便快捷的技术手段。

2、本发明的目的通过如下技术方案实现：

3、一种百香果快速选育方法，包括以下步骤：

4、（1）砧木与接穗的控童期同步促花处理：

5、反插腹接前30～45天启动砧木促花：

6、第一阶段——反插腹接前30～35天营养调控与整形修剪：停止施用氮肥，改施n:p2o5:k2o=8:15:20的高磷钾复合肥，每株每次施用50～80g，间隔10天一次，连续2次；苗高1.3～1.5米时摘心，保留顶端4～6个二级蔓，清除1.3米以下所有侧蔓和芽点，二级蔓长至6～8片叶时摘去顶端生长点；灌溉量减至正常量的70%，保持土壤相对含水量55%～65%；

7、第二阶段——反插腹接前20～25天植物生长调节剂诱导：叶面喷施15%多效唑可湿性粉剂500倍液（相当于500 mg/l），重点喷施顶端生长点和二级蔓中上部；多效唑喷施后7天，加喷6-ba（6-苄氨基嘌呤）150 mg/l+0.3%磷酸二氢钾+0.1%硼砂；

8、第三阶段——反插腹接前10～15天根部环割、追肥与促花巩固：对砧木主根埋深5cm处进行1/3宽度环剥，不伤木质部，涂布愈伤含naa 100 ppm的诱导膏，并用黑膜覆盖3天，同时追施n:p:k=10:30:20的高磷钾水溶肥5～8g/株，叶面喷施6-ba 100 mg/l+0.3%磷酸二氢钾+0.1%硼砂混合液；

9、反插腹接前25～30天启动接穗促花：

10、第一阶段——反插腹接前25～30天营养调控与物理促花：将各杂交选育单株实生苗（栽于15～20cm口径小盆中）灌溉量减至正常量的60%，持续7～10天；每盆追施n:p:k=10:30:20的高磷钾水溶肥2～3g，间隔7天一次；

11、第二阶段——反插腹接前20～25天植物生长调节剂诱导：叶面喷施15%多效唑可湿性粉剂500倍液，重点喷施顶端生长点；多效唑喷施后7天，加喷6-ba 150 mg/l+0.3%磷酸二氢钾+0.1%硼砂；

12、第三阶段——反插腹接前7～15天花苞发育与指标化监控：每3天观察记录接穗腋芽发育情况，以接穗出现直径≥0.5mm的可见花苞为最佳反插腹接时机，花苞数量≥3个时启动反插腹接操作；

13、（2）活体茎蔓限深削皮反插腹接：将经促花处理且带有≥0.5mm花苞的杂交选育单株绿色半木质化接穗，所述接穗保留于母本营养杯中，在接穗对接嫁接位置，采用专用接穗限深削切钳，于接穗节间一侧以约20°～30°倾角斜切一刀，形成深度约1.5～2.5mm、长约1.0～1.5cm的斜切口，接穗与母本单株不完全断离。采用专用砧木v型削切钳，在砧木顶端二级蔓的嫁接部位（茎径与接穗大小一致，大小约3-3.5mm），在两侧以匹配角度削出长度、深度相同的正楔形削面。操作时，将砧木的正楔形削面反向插入接穗斜切口中，使两者形成层自然重合度≥95%卡合对齐，然后采用硅胶固定夹夹持固定；

14、（3）一砧多穗立体反插腹接与光质调控愈合：将4～6个不同新品种杂交单株的接穗，分别沿砧木各二级蔓纵向错开5～8cm进行反插腹接卡合，外部套设双层光谱调节罩，所述调节罩包括透明聚乙烯内膜、外层仅透红光660nm和远红光730nm的滤光布，保持相对湿度85%以上、温度25～28℃，反插腹接后第7天移除光罩；

15、（4）反插腹接固定与接穗自身根系保留竞争管理：采用可调式软硅胶固定夹夹持嫁接部位，并利用托盆网袋将接穗母本营养杯悬挂于钢丝线上；反插腹接成活后8-14天，不剪断接穗自身根系，将各母本小盆置于潮汐灌溉槽中，控制每日供液量为正常量的55%～65%，迫使不同接穗间产生定向养分竞争；反插腹接成活后15天，反插腹接口完全愈合后，于接穗靠接口下方剪断接穗，使其脱离母本盆，成为独立植株；

16、（5）嫁接后三阶段成花保花处理：

17、阶段一——反插腹接后第1～7天愈合初期保花：反插腹接后第1天喷施芸苔素内酯0.01 mg/l+6-ba 50 mg/l+0.2%磷酸二氢钾，重点喷施接穗带花苞的节位及其上、下各1节；光罩内维持花苞局部湿度≥80%；反插腹接后第3天通过固定夹注药孔注入多菌灵1000倍液+6-ba 20 mg/l混合液0.5～1ml；

18、阶段二——反插腹接后第8～14天愈合后期壮花：反插腹接后第8天和第12天喷施0.3%磷酸二氢钾+0.1%硼砂+6-ba 100 mg/l，全株喷施至叶片滴水，重点喷施花苞及附近茎蔓；每日对带花苞的接穗母本小盆额外补水50～100ml；第8～10天每日上午9点前、下午4点后对花苞部位喷雾增湿，保持花苞局部湿度70%～80%；第15天完全露天开放后，遇高温≥32℃天气，上午10点至下午3点对花苞进行遮阳处理；

19、阶段三——反插腹接后第15～25天花期保花：花苞开放前3天及盛花期喷施0.2%磷酸二氢钾+0.05%硼砂+芸苔素内酯0.01 mg/l；开花当天上午8:00～10:00进行人工辅助授粉；谢花后3～5天喷施ga3 50 mg/l+0.2%磷酸二氢钾保果；

20、（6）动态开闭网棚与露天逆境胁迫筛选：反插腹接愈合后第7天起，逐步打开网棚两侧至2.5～3.0m，第15天完全敞开网棚，使植株暴露于自然高温、强光、风雨环境下；

21、（7）基于三阶段五维动态量化评估体系的初筛与评分决策：

22、阶段一——花器与早期活力评价，反插腹接后第15～22天：记录现蕾整齐度cv值，cv≤15%赋5分；测量花苞基部直径与长度比，以≥0.65为优；使用spad-502仪测定接穗第3片成熟叶叶绿素含量，spad≥45赋高分；此阶段总分排名末30%的品系直接淘汰；

23、阶段二——坐果与即时产量评价，反插腹接后第28～35天：统计前10朵花自然坐果率，fr≥80%计5分；用数显游标卡尺测量日均果径增长速率dgr，dgr≥1.2mm/天计高分；果实采收后以0.01g精度电子天平称量单果重及单株总产量（第一批果实为计），平均单果重（afw）≥110g计5分，100≤afw<110g计4分，90≤afw<100g计3分，80≤afw<90g计2分，afw<80g计1分；单株总产量（py）≥3000g计5分，2000g≤py<3000g计4分，1000g≤py<2000g计3分，500g≤py<1000g计2分，py<500g计1分；记录限量供液下叶片萎蔫恢复时间，以<30分钟为强竞争力；测量时以同一砧木未嫁接二级蔓为对照，按公式“校正值=接穗实测值/对照值×100”消除砧木个体差异；

24、阶段三——采后品质与一致性评价，反插腹接后第80～85天：用数字式折光仪测定可溶性固形物tss，tss≥18%得5分；用酸碱滴定法测定总酸ta，ta在1.0%～1.5%为优质区间；计算固酸比ssr，10.0～13.5为优质窗口；用便携式色差仪测定果皮色泽l*a*b*值，计算同品系3个果实色差δe均值，δe≤3.0赋附加分+2；测定可食率，≥52%为合格；

25、综合评分模型：总分=(0.30×阶段一标准化得分)+(0.40×阶段二标准化得分)+(0.30×阶段三标准化得分)，其中产量维度占阶段二权重50%，品质维度占阶段三权重65%，抗性维度取三期平均值后乘调整系数1.2；综合cv（果实重量、tss、果皮色泽）≤10%的品系直接推荐进入区试；

26、（8）生理生化辅助早期诊断：于反插腹接后第20天，采集各接穗第2～3片功能叶，测定超氧化物歧化酶sod、过氧化物酶pod活性和丙二醛mda含量，计算胁迫耐受指数sti=(sod+pod)/mda；同时采用elisa试剂盒检测脱落酸aba与赤霉素ga3比值；当sti≥180且aba/ga3≥2.5时，判定为高抗性优系，在阶段评分中享受附加权重×1.15；

27、（9）失效接穗的原位切除与备用接穗即时补接：在阶段一或阶段二被淘汰的品系，于靠接口下方2cm处剪断该淘汰品系接穗，在砧木同一二级蔓的清洁部位按照步骤（2）重新反插腹接，所述清洁部位距旧伤口≥5cm，反插腹接经过同步促花处理的新备用接穗，二次反插腹接愈合期缩短至7～10天，实现同砧多批次滚动筛选；

28、（10）母本双备份脱毒保存与扩繁：反插腹接成功后，将接穗下部原杂交实生苗换入含脱毒基质的大杯中保存，所述脱毒基质为草炭:蛭石=3:1，添加木霉菌及缓释肥；定期进行rt-pcr病毒检测黄瓜花叶病毒、百香果木纹病毒，阳性则淘汰；筛选确定优系后，直接从备份母本取茎段进行嫁接或扦插扩繁。

29、优选的是，步骤（2）中所述反插腹接时，采用专用接穗限深削切钳，于接穗节间一侧以约25°倾角斜切一刀，形成深度约2mm、长约1.3cm的斜切口。

30、优选的是，步骤（4）中所述可调式软硅胶固定夹内壁设有波浪形缓冲齿，外壁带刻度指示条，夹持力弹性系数为0.5 n/mm，且中央设有贯穿的注药孔，用于反插腹接后注入多菌灵1000倍液。

31、优选的是，步骤（4）中所述托盆网袋为柔性多孔网兜，底部内衬椰糠吸水层，网袋上端设有挂钩及长度调节绳，可随接穗生长自动调整承托高度。

32、优选的是，步骤（5）中所述阶段一保花处理后花苞脱落率≤5%，阶段二壮花处理后花苞膨大率≥90%，阶段三保花处理后坐果率≥80%。

33、优选的是，步骤（7）中所述可食率测定后，对排名前20%的i级推荐品系，直接利用步骤（9）的备份母本进行扩繁进入区试。

34、优选的是，步骤（9）中所述二次反插腹接后，新接穗的愈合期比初次反插腹接缩短30%，且不影响砧木上其他已成活接穗的正常开花结果。

35、本技术还提供一种用于百香果快速选育及高接换种方法的专用接穗砧木一体化切钳：

36、所述切钳包括下板（1）和活动板（2），活动板（2）上端设有把手（3），活动板（2）一面设有v型刀片（4），另一面设有斜刀片（5），所述下板（1）两侧分别对应设置固定钢片（6）和可移动钢片（7），所述可移动钢片（7）通过弹簧调节所需位置，所述v型刀片（4）与固定钢片（6）、v型刀片（4）与可移动钢片（7）均形成20°～30°角，所述斜刀片（5）与固定钢片（6）形成20°～30°角，所述固定钢片（6）和可移动钢片（7）高度均为5mm，距离为3～3.5mm。

37、本技术还提供一种用于百香果快速选育及高接换种方法的双层光谱调节罩，由透明聚乙烯内膜（4）和可拆卸外层滤光布套（3）套在圆柱骨架（2），光罩两端设有松紧带式束口（1），可拆卸外层滤光布套（3）顶部设有透气微孔（5），透明聚乙烯内膜（4）内壁嵌有微型温湿度指示贴片（6）。

38、所述圆柱骨架直径4cm，长6cm，有三根横向支持杆。

39、所述调节罩的外层滤光布仅透射波长660nm红光和730nm远红光，透光率≥85%，透气微孔的孔径0.5mm，间距2cm。

40、砧木与接穗同步促花，保花壮花，再通过三阶段五维动态量化评估体系的标准化选育打分模型消除人工主观误差，筛选出花芽分化充分、花蕾饱满健壮、坐果率高、果实品质的接穗品系；通过生理生化诊断，筛选出抗性高的接穗品系。建立失效接穗的原位切除、同砧滚动补接机制，筛选通量提升从而实现快速筛选接穗。