ITGA6阳性iPSC源小梁网类细胞在制备治疗高眼压疾病药物中的应用及筛选方法与流程

技术特征：
1.itga6阳性ipsc-tm细胞样品在制备治疗高眼压疾病药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，itga6阳性ipsc-tm细胞样品中itga6阳性ipsc-tm细胞比率为20％以上；优选的，itga6阳性ipsc-tm细胞样品中itga6阳性ipsc-tm细胞比率为22.8％以上。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，itga6阳性ipsc-tm细胞样品中itga6阳性ipsc-tm细胞比率为30％以上。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，itga6阳性ipsc-tm细胞样品中itga6阳性ipsc-tm细胞比率为40％以上。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，高眼压疾病包括高眼压症、青光眼。6.一种筛选权利要求1所述itga6阳性ipsc-tm细胞样品的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将人源ipsc-tm细胞与fitc-itga6抗体混合在2-8℃下孵育20-30分钟；孵育完成，离心孵育完成的细胞，并用缓冲液洗涤，然后用缓冲液重悬，避光加入带有anti-fitc的磁珠，混匀，4℃以下避光孵育15-20分钟，制得磁珠细胞混合物；(2)将步骤(1)制得的磁珠细胞混合物用缓冲液洗涤后，再用缓冲液重悬后，置于磁场中的ls分选株进行纯化，无磁性细胞通过ls分选柱，磁性细胞保留在ls分选柱上，将磁性细胞在ls分选柱上分离收集，获得磁性细胞样品，将收集的磁性细胞样品由bd facscalibur确定itga6阳性ipsc-tm细胞的比率，筛选itga6阳性ipsc-tm细胞比率为5.8％以上的细胞样品。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，ipsc-tm细胞与itga6抗体混合的数量体积比为1.0
×
106个：(90-110)μl；优选的，步骤(1)中，带有anti-fitc的磁珠加入量，以ipsc-tm细胞数与磁珠体积比计为1.0
×
106个：(9-11)μl。8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，筛选itga6阳性ipsc-tm细胞比率为20％以上的细胞样品；优选的，步骤(2)中，筛选itga6阳性ipsc-tm细胞比率为30％以上的细胞样品；优选的，步骤(2)中，筛选itga6阳性ipsc-tm细胞比率为40％以上的细胞样品。9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，将磁性细胞在ls分选柱上分离收集的方法是通过柱塞推挤收集。10.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)或步骤(2)中的缓冲液为含有体积分数为0.5％牛血清白蛋白和2mm乙二胺四乙酸的1
×
d-pbs缓冲液。

技术总结
本发明提供了ITGA6阳性iPSC源小梁网类细胞在制备治疗高眼压疾病药物中的应用及筛选方法，属于细胞治疗技术领域，具体为ITGA6阳性iPSC-TM细胞样品在制备治疗高眼压疾病药物中的应用；还提供了一种筛选ITGA6阳性iPSC-TM细胞样品的方法，主要步骤：将人源iPSC-TM细胞与FITC-ITGA6抗体混合，加入带有Anti-FITC的磁珠，制得磁珠细胞混合物；置于磁场中的LS分选株进行纯化，筛选ITGA6阳性iPSC-TM细胞比率为5.8％以上的细胞样品。5.8％以上的细胞样品。5.8％以上的细胞样品。


技术研发人员：朱玮 封鹏超 曹启龙 张菲凡 刘佳 苑志欣 周芙玲
受保护的技术使用者：青岛海尔生物科技有限公司
技术研发日：2022.11.14
技术公布日：2022/12/30