一种基于人工核酶的食品中污染物多色荧光分析方法与流程

技术特征：
1.一种同时检测多种污染物的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤为：(1)合成检测探针：在aunps表面修饰氯霉素、雌二醇激素或黄曲霉毒素m1的引物dna和相应的特异性抗体，分别得到针对氯霉素、雌二醇激素、黄曲霉毒素m1的三种检测探针；(2)将氯霉素、雌二醇激素、黄曲霉毒素m1相应抗原进行混合并添加至黑色聚苯乙烯微孔板，bsa封闭；(3)将步骤(1)制备的氯霉素、雌二醇激素、黄曲霉毒素m1的检测探针分别稀释后与待测样品混合后加入至步骤(2)中的黑色聚苯乙烯微孔板，孵育并清洗黑色聚苯乙烯微孔板；(4)将针对氯霉素、雌二醇激素、黄曲霉毒素m1的信号dna和mg
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分别加入至步骤(3)中的黑色聚苯乙烯微孔板，孵育并检测荧光强度信号。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，氯霉素的引物dna的序列为：5
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hs-(t)
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tctcttctccgagccggtcgaaatagtgcgt-3’；雌二醇激素的引物dna的序列为：5
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gattgtctccgagccggtcgaaatgaagcta-3’；黄曲霉毒素m1的引物dna的序列为：5
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gctactctccgagccggtcgaaattagaacg-3’。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，氯霉素的信号dna的序列为：5
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fam-acgcactat/ra/ggaagagat-bhq1-3’，雌二醇激素的信号dna的序列为：5
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cy3-tagcttcat/ra/ggacaatca-bhq2-3’，黄曲霉毒素m1的信号dna的序列为：5
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texas red-cgttctaat/ra/ggagtagcc-bhq2-3’。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，将氯霉素、雌二醇激素、黄曲霉毒素m1相应抗原进行混合并添加至黑色聚苯乙烯微孔板，35～38℃下孵育1.5～2.5h，加入220μl 2％bsa在35～38℃下封闭0.5～1.5h。5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，氯霉素、雌二醇激素、黄曲霉毒素m1相应抗原的添加浓度为0.6～1.5μg/ml。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，氯霉素、雌二醇激素、黄曲霉毒素m1的检测探针的稀释倍数为1/80-1/60。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，氯霉素、雌二醇激素、黄曲霉毒素m1的信号dna的添加浓度为0.01～0.1μg/ml，mg
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的浓度为5～15mm。8.一种多色荧光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括针对氯霉素、雌二醇激素和黄曲霉毒素m1的检测探针、包被有氯霉素、雌二醇激素和黄曲霉毒素m1包被抗原的黑色聚苯乙烯微孔板、bsa、氯霉素标准品、雌二醇激素标准品、黄曲霉毒素m1标准品、信号dna和mg
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。9.根据权利要求8所述的多色荧光检测试剂盒，其特征在于，所述检测探针的制备方法为：取一定量的aunps，加入氯霉素、雌二醇激素或黄曲霉毒素m1单克隆抗体，室温孵育，形成三种aunps-抗体分散液；巯基修饰的氯霉素、雌二醇激素或黄曲霉毒素m1的引物dna经tcep活化后分别加入对应aunps-抗体分散液，混匀并冷冻，溶解后加入peg20000和pbs，获得aunp-dna-抗体分散液；加入bsa进行孵育，离心取上清获得检测探针。10.根据权利要求8或9所述的多色荧光检测试剂盒，其特征在于，氯霉素的信号dna的序列为：5
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fam-acgcactat/ra/ggaagagat-bhq1-3’，雌二醇激素的信号dna的序列为：5
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cy3-tagcttcat/ra/ggacaatca-bhq2-3’，黄曲霉毒素m1的信号dna的序列为：5
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texas red-cgttctaat/ra/ggagtagcc-bhq2-3’。

技术总结
本发明公开了一种基于人工核酶的食品中污染物多色荧光分析方法，属于分子生物学检测领域。本发明以金纳米颗粒为载体，合成AuNPs-DNA-抗体检测探针，抗体用于捕获目标物，引物DNA用于放大信号。在最佳条件下，本发明的方法实现了CAP、17β-E2和AFM1的同时检测，检测范围分别为0.333ng/mL-3.333μg/mL、3.333ng/mL-3.333μg/mL、3.333fg/mL-3.333ng/mL，定量限分别为0.333ng/mL、3.333ng/mL、3.333fg/mL。本发明检测准确度、灵敏度和稳定性较高，相比现有技术，本发明建立的方法在检测过程中，无需添加额外的核酸外切酶，降低反应成本。降低反应成本。降低反应成本。


技术研发人员：郭亚辉 沈维韦 桑潘婷 丁洪流 金萍 谢云飞 姚卫蓉
受保护的技术使用者：苏州市产品质量监督检验院
技术研发日：2022.03.11
技术公布日：2022/5/30