动物组织中颠茄类生物碱的检测方法

技术特征：
1.一种动物组织中颠茄类生物碱的检测方法，其特征在于，包括：样品制备，解冻后的待测动物组织清洗后，切块、捣碎，分装样品容器中，保存备用；样品提取，称取样品5g试样，精确至0.01g，于50ml离心管中，加入50μl内标工作液涡旋混匀30s，并静止10min，加入15ml酸化乙腈旋涡混匀1min后，旋涡混匀1min后，35℃～55℃超声提取10min，取出冷却至室温，4500r/min离心5min，上清液转移至100ml鸡心瓶中；将所述离心管内的去除上清液后的固体进行二次提取，得到第二次的上清液，将两次的上清液合并，45℃，旋转蒸发至近干，得到残渣；样品净化，向所述残渣内加入50μl甲醇，水，溶解残渣，转移至2ml离心管中，用水定容至1.0ml，加入吸附剂，涡旋振荡30s，加入1ml正己烷，涡旋振荡10s，12000r/min离心5min，弃去上层油脂层，重复净化一次，至-20℃冷冻30min，12000r/min离心5min，下层清液经过滤后供液质使用；样品检测，将所述过滤后的下层清液上机检测，检测条件包括：色谱柱：infinitylabporoshell120hph-c18(2.1mm
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100mm，1.9μm)；流速：0.2ml/min；流动相：a相为5mm甲酸铵 0.1％甲酸；b相为甲醇，梯度洗脱；柱温：40℃，进样量：10μl；内外标法定量；质谱离子源:esi；离子源温度:100℃；干燥气流量:10l/h；毛细管电压:4000v；气流温度:350℃；雾化气压力:40psi；碰撞气类型:氮气；扫描方式:正离子；检测方式:mrm。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述吸附剂包括10mgpsa,10mg nh2、20mg中性氧化铝。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件以体积分数计，流速为0.2ml/min；在0～1min，流动相a相为95％，流动相b相为5％；在2～4min，流动相a相为90％，流动相b相为10％；在5min，流动相a相为50％，流动相b相为50％；在10min，流动相a相为20％，流动相b相为50％；在10～15min，流动相a相为95％，流动相b相为5％。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，将所述离心管内的去除上清液后的固体进行二次提取，包括：震散固体，加入15ml酸化乙腈，手摇上下震荡30s后，旋涡混匀加超声，得到第二次的上清液。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述下层清液过滤，包括：将所述下层清液经0.22μm滤膜过滤。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述动物组织包括：动物肌肉、肉、心、肝、肾、肺中的一种或多种。7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，还包括：标准储备液：分别称量适量山莨菪碱、消旋山莨菪碱、氢溴酸樟柳碱、硫酸阿托品、莨菪碱、东莨菪碱、氢溴酸后马托品、托品酸、去甲阿托品经折算后的山莨菪碱、消旋山莨菪碱、樟柳碱、阿托品、莨菪碱、东莨菪碱、后马托品、托品酸、去甲阿托品含量均为10mg，用甲醇定容至10ml棕色容量瓶中，制备为质量浓度为1000μg/ml标准储备液；移取山莨菪碱、消旋山莨菪碱、樟柳碱、阿托品、莨菪碱、东莨菪碱、后马托品、托品酸、去甲阿托品标准溶液，用甲醇定容于10ml棕色容量瓶中,制备为质量浓度为1000ng/ml混合中间液；在空白基质中分别加入10ng/ml混合标准溶液20μl、50μl、100μl、0.5ml、2ml，加入
1000ng/ml混合标准溶液50μl、100μl、200μl，按照与样品相同提取与净化步骤进行处理，制备8个质量浓度标准溶液为0.2ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和200ng/ml，后马托品为内标，内标法绘制工作曲线。

技术总结
本发明提供了一种动物组织中颠茄类生物碱的检测方法，采用分散固相萃取-高效液相色谱三重四极杆质谱联用法，以后马托品为内标物，同时测定动物组织中山莨菪碱、消旋山莨菪碱、樟柳碱、阿托品、东莨菪碱、托品酸、去甲阿托品等，优化了前处理和分离检测条件。目标化合物在，在0.5ng/L-200ng/L范围内线性良好，方法检出限为0.05～0.1μg/kg方法定量限为0.2～0.5μg/kg,基质空白加标回收率为80.2～119％，平行测定的相对标准偏差为1.13％～14.5％。该方法能够精准的测出动物组织中的颠茄类生物碱，测定结果准确可靠，为颠茄类生物碱的测量提供了可靠的数据，具有显著的经济效益，具有广阔的市场前景。对于指导药物残留的测量具有很好的参考价值。测量具有很好的参考价值。测量具有很好的参考价值。


技术研发人员：张惠峰 魏春雁 范宏 刘笑笑 孟繁磊 宋志峰 张慧 郑妍婕
受保护的技术使用者：吉林省农业科学院
技术研发日：2021.12.27
技术公布日：2022/4/29