利用AA3测定小麦中水溶性钙离子鉴定小麦耐盐性的方法

本发明涉及农业检测，尤其涉及一种利用aa3测定小麦中水溶性钙离子鉴定小麦耐盐性的方法。

背景技术：

1、随着沿海盐碱地区农业生产的发展，冬小麦耐盐种质筛选成为提高盐碱地利用效率的重要技术需求。冬小麦苗期受地下水埋深、土壤水分消耗及表层蒸发影响，根际盐分会发生动态迁移并形成阶段性盐分暴露过程。现有耐盐鉴定方法多采用固定盐浓度或固定时间进行处理，难以反映实际盐碱土壤环境下盐分动态变化对冬小麦的影响，同时不同种质自身生理基础差异也会影响评价准确性。因此，如何针对沿海盐碱土壤中冬小麦苗期动态盐分暴露过程，实现快速、准确的耐盐种质筛选，仍是当前需要解决的技术挑战。

2、中国专利公开号：cn120629504a，公开了一种基于aa3型流动分析仪的小麦耐盐性鉴定方法，该方法包括：步骤s1，获取一致性符合标准的若干小麦，经过预处理得到待测样品；步骤s2，分别制备若干浓度不同的钠离子标准工作液和若干浓度不同的钾离子标准工作液；步骤s3，设定流动分析仪的工作参数，分别对各标准工作液使用连续流动分析仪进样并经火焰光度计测定各标准工作液的吸光度，根据吸光度得出钠离子标准工作曲线及钾离子标准工作曲线；步骤s4，根据钠离子标准工作曲线及钾离子标准工作曲线构建待测样品的检测参数；步骤s5，对待测样品使用连续流动分析仪进样并经火焰光度计测定各标准储备液的吸光度；当待测样品的吸光度的峰高超过对应的标准工作曲线中最大浓度峰高的80%时，判断需要对样品进行稀释，并根据稀释前后测定的待测样品的浓度和吸光度修正对应的标准工作曲线；步骤s6，根据对待测样品测定的钠离子浓度和钾离子浓度分析小麦的耐盐性。

3、由此可见，该现有技术存在以下技术问题：其采用预处理后的小麦待测样品进行钠离子和钾离子的定量检测，并根据检测结果分析小麦耐盐性，检测过程主要围绕离子浓度测定展开，未结合沿海盐碱土壤环境下地下水埋深、根际土壤含水率及根际电导率的动态变化确定实际盐分暴露过程，因而难以使检测节点与冬小麦苗期实际返盐过程相对应；同时，其主要依据钠离子和钾离子的检测结果进行耐盐性分析，未考虑水溶性钙离子在不同盐分暴露阶段的响应及盐分减弱后的恢复变化，也难以结合苗期生长保持状态反映冬小麦种质对动态返盐过程的耐受能力，导致针对沿海盐碱土壤环境下冬小麦苗期返盐过程的耐盐种质早期筛选适应性不足。

技术实现思路

1、为此，本发明提供一种利用aa3测定小麦中水溶性钙离子鉴定小麦耐盐性的方法，用以通过根据沿海盐碱土壤环境下冬小麦苗期的根际水盐变化划分盐分暴露阶段，并利用各阶段水溶性钙离子的阶段响应特征及恢复状态进行耐盐性鉴定，来克服现有技术中由于采用固定盐浓度或固定时间进行盐胁迫处理，且未结合实际返盐过程确定检测节点导致检测结果难以反映冬小麦对动态盐分暴露的生理响应进而造成沿海盐碱土壤环境下冬小麦耐盐种质早期筛选准确性不足的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供一种利用aa3测定小麦中水溶性钙离子鉴定小麦耐盐性的方法，包括：

3、基于沿海盐碱土壤环境下冬小麦播后苗期的地下水埋深、根际土壤含水率和根际电导率的变化确定根际盐分暴露过程，并基于所述根际电导率与根际土壤含水率、地下水埋深之间的变化关系划分盐分暴露阶段；

4、根据所述盐分暴露阶段确定采样节点，采集返盐前及各采样节点的冬小麦功能叶片，提取水溶性钙离子，获得水溶性钙离子待测液；

5、采用aa3连续流动分析仪检测所述水溶性钙离子待测液，获得返盐前及各采样节点的水溶性钙离子含量，并根据各盐分暴露阶段的水溶性钙离子含量相对于返盐前水溶性钙离子含量的变化方向及变化程度，确定各盐分暴露阶段对应的水溶性钙离子响应值；

6、根据各盐分暴露阶段对应的水溶性钙离子响应值及所述盐分暴露阶段的根际电导率变化，确定冬小麦在不同盐分暴露阶段的水溶性钙离子阶段响应特征，并根据盐分高暴露阶段与盐分减弱阶段对应的水溶性钙离子含量变化，确定水溶性钙离子恢复状态；

7、获取返盐前及各采样节点的冬小麦苗期生长指标，根据所述苗期生长指标相对于返盐前的变化，确定苗期生长保持状态；

8、基于所述水溶性钙离子阶段响应特征、所述水溶性钙离子恢复状态和所述苗期生长保持状态，确定冬小麦种质的返盐耐受状态及耐盐等级。

9、进一步地，所述确定根际盐分暴露过程包括：

10、获取冬小麦播后苗期不同监测时刻的地下水埋深、根际土壤含水率和根际电导率；

11、根据所述根际土壤含水率和根际电导率的时序变化，结合所述地下水埋深变化，确定根际盐分的富集变化过程；

12、根据所述根际电导率的持续升高、峰值变化及降低或稳定变化，确定根际盐分的开始富集、持续富集及盐分减弱过程。

13、进一步地，所述划分盐分暴露阶段的过程包括：

14、根据所述根际盐分的开始富集过程，确定根际电导率进入持续升高状态的时段；

15、根据所述根际盐分的持续富集过程，确定根际电导率达到阶段性高值的时段；

16、根据所述根际盐分的盐分减弱过程，确定根际电导率降低或趋于稳定的时段，并分别将上述时段划分为盐分快速累积阶段、盐分高暴露阶段和盐分减弱阶段。

17、进一步地，所述确定采样节点的过程包括：

18、根据所述盐分快速累积阶段、盐分高暴露阶段和盐分减弱阶段分别确定对应的采样时段；

19、在各采样时段内确定对应采样时刻，并在返盐前同步确定基准采样时刻；

20、按照所述基准采样时刻及各采样时刻采集冬小麦功能叶片。

21、进一步地，所述提取水溶性钙离子的过程包括：

22、称取各采样节点的冬小麦功能叶片并加入预冷去离子水，进行冰浴研磨，获得叶片匀浆；

23、对所述叶片匀浆进行离心，分离获得上清液；

24、对所述上清液进行微孔滤膜过滤，获得水溶性钙离子待测液。

25、进一步地，所述采用aa3连续流动分析仪检测所述水溶性钙离子待测液的过程包括：

26、将所述水溶性钙离子待测液和钙离子显色试剂分别输入aa3连续流动分析仪；

27、使所述水溶性钙离子待测液与所述钙离子显色试剂连续混合并进行显色反应；

28、在预设检测波长下采集显色反应对应的吸光响应，并根据钙离子标准曲线确定各采样节点的水溶性钙离子含量。

29、进一步地，所述确定水溶性钙离子响应值的过程包括：

30、获取返盐前及各采样节点的水溶性钙离子含量；

31、将各盐分暴露阶段对应的水溶性钙离子含量分别与返盐前水溶性钙离子含量进行比较，确定各盐分暴露阶段对应的水溶性钙离子变化方向及变化程度；

32、根据各盐分暴露阶段对应的根际电导率变化确定对应的盐分暴露变化，并将所述盐分暴露变化与对应的水溶性钙离子变化方向及变化程度进行对应，确定各盐分暴露阶段对应的水溶性钙离子响应值。

33、进一步地，所述确定水溶性钙离子恢复状态的过程包括：

34、获取盐分高暴露阶段和盐分减弱阶段对应的水溶性钙离子含量，并获取返盐前的水溶性钙离子含量；

35、比较所述盐分高暴露阶段与盐分减弱阶段的水溶性钙离子含量，确定盐分减弱后水溶性钙离子含量相对于盐分高暴露阶段的变化方向及变化程度，并判断所述水溶性钙离子含量是否向返盐前含量回归；

36、根据盐分减弱阶段的水溶性钙离子含量相对于返盐前水溶性钙离子含量的回归程度，确定水溶性钙离子的充分恢复、部分恢复、恢复不足或未恢复状态。

37、进一步地，所述确定苗期生长保持状态的过程包括：

38、获取返盐前及各采样节点的冬小麦株高、叶面积和分蘖数中的至少一种苗期生长指标；

39、将各采样节点的所述苗期生长指标与返盐前对应的苗期生长指标进行比较，确定不同盐分暴露阶段的苗期生长变化；

40、根据所述苗期生长变化确定冬小麦苗期生长保持状态。

41、进一步地，所述确定冬小麦种质的返盐耐受状态及耐盐等级的过程包括：

42、根据所述水溶性钙离子阶段响应特征、所述水溶性钙离子恢复状态及所述苗期生长保持状态，确定冬小麦种质的返盐耐受状态；

43、根据所述返盐耐受状态与预设耐盐等级判定条件进行匹配，确定冬小麦种质的耐盐等级。

44、与现有技术相比，本发明的有益效果在于，本发明根据沿海盐碱土壤环境下根际水盐变化确定盐分暴露阶段及采样节点，解决固定时间采样难以对应冬小麦实际返盐过程的问题，提高了采样结果与实际盐分暴露过程的匹配性；并通过以返盐前水溶性钙离子含量为基准，分析盐分高暴露及盐分减弱阶段的钙离子响应和恢复变化，解决不同种质基础含量差异导致耐盐响应难以直接比较的问题，提高了耐盐性评价的针对性；进一步结合苗期生长保持状态进行返盐耐受判定，减少单一生理指标造成的评价偏差；同时通过aa3连续流动分析仪进行水溶性钙离子检测，提高多采样节点样品的检测效率和检测一致性。