一种环保型苏木素染色液及其制备方法

本发明属于细胞染色，具体涉及一种环保型苏木素染色液及其制备方法。

背景技术：

1、苏木素染色是一种常用的组织学染色方法，用于将细胞核染成蓝紫色，以便在显微镜下观察组织结构和病理变化。其基本原理在于，苏木素（hematoxylin）是一种碱性染料，经氧化后形成苏木红（hematein），在媒染剂（如铝离子或铁离子）作用下形成带正电荷的复合物。细胞核内的dna和rna带负电荷，通过离子键或氢键与苏木精复合物结合，使细胞核呈现蓝紫色或深蓝色。

2、现有的harris`苏木素存在如下缺点：1）高毒性与环境风险：经典配方含氧化汞，剧毒且难降解，存在重金属污染与职业暴露风险；虽有无汞改良版，但仍需注意安全处置。2）易产生沉淀与污染：表面易形成金属反光膜，使用前需每日过滤，否则切片会出现芝麻点沉淀，影响观察。3）使用周期短：持续氧化易老化失效，常规1周左右需更换，维护成本高。4）易过染与操作门槛高：属退行性染色，染色力强但易导致细胞核过染，需严格控制盐酸酒精分化时间，操作难度大。5）适配性有限：含酒精，不适用于免疫组化、特殊染色（如脂肪染色）后的核复染。传统lillie mayer苏木素存在如下缺点：1）染色力相对偏弱：细胞核着色深度与饱满度不及harris，对核质致密、高核浆比组织（如肿瘤、淋巴细胞）细节显示不足。2）批量效率低：属进行性染色，无需分化但染色时间更长（5–15分钟），不适合大批量常规he染色的快节奏流程，染色力＜1000张/周期。3）长期使用性能波动：虽比harris稳定，但长时间重复使用会因染料消耗、杂质累积导致着色不均，需定期监控并更换。4）选择性局限：对胞质、纤维背景着色弱，若需更强核浆对比，需搭配更适配的染料体系；对于粘膜染色易过染，阻碍粘膜病变的诊断。

3、为降低苏木素染色液对环境污染的风险，提高其使用周期、染色力、批量染色效率以及适配性，本发明提出了一种环保型苏木素染色液及其制备方法。

技术实现思路

1、本发明旨在提供一种环保型苏木素染色液及其制备方法，以解决现有技术中苏木素染色液对环境污染高、使用周期短、染色力弱的技术问题。

2、为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：

3、第一方面，本发明提供了一种环保型苏木素染色液，所述苏木素染色液由苏木精、硫酸铝钾、碘酸钠、无水乙醇、蒸馏水、甘油组成；所述苏木精、硫酸铝钾和碘酸钠的质量比为4~6：75~85：0.2~0.4，所述无水乙醇、蒸馏水和甘油的体积比为45~55：890~910：28~32，所述苏木精与无水乙醇的质量体积比为4~6g：45~55ml。

4、优选地，所述苏木素染色液由苏木精、硫酸铝钾、碘酸钠、无水乙醇、蒸馏水、甘油组成；所述苏木精、硫酸铝钾和碘酸钠的质量比为5：70：0.3，所述无水乙醇、蒸馏水和甘油的体积比为50：900：30，所述苏木精与无水乙醇的质量体积比为1g：10ml。

5、第二方面，本发明提供了上述环保型苏木素染色液的制备方法，包括如下步骤：

6、s1、将苏木精溶于无水乙醇中，获得苏木精无水乙醇液；

7、s2、将硫酸铝钾加入蒸馏水中，直接搅拌溶解或加热搅拌溶解，得到硫酸铝钾水溶液；

8、s3、将硫酸铝钾水溶液与苏木精无水乙醇液充分混合，再加入碘酸钠，搅拌溶解，最后加入甘油，充分摇匀后，获得苏木素染色液。

9、优选地，所述加热是指将温度加热至40~50℃。

10、优选地，所述硫酸铝钾水溶液通过加热溶解搅拌溶解后需降温处理。

11、优选地，所述降温后的温度为10~30℃。

12、第三方面，本发明提供了一种环保型苏木素-伊红染色试剂盒，由促染液、分化液、伊红液和上述苏木素染色液组成；

13、所述促染液为冰醋酸；所述分化液由体积比为1：99的浓盐酸和95%酒精组成，所述伊红液由质量体积比为1g：200ml的水溶性伊红和蒸馏水组成。

14、第三方面，本发明提供了采用上述环保型苏木素-伊红染色试剂盒对组织或脱落细胞的染色方法，包括如下步骤：

15、1）将组织的脱蜡切片或脱落细胞涂片进行清洗；

16、2）苏木素工作液染色4~6min后，自来水冲洗25~35s；

17、3）用分化液作用15~25s，流水蓝化4~6min；

18、4）伊红液染色0.8~1.2min，自来水冲洗25~35s；

19、5）依次经85%酒精2~3s、95%酒精4~6s和95%酒精4~6s；石碳酸i、ⅱ各作用4~6min；于二甲苯i、ⅱ、ⅲ中各处理2~4min，获得完成染色的中性树胶封片。

20、优选地，所述切片脱蜡的方法为将切片于二甲苯i、ⅱ中各脱蜡4~6min，以保证充分脱蜡；再依次经95%酒精4~6min、95%酒精4~6min、85%酒精2~3min和75%酒精2~3min，自来水冲洗0.8~1.2min。

21、优选地，所述苏木素工作液由体积比为250：2~3的权利要求1或2所述的苏木素染色与促染液组成。

22、与现有技术相比，本方案的有益效果：

23、1.无毒性与环境风险：所有试剂均无剧毒且易降解，不存在重金属污染与职业暴露风险。

24、2.不产生沉淀与污染：表面不易形成金属反光膜，不需要每日过滤，使用后废液经稀释后可正常途径排污。

25、3.使用周期长：半成熟状态，持续氧化，性能稳定，染色稳定，染色力可稳定持续14天，维护成本低。

26、4.批量效率高：染色时长5min，适合大批量常规he染色，持续染色4500-5000张/周期。

27、5.染色力强：细胞核着色深度与饱满度优秀，核质对比清晰。

28、6.适配性高：除免疫组化后的核复染外，其余染色都适用。

29、7.检出率高：不易造成胃幽门螺杆菌感染、黏液病变等疾病的漏诊，相反会大大提高该类病变的检出率。

1.一种环保型苏木素染色液，其特征在于，所述苏木素染色液由苏木精、硫酸铝钾、碘酸钠、无水乙醇、蒸馏水、甘油组成；所述苏木精、硫酸铝钾和碘酸钠的质量比为4~6：75~85：0.2~0.4，所述无水乙醇、蒸馏水和甘油的体积比为45~55：890~910：28~32，所述苏木精与无水乙醇的质量体积比为4~6g：45~55ml。

2.根据权利要求1所述的一种环保型苏木素染色液，其特征在于，所述苏木素染色液由苏木精、硫酸铝钾、碘酸钠、无水乙醇、蒸馏水、甘油组成；所述苏木精、硫酸铝钾和碘酸钠的质量比为5：70：0.3，所述无水乙醇、蒸馏水和甘油的体积比为50：900：30，所述苏木精与无水乙醇的质量体积比为1g：10ml。

3.权利要求1或2所述的环保型苏木素染色液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述加热是指将温度加热至40~50℃。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述硫酸铝钾水溶液通过加热溶解搅拌溶解后需降温处理。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述降温后的温度为10~30℃。

7.一种环保型苏木素-伊红染色试剂盒，其特征在于，由促染液、分化液、伊红液和权利要求1或2所述的苏木素染色液组成；

8.采用权利要求7所述的环保型苏木素-伊红染色试剂盒对组织或脱落细胞的染色方法，其特征在于，包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的染色方法，其特征在于，所述切片脱蜡的方法为将切片于二甲苯i、ⅱ中各脱蜡4~6min，以保证充分脱蜡；再依次经95%酒精4~6min、95%酒精4~6min、85%酒精2~3min和75%酒精2~3min，自来水冲洗0.8~1.2min。

10.根据权利要求8所述的染色方法，其特征在于，所述苏木素工作液由体积比为250：2~3的权利要求1或2所述的苏木素染色与促染液组成。