血液标记物在鉴别惊恐发作中的应用的制作方法

本发明属于分子诊断领域，具体涉及血液标记物在鉴别惊恐发作中的应用。

背景技术：

1、焦虑障碍是目前全球高发的精神心理疾病，具有发病隐匿、反复发作、迁延难愈的特点，对患者身心健康、社会功能及生活质量造成严重负面影响，同时也给公共卫生体系带来沉重负担。在各类焦虑障碍亚型中，惊恐发作作为一种急性、爆发性的严重焦虑状态，临床发病率逐年攀升，且发病人群覆盖青少年、中青年等多个年龄段，已成为精神医学、临床医学领域的重点研究病症。惊恐发作区别于持续性的焦虑状态，具有突发突止的特征，发病前无明显预警征兆，可在患者平静状态、日常活动甚至睡眠中突然发作，极易造成患者身心创伤，且反复发作易诱发社交回避、睡眠障碍等多种并发症，严重者会出现自残、厌世等极端心理，危及生命安全。

2、目前临床针对惊恐发作的诊疗体系仍存在诸多缺陷与不足，现有技术多聚焦于发作后的药物干预与心理疏导，缺乏对发作前兆的精准识别、发作过程的动态监测及提前干预手段。同时，由于惊恐发作的躯体症状与心血管、神经系统、代谢系统等多种躯体疾病症状高度相似，临床误诊、漏诊率极高，大量患者因误诊接受无效治疗，延误最佳干预时机，导致病情慢性化、反复发作。此外，现有诊疗方案无法适配患者个体化发病诱因，针对无明确诱因的突发性惊恐发作，缺乏有效的预判与防控机制，整体诊疗、防控效果有限。基于此，精准明晰惊恐发作的临床特征、发病规律及鉴别要点，是优化诊疗方案、开发新型干预设备与治疗手段的核心基础。

3、惊恐发作是一种突然爆发的强烈恐惧或躯体不适症状群，核心特征为急性发作、症状剧烈、进展迅速，通常在发作后10分钟内所有症状即可达到峰值，单次发作持续时长多为20-30分钟，极少数患者发作时长可超过1小时。该病发作时患者会同时伴随多重躯体症状、心理症状，且发作后易残留持续性的伴随不适症状，后续可诱发各类负性行为与情绪障碍，具体临床特征如下：

4、一、躯体症状

5、躯体症状是惊恐发作最直观的临床表现，由交感神经异常过度激活引发，累及心血管、呼吸、神经、肌肉等多个身体系统，也是导致临床误诊的主要原因，具体包括：

6、1、心血管反应：发作时患者会突发心跳加速、心慌心悸、胸闷胸痛等症状，部分患者伴随心前区压榨性不适感，症状表现与急性心肌缺血、心绞痛等心脏疾病高度相似，导致绝大多数患者首次发作时会误以为自身罹患严重心脏病，进一步加剧恐慌情绪，形成情绪与躯体症状的恶性循环。

7、2、呼吸系统异常：患者会出现突发呼吸急促、浅快呼吸、过度换气等表现，同时伴随明显的窒息感、憋气感，无法自主控制呼吸节奏。该类症状会引发机体酸碱平衡紊乱，进而继发头晕、头胀、手脚麻木、肢体酸胀等次生不适，加重患者的躯体痛苦。

8、3、神经系统激活：交感神经全面激活后，患者会出现全身异常出汗、肢体不自主颤抖、周身畏寒发冷或莫名燥热等症状，部分患者伴随恶心、呕吐、腹胀、腹痛等胃肠道神经紊乱表现，躯体不适感呈全身性、弥散性分布。

9、4、肌肉紧张异常：发作期间患者全身骨骼肌处于高度紧张、僵硬状态，肢体肌肉出现持续性震颤、无力，躯体平衡能力下降，严重时出现站立不稳、眩晕欲扑甚至短暂晕厥的情况，极大影响患者的日常行为活动。

10、二、心理症状

11、心理症状是惊恐发作的核心病理特征，区别于普通躯体疾病的关键要点，患者躯体不适发作的同时，会伴随突发性的极端负面心理体验，且无法通过主观意志缓解，具体包括：

12、1、无源性强烈恐惧感：患者会突然产生强烈的灾难化情绪，主观感受为“大难临头”“即将死亡”，整体情绪极度恐慌、焦虑，但无法明确感知具体的危险来源，与现实环境无关联，属于病理性的情绪爆发。

13、2、失控与发疯感：发作过程中，患者会清晰感知到自身情绪、身体反应完全不受主观控制，过度担忧自己失去理智、当众做出异常行为或过激举动，产生强烈的无助感与失控恐惧，进一步加重病情。

14、3、感知觉分离障碍：患者易出现现实解体与人格解体双重症状，一方面感觉周围环境模糊、虚假、不真实，如同置身梦境；另一方面会感觉自身与躯体、意识与身体相互分离，无法感知自身躯体状态，产生强烈的陌生感与疏离感。

15、三、持续性伴随症状

16、惊恐发作结束后，患者的剧烈急性症状会逐步消退，但会残留长期的持续性伴随症状，成为疾病反复发作、慢性化进展的重要诱因，具体表现为：

17、1、躯体过度警觉：患者长期处于高敏感状态，对自身轻微躯体变化过度关注，日常出现的轻微心跳加快、胸闷、头晕等正常生理波动，都会被患者过度解读为严重疾病发作的前兆，持续处于紧张戒备状态。

18、2、场景回避行为：患者因极度恐惧惊恐发作再次发生，会主动规避既往发作场景或自认为高危的环境，例如密闭空间、人群密集场所、独处环境等，长期回避会导致患者社交范围缩减、活动空间受限，逐步诱发社交障碍、孤僻等问题。

19、3、睡眠功能障碍：持续的焦虑、恐慌残留情绪会严重影响睡眠质量，患者常出现入睡困难、夜间莫名惊醒、多梦易醒、睡眠浅等症状，而睡眠不足又会反过来降低情绪调节能力与神经稳定性，诱发新一轮的惊恐发作，形成恶性循环。

20、四、发作时长与诱发因素

21、从发作时长来看，惊恐发作属于急性短暂性病症，单次发作持续时间集中在数分钟至半小时，临床中极少出现发作时长超过1小时的情况，但症状发作的剧烈程度极高，短时间内即可造成患者严重身心损伤。

22、从诱发因素来看，惊恐发作的诱因具有复杂性、多样性及隐匿性特征，可分为外源性诱因与内源性诱因。其中，外源性诱因包括长期精神压力、突发负面应激事件、熬夜、过度劳累、咖啡因或刺激性物质摄入、密闭/拥挤等特殊场景刺激等；内源性诱因多与患者自身神经递质紊乱、情绪调节能力缺陷、遗传特质相关。值得注意的是，多数惊恐发作无明确前置诱因，可在患者身心状态平稳时突发发作，难以提前预判，防控难度极大。

23、五、与相似疾病的核心鉴别要点

24、由于惊恐发作症状累及多系统，与多种躯体、精神疾病存在症状重叠，精准的鉴别诊断是临床诊疗的关键，其与常见相似疾病的核心区别如下：

25、1、与心脏疾病鉴别：冠心病、心绞痛等心脏疾病引发的胸痛多为固定位置持续性疼痛，伴随心电图、心肌酶、心脏彩超等影像学及生化指标异常；而惊恐发作引发的胸痛多为短暂性、游走性疼痛，位置不固定，发作后进行心脏相关检查无器质性病变异常，无实质性心脏损伤。

26、2、与低血糖鉴别：低血糖发作的核心特征为伴随明显饥饿感、出冷汗、手抖乏力，症状在补充糖分后可快速、完全缓解，发作与血糖数值异常直接相关；而惊恐发作无饥饿感，症状发作与血糖水平无关联，进食、补糖后无法缓解症状，需依靠情绪调节、神经干预方可逐步恢复。

27、3、与其他焦虑障碍鉴别：广泛性焦虑障碍核心表现为持续性、弥散性的过度担忧、紧张、烦躁，症状呈长期持续状态，无突发突止特征；而惊恐发作属于急性爆发性焦虑，症状突发骤止，发作间期患者可恢复正常状态，无持续性焦虑情绪，二者发病模式、临床进程存在本质差异。

28、综上所述，惊恐发作具有症状复杂、诱因隐匿、易误诊、反复发作的特点，现有临床技术缺乏针对性、精准化的识别、预判与干预方案，无法有效解决临床误诊率高、防控难度大、复发率高的行业痛点。因此，研发一种能够精准识别惊恐发作状态、预判发作趋势、实现早期干预的技术方案，具有重要的临床价值与市场应用前景。

29、富亮氨酸重复家族蛋白，它包括八个富亮氨酸重复序列 （leucine-rich repeat，lrr），已经有研究表明，lrr 蛋白属于跨膜蛋白，它们主要作为细胞黏附分子或配体结合蛋白参与正常生理活动。

30、富亮氨酸 α2 糖蛋白 1（leucine-rich α2-glycoprotein 1，lrg1），是富亮氨酸重复家族中的一员，lrg1属于lrr蛋白质家族成员。在过去的研究表明，lrg1参与机体重要的生理和病理过程，如蛋白质相互作用、信号转导和细胞粘附。

31、目前已经在神经系统内发现多种蛋白具有富亮氨酸重复结构，在一些神经退行性疾病中，检测到 lrg1 在脑脊液中浓度有所降低，并且观察到人类 lrg1 在解剖的大脑皮质中有表达。在过去的研究中，有学者将正常人与特发性正常压力脑积水（idiopathicnormal pressure hydrocephalus ，inph） 患者的脑脊液标本进行蛋白质组学分析，发现在 inph 患者脑脊液中 lrg1 表达有特异性增高，这样一来，lrg1 对 inph 的临床诊断具有潜在价值。lrg1 的表达异常与多种肿瘤的发生相关，如神经胶质瘤，肺癌，结肠癌，上皮性卵巢癌，肝细胞癌等。

32、在研究血管重塑所致视网膜病变的过程中，发现lrg1 可促进内皮细胞的有丝分裂，促进血管的新生。在体外人血管内皮细胞（human vascular endothelial cells，huvec）管腔形成试验中，进一步证实了这一假设。通过提供重组人 lrg1 作为媒介，可造成管腔形成和分支的显著增加，而抗 lrg1 抗体则明显阻断了管腔的形成。另有研究表明，lrg1 的血管生成活性并不仅局限于眼睛，在其他主要生物过程中也可能扮演着重要的角色，其中包括肿瘤和免疫反应等。lrg1 对 tgf-β1 信号通路的调节作用，为研究 lrg1 的功能提供了有力证据。lrg1 是控制眼部血管生成疾病非常有前途的治疗目标，并有可能在其他疾病如癌症和动脉粥样硬化中起重要作用。

33、lrg1 的功能可能与它的 lrr 结构有关。lrg 的功能被认为是通过结合其他蛋白如细胞色素 c，来起到调节的作用，从而限制一些蛋白的功能。胶质瘤起源于神经胶质细胞，是中枢神经系统最常见的肿瘤，占全脑和中枢神经系统肿瘤的 30%，占所有恶性脑肿瘤的 80%。相关实验表明，lrg1 在促进脑胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭中起着重要的作用，而这些功能正是通过介导转化生长因子 β1（transforming growth factorβ1，tgf-β1）信号转导路径实现的，并且 lrg1 通过 tgf-β 信号通路，可以促进内皮细胞增殖和血管生成，这提示 lrg1 可能参与星形细胞恶性肿瘤的发生和发展。以往的研究表明，抑制 lrg1的表达会抑制胶质瘤细胞的体外生长，在异种移植的小鼠模型中，会延迟脑胶质瘤的发生，这为 lrg1 对胶质瘤病理改变的趋向作用提供了证据。lrg1 与动脉粥样硬化和微循环障碍有关，可能是在不同的血管床中作为血管损伤的标志物。lrg1 在早期识别血管疾病的风险中具有潜在作用，其中的病理基础及这些相关性的机制仍需要进一步探索。可以考虑在血管性疾病中，将改变 lrg1 的活性作为一种治疗潜力，尤其是微创手术和血管内血运重建。lrg1 的表达在心肌梗死后上调，抑制心肌梗死后心脏重构作为一种新型的心血管保护因子，lrg1 可能成为心血管疾病的治疗目标。lrg1 的基因缺失会加重心肌梗死后心脏功能的障碍，使心肌纤维化增加。在 lrg1 缺陷小鼠中，smad1/5/8 通路受损，导致梗死边缘毛细血管密度减低，lrg1 的基因消融加剧了心脏重构模型中心肌梗死后毛细血管的密度减少。此外，我们的研究表明心跳呼吸骤停患者心肺脑复苏后血液中lrg1升高，可能与心跳呼吸骤停导致的脑缺血、脑损伤及血管损伤相关。与脑梗塞，心肌梗塞时患者血液中lrg1升高机理一致。

34、另一方面，lrg1 作为一种血管新生的因子，通过调节 smad1/5/8 通路，可能对血管性疾病的治疗有着可观的前景，但其具体的调节机制还尚不明确。

35、发明人在先的中国专利申请cn117110626a公开了颈部动脉病变时血液中lrg1平均值较正常人高，且随病变加重，颈部血管病变斑块脱落增加更明显，作为危险性颈部动脉病变的外周血标志物时，具有较高的灵敏性及特异性，可以结合b超等结果作为诊断颈部动脉病变使用。cn115856325a公开了外周血lrg1的含量与下肢动脉损伤密切相关，通过检测外周血中lrg1的含量，可以很好地预测下肢动脉损伤，特别是下肢动脉硬化或斑块、下肢动脉狭窄、血栓或闭塞，特别是可以很好地预测高血压、高血脂或高血糖所致的下肢动脉硬化或斑块、下肢动脉狭窄、血栓或闭塞。cn110261617a公开了lrg1可以作为脑出血外周血标志物。cn121476616a公开了lrg1可以作为鉴别癫痫抽搐的血液标记物；cn121114450a公开了lrg1可以作为鉴别病毒性心肌炎或冠状动脉狭窄严重程度的外周血标记物；cn120539428a公开了lrg1可以协助诊断流感，cn117110626a公开了lrg1可以作为危险性颈部动脉病变的标记物；cn120992961a公开了lrg1可以作为急性肾盂肾炎的标记物。随着发明人研究的深入，lrg1越来越多的功能被发现，但是未有实验数据显示其在惊恐发作有何作用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供血液标记物在鉴别惊恐发作中的应用。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、本发明的第一个方面，提供：lrg1定量试剂在制备惊恐发作诊断或辅助诊断试剂中的应用。

4、在一些实例中，所述lrg1定量试剂为elisa试剂、免疫荧光试剂、质谱分析试剂。

5、在一些实例中，lrg1定量试剂检测的样本为外周血。

6、本发明的第二个方面，提供：一种惊恐发作诊断或辅助诊断系统，包括：

7、定量装置，用于定量样本中lrg1的量；

8、分析装置，基于lrg1的含量，确定惊恐发作风险；

9、结果输出装置，用于输出所述分析装置的分析结果。

10、在一些实例中，所述定量装置为elisa检测装置、免疫印迹装置、免疫荧光装置或质谱装置。

11、在一些实例中，lrg1的含量高表明惊恐发作高风险。

12、在一些实例中，lrg1的含量高指其在外周血样本中的含量高于5 ng/ml。

13、在一些实例中，所述样本为外周血。

14、本发明的有益效果是：

15、本发明首次研究发现，在发生惊恐发作时，血液中lrg1明显升高，表明血液lrg1升高是惊恐发作的血液标记物，可用于临床的辅助诊断。