一种口服甲氨蝶呤脂质体及其制备方法

一种口服甲氨蝶呤脂质体及其制备方法
1.本技术是申请日为2017年11月20日、申请号为201711235090.2、发明名称 为《一种口服甲氨蝶呤脂质体及其制备方法》的分案申请。
技术领域
2.本发明属于药品领域，特别是涉及一种口服甲氨蝶呤脂质体及其制备方 法。


背景技术：

3.甲氨蝶呤(methotrexate，mtx)是一种具叶酸还原酶抑制作用的抗肿瘤 药物，广泛用于淋巴瘤和白血病的治疗，还用于如宫颈癌、乳腺癌、肺癌、 头颈部肿瘤和卵巢肿瘤的治疗，但安全性较低，不论是鞘内、肌内、静脉注 射还是口服给药治疗，均有可能发生严重不良反应，主要有：1、胃肠道反应： 口腔炎、口唇溃疡、咽喉炎、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、消化道出血，偶见 伪膜性或出血性肠炎等；2、肝功能损害：黄疸、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷 酸酶、γ-谷氨酰转肽酶等增高；3、大剂量应用时，本品和代谢产物沉积在肾 小管而致高尿酸血症肾病，可出现血尿、蛋白尿、尿少、氮质血症甚或尿毒 症。剂量大小是引起死亡的关键原因，由于mtx治疗不同疾病时选用剂量差 异较大，治疗恶性肿瘤常用剂量15或30mg/m2口服或注射，最大剂量可静脉 注射500mg/m2；对儿童急性淋巴性白血病剂量可增至5000mg/m2；个体差异 大，血药浓度不稳定；大量文献报道：应用mtx 72h血药浓度应低于0.1μmol/l 毒性反应方可最小。
[0004][0005]
因此mtx疗效和毒性取决于cmax和tmax；普通剂型和给药途径导致 缺乏缓释性，血药浓度要么低于cmin，要么高于cmax，缺乏靶向性。二者 导致毒性增加，疗效下降。
[0006]
脂质体作为先进药物载体应用于临床主要优势体现在：增强药物的溶解 性；降低药物毒性；赋予药物靶向性；药物的缓释作用；提高对药物的保护 作用；通过融合作用将药物送入细胞浆或细胞核中。
[0007]
普通脂质体同时也存在着一些缺点：(1)具有剂量依赖性药物动力学特 征；(2)体外物理稳定性和体内化学稳定性(口服易被胃肠道内消化液破坏) 较差；(3)静脉给药后，易被mps中的巨噬细胞吞噬，在体循环中的半衰 期非常短，因而对肿瘤等靶器官的靶向治疗作用差。这些缺点在一定程度上 限制了普通脂质体作为抗癌药物载体在肿瘤化疗中的应用。如何减少或避免 普通脂质体与周围介质中各种成分的相互作用，减少在体内被mps吞噬，提 高体内外稳定性，延长体内的循环时间，使药物在靶器官浓度高而在非靶组 织中浓度低，这是当今脂质体研究的重点和难点。


技术实现要素：

[0008]
本发明目的是针对上述现有技术的不足而提供一种口服甲氨蝶呤脂质体 及其制备方法。
[0009]
本发明实现上述目的所采取的技术方案是：一种口服甲氨蝶呤胆盐脂质 体，它是
由以下重量份数的原料制备而成：甲氨蝶呤15～25份，大豆卵磷脂 110～130份，纯度大于89％的磷脂酰丝氨酸25～35份，ph值为7.4、浓度为 20mmol/l的脱氧胆酸钠溶液15～25份，胆固醇70～80份和无水乙醚 2000～2200份。
[0010]
一种制备上述口服甲氨蝶呤胆盐脂质体的方法，所述方法采用逆向蒸发 法制备，它包括以下步骤：
[0011]
(1)制备ph值为7.4的磷酸盐缓冲液；取浓度为11.876g/l的磷酸氢二 钠加入浓度为9.078g/l的磷酸二氢钠中，其中磷酸氢二钠与磷酸二氢钠的体 积比为8：2，得ph＝7.4的磷酸盐缓冲液待用；
[0012]
(2)制备ph值为7.4的脱氧胆酸钠的磷酸盐缓冲液，待用；取20mmol/l 的脱氧胆酸钠溶液，然后加入ph＝7.4的磷酸盐缓冲液中，即得20mmol/l-1
脱氧胆酸钠的ph值为7.4的磷酸盐缓冲液，待用；
[0013]
(3)制备有机相：将大豆卵磷脂、磷脂酰丝氨酸、胆固醇、以及甲氨蝶 呤溶于无水乙醚中，形成有机相；取磷酸盐缓冲液注入到有机相中，水浴超 声5min，形成稳定的w/o形乳剂；将乳剂置于旋转蒸发仪上减压除去乙醚得 到粘稠的胶状溶液，加入ph为7.4的脱氧胆酸钠的磷酸盐缓冲液，继续减压 蒸发得到甲氨蝶呤胆盐脂质体。
[0014]
本发明的原理是：脂质体口服时遇到的最大困难是胃肠道的消化作用。 在脂质体未进入体循环前，需要经受胃酸以及胃肠道中胆盐的破坏，肝脏分 泌的胆汁对脂质体消化作用最强，胆汁中并没有消化酶，胆汁酸与甘氨酸或 牛磺酸结合形成的钠盐或钾盐(胆盐)是胆汁参与消化与吸收脂肪类物质的 主要成分。因此制备胆盐脂质体可以为脂质体的口服提供了另一个必要条件。 制备脂质体的过程中加入适当的胆盐，胆盐成为双层膜的一部分，在胃肠道 中可与内源性胆盐进行交换最终平衡，避免脂质体被胆盐消化。
[0015]
mtx脂质体制剂是将mtx分子包封入脂质体中，从而提高药物的稳定 性，起到缓释和被动靶向作用。由于mtx为脂溶性药物，可以插在脂质双层 膜之间，进而将其在水中增溶，脂质体包裹药物也可降低药物的毒副作用， 还可以增加药物分子在肿瘤部位的分布，减少其对其他正常组织的毒性。将 药物包封成脂质体，可减少肾排泄和代谢而延长药物在血液中的滞留时间， 使药物在体内缓慢释放，从而延长药物的作用时间，适当减少给药次数，减 少副作用，提高药物的安全性、有效性，减轻病人的痛苦，提高病人的顺应 性。
附图说明
[0016]
图1为本发明四种mtx制剂药时曲线图。
[0017]
图2为本发明四种mtx主要药代动力学参数。
[0018]
图3为本发明mtx普通脂质体和胆盐脂质体药物浓度检测图。
具体实施方式
[0019]
本发明以下将结合实施例做进一步的描述。
[0020]
实施例1
[0021]
本发明的口服甲氨蝶呤胆盐脂质体，它是由以下重量份数的原料制备而 成：甲氨蝶呤16份，大豆卵磷脂112份，纯度大于89％的磷脂酰丝氨酸27份， ph值为7.4、浓度为20mmol/l的脱氧胆酸钠溶液16份，胆固醇72份和无水乙 醚2050份。
[0022]
上述口服甲氨蝶呤胆盐脂质体的制备方法采用逆向蒸发法制备，它包括 以下步骤：
[0023]
(1)制备ph值为7.4的磷酸盐缓冲液；取浓度为11.876g/l的磷酸氢二钠 加入浓度为9.078g/l的磷酸二氢钠中，其中磷酸氢二钠与磷酸二氢钠的体积比 为8：2，得ph＝7.4的磷酸盐缓冲液待用；
[0024]
(2)制备ph值为7.4的脱氧胆酸钠的磷酸盐缓冲液，待用；取20mmol/l 的脱氧胆酸钠溶液，然后加入ph＝7.4的磷酸盐缓冲液中，即得20mmol/l-1
脱 氧胆酸钠的ph值为7.4的磷酸盐缓冲液，待用；
[0025]
(3)制备有机相：将大豆卵磷脂、磷脂酰丝氨酸、胆固醇、以及甲氨蝶 呤溶于无水乙醚中，形成有机相；取磷酸盐缓冲液注入到有机相中，水浴超 声5min，形成稳定的w/o形乳剂；将乳剂置于旋转蒸发仪上减压除去乙醚得 到粘稠的胶状溶液，加入ph为7.4的脱氧胆酸钠的磷酸盐缓冲液，继续减压蒸 发得到甲氨蝶呤胆盐脂质体。
[0026]
实施例2
[0027]
本发明的口服甲氨蝶呤胆盐脂质体，它是由以下重量份数的原料制备而 成：甲氨蝶呤19份，大豆卵磷脂120份，纯度大于89％的磷脂酰丝氨酸29份， ph值为7.4、浓度为20mmol/l的脱氧胆酸钠溶液20份，胆固醇75份和无水乙 醚2100份；其制备方法同实施例1。
[0028]
实施例3
[0029]
本发明的蝶呤胆盐脂质体，它是由以下重量份数的原料制备而成：甲氨 蝶呤22份，大豆卵磷脂125份，纯度大于89％的磷脂酰丝氨酸32份，ph值为7.4、 浓度为20mmol/l的脱氧胆酸钠溶液22份，胆固醇77份和无水乙醚2150份，其 制备方法同实施例1。
[0030]
实施例4
[0031]
本发明的口服甲氨蝶呤胆盐脂质体，它是由以下重量份数的原料制备而 成：甲氨蝶呤24份，大豆卵磷脂129份，纯度大于89％的磷脂酰丝氨酸34份， ph值为7.4、浓度为20mmol/l的脱氧胆酸钠溶液24份，胆固醇79份和无水乙 醚2200份；其制备方法同实施例1。
[0032]
以上所制备的口服甲氨蝶呤胆盐脂质体的大鼠实验结果如下：
[0033]
分别灌胃给以mtx溶液、mtx普通脂质体、mtx壳聚糖包衣脂质体以及 mtx胆盐脂质体，取处理血样，hplc和相应软件处理，结果见图1和图2：
[0034]
药动学结果表明：壳聚糖包衣脂质体峰浓度最大，胆盐脂质体与壳聚糖 脂质体的t1/2分别是普通脂质体组的1.56，1.93倍，明显延长auc
0-∞
；二者分 别是普通脂质体的1.94，3.3倍，统计学分析有显著性差异(p＜0.00i)； cmax/auc
0-∞
通常表示吸收速率，数据可知：mtx普通脂质体组吸收速率最 快，胆盐脂质体较普通脂质体有延缓释药、提高生物利用度的作用。
[0035]
体外释放
[0036]
mtx普通脂质体和胆盐脂质体各1ml置于透析袋中，将透析袋放入 0.1mol
·
l-1
的盐酸中做释放试验，用hplc检测其中药物浓度。实验结果见图3。
[0037]
根据图3可以看出，在盐酸溶液中，胆盐脂质体的释放速率慢于普通脂质 体。
[0038]
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分 实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下 获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。