一种腺苷水解提取d-核糖的方法
技术领域
1.本发明涉及生物化工技术领域，具体为一种腺苷水解提取d-核糖的方法。
背景技术：
2.d-核糖是重要的五碳单糖，是核糖核酸(rna)、atp的重要组成物质，对生命的形成有重要作用，d-核糖也是重要的药物中间体，用于多种核酸类药物的生产，并且具有广阔的应用前景。
3.目前d-核糖主要通过微生物制法，需要长时间的发酵，然后进行过滤、提纯等步骤，不仅耗时长，且步骤繁琐，在制作过程中会产生有害物质，且通过微生物制法得到的d-核糖转化率低于80％，使得生产成本提高。
技术实现要素：
4.本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种腺苷水解提取d-核糖的方法，可以简化制作步骤，且产量高，制作过程节能环保，可以有效解决背景技术中的问题。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：
6.步骤一：取腺苷溶于水，加入水解酶，升温至37～40℃反应4～6h；
7.步骤二：hplc检测反应完毕后升温至45～50℃，并在此温度下保温30～60min；
8.步骤三：降温至10～20℃固液分离，然后用纯水洗涤得到滤液，滤饼为腺嘌呤；
9.步骤四：步骤三中得到的滤液加入2％～3％的酸性溶液,加入0.2％～0.5％的活性炭，在50～55℃下脱色1h；
10.步骤五：对步骤四中脱色后的溶液进行过滤，过滤后溶液在40～50℃负压下浓缩，然后向浓缩液中加入乙醇，在10～20℃的温度下搅拌结晶6～10h，最后进行固液分离，滤饼为d-核糖。
11.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤一种水解酶的质量体积为腺苷量的50％。
12.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤三中的洗涤次数为2～4次。
13.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤四中的酸性溶液为醋酸或盐酸中的一种。
14.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤五中脱色后的溶液过滤采用精密过滤器。
15.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤五中乙醇的纯度为99％，乙醇的加入量为浓缩液的五倍。
16.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤五中的固液分离方式为抽滤。
17.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤五中得到的d-核糖纯度不低于99.5％。
18.与现有技术相比，本发明的有益效果是：本腺苷水解提取d-核糖的方法通过水解酶对腺苷进行水解，与传统的化学合成法和微生物提取法相比，反应温和，副产物少，产物收率高，转化率能达到90％左右，产品纯度大于99.5％，在整个生产过程中无需溶剂，降低了生产成本，且在制备过程中产生的三废量很少，非常绿色环保，有利于实现产业化，提高了生产效率。
具体实施方式
19.下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
20.实施例1：
21.步骤一：取50g腺苷溶于水，加入50％体积量的水解酶，升温至38℃反应4h；
22.步骤二：hplc检测反应完毕后升温至45℃，并在此温度下保温45min；
23.步骤三：降温至10℃固液分离，然后用纯水洗涤三次得到滤液，滤饼为腺嘌呤；
24.步骤四：步骤三中得到的滤液加入2％的醋酸溶液,加入0.3％的活性炭，在50℃下脱色1h；
25.步骤五：对步骤四中脱色后的溶液经过精密过滤器进行过滤，过滤后溶液在50℃负压下浓缩，然后向浓缩液中加入五倍量质量浓度为99％的乙醇，在10℃的温度下搅拌结晶8h，最后进行抽滤，滤饼为d-核糖。
26.经检测d-核糖的转化率为92.3％，最终得到d-核糖的纯度为99.6％，整个提取过程为28h。
27.实施例2：
28.步骤一：取100g腺苷溶于水，加入50％体积量的水解酶，升温至40℃反应5h；
29.步骤二：hplc检测反应完毕后升温至48℃，并在此温度下保温50min；
30.步骤三：降温至15℃固液分离，然后用纯水洗涤四次得到滤液，滤饼为腺嘌呤；
31.步骤四：步骤三中得到的滤液加入3％的盐酸溶液,加入0.3％的活性炭，在55℃下脱色1h；
32.步骤五：对步骤四中脱色后的溶液经过精密过滤器进行过滤，过滤后溶液在45℃负压下浓缩，然后向浓缩液中加入五倍量质量浓度为99％的乙醇，在15℃的温度下搅拌结晶6h，最后进行抽滤，滤饼为d-核糖。
33.经检测d-核糖的转化率为91.6％，最终得到d-核糖的纯度为99.7％，整个提取过程为30h。
34.实施例3：
35.步骤一：取50g腺苷溶于水，加入50％体积量的水解酶，升温至40℃反应5h；
36.步骤二：hplc检测反应完毕后升温至50℃，并在此温度下保温60min；
37.步骤三：降温至20℃固液分离，然后用纯水洗涤三次得到滤液，滤饼为腺嘌呤；
38.步骤四：步骤三中得到的滤液加入2％的盐酸溶液,加入0.2％的活性炭，在50℃下脱色1h；
39.步骤五：对步骤四中脱色后的溶液经过精密过滤器进行过滤，过滤后溶液在50℃负压下浓缩，然后向浓缩液中加入五倍量质量浓度为99％的乙醇，在18℃的温度下搅拌结晶10h，最后进行抽滤，滤饼为d-核糖。
40.经检测d-核糖的转化率为90.5％，最终得到d-核糖的纯度为99.5％，整个提取过程为34h。
41.对比例：取50g腺苷通过微生物制法得出d-核糖，经过发酵、脱色、减压浓缩，最后用四倍体积的乙醇沉淀结晶获得产品，经检测d-核糖的转化率为76.8％，d-核糖纯度为88％，用时92h。
42.通过对比可知，与传统的制法相比，通过水解腺苷得到d-核糖的方法不仅在转化率和纯度上更高，而且耗时短，有利于提高生产效率，且降低生产成本，适用于工业上的批量化生产，并且符合绿色环保的生产理念。
43.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
技术特征：
1.一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：取腺苷溶于水，加入水解酶，升温至37～40℃反应4～6h；步骤二：hplc检测反应完毕后升温至45～50℃，并在此温度下保温30～60min；步骤三：降温至10～20℃固液分离，然后用纯水洗涤得到滤液，滤饼为腺嘌呤；步骤四：步骤三中得到的滤液加入2％～3％的酸性溶液,加入0.2％～0.5％的活性炭，在50～55℃下脱色1h；步骤五：对步骤四中脱色后的溶液进行过滤，过滤后溶液在40～50℃负压下浓缩，然后向浓缩液中加入乙醇，在10～20℃的温度下搅拌结晶6～10h，最后进行固液分离，滤饼为d-核糖。2.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤一种水解酶的质量体积为腺苷量的50％。3.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤三中的洗涤次数为2～4次。4.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤四中的酸性溶液为醋酸或盐酸中的一种。5.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤五中脱色后的溶液过滤采用精密过滤器。6.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤五中乙醇的纯度为99％，乙醇的加入量为浓缩液的五倍。7.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤五中的固液分离方式为抽滤。8.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤五中得到的d-核糖纯度不低于99.5％。
技术总结
本发明公开了一种腺苷水解提取D-核糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：取腺苷溶于水，加入水解酶，升温至37～40℃反应4～6h；步骤二：HPLC检测反应完毕后升温至45～50℃，并在此温度下保温30～60min；步骤三：降温至10～20℃固液分离，然后用纯水洗涤得到滤液，滤饼为腺嘌呤；步骤四：步骤三中得到的滤液加入2％～3％的酸性溶液,加入0.2％～0.5％的活性炭，在50～55℃下脱色1h；步骤五：对步骤四中脱色后的溶液进行过滤，过滤后溶液在40～50℃负压下浓缩，本腺苷水解提取D-核糖的方法简化制作步骤，制作过程节能环保，有利于提高生产效率，且大大降低了生产成本，适用于工业上的批量化生产。的批量化生产。
技术研发人员：岳广宇 胡冬梅 韩雪 王颖 苏华强
受保护的技术使用者：通辽德胜生物科技有限公司
技术研发日：2022.05.20
技术公布日：2022/8/19
技术领域
1.本发明涉及生物化工技术领域，具体为一种腺苷水解提取d-核糖的方法。
背景技术：
2.d-核糖是重要的五碳单糖，是核糖核酸(rna)、atp的重要组成物质，对生命的形成有重要作用，d-核糖也是重要的药物中间体，用于多种核酸类药物的生产，并且具有广阔的应用前景。
3.目前d-核糖主要通过微生物制法，需要长时间的发酵，然后进行过滤、提纯等步骤，不仅耗时长，且步骤繁琐，在制作过程中会产生有害物质，且通过微生物制法得到的d-核糖转化率低于80％，使得生产成本提高。
技术实现要素：
4.本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种腺苷水解提取d-核糖的方法，可以简化制作步骤，且产量高，制作过程节能环保，可以有效解决背景技术中的问题。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：
6.步骤一：取腺苷溶于水，加入水解酶，升温至37～40℃反应4～6h；
7.步骤二：hplc检测反应完毕后升温至45～50℃，并在此温度下保温30～60min；
8.步骤三：降温至10～20℃固液分离，然后用纯水洗涤得到滤液，滤饼为腺嘌呤；
9.步骤四：步骤三中得到的滤液加入2％～3％的酸性溶液,加入0.2％～0.5％的活性炭，在50～55℃下脱色1h；
10.步骤五：对步骤四中脱色后的溶液进行过滤，过滤后溶液在40～50℃负压下浓缩，然后向浓缩液中加入乙醇，在10～20℃的温度下搅拌结晶6～10h，最后进行固液分离，滤饼为d-核糖。
11.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤一种水解酶的质量体积为腺苷量的50％。
12.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤三中的洗涤次数为2～4次。
13.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤四中的酸性溶液为醋酸或盐酸中的一种。
14.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤五中脱色后的溶液过滤采用精密过滤器。
15.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤五中乙醇的纯度为99％，乙醇的加入量为浓缩液的五倍。
16.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤五中的固液分离方式为抽滤。
17.作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤五中得到的d-核糖纯度不低于99.5％。
18.与现有技术相比，本发明的有益效果是：本腺苷水解提取d-核糖的方法通过水解酶对腺苷进行水解，与传统的化学合成法和微生物提取法相比，反应温和，副产物少，产物收率高，转化率能达到90％左右，产品纯度大于99.5％，在整个生产过程中无需溶剂，降低了生产成本，且在制备过程中产生的三废量很少，非常绿色环保，有利于实现产业化，提高了生产效率。
具体实施方式
19.下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
20.实施例1：
21.步骤一：取50g腺苷溶于水，加入50％体积量的水解酶，升温至38℃反应4h；
22.步骤二：hplc检测反应完毕后升温至45℃，并在此温度下保温45min；
23.步骤三：降温至10℃固液分离，然后用纯水洗涤三次得到滤液，滤饼为腺嘌呤；
24.步骤四：步骤三中得到的滤液加入2％的醋酸溶液,加入0.3％的活性炭，在50℃下脱色1h；
25.步骤五：对步骤四中脱色后的溶液经过精密过滤器进行过滤，过滤后溶液在50℃负压下浓缩，然后向浓缩液中加入五倍量质量浓度为99％的乙醇，在10℃的温度下搅拌结晶8h，最后进行抽滤，滤饼为d-核糖。
26.经检测d-核糖的转化率为92.3％，最终得到d-核糖的纯度为99.6％，整个提取过程为28h。
27.实施例2：
28.步骤一：取100g腺苷溶于水，加入50％体积量的水解酶，升温至40℃反应5h；
29.步骤二：hplc检测反应完毕后升温至48℃，并在此温度下保温50min；
30.步骤三：降温至15℃固液分离，然后用纯水洗涤四次得到滤液，滤饼为腺嘌呤；
31.步骤四：步骤三中得到的滤液加入3％的盐酸溶液,加入0.3％的活性炭，在55℃下脱色1h；
32.步骤五：对步骤四中脱色后的溶液经过精密过滤器进行过滤，过滤后溶液在45℃负压下浓缩，然后向浓缩液中加入五倍量质量浓度为99％的乙醇，在15℃的温度下搅拌结晶6h，最后进行抽滤，滤饼为d-核糖。
33.经检测d-核糖的转化率为91.6％，最终得到d-核糖的纯度为99.7％，整个提取过程为30h。
34.实施例3：
35.步骤一：取50g腺苷溶于水，加入50％体积量的水解酶，升温至40℃反应5h；
36.步骤二：hplc检测反应完毕后升温至50℃，并在此温度下保温60min；
37.步骤三：降温至20℃固液分离，然后用纯水洗涤三次得到滤液，滤饼为腺嘌呤；
38.步骤四：步骤三中得到的滤液加入2％的盐酸溶液,加入0.2％的活性炭，在50℃下脱色1h；
39.步骤五：对步骤四中脱色后的溶液经过精密过滤器进行过滤，过滤后溶液在50℃负压下浓缩，然后向浓缩液中加入五倍量质量浓度为99％的乙醇，在18℃的温度下搅拌结晶10h，最后进行抽滤，滤饼为d-核糖。
40.经检测d-核糖的转化率为90.5％，最终得到d-核糖的纯度为99.5％，整个提取过程为34h。
41.对比例：取50g腺苷通过微生物制法得出d-核糖，经过发酵、脱色、减压浓缩，最后用四倍体积的乙醇沉淀结晶获得产品，经检测d-核糖的转化率为76.8％，d-核糖纯度为88％，用时92h。
42.通过对比可知，与传统的制法相比，通过水解腺苷得到d-核糖的方法不仅在转化率和纯度上更高，而且耗时短，有利于提高生产效率，且降低生产成本，适用于工业上的批量化生产，并且符合绿色环保的生产理念。
43.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
技术特征：
1.一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：取腺苷溶于水，加入水解酶，升温至37～40℃反应4～6h；步骤二：hplc检测反应完毕后升温至45～50℃，并在此温度下保温30～60min；步骤三：降温至10～20℃固液分离，然后用纯水洗涤得到滤液，滤饼为腺嘌呤；步骤四：步骤三中得到的滤液加入2％～3％的酸性溶液,加入0.2％～0.5％的活性炭，在50～55℃下脱色1h；步骤五：对步骤四中脱色后的溶液进行过滤，过滤后溶液在40～50℃负压下浓缩，然后向浓缩液中加入乙醇，在10～20℃的温度下搅拌结晶6～10h，最后进行固液分离，滤饼为d-核糖。2.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤一种水解酶的质量体积为腺苷量的50％。3.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤三中的洗涤次数为2～4次。4.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤四中的酸性溶液为醋酸或盐酸中的一种。5.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤五中脱色后的溶液过滤采用精密过滤器。6.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤五中乙醇的纯度为99％，乙醇的加入量为浓缩液的五倍。7.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤五中的固液分离方式为抽滤。8.根据权利要求1所述的一种腺苷水解提取d-核糖的方法，其特征在于：所述步骤五中得到的d-核糖纯度不低于99.5％。
技术总结
本发明公开了一种腺苷水解提取D-核糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：取腺苷溶于水，加入水解酶，升温至37～40℃反应4～6h；步骤二：HPLC检测反应完毕后升温至45～50℃，并在此温度下保温30～60min；步骤三：降温至10～20℃固液分离，然后用纯水洗涤得到滤液，滤饼为腺嘌呤；步骤四：步骤三中得到的滤液加入2％～3％的酸性溶液,加入0.2％～0.5％的活性炭，在50～55℃下脱色1h；步骤五：对步骤四中脱色后的溶液进行过滤，过滤后溶液在40～50℃负压下浓缩，本腺苷水解提取D-核糖的方法简化制作步骤，制作过程节能环保，有利于提高生产效率，且大大降低了生产成本，适用于工业上的批量化生产。的批量化生产。
技术研发人员：岳广宇 胡冬梅 韩雪 王颖 苏华强
受保护的技术使用者：通辽德胜生物科技有限公司
技术研发日：2022.05.20
技术公布日：2022/8/19
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